Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

نقدم تدفق الخلوي على أساس طريقة لدراسة تطور الخلايا T في الجسم الحي باستخدام الفئران وراثيا على التلاعب wildtype أو T خلفية مستقبلات الخلايا المعدلة وراثيا.

Abstract

A نظام صحي المناعي يتطلب أن الخلايا T المستضدات الخارجية الرد على حين تبقى تسامحا في تقرير المصير، مستضدات. إعادة ترتيب عشوائية من مستقبلات الخلايا T (TCR) α β ومواضع يولد مرجع خلية T مع تنوع واسع في خصوصية المستضد، سواء في تقرير المصير والأجنبية. اختيار مرجع خلال التنمية في الغدة الصعترية هو أمر حاسم لتوليد خلايا T آمنة ومفيدة. عيوب في اختيار التوتة المساهمة في تطوير اضطرابات المناعة الذاتية ونقص المناعة 1-4.

الأسلاف خلية T دخول التوتة كما نقرا thymocytes (DN) السلبية التي لا تعبر عن CD4 CD8 أو شارك في مستقبلات. التعبير عن كل من شارك وαβTCR مستقبلات يحدث في مرحلة (DP) إيجابية مزدوجة. تفاعل مع αβTCR الذاتي الببتيد-MHC (PMHC) قدم من قبل خلايا الغدة الصعترية يحدد مصير خلية توتية DP. التفاعلات تؤدي إلى تقارب عالية التحديد السلبية وeliminaنشوئها من ذاتية التفاعل thymocytes. انخفاض نتيجة التفاعلات الإيجابية تقارب في اختيار وتطوير CD4 CD8 واحد أو إيجابية (SP) خلايا T قادرة على الاعتراف المستضدات الخارجية المقدمة من MHC الذاتي 5.

يمكن دراستها اختيار الإيجابية في الفئران مع ذخيرة بولكلونل TCR (wildtype) من خلال مراقبة الجيل من الخلايا T الناضجة. ومع ذلك، فإنها ليست مثالية لدراسة اختيار السلبية التي ينطوي حذف السكان مستضد محددة الصغيرة. وقد استخدمت العديد من أنظمة نموذج لدراسة اختيار السلبية ولكنها تختلف في قدرتها على تلخيص الأحداث الفسيولوجية 6. على سبيل المثال، في المختبر من التحفيز thymocytes تفتقر إلى البيئة الغدة الصعترية التي تشارك عن كثب في الاختيار، في حين إدارة مستضد خارجي المنشأ يمكن أن يؤدي إلى غير محددة حذف thymocytes 7-9. حاليا، أفضل الأدوات لدراسة في الجسم الحي هي اختيار السلبية الفئران التي تعبر عن transgenic TCR محددة لمستضد الذاتية الذاتي. ومع ذلك، وتتميز العديد من النماذج الكلاسيكية المعدلة وراثيا من قبل TCR المبكرة التعبير عن سلسلة TCRα المعدلة وراثيا في مرحلة DN، مما أدى إلى اختيار سابق لأوانه السلبية. وقد وضعت مختبرنا النموذج CD4 HY، وهو ما يعبر عنه في مشروط HY المعدلة وراثيا TCRα في مرحلة DP، مما يسمح لاختيار سلبية تحدث أثناء الانتقال إلى DP SP كما يحدث في الفئران wildtype 10.

هنا، نحن تصف تدفق الخلوي على أساس بروتوكول لفحص الغدة الصعترية اختيار الإيجابية والسلبية في نموذج الفأر HY CD4. في حين اختيار سلبية في الفئران CD4 HY هو الفسيولوجية للغاية، ويمكن أيضا أن تطبق هذه الأساليب لغيرها من النماذج المعدلة وراثيا TCR. سنقدم أيضا الاستراتيجيات العامة لتحليل إيجابي في اختيار ذخيرة بولكلونل ينطبق على أي تلاعب الفئران وراثيا.

Protocol

الرجوع إلى الشكل 1 مخطط شامل للبروتوكول التجريبية.

