استعمال اللوني للغاز لتحليل التغييرات التركيبية من الأحماض الدهنية في الفئران الكبد الأنسجة أثناء الحمل

Summary

الحمل يؤدي إلى تغييرات كبيرة في تكوين الأحماض الدهنية من الأنسجة الأمهات. ويمكن الحصول على ملامح من المادة الدهنية عبر اللوني للغاز للسماح تحديد وتقدير الأحماض الدهنية في الطبقات الدهنية الفردية بين الفئران التي تغذت مختلف الوجبات الغذائية عالية الدهون ومنخفضة خلال فترة الحمل.

Abstract

اللوني للغاز (GC) هو وسيلة حساسة للغاية يستخدم لتحديد وقياس محتوى الأحماض الدهنية من الدهون من الأنسجة، والخلايا، والبلازما / مصل، مما أسفر عن النتائج بدقة عالية واستنساخ عالية. في دراسات التمثيل الغذائي والتغذية يسمح GC تقييم التغيرات في تركيزات الأحماض الدهنية التالية تدخلات أو خلال التغيرات في الحالة الفسيولوجية مثل الحمل. المرحلة الصلبة استخراج (SPE) باستخدام خراطيش أمينو السيليكا يسمح الفصل بين الطبقات الدهنية الرئيسية بما في ذلك زعت عشوائيا إلى ثلاثة، الدهون الفوسفاتية المختلفة، واسترات الكوليسترول (CE). تم استخدام GC جنبا إلى جنب مع جمعية مهندسي البترول لتحليل التغيرات في تكوين الأحماض الدهنية من جزء CE في كبد الفئران الحوامل البكر والتي تم تغذيتها مختلف الوجبات الغذائية العالية والمنخفضة الدهون. هناك آثار التفاعل حمية / الحمل كبير على محتوى حمض أوميغا 3 و أوميغا 6 الدهنية من الكبد CE، مشيرا إلى أن الإناث الحوامل لديهم استجابة مختلفة لmanipulat الغذائيةوينظر أيون من بين الإناث البكر.

Introduction

اللوني للغاز (GC) هي تقنية راسخة المستخدمة لتحديد وقياس إدماج الأحماض الدهنية في تجمعات الدهون وأغشية الخلايا ^1،2 خلال مكملات أو الفسيولوجية الظروف مثل السمنة (والأمراض ذات الصلة مثل مرض السكري) أو الحمل ^{3 - 5.} بل هو أيضا مناسبة لتحليل أنواع وكميات الدهون في الأطعمة. هذا مفيد عندما تميز العلائق، وكذلك التأكد من أن صناعة المواد الغذائية يتوافق مع اللوائح. على سبيل المثال، GC يمكن استخدامها لتأكيد هوية وكمية من الأحماض الدهنية داخل منتج مثل المكملات الغذائية لضمان وضع العلامات هو الصحيح، ويتم الالتزام اللوائح إلى ^6،7. تحليل الأحماض الدهنية يمكن أن توفر معلومات قيمة حول التمثيل الغذائي للدهون في الصحة والمرض، وتأثير تغيير النظام الغذائي، وتأثير التغيرات في الحالة الفسيولوجية ^8. وقد وفرت استخدام GC لدراسة عينات خلال فترة الحمل مهمةمعلومات عن التغيرات في الأحماض الدهنية والدهون المعقدة التوازن ^3.

