Sıçan ve Farelerde Ovariektomi ve 17β-östradiol Değiştirme: Görsel Gösteri

Özet

Silastik kapsüller ve peroral Nutella vasıtası ile overlerin alınması ve 17β-estradiol müteakip değiştirilmesi sıçan ve farelerin gösterilmiştir.

Özet

Östrojenler etkileri istisnai olarak geniş bir yelpazeye sahip kadın cinsel hormonların bir aile vardır. Sıçan ve farelerde östrojen araştırmalarında kullanılan ettiklerinde genellikle 17β-östradiol Eksojen yerine, hızla bisiklete hormon üretimini baskılamak için ovarektomi edilir. Hormonu fizyolojik serum elde etmek için uygulanmalıdır nasıl olduğu konusunda görüş birliği eksikliği Ancak, vardır. 17β-östradiol seviyesi / uygulama yöntemi derinden deneysel sonuçlar ^1-3 etkilediğinden Bu çok önemlidir. Biz subkutan silastik kapsül ve başına sözlü somun-krem Nutella ticari yavaş salımlı granül (Amerika Yenilikçi Araştırma şirketi tarafından üretilen) üstün olduğu bulma, 17β-östradiol yönetimin farklı modları karakterize bir dizi çalışma var ve 17β-estradiol ^4-6 fizyolojik serum konsantrasyonları üretimi açısından günlük enjeksiyonlar. Adv arasındaDaha önce buprenorfin idaresi ⁷ için kullanılır olmuştur fındık dondurma yöntemi, bir antages östrojen yönetimi için kullanılan zaman oral hormon replasman tedavisi benzer ve non-invaziv olmasıdır. Subkutan silastik kapsüller uygundur ve çok kararlı serum konsantrasyonları üretirler. Bu video, makale ovariektomi adım adım gösteri ve silastik kapsül ve yönetim prosedürlerinin önemli yönlerini bir tartışma izler sıçan ve farelerde yapılan oral Nutella tarafından 17β-östradiol hormon replasman içerir.

Protokol

1. Dorsal Rota aracılığıyla Ovariektomi

1. Bir oksijen / nitrik oksit,% 30 /% 70 karışımı içinde% 1.5 izofluran (indüksiyonu için% 4) kullanılarak, örneğin hayvansal uyuşturmak. Bir rektal termometre bağlı bir ısıtma plaka üzerinde pozisyonda hayvan yerleştirin. Bu hayvan ve plaka arasında izolasyon ince bir tabaka olması önemlidir ve bu termometre geri besleme sistemi 37 içinde vücut ısısını korur ± 0.5 ° C Göz koruması için jel sürün ve postoperatif ağrı için hayvanın boyun lateral üzerindeki deri altına serum fizyolojik ile sulandırılmış 5 mg Rimadyl / kg vücut ağırlığı yönetmek.
2. Iliak kanattan cephally bir 4 * 4 cm (3 fareler için * 3 cm) alan Tıraş. Iyice bir 4 * 4 cm açıklık cerrahi sac ile hayvan kapsayan önce Örneğin Jodopax için ile traş yıkayın.
3. 2-3 cm'lik orta hat kesi olun ve açık açık yatan fasya karşı cildi incelemek. Orta hat lateral Bir cm, başka bir kesi yapmak uçtan bir ucafasya ugh. Açık açık karın boşluğuna ulaşana kadar yüzeysel olarak mümkün olduğunca bu fasya altında yanal incelemek.
4. Cımbız kullanarak, karın boşluğunda over çevreleyen yağ dokusu kapmak ve yavaşça dışarı çekin. Over belirlemek ve uterin boynuz ve bu yapının proksimalde damarları 0.5-1 cm ligate. Over ve bağlanan yağ dokusu kesin ve karın boşluğuna kalan doku geri koydum. Kontralateral fasya başka bir kesi yapmak ve işlemi tekrarlayın.
5. Tercihen bir monofilament sütür kullanılarak, yaraları kapatmak ve anesteziden uyanık hayvan izin verin. Cerrahisinden sonra, en azından 2 saat boyunca ısıtılmış bir kafes (25-27 ° C) içinde hayvan yerleştirin. Hayvanlar birinci gün postoperatif ayrı muhafaza edilmelidir. Bu kafes sık iyileşme döneminde temizlenir / değiştirilir çok önemlidir. Yirmi dört saat cerrahisinden sonra, bir başka ile seyreltilir 5 mg Rimadyl / kg vücut ağırlığı ile deri altından enjekte hayvanlarıtuzlu.

