استئصال المبيض و17β استراديول، مع تبديل في الجرذان والفئران: تظاهرة البصرية

Summary

وأظهرت استئصال المبيض واستبدال لاحق من استراديول، 17β بواسطة كبسولات silastic ونوتيلا بطريق الفم؛ بالفم في الجرذان والفئران.

Abstract

هرمون الاستروجين هي عائلة من الهرمونات الجنسية الأنثوية مع طيف واسع للغاية من الآثار. عندما تستخدم الجرذان والفئران في البحث هرمون الاستروجين وعادة ما ovariectomized من أجل يجتذ انتاج هرمون ركوب الدراجات بسرعة، لتحل محل خارجيا 17β-استراديول. هناك، مع ذلك، عدم وجود توافق في الآراء بشأن الكيفية التي ينبغي أن تدار هذا الهرمون على الحصول على تركيزات مصل الفسيولوجية. هذا أمر بالغ الأهمية منذ 17β-استراديول مستوى / إدارة طريقة عميقا يؤثر على النتائج التجريبية ^1-3. لدينا في سلسلة من الدراسات تتسم أنماط مختلفة من 17β-استراديول الإدارة، وجدت أن كبسولات تحت الجلد silastic ولكل الفم نوتيلا الجوز كريم تعلو على الكريات بطيئة الافراج المتاحة تجاريا (التي تنتجها شركة بحوث مبتكرة من أمريكا) و حقن يومية من حيث تنتج تركيزات مصل الفسيولوجية لل17β-استراديول ^{و 4-6.} بين أدفantages طريقة الجوز كريم، الذي سبق واستخدمت لإدارة البوبرينورفين ^7، هو أنه عندما تستخدم لإدارة الاستروجين أنها تشبه بطريق الفم؛ بالفم العلاج بالهرمونات البديلة، وهو غير الغازية. وsilastic كبسولات تحت الجلد هي مريحة وتنتج تركيزات مصل الأكثر استقرارا. هذه المادة تحتوي على فيديو خطوة بخطوة المظاهرات من استئصال المبيض و17β-استراديول بالهرمونات البديلة بواسطة كبسولات silastic ونوتيلا بطريق الفم؛ بالفم في الجرذان والفئران، تليها مناقشة جوانب هامة من الإجراءات الإدارية.

Protocol

1. استئصال المبيض عبر الطريق الظهرية

1. تخدير الحيوانات، على سبيل المثال باستخدام 1.5٪ isoflurane (4٪ لتحريض) في أكسيد الأوكسجين / النيتروز بنسبة 30٪ / 70٪ خليط. وضع الحيوان في موقف المعرضة على طبق من التدفئة وصله بجهاز مقياس الحرارة المستقيمي. من المهم أن يكون طبقة رقيقة من العزلة بين الحيوان وصحن، وإلى أن مقياس الحرارة التغذية المرتدة نظام يحافظ على درجة حرارة الجسم في غضون 37 ± 0.5 درجة مئوية. تطبيق الهلام لحماية العين وإدارة 5 ملغ Rimadyl / كغ وزن الجسم تضعف في المياه المالحة تحت الجلد على الجانب الوحشي للرقبة الحيوان لتخفيف آلام ما بعد الجراحة.
2. حلاقة 4 * 4 سم (3 * 3 سم للفئران) منطقة cephally من عرف الحرقفة. اغسل منطقة حليق مع لJodopax سبيل المثال قبل تغطية الحيوان مع 4 * 4 سم ورقة جراحة فتحة.
3. جعل شق 2-3 سم خط الوسط وتشريح بصراحة الجلد من اللفافة الأساسية. واحد سم الجانبي من خط الوسط، وجعل آخر thro شقهتاف اشمئزاز فآسيا. تشريح بصراحة أفقيا تحت هذه اللفافة كما ظاهريا ممكن حتى الوصول الى تجويف البطن.
4. باستخدام الملقط، والاستيلاء على الأنسجة الدهنية التي تحيط مبيض في تجويف البطن واسحبه برفق خارج. التعرف على المبيض والرحم ligate قرون والأوعية 0،5-1 سم قريب من هذا الهيكل. قطع المبيض وligated الأنسجة الدهنية، ووضع الظهر الأنسجة المتبقية داخل تجويف البطن. جعل شق آخر في المقابل لفافة وكرر الإجراء.
5. إغلاق الجروح، وذلك باستخدام ويفضل أن يكون خياطة حيدة، والسماح للحيوان يستيقظ من التخدير. وضع حيوان في قفص ساخن (25-27 درجة مئوية) خلال ما لا يقل عن 2 ساعة بعد الجراحة. وينبغي أن يكون مقر هذه الحيوانات على حدة في الأيام الأولى بعد العمل الجراحي. فمن المحوري الذي كثيرا ما يتم تنظيف القفص / استبداله خلال مرحلة الانتعاش. أربع وعشرين ساعة بعد الجراحة، وحقن الحيوانات تحت الجلد مع آخر وزن الجسم 5 Rimadyl / كغ ملغ في تخفيفهالمالحة.