في وقت مبكر من الفصل الكروماتوغرافي، وعادة ما تكون نسبة الدهون المستخرجة من العينة باستخدام ذوبان الدهون في مخاليط المذيبات من الكلوروفورم والميثانول. يتم إضافة كلوريد الصوديوم إلى تسهيل فصل الخليط في الدهون المائية والعضوية التي تحتوي مراحل ^9،10. يمكن فصل الطبقات الدهنية المعقدة من الاهتمام من مجموع استخراج الدهون من خلال المرحلة الصلبة استخراج (SPE). هذه التقنية فصل elutes الطبقات الدهنية على أساس قطبية أو تقارب ملزمة. ومزال Triacyglycerols (TAG) واسترات الكوليسترول (CE) أولا ككسر مجتمعة، كذلك الطبقات، فسفاتيديل (PC)، فسفاتيديل (PE)، والأحماض الدهنية غير تجمعت (NEFA) ومزال عن طريق زيادة قطبية المذيب يبلغ حجمه . فصل TAG من CE يستغل الملزمة TAG فقط لخراط SPE جديدةDGE، مما يسمح CE أن مزال. ويمكن بعد ذلك أن TAG مزال عن طريق زيادة قطبية المذيب ^9،10 يبلغ حجمه. يسمح هذا الأسلوب يتحقق عينات متعددة في وقت واحد لا يمكن فصلها مع تحقيق عائد أعلى من مع طبقة رقيقة اللوني، مما يعني أن عينات صغيرة نسبيا الحجم (على سبيل المثال <البلازما أو مصل 100 ميكرولتر، <100 ملغ الأنسجة) يمكن تحليلها ^11،12.

GC هي تقنية راسخة وصف لأول مرة في 1950s؛ اقترح أن الطور المتحرك في النظم ثم السائل السائل يمكن الاستعاضة مع بخار. انه كان يستخدم في البداية لتحليل البترول ولكن توسعت بسرعة في مجالات أخرى مثل تحليل الأحماض الأمينية والدهون الكيمياء الحيوية، والتي لا تزال ذات أهمية كبرى. وقد أدى التقدم في المعدات والتكنولوجيا GC مثل وضع الأعمدة الشعرية من الأعمدة معبأة المستخدمة سابقا إلى التقنيات الحالية لدينا في الأحماض الدهنية التي هي قادرة على أن تكونفصل أكثر كفاءة في درجات حرارة أقل مما أدى إلى GC تستخدم بشكل روتيني لتحديد وقياس الأحماض الدهنية في مجموعة واسعة من التحقيقات ^13.

يتطلب GC الأحماض الدهنية أن derivatized من اجل ان يتمكنوا قد تصبح متقلبة بما فيه الكفاية ليكون مزال في درجات حرارة معقولة دون التحلل الحراري. هذا وعادة ما ينطوي على الاستعاضة عن مجموعة وظيفية تحتوي على الهيدروجين لتكوين استرات، thioesters أو الأميدات للتحليل. ودرس استرات الميثيل عادة المشتقات التي يتم إنتاجها من قبل مثيلة. في هذا الأسلوب يتم تحلل السندات استر في الدهون المعقدة للافراج عن الأحماض الدهنية الحرة، والتي transmethylated لتشكيل استرات الأحماض الدهنية الميثيل (FAME). الملف الشخصى الناتجة من FAME، والتي تحددها القيادة العامة، ويشار إليها باسم تكوين الأحماض الدهنية، ويمكن بسهولة مقارنة بين المجموعات التجريبية المختلفة ^9،10. يسمح للتقنية كل من نسب individالأحماض الدهنية السياقية وتركيزاتها المراد قياسها.

بالإضافة إلى استخدام GC لتحليل الأحماض الدهنية في دراسات التغذية وداخل صناعة الأغذية، وتقنية يمكن استخدامها عبر مجموعة واسعة من المجالات التحليلية. على سبيل المثال، التحليلات البيئية باستخدام GC تشمل قياس تلوث المياه من خلال المبيدات الحشرية والتربة تحاليل قياس محتوى كلوروبنزين. في علم السموم، كما تم استخدام GC لتحديد المواد غير المشروعة في البول وعينات الدم من الأفراد؛ مثل هذه القدرة على الأداء الرياضي ¹² والقدرة على فصل مخاليط معقد من الهيدروكربونات يجعل هذه التقنية شعبية في الصناعة النفطية لتحليل البتروكيماويات ^12.

