11.17 : الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء: المقدمة

تعتبر الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC)، والتي كانت تُعرف سابقًا باسم الكروماتوغرافيا السائلة عالية الضغط، تقنية قوية تُستخدم لفصل وتحديد وقياس المكونات في الخلائط المعقدة. يشير مصطلح "الضغط العالي" إلى استخدام الضغط العالي لدفع الطور المتحرك السائل عبر الأعمدة المضغوطة بإحكام. I

في تقنية HPLC، تلعب طوران دورًا حاسمًا في عملية الفصل:

• الطور المتحرك: هو المذيب السائل الذي يتدفق عبر النظام، حاملاً العينة معه. يتم اختيار المذيب بناءً على قطبيته لتحسين التفاعل مع المحللات والطور الثابت. يعمل "مؤشر القطبية" كدليل لاختيار المذيب المناسب للفصل.
• الطور الثابت: الطور الثابت عبارة عن مادة صلبة، غالبًا ما تكون على أساس السيليكا، معبأة داخل العمود. في الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء ذات الطور العكسي، يكون الطور الثابت عادةً عبارة عن سيليكا مشتقة، مثل سيليكا أوكتاديسيل (C18). إن الحجم الصغير لجسيمات المادة المعبأة يخلق مساحة سطح عالية، مما يعزز التفاعلات مع المحللات. لتقليل التفاعلات غير المرغوب فيها، مثل تلك الناتجة عن مجموعات السيلانول غير المتفاعلة، غالبًا ما يتم تغطية الطور الثابت بكاشف مثل ثلاثي ميثيل كلورو سيلان

يحدث الفصل عندما تتفاعل المحللات بشكل مختلف مع كل من الطور المتحرك والثابت، اعتمادًا على خصائصها الكيميائية، مما يؤدي إلى هجرة تفاضلية عبر العمود.

في بعض الأحيان، ترتبط جزيئات المذاب بشكل لا رجعة فيه بالطور الثابت، مما يؤدي إلى انسداد العمود التحليلي وتقليل أدائه. لمنع ذلك، يتم وضع عمود حماية قبل العمود التحليلي. يمكن أيضًا وضع عمود أولي يسمى عمود الزبال بين خزان الطور المتحرك والمحقن. يضمن هذا دخول المذيب إلى العمود التحليلي، المشبع بالفعل بالسيليكا من عمود الزبال، مما يمنع التفاعلات غير المرغوب فيها ويطيل عمر العمود التحليلي.

بعد عملية الفصل، يتم الكشف عن المواد المحللات بواسطة أجهزة كشف مختلفة، اعتمادًا على خصائص المركبات. تُعرض النتائج على شكل مخططات كروماتوغرافية، تحتوي على تمثل المكونات المختلفة للخليط. يوفر هذا بيانات نوعية وكمية حول العينة.