1. تشريح

  1. مكان الصلب شبكة العقيمة الشاشة إلى 60 × 15 مم طبق بتري. وهناك حاجة وحدة واحدة لكل عينة الأنسجة.
  2. إضافة 5 مل من محلول الملح المتوازن هانك (HBSS) إلى كل طبق. إبقاء الأطباق على الجليد.
  3. الموت ببطء مع الفئران CO 2.
  4. آمنة الماوس لسطح تشريح، جنبا بطني مواجهة. رذاذ الفأر مع الايثانول 70٪ للتعقيم والتي تكفل متعقد الفراء أسفل.
  5. باستخدام مقص جراحي، تبدأ بجعل تشريح شق بطني في الجلد في منطقة البطن فقط فوق الأعضاء التناسلية. تمديد صعودا إلى شق الذقن.
  6. من خط الوسط، تمديد شق أسفل على طول جميع الأطراف. سحب الجلد فضفاضة ويعلقون عليه إلى السطح تشريح.
  7. حصاد الغدة الصعترية:
    1. رفع الطرف السفلي من عظمة القص إلى إجراء شق.
    2. تجنب الكبد، قطع الحجاب الحاجز لفصل القفص الصدري ثم قطع القفص الصدري على كل جانب. قطع ما يزيد على كل جانب القفص الصدري، مع الحرص على تجنب الرئتين والقلب.
    3. سحب بلطف مرة أخرى القفص الصدري مع ملقط. الغدة الصعترية هي بيضاء، جهاز الفص تقع فوق القلب. باستخدام حافة مسطحة من ملقط لفهم الجزء السفلي من فصوص، وسحب بلطف الغدة الصعترية ووضعه على الشاشة شبكة.
  8. حصاد الطحال:
    1. الطحال هو أحمر، ركوب الأمواج على شكل الجهاز الموجود على الجانب الأيسر من تجويف البطن الماوس،، تحت الكبد.
    2. إجراء شق في تجويف البطن. سحب بلطف من الطحال مع زوج واحد من الملقط، وذلك باستخدام الزوج الثاني لندف بعيدا النسيج الضام. وضع الطحال على شاشة شبكة منفصلة.

2. خلية إعداد

  1. باستخدام المكبس من المحاقن مل 3، طحنأجهزة المستمر على شاشة شبكة النسيج الضام حتى فقط وبقايا الدهون. شطف مع شبكة HBSS من الطبق ثلاث مرات. استخدام المكبس جديد لكل عينة الأنسجة.
    1. ويمكن استخدام خيارات أخرى لالمجانسة الأنسجة بدلا من هذا الأسلوب.
  2. عد الخلايا باستخدام عدادة الكريات.
  3. بيليه الخلايا بواسطة الطرد المركزي في 335 x ج لمدة 5 دقائق في C. ° 4
  4. إعادة تعليق splenocytes في 500 ميكرولتر من العازلة تحلل ACK (0.15 M NH 4 الكلورين، 10 ملم KHC0 3، 0.1 مم نا 2 EDTA، ودرجة الحموضة 7.2) لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. thymocytes إعادة تعليق على 20 × 10 6 خلية / مل العازلة FACS في (PBS، 1٪ FCS، 0.02٪ أزيد الصوديوم) وتوضع جانبا على الجليد.
  5. العودة إلى splenocytes تعادل التوتر عن طريق إضافة 5 مل من HBSS. splenocytes بيليه بواسطة الطرد المركزي و resuspend في 20 × 10 6 خلية / مل العازلة FACS في. إذا الخلايا تحتاج للبقاء العقيمة، يمكنك استخدام معقم RPMI + FCS 10٪.

3.تلطيخ الخلايا لقياس التدفق الخلوي

والغرض من هذا البروتوكول هو تحديد استراتيجيات لتحليل اختيار الإيجابية والسلبية باستخدام wildtype (WT) والفئران HY CD4. لاعتبارات عامة تتعلق تدفق الخلوي التجريبية تصميم وحيازة، والتحليل، ونشير إلى القراء استعراض ممتاز من قبل تونغ وآخرون 11

