11.17 : Высокоэффективная жидкостная хроматография: Введение

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), которая раньше назывлась высокоэффективной жидкостной хроматографией, является мощным методом, используемым для разделения, идентификации и количественного определения компонентов в сложных смесях. Термин «высокое давление» относится к использованию высокого давления для проталкивания жидкой подвижной фазы через плотно упакованные колонки. I

В ВЭЖХ две фазы играют решающую роль в процессе разделения:

• Подвижная фаза: это жидкий растворитель, который протекает через систему, перенося с собой образец. Растворитель выбирается на основе его полярности для оптимизации взаимодействия с аналитами и неподвижной фазой. «Индекс полярности» служит руководством для выбора подходящего растворителя для разделения.
• Стационарная фаза: неподвижная фаза представляет собой твердый материал, часто на основе силикагеля, упакованный в колонку. В обращенно-фазовой ВЭЖХ неподвижной фазой обычно является дериватизированный силикагель, такой как октадецил (C18) силикагель. Небольшой размер частиц упакованного материала создает большую площадь поверхности, усиливая взаимодействие с аналитами. Чтобы уменьшить нежелательные взаимодействия, например, с непрореагировавшими силанольными группами, неподвижная фаза часто блокируется реагентами, такими как триметилхлорсилан

Разделение происходит, поскольку аналиты по-разному взаимодействуют как с подвижной, так и с неподвижной фазами в зависимости от их химических свойств, что приводит к дифференциальной миграции через колонку.

Иногда молекулы растворенного вещества необратимо связываются с неподвижной фазой, засоряя аналитическую колонку и снижая ее производительность. Чтобы предотвратить это, перед аналитической колонкой помещают защитную колонку. Предколонка, называемая колонкой-поглотителем, также может быть помещена между резервуаром подвижной фазы и инжектором. Это гарантирует, что растворитель поступает в аналитическую колонку, которая уже насыщена кремнием из колонки-поглотителя, предотвращая нежелательные реакции и продлевая срок службы аналитической колонки.

После разделения аналиты обнаруживаются различными детекторами в зависимости от характеристик соединений. Результаты визуализируются в виде хроматограмм с пиками, соответствующими различным компонентам смеси. Это позволяет получить как качественные, так и количественные данные об образце.