2. Silastik Kapsül ile 17β-östradiol Subkutan İdaresi

1. Iyice susam yağı 17β-östradiol istenilen miktarda karıştırın. Sıçanlar ve fareler fizyolojik konsantrasyonları için, sırasıyla 180 mcg / mL ve mcg / mL 18-36 öneririz. Plasebo kapsüller saf susam yağı ile doldurulur.
2. 3 cm (fareler için 2 cm) silastik boru uzunlukları ve 5 mm (fareler için 3 mm) takmak için ahşap aplikatör sopalarla uzunlukları kesin. Forseps kullanarak, tüm uzunluğu doldurmak için 17β-estradiol/sesame yağ solüsyonu enjekte önce silastik kapsül içine bir ahşap fiş sıkın. Yavaşça ahşap bir fiş (fişler kapsül kalıcı kalması beklenen) ile açık sonunda silastik kapsül kap. Implantasyondan önce, bir gece boyunca geri kalan 17β-östradiol çözelti içinde kapsül inkübe.
3. Kapsülün implantasyon sıçanlarda ovariektomi kullanılan anestezi gerçekleştirilebilir. Mi içince, ancak ovariektomi sonra 14 günlük bir iyileşme süresi kuvvetle narin deri yoluyla çıkıntılı kapsül riskini en aza indirmek için tavsiye edilir.
4. 1.1 gibi, ya ovariektomi insizyon kapatıldıktan sonra cerrahi hazırlıklardan sonra, tıraş ve hayvanın boyun dorsalinde 2 * 2 cm yıkayın. 1 cm'lik bir kesi yapmak ve pervasızca kapsül için geniş bir alan olan, caudolaterally bir deri altı cebe incelemek. Silastik kapsül (bu zaman noktaya kadar 17β-östradiol çözüm inkübe edildiği) silin ve yavaşça sonradan bir dikişle kapatılır kesi yoluyla yükleyin. Bu emin olmak için çok önemli olduğu, özellikle yara yakın alanda mümkün olduğunca az kapsül suşları cilt. Implantasyon kapsül üretimi bakıldığında, kirlenmenin önlendiği önemlidir.

3. Nut-krem Nutella ile 17β-östradiol peroral İdaresi

1. Iyice erimesi 17β-sonra susam yağı östradiol ve Nutella ile susam yağı karıştırın. Her günlük kısmı 17β-östradiol 28 mikrogram, 5 uL susam yağı ve bir kilogram vücut ağırlığı ve sıçanlar için 17β-estradiol 1.12 mg, 0,312 uL susam yağı ve her 30-g fare için 60 mg Nutella başına 1 gr Nutella içerir öneririz. Placebo ceviz krem ​​17β-östradiol olmadan hariç aynı hazırlanır.
2. Deney öncesinde beş gün için hormon içermeyen ceviz krem ​​yemeği için hayvanlar eğitin. Eğitimin ilk üç gün, fareler optimal evlerinde kafeslerde, (yaklaşık 0.5 gr Nutella 2-5 hayvanlar için) grupları konusunda eğitilmelidir. Eğitimin dördüncü ve beşinci günlerde, hayvanların deneysel duruma benzemeye günlük kısmını almadan önce ayrı kafeslere konur.
3. Deneme sırasında, hayvanların Nutella kısmı küçük seramik karoların üzerinde servis edilir sonra, her beslenmeden durum için ayrı kafeslere konur. Eğitim yukarıda, o gibi yapıldıysaur deneyim sıçan ve farelerin fazla% 95 fındık-krem kabul, ve bir kez tam habitüe, hayvanların çoğu saniye içinde tüketmek olmasıdır.

4. Temsilcisi Sonuçlar

Mevcut yöntemlerin yeniden hedefliyoruz serum fizyolojik 17β-östradiol konsantrasyonu, yaklaşık olarak 5-140 pg / sıçan ve fareler ^4,6 için 5-35 pg / mL için ml. Subkutan silastik kapsülleri yukarıdaki talimatlara göre, 300 gram dişi Sprague-Dawley sıçanlara zaman, yavaş yavaş pg / mL günde yaklaşık 40 adet 2 ila 10 pg / mL günde 35 17β-östradiol serum konsantrasyonları azalmakta üretirler. Ancak, hemen uygulamadan sonra, 1000 pg / ml civarında bir serum pik konsantrasyonu ^4,5 (Şekil 1A) 8 saat içinde fizyolojik aralığına düşen beklenebilir. 25 g dişi C57BL / 6 fare uygulanmıştır 36 ug 17β-estradiol/mL, yukarıda tarif fareler için silastik kapsüller, serum kons işlemekyavaş yavaş yaklaşık 90 pg / mL günde 2 ila 25 pg / mL günde 35 düşmesi entrations. Bu (Şekil 1B) ⁶ incelenmemiştir rağmen, sıçanlarda bulundu gibi Bu muhtemelen benzer bir pik önce gelmelidir.

