11.17 : Chromatographie liquide haute performance : introduction

La chromatographie liquide haute performance (HPLC), anciennement appelée chromatographie liquide haute pression, est une technique puissante utilisée pour séparer, identifier et quantifier les composants dans des mélanges complexes. Le terme « haute pression » fait référence à l'utilisation d'une haute pression pour pousser la phase mobile liquide à travers les colonnes étroitement remplies.

En HPLC, deux phases jouent un rôle essentiel dans le processus de séparation :

Phase mobile : il s'agit d'un solvant liquide qui circule dans le système, emportant avec lui l'échantillon. Le solvant est choisi en fonction de sa polarité pour optimiser l'interaction avec les analytes et la phase stationnaire. L'« indice de polarité » sert de guide pour sélectionner le solvant approprié pour la séparation.

Phase stationnaire : la phase stationnaire est un matériau solide, souvent à base de silice, emballé dans la colonne. Dans la HPLC en phase inverse, la phase stationnaire est généralement de la silice dérivée, telle que la silice octadécyle (C18). La petite taille des particules du matériau emballé crée une grande surface, améliorant les interactions avec les analytes. Pour réduire les interactions indésirables, telles que celles avec les groupes silanol n'ayant pas réagi, la phase stationnaire est souvent bouchée par des réactifs comme le triméthylchlorosilane.

La séparation se produit lorsque les analytes interagissent différemment avec les phases mobile et stationnaire, en fonction de leurs propriétés chimiques, ce qui conduit à une migration différentielle à travers la colonne.

Parfois, les molécules de soluté se lient de manière irréversible à la phase stationnaire, obstruant la colonne analytique et diminuant ses performances. Pour éviter cela, une colonne de garde est placée avant la colonne analytique. Une précolonne appelée colonne de récupération peut également être placée entre le réservoir de phase mobile et l'injecteur. Cela garantit que le solvant pénètre dans la colonne analytique, qui est déjà saturée de silice provenant de la colonne de récupération, empêchant les réactions indésirables et prolongeant la durée de vie de la colonne analytique.

Après la séparation, les analytes sont détectés par différents détecteurs, en fonction des caractéristiques des composés. Les résultats sont visualisés sous forme de chromatogrammes, avec des pics correspondant aux différents composants du mélange. Cela fournit des données à la fois qualitatives et quantitatives sur l'échantillon.