تصور كا الأوعية الدموية 2 + اشارة سببها ريوس المشتقة نظير الصماوي

Summary

وصفت وسيلة فعالة للحصول على نظرة ثاقبة الرؤية والاستقراء ريوس نظير الصماوي المستمدة من البطانية إشارة + CA2. هذا الأسلوب يستفيد من قياس نظير الصماوي ريوس المستمدة أثار CA2 + تعبئة الخلايا البطانية في الأوعية الدموية في نموذج شارك في الثقافة.

Abstract

وقد تورط الاكسدة في عدد من الظروف المرضية بما في ذلك نقص التروية / ضخه الأضرار والتسمم. مفهوم الاكسدة يشير إلى تشكيل الشاذة من ريوس (أنواع الاكسجين التفاعلية) ، والتي تشمل ^• O ₂ ^-- ، H ₂ O ₂ ، وجذور الهيدروكسيل. أنواع الاكسجين التفاعلية التأثيرات العديد من العمليات الخلوية بما في ذلك نقل الإشارة ، وانتشار الخلايا وموت الخلايا ^1-6. ROS لديها القدرة على الأوعية الدموية وتلف خلايا الجهاز مباشرة ، ويمكن الشروع في التفاعلات الكيميائية الثانوية والتعديلات الوراثية التي تؤدي في نهاية المطاف في التضخيم من الأضرار الأولية بوساطة نسيج ريوس. ومن المكونات الرئيسية لتتالي التضخيم الذي لا رجعة فيه تفاقم تلف الأنسجة هو توظيف وتفعيل تعميم الخلايا الالتهابية. أثناء الالتهاب ، وإنتاج السيتوكينات الالتهابية الخلايا مثل نخر الورم عامل α (TNFα) ، وأنه IL - 1تنشيط الخلايا البطانية (EC) والخلايا الظهارية ، وكذلك زيادة ⁷ الاستجابة الالتهابية. خلل بطانة الأوعية الدموية هي ميزة أنشئت من التهاب حاد. الضامة تساهم في اختلال وظيفي التهاب بطانة خلال الآليات التي لا تزال غامضة. تفعيل نتائج الضامة خارج الخلايا في الإفراج عن O ₂ ^{• --} والعديد من السيتوكينات الموالية للالتهابات ، والتي يطلق إشارات مرضية في الخلايا المجاورة ^8. oxidases NADPH هي المصدر الرئيسي والأساسي للروس في معظم أنواع الخلايا. في الآونة الأخيرة ، فإنه يظهر من قبلنا وغيرها ^9،10 ريوس أن تنتجها oxidases NADPH تحفز إنتاج ريوس الميتوكوندريا خلال ظروف الفيزيولوجية المرضية كثيرة. وبالتالي قياس إنتاج ريوس الميتوكوندريا هي نفس القدر من الأهمية ، بالإضافة إلى قياس عصاري خلوي ريوس. الضامة تنتج ريوس من NADPH أوكسيديز انزيم بروتين فلافيني الذي يلعب دورا رئيسيا في التهاب. تنشيط مرة واحدة ،NADPH أوكسيديز أكلة تنتج كميات وفيرة من O ₂ ^{• --} التي تعتبر مهمة في الآلية الدفاعية للمضيف ^11،12. على الرغم من نظير الصماوي المستمدة من O ₂ ^{• --} يلعب دورا هاما في التسبب في أمراض الأوعية الدموية ، والتصور من الإشارات التي يسببها ريوس نظير الصماوي الخلايا بما في ذلك تعبئة كا ^{2 +} لا تزال الفرضية. وقد طورنا نموذجا والتي تستخدم في تنشيط البلاعم كمصدر ^لل• O ₂ ^-- لتنبيغ إشارة إلى الخلايا البطانية المجاورة. باستخدام هذا النموذج الذي يثبت أن بلعم المستمدة من O ₂ ^{• --} أن يؤدي إلى إشارات الكالسيوم في الخلايا البطانية المجاورة.

Protocol

ويمكن قياس أنواع الاكسجين التفاعلية في الخلايا الحية باستخدام الأصباغ الأكسدة الحساسة (1 و 2) أو باستخدام أجهزة استشعار البلازميد (3 و 4) من جانب المجهري متحد البؤر.

