Овариоэктомия и 17β-эстрадиола Замена у крыс и мышей: наглядная демонстрация

Резюме

Овариоэктомия и последующей заменой 17β-эстрадиола с помощью силиконовой капсулы и пероральный Nutella демонстрируются на крысах и мышах.

Аннотация

Эстрогены семьи женских половых гормонов с исключительно широким спектром эффектов. Когда крыс и мышей, которые используются в эстроген исследования они, как правило, яичниками, чтобы удалять быстро велосипеде выработку гормонов, заменив 17β-эстрадиол экзогенно. Существует, однако, отсутствие консенсуса относительно того, как гормон следует применять для получения физиологического раствора концентрации. Это очень важно, так как 17β-эстрадиола уровень / Администрация метод глубоко влияет на результаты эксперимента ^1-3. Мы имеем в серии исследований, характеризуется различными видами 17β-эстрадиол администрации, посчитав, что подкожные силиконовые капсулы и за устные орехов крем Nutella превосходит коммерчески доступных медленного высвобождения гранул (производства компании Innovative Research Америки) и ежедневных инъекций по производству физиологических сывороточных концентраций 17β-эстрадиол ^4-6. Среди продвинутыхantages ореха мороженого метод, который ранее был использован для бупренорфин администрации ^7, в том, что когда он используется для приема эстрогенов она напоминает пероральные заместительной гормональной терапии и является неинвазивным. Подкожный силиконовые капсулы удобны и дают наиболее стабильный сыворотке. Эта статья содержит видео шаг за шагом демонстрации овариэктомии и 17β-эстрадиола гормон замена силиконовые капсулы и пероральный Nutella у крыс и мышей, а затем обсуждение важных аспектов административных процедур.

протокол

1. Овариоэктомия через спинной маршрута

1. Анестезию животного, например, с помощью 1,5% ИФ (4% для индукции) в кислород / закись азота 30% / 70% смеси. Поместите животное в положении лежа на нагревательной пластины связаны с ректального термометра. Важно, чтобы тонкий слой изоляции между животным и пластинки, и термометр системы обратной связи поддерживает температуру тела в пределах 37 ± 0,5 ° C. Применение геля для защиты глаз и управлять 5 мг Римадил / кг массы тела растворяется в солевом подкожно на латеральной шеи животного для послеоперационного обезболивания.
2. Бритье 4 * 4 см (3 * 3 см для мышей) области cephally из гребня подвздошной кости. Тщательно вымойте бритой области, например, с Jodopax до покрытия животное с 4 * 4 см лист хирургия диафрагмы.
3. Сделайте 2-3 см, срединный разрез и прямо рассекают кожу от основной панели. Один см латеральнее средней линии, сделать еще один разрез беспересадочныйтьфу фасции. Грубо рассекают сбоку под этой фасцией как поверхностно возможно до достижения брюшной полости.
4. С помощью пинцета возьмите жировой ткани, которая окружает яичника в брюшную полость и осторожно вытащите его. Определить яичников и перевязывать рога матки и сосудов 0,5-1 см проксимальнее этой структуры. Разрежьте яичников и перевязанной жировой ткани и поставьте обратно в тканях брюшной полости. Сделайте еще один разрез в противоположной панели и повторите процедуру.
5. Закройте раны, предпочтительно с использованием мононити шов, и пусть животное очнуться от наркоза. Поместите животное в клетке с подогревом (25-27 ° С) в течение по крайней мере 2 часа после операции. Животные должны быть размещены отдельно в первые дни после операции. Это имеет решающее значение, что клетки часто очистке / замене на этапе восстановления. Двадцать четыре часа после операции, вводят животным подкожно еще 5 мг Римадил / кг массы тела растворяется вфизиологическим раствором.