2. تحت الجلد الإدارة من استراديول، 17β من خلال كبسولات Silastic

1. مزيج دقيق المبلغ المطلوب من استراديول، 17β في زيت السمسم. لتركيزات الفسيولوجية في الجرذان والفئران، ونحن نوصي 180 ميكروغرام / مل و 18-36 ميكروغرام / مل على التوالي. تمتلئ كبسولات الدواء الوهمي مع زيت السمسم النقي.
2. قطع 3 سم (2 سم للفئران) أطوال من الأنابيب silastic و 5 مم (3 مم بالنسبة للفئران) أطوال العصي قضيب خشبي ليسد. باستخدام ملقط، ضغط 1 المكونات الخشبية في كبسولة silastic قبل حقن محلول زيت 17β-estradiol/sesame لملء طول. تتويج بلطف الكبسولة silastic في النهاية مفتوحة مع آخر المكونات الخشبية (من المفترض شمعات على البقاء بصورة دائمة في كبسولة). احتضان الكبسولات في حل 17β-استراديول المتبقية بين عشية وضحاها قبل الزرع.
3. لا يمكن أن يؤديها زرع كبسولة خلال التخدير المستخدمة في استئصال المبيض في الفئران. عن ميم، ومع ذلك، ينصح بشدة فترة نقاهة لمدة 14 يوما بعد استئصال المبيض لتقليل مخاطر من الكبسولة جاحظ من خلال الجلد هشا.
4. بعد استعدادات الجراحية كما هو الحال في 1.1، أو بعد إغلاق شق استئصال المبيض، حلاقة وغسل (أ) 2 * منطقة سم 2 على الجانب الظهري من عنق الحيوان. جعل شق 1 سم وتشريح بصراحة جيب تحت الجلد caudolaterally، مع مساحة وافرة للكبسولة. مسح كبسولة silastic (أن حتى هذه النقطة في الوقت وقد حضنت في حل 17β-استراديول) وتثبيت بلطف من خلال الشق الذي يغلق في وقت لاحق من قبل خياطة. فمن المحوري للتأكد من أن السلالات كبسولة الجلد أقل قدر ممكن، لا سيما في منطقة قريبة من الجرح. من إنتاج كبسولات لزرع، فمن المهم أن يتم تجنب التلوث.