1. تصور ريوس عصاري خلوي في الخلايا J774

1. تنمو J774.1 الماوس الوحيدات المستمدة الضامة (10 ⁶ خلية / مل) على أسفل الزجاج 35 ملم الأطباق (جهاز هارفارد) لمدة 48 ساعة.
2. التحدي مع خلايا TLR منبهات (2 ميكروغرام / لتر ، ليبو - teichoic حمض TLR2 ناهض ؛ 10μg/ml ، بولي (I : C) - TLR3 ناهض ؛ 1 ميكروغرام / مل LPS - TLR4 ناهض) لمدة 6 ساعات إلى 37 درجة مئوية.
   ملاحظة : استخدمت تقوم البلاعم المعالجة تحت ظروف مماثلة للنموذج التعاون كا ^{2 +} ثقافة التعبئة.
3. إضافة الصبغة الحساسة للأكسدة H ₂ DCF - DA (Invitrogen) لإعطاء تركيز النهائي من 10 ميكرومتر في ECM (المتوسط ​​خارج الخلية : 121 مم كلوريد الصوديوم ، 5 مم NaHCO _{3 و} 10 ملي نا HEPES و 4.7 ملي بوكل ، 1.2 ملي KH ₂ ص ₄ و 1.2 ملي MgSO ₄ ، 2 مم CaCl ₂ ، 10الجلوكوز و 2.0 ملي ديكستران ٪ ، ودرجة الحموضة 7.4 ؛ تم الحصول عليها من جميع سيغما) التي تحتوي على 2 ٪ لجيش صرب البوسنة الأطباق والخلايا احتضان لمدة 20 دقيقة قبل التصور مبائر تحت المجهر.
4. بعد تحميل صباغة ، وضعت على خلايا تصور مرحلة حرارة يتم التحكم فيها نظام التصوير المناسبة. نستخدم كارل زايس ميتا 510 LSM مبائر نظام التصوير مقرونا الأرجون ليزر ايون مصدر في جامعة النجاح الإثارة من 488 نانومتر لمضان DCF 40X الهدف باستخدام النفط ¹³ (الشكل 1A و D).
5. تحليل الصور باستخدام برنامج ImageJ (1.44) ، والبرمجيات المتاحة مجانا من المعاهد الوطنية للصحة (Rasband ، وكان ، ImageJ الأميركية ، والمعاهد الوطنية للصحة في بيثيسدا بولاية ميريلاند ، الولايات المتحدة الأمريكية ، http://rsb.info.nih.gov/ij / ، 1997-2009).

2. تصور mROS في الخلايا J774

1. تنمو J774.1 الماوس الوحيدات المستمدة الضامة (10 ⁶ خلية / مل) على أسفل الزجاج 35 ملم الأطباق (جهاز هارفارد) لمدة 48 ساعة.
2. التحدي الخلايا مع يغاندس TLR mROS للحث على إنتاج (2 ميكروغرام / لتر ، ليبو - teichoic حمض TLR2 ؛ 10μg/ml ، بولي (I : C) - TLR3 ؛ 1 ميكروغرام / مل LPS - TLR4) لمدة 6 ساعات في 37 ° جيم
3. إضافة الميتوكوندريا الفائق مؤشر MitoSOX الأحمر (Invitrogen) لإعطاء تركيز النهائي من 5 ميكرومتر في ECM التي تحتوي على 2 ٪ لجيش صرب البوسنة الأطباق والخلايا احتضان لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية للسماح للتحميل MitoSOX الأحمر.
4. بعد تحميل الصبغة ، تصور الخلايا في مرحلة حرارة يتم التحكم فيها من كارل زايس LSM 510 الزوجين مبائر ميتا نظام التصوير مع ليزر أيون الأرجون مصدر في جامعة النجاح الإثارة من 561 نانومتر لMitoSOX الأحمر مضان 40X الهدف باستخدام النفط (الشكل 1B و E).
5. لمراقبة التجارب ، وبعد إضافة الصبغة تحميل برنامج تلفزيوني أو DMSO (مراقبة سلبية) أو Antimycin 2μM ألف (كما الفائق الميتوكوندريا مولد إيجابية السيطرة) إلى الخلايا السابقة لصورة العينة كما هو موضح في 2.4 (الشكل 1C)
6. تحليل الصور باستخدام برنامج ImageJ (1.44).