ويرتبط الحمل مع تغييرات كبيرة في تكوين الأحماض الدهنية من الأنسجة الأمهات، وتحديدا في محتوى أوميغا 3 (ن 3) وأوميغا 6 (ن 6) غير المشبعة المجلس الدولي للمطارات الدهنيةس (بوفا) ^3. في الدراسة الحالية، ونحن مثالا على استخدام GC في قياس الأحماض الدهنية من خلال وصف استخدامه في تحليل تكوين الأحماض الدهنية من الأنسجة المأخوذة من الكبد الفئران الحوامل البكر وتغذية حمية منخفضة الدهون وعالية مع مصادر النفط المختلفة. كانت العلائق المقدمة هنا على النفط على أساس نظام غذائي منخفض الدهون فول الصويا، اتباع نظام غذائي عالي الدهون التي تعتمد على النفط فول الصويا (130.9 ز الدهون / كجم من الدهون الكل) أو اتباع نظام غذائي تعتمد على النفط بذر الكتان غنية بالدهون (130.9 ز الدهون / كجم النظام الغذائي)، شريطة لمدة 20 يوما. وقد وصفت والمواد الغذائية كاملة وتكوين الأحماض الدهنية من هذه الوجبات سابقا ^14. الوجبات الغذائية زيت فول الصويا غنية في حمض اللينوليك (18:02 ن 6) وتحتوي على بعض حمض اللينولينيك α (18:03 ن 3) في حين أن اتباع نظام غذائي زيت بذر الكتان غنية في حمض اللينولينيك-α. تمثل هذه الوجبات الغنية بالدهون حصص مختلفة من اللينوليك إلى α لينولينيك والأحماض (حصص من 8:1 و 1:1 على التوالي). طريقة لعزل الطبقات الدهنية الفردية وتحليلها بواسطة GC هو أنناليرة لبنانية أنشئت والتحقق من صحتها، وقد نشرت سابقا ¹⁰ ولكن من دون صفا تقنيا مفصلا وجدت في هذه الوثيقة.

Protocol

1. إجراءات الحيوان

1. ينبغي تنفيذ جميع أعمال الحيوانية وفقا للوزارة الداخلية على الحيوانات (الإجراءات العلمية) لعام (1986).
2. تتزاوج فئران ويستار الذين تتراوح أعمارهم بين 10 أسابيع من العمر عن طريق تربية بزوجة واحدة، وتأكيد الحمل بظهور المكونات المهبلية. تسجيل هذه كيوم 1 من الحمل، ويبدأ النظام الغذائي التجريبية. للإناث عذراء، إيواء كل الفئران بشكل فردي، وبدء اتباع نظام غذائي التجريبية.
3. بعد تغذية علائق تجريبية لمدة 20 يوما الموت ببطء الفئران عن طريق CO ₂ الخنق تليها خلع عنق الرحم.
4. استخدام ملقط تشريح ومقص لفضح تجويف البطن واستئصال الكبد عن طريق قطع الأربطة، التي تربط الكبد إلى الحجاب الحاجز، والجدار الأمامي للبطن والمعدة والاثني عشر. يغسل الكبد في برنامج تلفزيوني وتجميد في النيتروجين السائل قبل تخزينها في -80 درجة مئوية.

2. إعداد الدهن إجمالي استخراج ⁹

1. إضافة moleculالمناخل ع (لملء 1/10 من الحاويات المذيبات) لجميع المذيبات المذيبات لخلق 'الجافة'. القيام بجميع أعمال المذيبات داخل غطاء الدخان.
2. قطع ما يقرب من 100 ملغ الكبد المجمدة وتزن. وضع الأنسجة في أنبوب في دلو الثلج وإضافة 0.8 مل الجليد الباردة 0.9٪ كلوريد الصوديوم. تجانس الأنسجة.
3. إضافة المعايير الداخلية الذائبة في 1 مل / ملغ من كلوروفورم الجافة: الميثانول (2:1، ت / ت) التي تحتوي على hydroxytoluene الأنيسول (BHT و 50 ملغ / لتر)، ومضادة للأكسدة. ل100 ملغ من كبد الفئران إضافة 100 ميكروغرام من معيار CE (الكوليسترول heptadecanoate 17:00) تنبيه: الكلوروفورم وBHT خطرة.
4. إضافة 5.0 مل كلوروفورم الجافة: الميثانول (2:1، ت / ت) التي تحتوي على BHT (50 ملغم / لتر).
5. إضافة 1.0 مل 1 M كلوريد الصوديوم، مزيج دقيق من قبل vortexing حتى خليط تبدو موحدة. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع.
6. أجهزة الطرد المركزي في 1000 x ج لمدة 10 دقيقة، الفرامل المنخفضة في درجة حرارة الغرفة.
7. جمع أقلمرحلة استخدام الزجاج ماصة باستور، ونقل إلى جديدة قبعة المسمار أنبوب زجاجي والجافة تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع.