2. Подкожного введения 17β-эстрадиола через Silastic капсулы

1. Тщательно смешать необходимое количество 17β-эстрадиола в кунжутное масло. В физиологических концентрациях у крыс и мышей, мы рекомендуем 180 мкг / мл и 18-36 мкг / мл соответственно. Placebo капсулы наполнены чистым маслом кунжута.
2. Сокращение 3 см (2 см для мышей) длиной силиконовые трубки, 5 мм (3 мм для мышей) длины деревянные палочки аппликатор для подключения. Используя щипцы, сожмите одну деревянную вилку в силиконовые капсулы перед инъекцией 17β-estradiol/sesame масляного раствора, чтобы заполнить всю длину. Осторожно ограничить силиконовые капсулы в открытый конец с другой деревянные пробки (заглушки должны навсегда остаться в капсуле). Инкубируйте капсулы в остальных 17β-эстрадиол решение ночь перед имплантацией.
3. Имплантация капсулы могут быть выполнены во время анестезии используется при овариэктомии у крыс. Для мильсе, тем не менее, 14-дневный период восстановления после овариэктомии, настоятельно рекомендуется свести к минимуму риск того, что капсула выступающие через хрупкую кожу.
4. После хирургической подготовки, как в 1.1, или после закрытия овариэктомии разрез, бриться и мыться 2 * 2 см области на спинной части шеи животного. Сделайте надрез 1 см и резко рассекать подкожный карман caudolaterally, с достаточным пространством для капсулы. Протрите силиконовые капсулы (что до этого времени точка была инкубировали в 17β-эстрадиола раствора) и осторожно установить его через разрез, который впоследствии закрывается швом. Это имеет решающее значение, чтобы убедиться, что капсулы штаммов кожу как можно меньше, особенно в районе, недалеко от ран. В производстве капсул для имплантации, важно, чтобы избежать загрязнения.

3. Перорального введения 17β-эстрадиола через Орех-сливки Nutella

1. Тщательно растворите 17β-эстрадиола в кунжутное масло, а затем смешать с кунжутным маслом Nutella. Мы рекомендуем, чтобы каждый ежедневно часть содержит 28 мг 17β-эстрадиола, 5 мкл кунжутного масла и 1 г Nutella на килограмм веса тела для крыс и 1,12 мг 17β-эстрадиол, 0,312 мкл кунжутного масла и 60 мг Nutella для каждого 30-г мыши. Placebo орехов крем готовят одинаково, за исключением без 17β-эстрадиол.
2. Обучение животных есть гормонов орехов крем в течение пяти дней до начала эксперимента. Первые три дня обучения, крысы должны оптимально пройти обучение в группах (около 0,5 г Nutella 2-5 животных), в клетках дома. На четвертый и пятый день обучения, животные помещаются в отдельные клетки до получения ежедневной часть напоминает экспериментальную ситуацию.
3. В ходе эксперимента животные помещаются в отдельные клетки для каждого кормления раз, после чего часть Nutella подается на небольшие керамические плитки. Если тренировка была выполнена, как указано выше, оур опыт показывает, что более 95% от крыс и мышей принять орех крем, и как только полностью привыкли, большинство животных потреблять его в течение нескольких секунд.

4. Представитель Результаты

Физиологические сыворотки 17β-эстрадиола концентрации, которые современные методы направлены на воспроизведение, около 5-140 пг / мл для крыс и 5-35 пг / мл для мышей ^4,6. Подкожный силиконовые капсулы в соответствии с инструкциями выше, при приеме внутрь до 300 г женского Sprague-Dawley крыс, производить медленно убывающих 17β-эстрадиола сыворотке от 40 пг / мл 2-й день до 10 пг / мл 35-й день. Однако сразу же после введения сыворотки максимальной концентрации около 1000 пг / мл можно ожидать, упав на физиологическом диапазоне в течение 8 часов (рис. 1а) ^4,5. Силиконовые капсулы для мышей, описанные выше 36 мкг 17β-estradiol/mL, при введении 25 г женщина C57BL / 6 мышей, оказывают сыворотки концентрированнойentrations, которые медленно снижаться с примерно 90 пг / мл 2-й день до 25 пг / мл 35-й день. Это, вероятно, предшествовал аналогичный пик, как было обнаружено у крыс, хотя это не исследовано (рис. 1б) ^6.