3. Visualizatiعلى من ROS عصاري خلوي في MPMVECs فرط خلوي مستقرة

1. نستخدم pHyPer - خلوي (Evrogen) متجه التعبير الثدييات ترميز فرط استشعار الفلورسنت التي يموضع في السيتوبلازم وتحديدا تركيز الحواس submicromolar من H ₂ O ₂ ^14.
2. Transfect الرئوي الاوعية الدموية الدقيقة الفئران الخلايا البطانية (MPMVECs) مع pHyPer - خلوي النواقل باستخدام إما electroporation أو الكواشف ترنسفكأيشن. نحن نستخدم 10 × 10 ⁶ خلايا وtransfect مع 10μg من pHyPer - خلوي عبر electroporation باستخدام الجينات BioRad نظام electroporator بولسير (250V ؛ 500 μF). تستكمل MPMVECs الثقافة في المتوسط ​​10 ٪ مع DMEM FBS والأحماض الأمينية غير الأساسية ، البطانية تكملة النمو والمضادات الحيوية.
   ملاحظة : ترنسفكأيشن بعد ، وخلايا في طبق منخفض الكثافة لتسهيل نمو المستعمرة.
3. استبدال المتوسطة مع مستنبت كاملة تستكمل مع 500 ميكروغرام / مل G418 ، بعد 48 ساعة من ترنسفكأيشن. الشاشة للاستنساخ التي أعلى نسبة من H خلايا yPer ايجابية وايجابية فرط مرور الحيوانات المستنسخة لزيادة عدد الخلايا الإيجابية المفرطة (الشكل 2).
   ملاحظة : نحن نستخدم المسلسل تخفيف من الخلايا لاختيار واحد من الخلايا نسيلي والشاشة لخلايا مستقرة للغاية معربا عن فرط.
4. نمو مستقر فرط خلوي MPMVECs على coverslips 0.2 ٪ المغلفة الجيلاتين (80 نقطة التقاء ٪). التحدي القادم خلايا اليوم مع يغاندس TLR (2 ميكروغرام / لتر ، حمض TLR2 Lipoteichoic ؛ 10μg/ml ، بولي (I : C) - TLR3 ؛ 1 ميكروغرام / مل LPS - TLR4) لمدة 6 ساعات إلى 37 درجة مئوية. الخلايا غير المعالجة بمثابة السيطرة.
5. بعد العلاج ، وتركيب الخلية Attofluor coverslips على الغرفة (Invitrogen). إضافة 1ml من قبل هانكس حرارة محلول ملحي متوازن (HBSS) الى الغرفة ووضع الغرفة في مرحلة حرارة يتم التحكم فيها من LSM كارل زايس النظام ميتا 510 مبائر التصوير. وتصور صورة مضان التغيير في جامعة النجاح الإثارة من 488 نانومتر باستخدام 40X الهدف النفط (الشكل 3A و D).
6. تحليل الصور باستخدام برنامج ImageJ (1.44) (انظر القسم 6).

itle "> 4. ريوس من التصور في الميتوكوندريا MPMVECs فرط dMito مستقرة

1. نستخدم pHyPer - dMito (Evrogen) متجه التعبير الترميز الميتوكوندريا الثدييات التي تستهدف المفرط الذي يموضع في تركيز الحواس الميتوكوندريا وتحديدا submicromolar من H ₂ O _2.
2. MPMVECs Transfect مع pHyPer - dMito وتوليد مستقرة فرط dMito MPMVECs التالية الخطوات المذكورة في المقطع 3،2-3،3.
3. نمو مستقر فرط dMito MPMVECs على coverslips 0.2 ٪ المغلفة الجيلاتين (80 نقطة التقاء ٪).
4. التحدي القادم خلايا اليوم مع يغاندس TLR (2 ميكروغرام / لتر ، حمض TLR2 Lipoteichoic ؛ 10μg/ml ، بولي (I : C) - TLR3 ؛ 1 ميكروغرام / مل LPS - TLR4) لمدة 6 ساعات إلى 37 درجة مئوية. الخلايا غير المعالجة تكون بمثابة الشاهد السلبي. إضافة Antimycin 2μM عينة (الميتوكوندريا الفائق محفز إيجابي التحكم) قبل تصور.
5. بعد العلاج ، وتركيب الخلية Attofluor coverslips على الغرفة (Invitrogen). إضافة 1ml من قبل هانكس حرارة محلول ملحي متوازن (HBSS) الى الغرفةوتضع الغرفة في مرحلة حرارة يتم التحكم فيها من LSM كارل زايس النظام ميتا 510 مبائر التصوير. تصور وتغيير صورة مضان في جامعة النجاح الإثارة من 488 نانومتر باستخدام 40X الهدف النفط (الشكل 3B ، C و E).
6. تحليل الصور باستخدام برنامج ImageJ (1.44) (انظر القسم 6).