  1. قسامة 4 × 10 6 thymocytes لكل عينة التدفق الخلوي إلى كل بئر من لوحة 96-حسنا، وكذلك 1 × 10 6 splenocytes WT في السيطرة التعويض. في حالة استخدام الفئران المعدلة وراثيا، يجب أن تشمل الماوس WT كعنصر تحكم في تجربتك.
  2. منع المستقبلات من التيسير احتضان الخلايا مع anti-CD16/32 (استنساخ 2.4G2) لمدة 10 دقيقة على الجليد.
  3. تدور في 335 XG وحة في C ° 4 لمدة 5 دقائق. إزالة الغطاء وتبديد السائل من الآبار بواسطة عبها لوحة واحدة، تواجه أسفل إلى بالوعة. إعادة تعليق كل بئر في 200 ميكرولتر من العازلة FACS. تكرار الغسيل.
  4. إعداد الكوكتيلات الأجسام المضادة على النحو المبين أدناه، وذلك باستخدام تركيز الأمثل للكل الأجسام المضادة على أساس التخفيف في 200 ميكرولتر من العازلة FACS لكل بئر. يتم تعريف التركيز الأمثل للكل الأجسام المضادة كما تحتوي على نسبة أقل حاجة لإعطاء أكبر فصل السكان الإيجابية والسلبية. إذا لم يكن هناك سكان السلبية لجسم معين، ينبغي إدراج نمط إسوي جسم مضاد. يمكن زيادتها إجمالي حجم لكل بئر أسفل (على سبيل المثال إلى 100 ​​ميكرولتر لكل بئر) اذا شئت.
    1. WT الغدة الصعترية: مكافحة TCRβ، ومكافحة CD4، ومكافحة CD8، ومكافحة CD69 أو مكافحة CD5، CD24 المضادة لل
    2. CD4 HY الغدة الصعترية: مكافحة HY TCR (T3.70)، ومكافحة CD4، ومكافحة CD8، ومكافحة CD69 أو مكافحة CD5، CD24 المضادة لل
      للحصول على أفضل فصل CD69 CD69 الصغرى والسكان في thymocytes مرحبا، فمن المستحسن أن يتم استخدام الأجسام المضادة لمكافحة CD69 المعقدة البيروكسيديز الأساسي، تليها الثانوية البقعة التي تحتوي على ملون تألقي، مترافق streptavidin. نحن عSE نفس الاستراتيجية لCD5 تلطيخ.
  5. احتضان خلايا مع 200 ميكرولتر من الأجسام المضادة في كوكتيل العازلة FACS لمدة 30 دقيقة على الجليد في الظلام.
  6. المتزامنة مع تلطيخ كوكتيل الأجسام المضادة، وصمة عار كل عنصر تحكم التعويض مع الأجسام المضادة ملون تألقي، مترافق واحد. من الناحية المثالية، وتلطيخ التعويض ينطوي على نفس الأجسام المضادة المستخدمة في كوكتيل الأجسام المضادة. ومع ذلك، قد تلطيخ لكل مستضد الفردية لا يكون ممكنا للحصول على أكبر التجارب عندما يتم يعاير مستضدات عديدة. ولذلك، فمن المستحسن لتلطيخ CD4 المضادة للأو CD8 المضادة، بسبب التعبير عالية من هذه المضادات، أو استخدام الخرز التعويض. وصمة عار في المخزن المؤقت FACS لمدة 30 دقيقة على الجليد في الظلام. ترك عنصر تحكم واحد التعويض غير ملوثين.
  7. غسل الخلايا مرتين مع العازلة FACS.
  8. إعادة تعليق الخلايا في المخزن المؤقت FACS ونقلها لأنابيب FACS.
  9. الحصول على عينات على قياس التدفق الخلوي. وتشمل اقتناء FSC-A-W وFSC إلىllow صدرة للتمييز.

4. تحليل البيانات قياس التدفق الخلوي - غير TCR الفئران المعدلة وراثيا

نستخدم FlowJo التدفق الخلوي لتحليل البيانات. الرجوع إلى الشكل 2A للاستراتيجية النابضة لالفئران المعدلة وراثيا غير TCR.