3. الفصل بين فئات الدهون الصلبة عن طريق استخراج المرحلة (SPE) ¹⁰

1. ربط خزان SPE إلى مضخة الفراغ ووضع أمينو السيليكا خرطوشة SPE على الخزان.
2. وضع جديد المسمار غطاء أنبوب زجاجي المسمى TAG وCE في رف خزان تحت عمود لجمع جزء الأول.
3. حل مجموع استخراج الدهون في 1.0 مل كلوروفورم الجافة والدوامة.
4. تطبيق العينة إلى العمود باستخدام ماصة باستير الزجاج والسماح لبالتنقيط من خلال أنبوب في غطاء المسمار تحت الجاذبية. عندما تسقط لا تقطر أبعد من ذلك، إزالة السائل المتبقية فراغ.
5. أزل TAG CE وجزء تحت فراغ، وغسل العمود مع 2 × 1.0 مل يغسل كلوروفورم الجافة.
6. عندما تتم إزالة جميع السائل، وتجفيف TAG CE fractioن تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع.
7. وضع جديد المسمار غطاء أنبوب زجاجي PC وصفت في درج خزان تحت العمود.
8. أزل الكسر PC تحت فراغ مع إضافة 2 × 1.0 مل كلوروفورم الجافة: الميثانول (60:40، ت / ت) حتى تتم إزالة جميع السائل من العمود.
9. إزالة جزء PC والجافة تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع.
10. وضع المسمار غطاء أنبوب زجاجي المسمى PE جديدة في علبة دبابات وأزل PE جزء مع إضافة 1.0 مل الميثانول الجاف تحت فراغ.
11. إزالة وPE الجافة جزء تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع.
12. وضع الزجاج الجديد المسمار غطاء أنبوب المسمى NEFA في علبة دبابات وأزل NEFA جزء تحت فراغ بإضافة 2 × 1.0 مل يغسل كلوروفورم الجافة: الميثانول: حمض الخليك الجليدي(100:2:2، ت / ت / ت) تنبيه: حامض الخليك الجليدي هو الخطرة.
13. إزالة جزء جمعها NEFA والجافة تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع.
14. وضع أمينو السيليكا جديدة خرطوشة SPE على خزان SPE ووضع أنبوب زجاجي المسمار الحد الأقصى في علبة خزان تحت خرطوشة لجمع النفايات.
15. غسل العمود مع 3 يغسل من الهكسان الجافة في ظل فراغ ثم يغسل 1.0ml النهائي تحت الجاذبية. لا تسمح خرطوشة لتصبح جافة (تحويل قنوات العمود خرطوشة لموقف مغلقة عند مستوى الهكسان على مقربة من مصفوفة خرطوشة) تنبيه: الهكسين خطرة.
16. استبدال أنبوب النفايات مع أنبوب جديد الزجاج المسمار الحد الأقصى المسمى CE.
17. حل المجففة وTAG CE جزء (المعد في الخطوة 3.6) في 1.0 مل من الهكسان الجافة والدوامة. لتطبيق هذا العمود باستخدام ماصة باستير الزجاج والسماح لبالتنقيط من خلال إطار زravity.
18. عندما تسقط لا تقطر أبعد من ذلك، إزالة السائل المتبقية تحت فراغ.
19. تحت فراغ، وغسل العمود مع 2 × 1.0 مل من الهكسان يغسل الجافة إلى أزل م وجزء جمعت الجافة تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع.
20. وضع جديد المسمار غطاء أنبوب زجاجي المسمى TAG في علبة دبابات وأزل TAG مع إضافة 2 × 1.0 مل من الهكسان يغسل الجافة: الميثانول: خلات الإيثيل (100:5:5) تحت فراغ.
21. جزء الجافة التي تم جمعها تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع تحذير: خلات الإيثيل خطرة.