5. شارك في ثقافة نموذج للتصور نظير الصماوي المستمدة ريوس أثار كا ^{2 +} الاشارات في الخلايا البطانية

لتصور وقياس [كا ^{2 +]} ط التغييرات نستخدم كا ^{2 +} الحساسة صبغة الفلورسنت fluo - 4 صباحا (Invitrogen).

1. تنمو MPMVECs على الجيلاتين المغلفة 0.2 ٪ coverslips 25mm الزجاج (80 ٪ التقاء).
2. احتضان الخلايا المزروعة في coverslips في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة في ECM التي تحتوي على 2 ٪ BSA 0.003 ٪ وحمض pluronic مع 5 ميكرومتر fluo - 4 صباحا (Invitrogen) التركيز النهائي للسماح للتحميل - fluo 04:00. بعد تحميل وغسل الخلايا بمحلول التصوير التجريبي (ECM التي تحتوي على 0.جيش صرب البوسنة 25 ٪) التي تحتوي على سلفينبيرازون لتقليل فقدان الصبغة.
3. بعد تحميل fluo - 4 ، على جبل coverslips Attofluor الخلية الغرفة (Invitrogen). إضافة 800μl من قبل تحسنت التجريبية حل التصوير لغرفة ووضعه في مرحلة حرارة يتم التحكم فيها من LSM كارل زايس النظام ميتا 510 مبائر التصوير.
4. في تسمية أنبوب فصل الضامة nonactivated أو تنشيط معزولة من أي نوع أو البرية gp91 ^{phox / --} الفئران (LPS معاملته لمدة 6 ساعة) مع الخلية الحمراء CMTPX تعقب (500ng/ml) (Invitrogen) في ECM التي تحتوي على 2 ٪ BSA وحمض pluronic 0.003 ٪. غسل وresuspend الخلايا مع 200μl الحل التصوير التجريبية.
5. إضافة إلى الضامة المسمى fluo ، 04:00 تحميل MPMVECs في الجمعية الغرفة.
6. سجل مضان الخضراء والحمراء كل لمدة 10-20 دقيقة 3S به كارل زايس LSM510 التصوير مبائر ميتا مع نظام ليزر الأرجون مصدر ايون مع الإثارة في 488 و 561 نانومتر لfluo - 4 صباحا وتعقب الخلايا الحمراء respectivel مضانص (Fig.4 AC).
   ملاحظة : بدلا من ذلك ، يمكن أن تستخدم J774.1 خط الخلية لانتزاع MPMVECs كا ^{2 +} التعبئة.
7. تحليل fluo - 4 تغييرات كثافة مضان باستخدام البرمجيات ImageJ (1.44) (انظر القسم 6).

6. تحليل البيانات باستخدام برنامج ImageJ

نقل الصور التي تم الحصول عليها من النظام مبائر كملف تنسيق. LSM لتحليل البيانات. ZEN 2009 و 2010 ZEN البرامج المقدمة مع المجهر LSM ميتا مبائر 510 أو 710 LSM المجهر multiphoton مبائر يحفظ الملفات على التوالي في شكل LSM. نوصي باستخدام هذه الأم. الملفات LSM لتحليل الصورة كما يتم الاحتفاظ نوعية الأصلي. هذا يمكن أن يكون تنسيق ملف فتحه مباشرة في تحليل الصور برنامج J. صورة الخطوات التالية مثالا التحليل الكمي من صورة واحدة. ويلزم أي ملحقات إضافية لهذا تحليل البيانات.