3. بطريق الفم؛ بالفم الإدارة من استراديول، 17β عبر نوتيلا البندق كريم

1. حل شامل 17β-استراديول في زيت السمسم، ثم مزج زيت السمسم مع نوتيلا. من المستحسن أن كل جزء يحتوي على 28 ميكروغرام يوميا 17β-استراديول (5)، وزيت السمسم ميكرولتر 1 غرام نوتيلا لكل كيلوغرام من وزن الجسم بالنسبة للفئران و 1.12 ميكروغرام 17β-استراديول، 0،312 زيت السمسم و 60 ميكرولتر نوتيلا ملغ لكل فأر 30-G. يتم إعداد وهمي الجوز كريم مماثل باستثناء دون استراديول-17β.
2. تدريب الحيوانات على أكل هرمون خالية من الجوز كريم لمدة خمسة أيام قبل التجربة. الايام الثلاثة الاولى من التدريب ينبغي، على النحو الأمثل الفئران سيتم تدريب في مجموعات (حوالي 0.5 غرام نوتيلا على الحيوانات 2-5)، في أقفاص وطنهم. في اليومين الرابع والخامس من التدريب، ويتم وضع الحيوانات في أقفاص منفصلة قبل ان يحصل على جزء يوميا ليشابه حالة تجريبية.
3. أثناء التجربة، يتم وضع الحيوانات في أقفاص منفصلة في كل مناسبة للتغذية، وبعد ذلك يتم تقديم جزء نوتيلا على بلاط السيراميك الصغيرة. إذا كان قد تم تنفيذ التدريب على النحو الوارد أعلاه، ستجربة اور هي أن أكثر من 95٪ من الفئران والجرذان قبول الجوز كريم، ومرة ​​واحدة اعتادوا تماما، معظم هذه الحيوانات أنها تستهلك في غضون ثوان.

4. ممثل النتائج

المصل الفيزيولوجي 17β-استراديول تركيزات، والتي الأساليب الحالية تهدف إلى إعادة إنتاج، ما يقرب من 5-140 جزء من الغرام / مليلتر بالنسبة للفئران و5-35 جزء من الغرام / مليلتر بالنسبة للفئران ^4،6. كبسولات تحت الجلد silastic وفقا للتعليمات المذكورة أعلاه، عندما تدار إلى 300 غ من الفئران، سبراغ داولي الإناث، وانخفاض إنتاج ببطء 17β-استراديول تركيزات مصل من حوالي 40 جزء من الغرام / مل اليوم يوم بيكوغرام / مل 2-10 35. ومع ذلك، مباشرة بعد إدارة، يمكن توقع ذروة تركيز مصل الدم حول خريج 1000 / مل، وانخفض إلى مجموعة الفسيولوجية فى غضون 8 ساعات (الشكل 1A) ^4،5. الكبسولات silastic عن الفئران الموصوفة أعلاه مع 17β-estradiol/mL ميكروغرام 36، عندما تدار إلى 25 C57BL الإناث ز / الفئران 6، تجعل اضرب المصلentrations أن ينخفض ​​ببطء من ما يقرب من 90 جزء من الغرام / مل يوم 2-25 جزء من الغرام / مل يوم 35. ويسبق هذا على الأرجح من قبل قمة مماثلة كما تم العثور عليه في الفئران، على الرغم من هذا لم يتم التحقيق فيها (الشكل 1B) ^6.

ووصف طريقة نوتيلا بطريق الفم؛ بالفم مع جرعات أعلى، عندما تدار إلى 300 الفئران ز سبراغ-داولي الإناث، ويجعل المستويات الفسيولوجية للاستراديول-17β مع التقلبات اليومية بين 10-70 جزء من الغرام / مل (الشكل 2A) ^4. بالنسبة للفئران باستخدام جرعة أعلاه، على المستويات اليومية تتراوح ما بين حوالي 20 و 120 جزء من الغرام / مل ⁶ (الشكل 2B).

