11.17 : Cromatografia Líquida de Alta Eficiência: Introdução

A cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), anteriormente chamada de cromatografia líquida de alta pressão, é uma técnica poderosa usada para separar, identificar e quantificar componentes em misturas complexas. O termo "alta pressão" se refere ao uso de alta pressão para empurrar a fase móvel líquida através das colunas compactadas. I

Na HPLC, duas fases desempenham um papel crítico no processo de separação:

• Fase Móvel: Este é um solvente líquido que flui através do sistema, carregando a amostra com ele. O solvente é escolhido com base em sua polaridade para otimizar a interação com os analitos e a fase estacionária. O "índice de polaridade" serve como um guia para selecionar o solvente adequado para separação.
• Fase Estacionária: A fase estacionária é um material sólido, geralmente à base de sílica, compactado dentro da coluna. Na HPLC de fase reversa, a fase estacionária é tipicamente sílica derivatizada, como sílica octadecil (C18). O tamanho pequeno de partícula do material compactado cria uma grande área de superfície, aumentando as interações com os analitos. Para reduzir interações indesejáveis, como aquelas com grupos silanol não reagidos, a fase estacionária é frequentemente coberta com reagentes como trimetilclorosilano

A separação ocorre quando os analitos interagem de forma diferente com as fases móvel e estacionária, dependendo de suas propriedades químicas, o que leva à migração diferencial através da coluna.

Às vezes, moléculas de soluto se ligam irreversivelmente à fase estacionária, obstruindo a coluna analítica e diminuindo seu desempenho. Para evitar isso, uma coluna de proteção é colocada antes da coluna analítica. Uma pré-coluna chamada coluna de limpeza (scavenger) também pode ser colocada entre o reservatório da fase móvel e o injetor. Isso garante que o solvente entre na coluna analítica, que já está saturada com sílica da coluna de limpeza, evitando reações indesejadas e estendendo a vida útil da coluna analítica.

Após a separação, os analitos são detectados por vários detectores, dependendo das características dos compostos. Os resultados são visualizados como cromatogramas, com picos correspondentes aos diferentes componentes da mistura. Isso fornece dados qualitativos e quantitativos sobre a amostra.