1. مفتوحة. LSM أو ملف TIFF في برنامج J صورة باستخدام ملف> فتح
2. انقر فوق علامة التبويب IMAGE> COالقنوات LOR الانشقاق> وتقسيم قنوات خضراء ومدينة دبي للإنترنت. استخدام صورة من قناة خضراء لتحليلها لاحقا.
3. انقر مرتين وحدد "اختيار فرشاة البيضاوي" علامة التبويب وتعيين القيمة إلى 20 بكسل.
4. لفرط خلوي الصور ، انقر على خلية واحدة لتحديد مساحة دائرية من القياس. ثم اضغط على "M" المفتاح لقياس شدة المجال المحدد. يتم الاحتفاظ القيم في إطار نتائج جديدة.
5. القادم من خلال عقد انقر على "التحول" مفتاح في خلية مختلفة لتحديد منطقة أخرى ، ثم عن طريق الضغط على "M" مفتاح. وسجلت كثافة في إطار النتيجة. كرر الخطوات 4-5 على 50 خلايا مختلفة.
6. لوحات د ميتو هايبر ، تعيين القيمة إلى 10 بكسل في اختيار فرشاة البيضاوي. المنطقة ذات الاهتمام (ROI) لابد من تتبع يدويا بما في ذلك خلايا الميتوكوندريا معينة.
7. باستخدام يدوية ، تتبع منطقة حول الميتوكوندريا ثم اضغط على "M". كرر الخطوات 6-7 على 50 خلايا مختلفة.
8. نسخ لي an القيم من النافذة ولصق النتائج في ورقة Excel أو أي برنامج لمؤامرة النتائج. نستخدم إما SigmaPlot أو PRISM Graphpad لرسم البيانات والرسم البياني.

7. ممثل النتائج

ويوضح الشكل 1 عصاري خلوي والميتوكوندريا ريوس على إنتاج التحدي مع يغاندس TLR. صور مبائر ممثل تظهر زيادة التدفقات النقدية المخصومة (عصاري خلوي) وMitoSOX الأحمر (الميتوكوندريا) مضان بعد 6 ساعات من التحفيز. تم تطبيع التغييرات مضان ، وأعربت عن مثل تغير أضعاف.

الشكل 2 يوضح توليد مستقرة فرط خلوي وفرط dMito الخلايا البطانية. وكانت transfected الخلايا البطانية مع الماوس pHyPer - خلوي أو pHyPer - dMito يبني البلازميد عبر electroporation. وقد تم اختيار الخلايا البلازميدات معربا عن ستابلي مع G418 لمدة أسبوعين. بعد التحديد ، وكان المصنف خلايا مخففة في 96 لوحات جيدا. وقد تم عزل المستعمرات الفردية وتصويرها للتعبير متجانسة.

e_content "> ويبين الشكل 3 قياس البطانية عصاري خلوي ومستويات الميتوكوندريا H ₂ O _2. مبائر الممثل الصور تظهر زيادة شديدة خلوي (عصاري خلوي) ، وفرط dMito (الميتوكوندريا) مضان بعد 6 ساعات من التحفيز. تم تطبيع تغييرات شدة الإسفار وكما أعرب عنه تغيير أضعاف.

الشكل 4 يوضح تقييم البلاعم المستمدة ريوس بفعل كا ^{2 +} عصاري خلوي البطانية التعبئة. أضيفت LPS - حفز الخلايا الرئوية الضامة على البطانية الاوعية الدموية الدقيقة (PMVEC) كان قد تم تحميلها مسبقا مع الكالسيوم بين الخلايا ^{2 +} ([كا ^{2 +]} ط) مؤشر صبغة Fluo - 4. أثار تطبيق البرية الضامة LPS تنشيط اكتب [كا ^{2 +]} ط ارتفاع PMVECs أن الموهن بالضربة القاضية من NADPH أوكسيديز وظيفية (gp91 ^{phox / --).}

الشكل 1. Visualizatiيوم ولدت من البلاعم الخلوية ريوس والفائق الميتوكوندريا. وقد تم الطعن J774.1 الخلايا مع يغاندس TLR2 و 3 و 4 (2 ميكروغرام / لتر ، حمض TLR2 Lipoteichoic ؛ 10μg/ml ، بولي (I : C) - TLR3 ؛ 1 ميكروغرام / مل LPS - TLR4). لمدة 6 ساعات في 37 درجة مئوية. بعد أن تم تحميلها الخلايا المعاملة مع (A) الخلوية ريوس مؤشر (H ₂ - DA DCF ؛ مخضر) أو (B) مؤشر الفائق الميتوكوندريا (MitoSOX الأحمر ؛ مضان أحمر). (C) وكانت تستخدم Antimycin كعنصر تحكم إيجابية لإنتاج ريوس الميتوكوندريا. تم تقييم التغيرات كثافة مضان مبائر باستخدام المجهر. (د) و (E) الكميات التغيير يعني مضان.