4. إعداد FAME من CE ¹⁰

1. إضافة 0.5 مل من التولوين جافة لجزء CE فصل (جمعها في الخطوة 3.19) ودوامة الحذر: التولوين هو الخطرة.
2. إعداد مثيلة كاشف (الميثانول الجاف مع 2٪ (الخامس/ V) H ₂ SO _4)، منها 1.0 مل هو مطلوب لكل عينة. الاستغناء حجم الميثانول الجاف في كوب أو وعاء من البلاستيك مناسب مع غطاء وإضافة المبلغ المطلوب من H ₂ SO ₄ نقطه نقطه ثم تخلط بواسطة انعكاس تنبيه: حمض الكبريتيك هو الخطرة.
3. إضافة 1.0 مل من كاشف مزج بالميثيل للعينات الذائبة في التولوين الجاف، وكأب الأنابيب بشكل آمن، والمزيج بلطف.
4. تسخين العينات لمدة 2 ساعة على 50 درجة مئوية.
5. بعد 2 ساعة إزالة الأنابيب من الحرارة. مرة واحدة إضافة 1.0 مل بارد تحييد الحل (0.25 M KHCO ₃ 0.5MK ₂ CO ₃₎ تنبيه: بيكربونات البوتاسيوم وكربونات البوتاسيوم والخطرة.
6. إضافة 1.0 مل الهكسان الجافة والدوامة.
7. أجهزة الطرد المركزي في 250 x ج لمدة 2 دقيقة، الفرامل المنخفضة في درجة حرارة الغرفة.
8. جمع المرحلة العليا، والذي يحتوي على الشهرة، ونقل إلى غير المسمار غطاء أنبوب زجاجي المتاح الجديدة.
9. تجفيف FAME جمعها تحتالنيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع.

5. إزالة الكولسترول مجانا من التلوث CE FAME ¹⁴

(الكولسترول الحرة يمكن أن تلوث العينة، وانظر الشكل 1 لآثار سبيل المثال اللوني مع وبدون إزالة الكولسترول مجانا).

1. وضع أنبوب في خزان النفايات SPE ووضع هلام السيليكا خرطوشة SPE على الخزان.
2. غسل العمود مع 3 × 1 مل من الهكسان يغسل الجافة في ظل فراغ و1 × 1 مل تحت الجاذبية.
3. إزالة النفايات ويغسل إضافة أنبوب في خزان النفايات الجديد.
4. حل FAME CE في 1 مل الجافة الهكسان، دوامة.
5. تنطبق على العمود باستخدام ماصة باستير الزجاج والسماح لبالتنقيط من خلال إطار الجاذبية.
6. غسل العمود مع 3 × 1 مل من الهكسان يغسل تحت فراغ.
7. إزالة يغسل النفايات ووضع أنبوب جديد غير سقف المسمار في خزان المسمى FAME CE.
8. أزلFAME CE مع 2 × 1 مل الهكسان الجافة: ايثر (95:5 ت / ت) يغسل.
9. تجف تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع تحذير: ثنائي اثيل ايثر غير الخطرة.

6. نقل FAME إلى GC السيارات عينات فيال

1. إضافة 75 ميكرولتر الهكسان الجافة لعينة، دوامة، ونقل إلى GC عينة السيارات القارورة.
2. إضافة 75 ميكرولتر مزيد من الهكسان الجافة لعينة، دوامة ونقل إلى GC نفس العينة السيارات القارورة. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل الى شهر.