Пероральный метод Nutella с дозы, описанной выше, при приеме внутрь до 300 г женского Sprague-Dawley крыс, оказывает физиологическое уровней 17β-эстрадиола с суточными колебаниями между 10-70 пг / мл (рис. 2A) ^4. Для мышей с использованием выше доза, ежедневные уровни колеблются примерно от 20 до 120 пг / мл (рис. 2В) ^6.

. Ронг> Рисунок 1 стилизованные представления графов 17β-эстрадиола концентрации у крыс (А, п = 10 временных точек до 24 ч, п = 15 в более поздние времена точек) ^4,5 и мышей (B, N = 10) ⁶ после имплантации капсул. Силиконовые капсулы в течение непродолжительного начального пика концентрации в сыворотке крови до 1000 пг / мл, но снижение в течение нескольких часов до уровней ниже 100 пг / мл. В ближайшие 4-5 недели, капсулы дают стабильный, хотя и неуклонно снижается, сывороточных концентраций. Затененные области соответствуют физиологическим 17β-эстрадиола сыворотке интактных самок крыс и мышей соответственно. Хотя визуально не показал на графиках, то между индивидуальной изменчивости в 17β-эстрадиола концентрации, что делает коэффициенты вариации от 27 до 183% у крыс и от 28 до 115% у мышей с силиконовой метод капсулы (очень низкая средняя Концентрации часто порождают высокие коэффициенты вариации).

iles/ftp_upload/4013/4013fig2.jpg "/>
Рисунок 2 стилизованные представления графов 17β-эстрадиола концентрации у крыс (А, п = 15). ⁴ и мышей (B, N = 10) ^6, как следствие ежедневного приема гормонов в Nutella. Пероральный метод Nutella оказывает ежедневное пиков, но не намного выше, чем производства подкожно или внутривенно методами. Это имитирует фармакокинетику человека заместительной гормональной терапии, и питьевого лечения может продолжаться сколь угодно долго, даже если приведенный выше пример только представить первоначальный 96 часов. Затененные области соответствуют физиологическим 17β-эстрадиола сыворотке интактных самок крыс и мышей соответственно. Хотя визуально не показал на графиках, то между индивидуальной изменчивости в 17β-эстрадиола концентрации, что делает коэффициенты вариации от 40 до 132% у крыс и от 13 до 219% у мышей с методом Nutella (очень низкая средняя концентрация зачастую приводит к высокойКоэффициенты вариации).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Администрация режимах приведенные выше есть в более ранних исследованиях доказал свое превосходство в коммерческих медленного высвобождения гранул и инъекций по производству физиологических сывороточных концентраций 17β-эстрадиол. Хотя медленным высвобождением гранулы производят...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Название реагента	Компания	Номер по каталогу	Комментарии
Римадил, 50 мг / мл	Pfizer	462986	Послеоперационного обезболивания после овариэктомии.
Lubrithal глаз гель	Лев лаборатории		Защита глаз во время операции.
Jodopax ветеринара	Pharmaxim		Хирургия дезинфекции.
Викрил 4-0 шва	Johnson & Johnson		Рана шва и яичников труб.
17β-эстрадиол,> 98%	Сигма	E8875-1G	В кунжутное масло на силиконовой капсулы и Nutella.
Кунжутное масло	Сигма	S3547-1L	Растворение 17β-эстрадиол.
Silastic труб, ID / OD: 1.575/3.175 мм	Dow Corning	508-008	Производство силиконовые капсулы.
Деревянная палка аппликатор	Selefatrade	12-0783	Укупорки силиконовые капсулы.
Nutella	Ферреро		Средний для перорального 17β-эстрадиол.