11.17 : 고성능 액체 크로마토그래피: 소개

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 이전에 고압 액체 크로마토그래피라고 불렸으며, 복잡한 혼합물의 성분을 분리, 식별 및 정량화하는 데 사용되는 강력한 기술입니다. "고압"이라는 용어는 고압을 사용하여 액체 이동상을 단단히 채워진 컬럼을 통해 밀어내는 것을 말합니다. I
HPLC에서 두 가지 상이 분리 과정에서 중요한 역할을 합니다.

1. 이동상: 이것은 시스템을 통해 흐르면서 표본을 운반하는 액체 용매입니다. 용매는 분석물과 고정상과의 상호 작용을 최적화하기 위해 극성에 따라 선택됩니다. "극성 지수"는 분리에 적합한 용매를 선택하는 데 도움이 됩니다.
2. 고정상: 고정상은 종종 실리카 기반의 고체 물질로 컬럼 내에 채워져 있습니다. 역상 HPLC에서 고정상은 일반적으로 옥타데실(C18) 실리카와 같은 유도체화된 실리카입니다. 작은 입자 크기의 충전재는 높은 표면적을 생성하여 분석물과의 상호 작용을 향상시킵니다. 반응하지 않은 실라놀 그룹과 같은 바람직하지 않은 상호 작용을 줄이기 위해 고정상은 종종 트리메틸클로로실란과 같은 시약으로 끝을 캡핑합니다.

분석물이 화학적 특성에 따라 이동상과 고정상 모두와 다르게 상호 작용하여 컬럼을 통한 차등 이동으로 인해 분리가 발생합니다.

때로는 용질 분자가 고정상에 비가역적으로 결합하여 분석 컬럼이 막히고 성능이 저하됩니다. 이를 방지하기 위해 분석 컬럼 앞에 가드 컬럼을 배치합니다. 스캐빈저 컬럼이라고 하는 프리컬럼을 이동상 저장소와 주입기 사이에 배치할 수도 있습니다. 이렇게 하면 용매가 스캐빈저 컬럼에서 실리카로 이미 포화된 분석 컬럼으로 들어가 원치 않는 반응을 방지하고 분석 컬럼의 수명을 연장할 수 있습니다.

분리 후 분석물은 화합물의 특성에 따라 다양한 검출기로 감지됩니다. 결과는 혼합물의 다양한 구성 요소에 해당하는 피크가 있는 크로마토그램으로 시각화됩니다. 이는 표본에 대한 정성적 및 정량적 자료를 모두 제공합니다.