. رونغ> الشكل 1 الرسوم البيانية مجدد تقديم 17β-استراديول التركيزات في الفئران (A؛ ن = 10 نقاط في الوقت تصل إلى 24 ساعة، ن = 15 نقطة في وقت لاحق من الوقت) ^4،5 والفئران (ب، ن = 10) ⁶ بعد زرع كبسولة. الكبسولات silastic إنتاج ذروة قصيرة الأولي من تركيزات مصل تصل إلى 1000 جزء من الغرام / مل، ولكن الانخفاض في غضون ساعات إلى مستويات أقل من 100 جزء من الغرام / مل. خلال الأسابيع القادمة 4-5، وكبسولات تسفر عن مستقر، على الرغم من الانخفاض المتواصل، تركيزات مصل. المناطق المظللة تتوافق مع تركيزات 17β-استراديول المصل الفيزيولوجي في إناث الفئران سليمة والفئران على التوالي. حتى ولو لم تظهر بصريا في الرسوم البيانية، وهناك ما بين الفرد التغير في تركيزات 17β-استراديول، مما يجعل معاملات التغير 27-183٪ في الفئران ومن 28 إلى 115٪ في الفئران مع أسلوب كبسولة silastic (متوسط ​​منخفض جدا تركيزات كثيرا ما تولد معاملات عالية من التباين).

iles/ftp_upload/4013/4013fig2.jpg "/>
الشكل 2 الرسوم البيانية مجدد تقديم 17β-استراديول التركيزات في الفئران (أ، ن = 15). ⁽⁴⁾ والفئران (ب، ن = 10) ⁶ نتيجة للإدارة الهرمون يوميا في نوتيلا. طريقة نوتيلا بطريق الفم؛ بالفم يجعل قمم يوميا، لكن ليس بفارق كبير يصل إلى تنتجها تحت الجلد أو في الوريد طرق. هذا يقلد الدوائية البشرية العلاج بالهرمونات البديلة، والمعاملة بطريق الفم؛ بالفم يمكن المضي قدما لطالما لزم الأمر، حتى لو المثال أعلاه فقط تقديم أولي 96 ساعة. المناطق المظللة تتوافق مع تركيزات 17β-استراديول المصل الفيزيولوجي في إناث الفئران سليمة والفئران على التوالي. حتى ولو لم تظهر بصريا في الرسوم البيانية، وهناك ما بين الفرد التغير في تركيزات 17β-استراديول، مما يجعل معاملات التغير 40-132٪ في الفئران ومن 13 إلى 219٪ في الفئران مع أسلوب نوتيلا (متوسط ​​تركيزات منخفضة للغاية كثيرا ما تولد ارتفاعمعاملات التغير).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

ثبت أن وسائل إدارة المعروضة أعلاه لها في الدراسات السابقة متفوقة على الكريات بطء الإفراج التجارية وحقن من حيث تنتج تركيزات مصل الفسيولوجية للاستراديول-17β. في حين الافراج بطيئة الكريات إنتاج عالية جدا وطويلة قمم تركيز مصل الدم، والحقن تسبب المدقع، والتقلبات الهرمون...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
اسم كاشف	شركة	فهرس العدد	تعليقات
Rimadyl، 50 ملغ / مل	فايزر	462986	بعد العملية الجراحية للوعي بعد استئصال المبيض.
Lubrithal العين هلام	ليو مختبرات		حماية العين أثناء الجراحة.
Jodopax التعليم والتدريب المهني	Pharmaxim		جراحة التعقيم.
4-0 خياطة Vicryl	جونسون آند جونسون		خاط الجرح وربط المبيض.
17β-استراديول،> 98٪	سيغما	E8875-1G	في زيت السمسم لكبسولات silastic ونوتيلا.
زيت السمسم	سيغما	S3547-1L	حل 17β-استراديول.
Silastic الأنابيب، الهوية / التطوير التنظيمي: 1.575/3.175 مم	داو كورنينج	508-008	إنتاج كبسولات silastic.
قضيب خشبي عصا	Selefatrade	12-0783	متوجا من الكبسولات silastic.
نوتيلا	فيريرو		متوسطة لمدة بطريق الفم؛ بالفم استراديول-17β.