  1. باستخدام FSC-A بواسطة SSC، بوابة إلكترونيا على السكان "اللمفاويات".
  2. بين السكان "اللمفاويات"، استخدم FSC-A-W من قبل FSC إلى البوابة إلكترونيا السكان الصغرى FSC-W لاستبعاد الخلايا والحلل aggregrates. هذا هو "القميص" البوابة.
  3. باستخدام الأحداث في بوابة "القميص" قطعة من CD8 CD4. رسم بوابات للDN، DP مملة، DP مشرق، CD4 + CD8 الصغرى، وCD4SP CD8SP السكان كما هو مبين في الشكل 2B.
  4. تحت أبواب CD4SP وCD8SP، وخلق TCRβ من CD24 المؤامرات. استخدام أداة لرسم النابضة رباعي بوابات كما هو مبين في الشكل 2C.
  5. إنشاء شمال شرقث مؤامرة من "القميص" البوابة: TCRβ من CD69. رسم بوابات A، B، C، D كما هو مبين في الشكل 2D.
  6. خلق آخر من المؤامرة "القميص" البوابة: TCRβ من CD5. رسم بوابات الأول والثاني والثالث والرابع كما هو مبين في الشكل 2E، وهذا هو استراتيجية أخرى لدراسة اختيار إيجابية.
  7. تطبيق DN، DP مملة، DP مشرق، وكثافة العمليات CD4، وبوابات CD4SP CD8SP من تحت "القميص" لط بوابات والثاني والثالث، والرابع، A، B، C، D (الشكل 2D، E).
  8. حساب عدد الخلايا في مجموعة فرعية معينة عن طريق ضرب الخلوية الجهاز من وتيرة من كل باب لاحق حتى تصل السكان التي تستهدفها. على سبيل المثال، سيتم تحديد عدد TCRβ thymocytes CD69-CD8SP مرحبا من قبل الغدة الصعترية الخلوية X٪ TCR بهي CD69-(جزء D) X CD8SP٪.
    1. عد يأخذ في الاعتبار بالفعل الخلايا الحية والميتة حتى لا تشمل lymphoc "YTE "البوابة في الحسابات الخاصة بك.

5. تحليل البيانات قياس التدفق الخلوي - TCR المعدلة وراثيا الفئران

الرجوع إلى الشكل 3A للاستراتيجية النابضة لالفئران المعدلة وراثيا TCR.

  1. اتبع الخطوات من 4.1 و 4.2 كما في المقطع السابق.
  2. تحت بوابة "القميص"، إنشاء T3.70 من مؤامرة SSC وبوابة على T3.70 + السكان خلية لتحليل مستضد محددة الخلايا T (الشكل 3B). في بعض الحالات، قد يكون من مصلحة هذه الفئة من السكان مقارنة للمستضد غير محددة (T3.70) السكان خلية T.
  3. بين السكان + T3.70، تعادل DN، DP، CD4SP وCD8SP بوابات (الشكل 3C).
    1. لعينات التحكم WT، ووضع هذه البوابات تحت بوابة "القميص" أو إنشاء بوابة T3.70 كما سيكون هناك عدد قليل جدا من T3.70 + الخلايا.
  4. تحت بوابة CD8SP، إنشاءT3.70 من CD24 المؤامرة. استخدم أداة لتقسيم النابضة رباعي الخلايا إلى أربع السكان (الشكل 3F).
  5. إنشاء رسم بياني يصور CD69 التعبير مضافين في المقصورة DP من الفئران WT وT3.70 مقصورة DP + CD4 من الفئران HY (الشكل 4A). تكرار لدراسة CD5 التعبير (الشكل 4B).
  6. حساب العدد المطلق للخلايا في كل فرعية من الفائدة في 4.8.

النتائج

في الفيزيولوجية نماذج المعدلة وراثيا والفئران WT TCR، واختيار الإيجابي يبدأ في مرحلة DP مشرق قبل أن ينتقل إلى مرحلة DP مملة بعد اللقاء مستضد. thymocytes DP مملة ثم أدخل CD4 CD8 + الانتقالية المرحلة الصغرى قبل أن يصبح CD4SP أو thymocytes CD8SP (الشكل 2B). و...

Discussion

ويمكن استخدام بروتوكول المعروضة هنا لدراسة اختيار الإيجابية والسلبية في غير المعدلة وراثيا والفئران TCR TCR المعدلة وراثيا. هذا البروتوكول يصف تلطيخ من المستضدات السطحية. لمزيد من التحليل للآليات الجزيئية، فإنه غالبا ما يكون ضروريا لأداء تلطيخ الخلايا. نستخدم العلوم ...