الشكل 2. التمثيل التخطيطي لتوليد التعبير المستقرة للعصاري خلوي الخلية البطانية والميتوكوندريا المؤشرات ريوس.

الشكل 3. V. isualization عصاري خلوي من البطانية والميتوكوندريا H ₂ O ₂ MPMVECs المستويات معربا عن ستابلي (أ) فرط خلوي أو (B) وقد تم الطعن فرط dMito مع يغاندس TLR2 و 3 و 4 (2 ميكروغرام / لتر ، حمض TLR2 Lipoteichoic ؛ 10μg / مل ، بولي (I : C) - TLR3 ؛ 1 ميكروغرام / مل LPS - TLR4) لمدة 6 ساعات إلى 37 درجة مئوية. (C) وكانت تستخدم Antimycin كعنصر تحكم إيجابية لإنتاج ريوس الميتوكوندريا. بعد العلاج ، وجرى تقييم التغيرات كثافة مضان مبائر باستخدام المجهر. (د) و (E) الكميات التغيير يعني مضان.

الشكل 4. بلعم المستمدة ريوس انتزاع ضعف الخلية البطانية كا تعبئة ^{+ 2.} (أ) تم تنشيط التمثيل التخطيطي من الخلايا البطانية / بلعم دراسة نموذج التعاون ثقافة (B) الضامة الفئران المعزولة طازجة من كلا WT وgp91phox الفئران الخالية (مختبر جاكسون) التي LPS ميكروغرام / 1 مل لمدة 6 ساعة. Macropوصفت hages مع تعقب الخلايا الحمراء (الحمراء) ، وأضاف على Fluo - 4 PMVECs تحميل (الخضراء) لتقييم يا نظير الصماوي ₂ ^{• --} يشير (C) أثار LPS تنشيط البلاعم الفئران المعزولة من وزن كبير وسريع تعبئة ⁺ كا ² في PMVECs مقارنة الضامة من الفئران gp91phox فارغة. وقد تبين من التحقق من صحة التنشيط بلعم سابقا.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

وصف طريقة القياس هنا يسمح السريع وكمية من أنواع الاكسجين التفاعلية في الخلايا الحية إما باستخدام الأصباغ الأكسدة حساسة أو أجهزة الاستشعار البلازميد. منبهات من TLRs (مثل مستقبلات تول) هي المركبات التي تحفز الخلايا من خلال TLRs موجودة على سطح الخلية وتحريك مسارات إشارات ا...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
الكاشف	شركة	فهرس العدد
Attofluor الخلية الغرفة	Invitrogen	A7816
Antimycin A	سيغما الدريتش	A8674
DMEM المتوسطة انخفاض الجلوكوز	Invitrogen	10567-014
عامل النمو البطاني تكملة (رسم القلب)	ريف	02-102
المصل البقري الجنين	Invitrogen	12662011
G418	Invitrogen	10131-027
الجيلاتين	سيغما الدريتش	G1393
H 2 DCFDA	Invitrogen	D - 399
LPS	سيغما الدريتش	L4516
LTA	سيغما الدريتش	L2515
MitoSOX الأحمر	Invitrogen	M36008
OPTI - MEM أنا انخفاض متوسط ​​المصل	Invitrogen	51985091
القلم / بكتيريا (10X)	Invitrogen	15140163
pHyPer - خلوي	Evrogen	FP941
pHyPer - dMito	Evrogen	FP942
بولي (I : C)	سيغما الدريتش	P0913
المنشور 5.0 البرمجيات	GraphPad البرمجيات ، وشركة
SigmaPlot 11.0	Systat البرمجيات ، المؤتمر الوطني العراقي.
التربسين - EDTA (10X)	Invitrogen	15400054
T - 25 قوارير	كورنينج	430639
T - 75 قوارير	فالكون دينار بحريني	353136
96 - T جيداC الصغرى لوحة جيدا	فالكون دينار بحريني	353072
زن 2009 البرمجيات	كارل زايس المجهري ميتا 510 مبائر