7. التحليل باستخدام كروماتوغرافيا الغاز ¹⁴

1. تحليل FAME على الكروماتوجرافي الغاز. تعيين المثال الأعلى: 30 متر x 0.25 ميكرون 0.25 × مم BPX-70 تنصهر السيليكا العمود الشعري مع بروتوكول درجة الحرارة:
   درجة الحرارة الأولية 115 درجة مئوية، وعقد 2 دقيقة، منحدر 10 درجة مئوية / دقيقة إلى 200 درجة مئوية، وعقد 18.5 دقيقة، منحدر 60 درجة مئوية / دقيقة إلى 245 درجة مئوية، حالعمر 4 دقائق.
   العمود: الغاز الهليوم، ومعدل تدفق 1.0، 14.6 ضغط وسرعة 29.
   حاقن: درجة الحرارة = 300 ° C.
   كاشف: تدفق الهيدروجين 40.0، 184.0 تدفق الهواء، وتشكل الهليوم الغاز، وتدفق 45.0، ودرجة الحرارة = 300 ° C.
2. تعيين نسبة الانقسام حسب الاقتضاء (على سبيل المثال 25:1 لتحليل FAME CE).
3. تحديد منطقة تحت كل الذروة باستخدام البرمجيات المناسبة وتحديد المجد من خلال المقارنة مع المعايير. انظر الشكل 2 على سبيل المثال الاستشرابية.
4. استخدام المنطقة تحت بيانات الذروة لحساب مساهمة الأحماض الدهنية الفردية كنسبة مئوية من مجموع الأحماض الدهنية.
5. واضاف حساب تركيزات المطلقة من الأحماض الدهنية من خلال تقسيم المنطقة من المعايير الداخلية من المبلغ. تقسيم مساحة كل الأحماض الدهنية من خلال هذه النتيجة للحصول على تركيزات المطلقة من كل الأحماض الدهنية داخل كمية الأنسجة المستخدمة.

النتائج

نجاح هذه الطريقة يعتمد على بعد بروتوكول بالضبط وعلى استخدام المذيبات والكواشف نظيفة من أجل الحد من 'الضوضاء' والتلوث التي يمكن أن تظهر على اللوني. العينات الملوثة هي أكثر صعوبة لتحليل، وتخفيض دقة المساحة تحت منحنى العمليات الحسابية. إذا تم اتباع البروتوكول بنجا?...

Discussion

اللوني للغاز هو أسلوب دقيق لاستخدامها لتحليل الأحماض الدهنية، ويرى استنساخ العالية هذه التقنية مناسبة للالتحليلات السريرية. يجب استخدام الأعمدة GC المناسبة لتمكين تحديد الأحماض الدهنية من الفائدة، مع وجود اختلافات الأعمدة المتوفرة في قطبية الطور الثابت، طول العمو...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Methanol	Fisher Scientific	M/4056/17	'CAUTION' Fumes - HPLC Grade
Chloroform	Fisher Scientific	C/4966/17	'CAUTION' Fumes - HPLC Grade
BHT	Sigma- Aldrich	W218405	'CAUTION' Dust fumes - Anhydrous
NaCl	Sigma- Aldrich	S9888	Anhydrous
Hexane	Fisher Scientific	H/0406/17	'CAUTION' Fumes - HPLC Grade
Glacial acetic acid	Sigma- Aldrich	695084	'CAUTION' Burns - 99.85%
Sulfuric acid	Sigma- Aldrich	339741	'CAUTION' Burns - 99.999%
Potassium carbonate	Sigma- Aldrich	209619	99% ACS Reagent grade
Potassium bicarbonate	Sigma- Aldrich	237205	99.7% ACS Reasgent grade
Ethyl acetate	Fisher Scientific	10204340	'CAUTION' Fumes - 99+% GLC SpeciFied
Toluene	Fisher Scientific	T/2300/15	'CAUTION' Fumes
Diethyl ether	Sigma- Aldrich	309966	'CAUTION' Fumes
Nitrogen (oxygen free) cylinder	BOC	44-w	'CAUTION' Compressed gas - explosion risk
Aminopropyl silica SPE cartridges	Agilent	12102014	Cartridge - Bead mass 100 mg
Silica gel SPE cartidges	Agilent	14102010	Cartridge - Bead mass 100 mg
Molecular seives	Sigma- Aldrich	334324	Pellets, AW-300, 1.6 mm
Glass Pasteur pipettes	Fisher Scientific	FB50251