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

فإن الكتاب أود أن أشكر بينغ تشانغ على مساعدته التقنية. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الكندية لأبحاث الصحة (MOP-86595). TAB هو محقق جديد CIHR والباحث AHFMR. ويدعم QH من قبل على منحة دراسات عليا CIHR كندا - الدكتوراه ومنحة دراسية لAIHS بدوام كامل. ويدعم SAN بواسطة منحة دراسات عليا II الملكة اليزابيث. ويدعم AYWS بواسطة منحة دراسات عليا لNSERC - الدكتوراه.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
اسم كاشف شركة كتالوج رقم التعليقات (اختياري)
HyClone هانك حل متوازن الملح الحرارية العلمية SH30030.02
شاشات شبكة معدنية Cedarlane CX-0080-E-01
أطباق بتري (60 × 15 مم) فيشر العلمية 877221
المحاقن (3 مل) BD العلوم البيولوجية 309657
المخروطية أنابيب (15 مل) Sarstedt 62.554.205
مجهر زايس - بريمو ستار 415500-00XX-000
عدادة الكريات Hausserعلمي 3110
96-وحة جيدا Sarstedt 82.1582.001
ماصة الأقنية Fisherbrand 21-377-829
الجنين مصل العجل PAA A15-701
الفوسفات مخزنة المالحة فيشر العلمية SH3025802
أزيد الصوديوم IT بيكر الكيميائية المحدودة V015-05
FCR كاشف حظر استنساخ 2.4G2
مكافحة الماوس HY TCR eBioscience XX-9930-YY * استنساخ T3.70
مكافحة الماوس CD4 eBioscience XX-0042-YY * استنساخ RM4-5
Aالمعهد القومي للاتصالات الماوس CD8α eBioscience XX-0081-YY * استنساخ 53-6،7
مكافحة CD24 الماوس eBioscience XX-0242-YY * استنساخ M1/69
مكافحة الماوس TCRβ eBioscience XX-5961-YY * استنساخ H57-597
مكافحة CD69 الماوس المعقدة البيروكسيديز eBioscience 13-0691-YY * استنساخ H1.2F3
مكافحة الماوس CD5 المعقدة البيروكسيديز eBioscience 13-0051-YY * استنساخ 53-7،3
Streptavidin eBioscience XX-4217-YY *
تدفق عداد الكريات BD العلوم البيولوجية - FACS كانتو 338962
FACS أنابيب BD العلوم البيولوجية 352052
برامج تحليل تدفق الخلوي TreeStar - Flowjo FlowJo V7 / 9
HyClone RPMI - 1640 متوسطة الحرارية العلمية SH30027.01

* يختلف حسب XX YY ملون تألقي ويختلف حسب حجم القارورة.