Dozlarda peroral Nutella yöntemi 300 g dişi Sprague-Dawley farelerinin uygulandığı zaman, yukarıda anlatılan 10-70 pg / ml (Şekil 2A) ⁴ arasında günlük dalgalanmalarla 17β-estradiol fizyolojik seviyeleri vermektedir. Yukarıda belirtilen dozlar kullanılarak fareler için, günde yaklaşık 20 seviyeleri ve 120 pg / ml (Şekil 2B) ⁶ arasında değişen.

. sıçanlarda 17β-östradiol seviyelerini gösteren rong> Şekil 1 Stilize grafikleri; ^4,5 ve fareler (Bir sonraki zaman noktalarında n zaman puan = 10 en çok 24 saat, n = 15) (B n = 10) kapsül implantasyon sonrası ^6. Silastik kapsülleri 1000 serum konsantrasyonları kısa bir başlangıç ​​zirveye kadar üretmek pg / ml, ama 100 pg / ml altındaki seviyelere saat içinde azalır. Giderek azalmakta olsa da önümüzdeki 4-5 hafta için, kapsül, serum konsantrasyonları istikrarlı verim. Gölgeli alanlar sırasıyla sağlam dişi sıçanlar ve fareler fizyolojik 17β-östradiol serum karşılık gelir. Görsel grafikler gösterilememiştir rağmen, inter-bireysel değişkenliği (çok düşük ortalama 27 sıçanlarda% 183 ve 28 silastik kapsül yöntemi ile farelerde% 115 değişkenlik katsayıları render 17β-östradiol konsantrasyonu vardır konsantrasyonları genellikle) varyasyon katsayıları yüksek oluşturur.

iles/ftp_upload/4013/4013fig2.jpg "/>
Şekil 2 sıçanlarda 17β-östradiol konsantrasyonu sunan Stilize grafikler (A; n = 15). ⁴ ve fareler (B n = 10) Nutella günlük hormonu verilmesinin bir sonucu olarak ^6. Peroral Nutella yöntem subkutan veya intravenöz yöntemlerle üretilen kadar yüksek değil ancak açık farkla, günlük pik vermektedir. Bu insan hormon replasman tedavisi farmakokinetiği taklit eden ve oral tedavi sadece yukarıdaki örnekte ilk 96 saat sunmak bile, gerekli olduğu sürece için devam edebilirsiniz. Gölgeli alanlar sırasıyla sağlam dişi sıçanlar ve fareler fizyolojik 17β-östradiol serum karşılık gelir. Rağmen görsel grafikler gösterildiği değil, inter-bireysel değişkenliği (çok düşük ortalama konsantrasyonları Nutella yöntemi ile farelerde sıçanlarda 40-% 132 den ve 13 219% ile varyasyon katsayıları render 17β-östradiol konsantrasyonu vardır genellikle yüksek üretmekvaryasyon katsayıları).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Daha önceki çalışmalarda var Yukarıda sunulan yönetim modları 17β-östradiol fizyolojik serum üretimi açısından ticari yavaş salımlı tablet ve enjeksiyon üstün olduğunu kanıtladı. Yavaş salınımlı pelet çok yüksek ve uzun süreli serum konsantrasyonu zirveleri üretirken, enjeksiyon aşırı, günlük hormon dalgalanmalara neden ve hayvanların ^4-6 tekrarlanan stresli ele alınmayı gerektirir. Yeterli yönetim modları seçmenin önemi düşük doz 17β-östradiol yönetim rejimleri ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reaktif Adı	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Rimadyl, 50 mg / ml	Pfizer	462986	Ovariektomi postoperatif analjezi.
Lubrithal göz jeli	Leo Laboratuvarları		Ameliyat sırasında göz koruması.
Jodopax veteriner	Pharmaxim		Cerrahi dezenfeksiyon.
Vicryl 4-0 sütür	Johnson & Johnson		Sütür ve over ligasyonu Yaralanması.
17β-estradiol,>% 98	Sigma	E8875-1G	Silastik kapsül ve Nutella için susam yağı içinde.
Susam yağı	Sigma	S3547-1L	17β-östradiol dağıtılması.
Silastik tüp, ID / OD: 1.575/3.175 mm	Dow Corning	508-008	Silastik kapsül üretimi.
Ahşap aplikatör çubuk	Selefatrade	12-0783	Silastik kapsül Kapatma.
Nutella	Ferrero		Peroral 17β-östradiol için Orta.