References

  1. Liston, A., Lesage, S., Wilson, J., Peltonen, L., Goodnow, C. C. Aire regulates negative selection of organ-specific T cells. Nat. Immunol. 4, 350-354 (2003).
  2. Liston, A. Gene dosage--limiting role of Aire in thymic expression, clonal deletion, and organ-specific autoimmunity. J. Exp. Med. 200, 1015-1026 (2004).
  3. Hogquist, K. A., Baldwin, T. A., Jameson, S. C. Central tolerance: learning self-control in the thymus. Nat. Rev. Immunol. 5, 772-782 (2005).
  4. Liston, A., Enders, A., Siggs, O. M. Unravelling the association of partial T-cell immunodeficiency and immune dysregulation. Nat. Rev. Immunol. 8, 545-558 (2008).
  5. Starr, T. K., Jameson, S. C., Hogquist, K. A. Positive and negative selection of T cells. Annu. Rev. Immunol. 21, 139-176 (2003).
  6. McCaughtry, T. M., Hogquist, K. A. Central tolerance: what have we learned from mice. Seminars in immunopathology. 30, 399-409 (2008).
  7. Zhan, Y. Without peripheral interference, thymic deletion is mediated in a cohort of double-positive cells without classical activation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100, 1197-1202 (2003).
  8. Brewer, J. A., Kanagawa, O., Sleckman, B. P., Muglia, L. J. Thymocyte apoptosis induced by T cell activation is mediated by glucocorticoids in vivo. J. Immunol. 169, 1837-1843 (2002).
  9. Martin, S., Bevan, M. J. Antigen-specific and nonspecific deletion of immature cortical thymocytes caused by antigen injection. European journal of immunology. 27, 2726-2736 (1997).
  10. Baldwin, T. A., Sandau, M. M., Jameson, S. C., Hogquist, K. A. The timing of TCR alpha expression critically influences T cell development and selection. J. Exp. Med. 202, 111-121 (2005).
  11. Tung, J. W. Modern flow cytometry: a practical approach. Clinics in laboratory medicine. 27, 453-468 (2007).
  12. Aliahmad, P., Kaye, J. Development of all CD4 T lineages requires nuclear factor TOX. J. Exp. Med. 205, 245-256 (2008).
  13. Kastner, P. Bcl11b represses a mature T-cell gene expression program in immature CD4(+)CD8(+) thymocytes. Eur. J. Immunol. 40, 2143-2154 (2010).
  14. Albu, D. I. BCL11B is required for positive selection and survival of double-positive thymocytes. J. Exp. Med. 204, 3003-3015 (2007).
  15. Van De Wiele, C. J. Thymocytes between the beta-selection and positive selection checkpoints are nonresponsive to IL-7 as assessed by STAT-5 phosphorylation. J. Immunol. 172, 4235-4244 (2004).
  16. Ueno, T. CCR7 signals are essential for cortex-medulla migration of developing thymocytes. J. Exp. Med. 200, 493-505 (2004).
  17. Saini, M. Regulation of Zap70 expression during thymocyte development enables temporal separation of CD4 and CD8 repertoire selection at different signaling thresholds. Science signaling. 3, ra23 (2010).
  18. Hu, Q., Sader, A., Parkman, J. C., Baldwin, T. A. Bim-mediated apoptosis is not necessary for thymic negative selection to ubiquitous self-antigens. J. Immunol. 183, 7761-7767 (2009).
  19. Kisielow, P., Bluthmann, H., Staerz, U. D., Steinmetz, M., von Boehmer, H. Tolerance in T-cell-receptor transgenic mice involves deletion of nonmature CD4+8+ thymocytes. Nature. 333, 742-746 (1988).
  20. McCaughtry, T. M., Baldwin, T. A., Wilken, M. S., Hogquist, K. A. Clonal deletion of thymocytes can occur in the cortex with no involvement of the medulla. J. Exp. Med. 205, 2575-2584 (2008).
  21. Derbinski, J., Schulte, A., Kyewski, B., Klein, L. Promiscuous gene expression in medullary thymic epithelial cells mirrors the peripheral self. Nat. Immunol. 2, 1032-1039 (2001).
  22. Anderson, M. S. Projection of an immunological self shadow within the thymus by the aire protein. Science. 298, 1395-1401 (2002).
  23. Kurts, C. Constitutive class I-restricted exogenous presentation of self antigens in vivo. J. Exp. Med. 184, 923-930 (1996).
  24. Nitta, T., Nitta, S., Lei, Y., Lipp, M., Takahama, Y. CCR7-mediated migration of developing thymocytes to the medulla is essential for negative selection to tissue-restricted antigens. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 17129-17133 (2009).
  25. Bouneaud, C., Kourilsky, P., Bousso, P. Impact of negative selection on the T cell repertoire reactive to a self-peptide: a large fraction of T cell clones escapes clonal deletion. Immunity. 13, 829-840 (2000).
  26. Gallegos, A. M., Bevan, M. J. Central tolerance to tissue-specific antigens mediated by direct and indirect antigen presentation. J. Exp. Med. 200, 1039-1049 (2004).
  27. Moon, J. J. Naive CD4(+) T cell frequency varies for different epitopes and predicts repertoire diversity and response magnitude. Immunity. 27, 203-213 (2007).
  28. Bouillet, P. BH3-only Bcl-2 family member Bim is required for apoptosis of autoreactive thymocytes. Nature. 415, 922-926 (2002).
  29. Suen, A. Y., Baldwin, T. A. Proapoptotic protein Bim is differentially required during thymic clonal deletion to ubiquitous versus tissue-restricted antigens. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , (2012).
  30. Calnan, B. J., Szychowski, S., Chan, F. K., Cado, D., Winoto, A. A role for the orphan steroid receptor Nur77 in apoptosis accompanying antigen-induced negative selection. Immunity. 3, 273-282 (1995).
  31. Zhou, T. Inhibition of Nur77/Nurr1 leads to inefficient clonal deletion of self-reactive T cells. J. Exp. Med. 183, 1879-1892 (1996).
  32. Baldwin, T. A., Hogquist, K. A. Transcriptional analysis of clonal deletion in vivo. J. Immunol. 179, 837-844 (2007).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

68 T

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved