JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

هذه المادة سوف تركز على تطوير البوليمر المغلفة السطوح على المدى الطويل، ثقافة مستقرة من الخلايا الجذعية المستمدة خلايا الكبد البشرية.

Abstract

Currently, one of the major limitations in cell biology is maintaining differentiated cell phenotype. Biological matrices are commonly used for culturing and maintaining primary and pluripotent stem cell derived hepatocytes. While biological matrices are useful, they permit short term culture of hepatocytes, limiting their widespread application. We have attempted to overcome the limitations using a synthetic polymer coating. Polymers represent one of the broadest classes of biomaterials and possess a wide range of mechanical, physical and chemical properties, which can be fine-tuned for purpose. Importantly, such materials can be scaled to quality assured standards and display batch-to-batch consistency. This is essential if cells are to be expanded for high through-put screening in the pharmaceutical testing industry or for cellular based therapy. Polyurethanes (PUs) are one group of materials that have shown promise in cell culture. Our recent progress in optimizing a polyurethane coated surface, for long-term culture of human hepatocytes displaying stable phenotype, is presented and discussed.

Introduction

وقد استخدمت على نطاق واسع المواد البيولوجية في صيانة وتمايز الخلايا الجذعية المحفزة 1. مع تمكين، وهذه ركائز البيولوجية غالبا ما تحتوي على عدد لا يحصى من المكونات غير محددة. Matrigel هو الركيزة تستخدم عادة لزراعة الخلايا الجذعية وتمايز. للأسف، تكوينه المتغير يؤثر وظائف الخلايا والنمط الظاهري. على الرغم من مجموعة متنوعة من المصفوفات البيولوجية البديلة، وأكثر تحديدا استخدمت 2-7، أصل حيواني أو ضعف قابلية يجعلهم مرشحين غير صالحة للتصنيع الصناعي. ولتحديد البدائل الاصطناعية، مع تكوين المعرفة والأداء الموثوق بها، هي الأهداف الرئيسية في أبحاث الخلايا الجذعية.

في محاولة للتغلب على قيود غير محددة ركائز ثقافة الخلية، وقد حددت التخصصات التعاون بين الكيمياء وعلم الأحياء المواد الاصطناعية مع القدرة على دعم النمط الظاهري الخلية. موالفةركائز ETIC هي قابلة للتطوير، فعالة من حيث التكلفة، ويمكن تصنيعها في الهياكل المعقدة 3D، ومحاكاة البيئة في الجسم الحي. بسبب هذه الخصائص ركائز الاصطناعية واستخدمت على نطاق واسع لدعم ودفع التفريق بين العديد من أنواع الخلايا 8-10.

وقد فحوصات متقدمة وعالية الإنتاجية تسهيل الفرز السريع للمواد الاصطناعية، من المكتبات الكبيرة، وتسليم مواد جديدة ذات خصائص مرنة مع تطبيقات واسعة في مجال البحوث الطبية الحيوية والتنمية 11-13. استخدام إنتاجية عالية البوليمر تكنولوجيا الفحص الصغيرة مجموعة، حددنا بسرعة البولي يوريثين بسيط (PU134)، ومناسبة لصيانة الخلايا الجذعية خلايا الكبد البشرية المشتقة. تم العثور على هذا البوليمر لتكون متفوقة على ركائز المستمدة الحيوانية فيما يتعلق التمايز الكبدية وظيفة 14-16. لقد الأمثل لاحقا عملية طلاء الظروف والتضاريس والتعقيم للوصول الآثارعلى الأداء البوليمر في تحقيق الاستقرار في وظيفة الكبدية وعمر. هذا له آثار هامة فيما يتعلق فهم أساسيات علم الأحياء الكبدية لنمذجة تستند خلية والتطبيقات الطب التجديدي.

التكنولوجيا وصفها هنا تمثل مثالا على كيفية سطح البوليمر الاصطناعية يمكن أن يكون الأمثل للحفاظ على النمط الظاهري الخلية. ونحن نعتقد أن الجمع بين هذه التكنولوجيا مع مصل فعال الكبدية المجانية بروتوكول التمايز لديه القدرة على توفير إنتاج قابلة للاستخدام من خلايا الكبد في المختبر، والنمذجة في الطب التجديدي.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

1. توليف PHNGAD (بولى [1،6-hexanodiol / neopentyl غليكول / دي (جلايكول الإثيلين) حمض الأديبيك -alt-] ديول)

figure-protocol-218

مخطط 1: توليف PHNAGD تمثيل تخطيطي لتركيب PHNAGD. كان من رد الفعل من 1،6-Hexanodiol، جلايكول الاثيلين، وجلايكول neoppentyl وحمض الأديبيك أعدت PHNAGD. PHNAGD، بولي [1،6-hexanodiol / neopentyl غليكول / دي (جلايكول الإثيلين) حمض الأديبيك -alt-] ديول.

  1. تطبيق المعالجة الحرارية للأحادية 1،6-الهيكسنديول، دي (جلايكول الإثيلين) وneopentyl غليكول عند 40 درجة مئوية لمدة 48 ساعة في فرن فراغ لإزالة أي المياه المتبقية. السماح للبرد وصولا الى RT تحت فراغ.
  2. إضافة 22 مليمول لكل مونومر وحمض الأديبيك (55 ملمول) إلى قاع القارورة ذهابا والعنق اثنين مجهزة أثار شريط ومتصلا جهاز عميد-ستارك.
  3. وضع التجمع كله في ظل فراغ والحرارة بلطف GLAssware عند 40 درجة مئوية لمدة 6 ساعة، من أجل تجنب أي امتصاص الرطوبة خلال إضافة المادة الكيميائية في قارورة.
  4. إضافة عن طريق حقنة، قطرة قطرة، 0.0055 مول من التيتانيوم الحفاز (IV) باتوكسايد.
  5. تحريك خليط التفاعل عند 180 درجة مئوية تحت جو N 2 لمدة 24 ساعة، وجمع المياه المتبقية في فخ عميد-ستارك. السماح لتبريد المنتج إلى RT.

2. توليف PU134

figure-protocol-1820

مخطط 2: توليف PU134 تمثيل تخطيطي لتركيب البولي يوريثين 134. تم بواسطة تفاعل 1.0 EQUIV من PHNGAD مع 2.0 EQUIV من 4،4'-Methylenebis (فينيل الإيزوسيانات) التي أعدت PU134، تليها إضافة 1.0. EQUIV من سلسلة الموسع 1،4-بيوتانديول.

  1. خلط أي ما يعادل واحد من PHNGAD البوليول (مليون ~ 1،800 دا، 3.2 ملمول) مع اثنين من مكافئات من 4"4 Methylenebis (فينيل الإيزوسيانات) (6.4 ملمول) في اللامائية N، N -Dimethylformamide (12 مل).
  2. تحريك خليط التفاعل عند 70 درجة مئوية، وتحت جو N 2.
  3. إضافة عن طريق حقنة، قطرة قطرة التيتانيوم الحفاز (IV) باتوكسايد (0.8٪ بالوزن).
  4. بعد 1 ساعة، إضافة يعادل واحد من سلسلة الموسع 1،4-بيوتانديول (3.2 ملمول). زيادة درجة الحرارة عند 90 درجة مئوية ويقلب لمدة 24 ساعة تحت جو N 2.
  5. بعد رد فعل، وجمع البولي عن طريق الترسيب بإضافة ايثر (الهكسان أو الماء يمكن أن تستخدم أيضا) إسقاط الحكمة في حل رد فعل حتى يحدث هطول الأمطار.
  6. الحل الطرد المركزي في 5،300 x ج لمدة 5 دقائق.
  7. صب طاف وتجفيف قبالة عند 40 درجة مئوية في فرن فراغ حتى يتبخر المذيب.
    ملاحظة: من أجل ضمان أن المنتج النهائي للتفاعل تمتلك المعلمات الصحيحة بشأن لتوزيع الوزن الجزيئي، والحبو وظيفيةملاحظة من البوليمر، وذوبان ودرجات حرارة التحول الزجاجي، وتقنيات وأساليب تحليلية مختلفة يمكن استخدامها، مثل هلام تخلل اللوني الطيفي أو عيد الفطر.

3. إعداد حلول PU134

  1. تزن 200 ملغ من PU134 في زجاجة.
  2. تمييع PU134 إلى تركيز النهائي من 2٪ في عدد من المذيبات: الكلوروفورم، وهو مزيج من الكلوروفورم والتولوين في نسبة 1: 1، رباعي هيدرو الفوران، ومزيج من رباعي هيدرو الفوران وdicloromethane في نسبة 1: 1.
    ملاحظة: انتخاب المذيب المناسب تختلف تبعا لاستخدام البوليمر. مذيبات مختلفة تمتلك نقطة الغليان المختلفة التي يمكن أن تؤثر على ذوبان من البوليمر.
  3. يهز الحل بقوة لمدة 20 دقيقة في RT باستخدام شاكر بسرعة 200 يذكره / دقيقة، حتى يصبح حل متجانس ويتم احترام أي راسب.

4. طلاء الزجاج الشرائح مع PU134

  1. وضع ROUالثانية 15 مم 2 ساترة على المغطي تدور.
  2. تطبيق 50 ميكرولتر من الحل PU134 إلى كل باستخدام ماصة. ضبط مستوى الصوت من الحل PU134 فقا لحجم ساترة يتطلب إبقاء حجم تطفو على السطح نسبة متناسبة.
  3. تدور كل ساترة لمدة 7 ثانية في 23 × ز.
  4. الهواء ساترة الجافة في RT لمدة 24 ساعة على الأقل قبل التعقيم.

5. تشعيع ساترة

  1. غاما أشرق البوليمر المغلفة ساترة من خلال تطبيق جرعة من 10 غرايز باستخدام irradiator المختبر لمدة 12 دقيقة.
  2. الأشعة فوق البنفسجية أشرق البوليمر المغلفة ساترة باستخدام 30 واط، مصباح الأشعة فوق البنفسجية لمدة 16 دقيقة كل جانب.
  3. وضع البوليمر المغلفة ساترة في مناسبة لوحة الثقافة الأنسجة وفقا لحجم الشريحة.

6. المجهر الإلكتروني

  1. معطف الذهب البوليمر ساترة بواسطة الاخرق لمدة 200 ثانية في جو من 5 × 10 -1 مليبار من الضغط.
  2. التقاط ميكروغرامraphs من البوليمر المغلفة ساترة باستخدام المجهر الإلكتروني الماسح في تسريع والجهد 20 كيلو فولت في وضع التصوير الإلكترون الثانوي.

7. الملاحظات القوة الذرية الميكروسكوب

  1. مسح مساحة 20 × 20 ميكرون من سطح البوليمر.
  2. إنشاء معدل المسح من 1.32 إلى 1.60 هرتز هرتز.
  3. تشكيل لقرار 512 X 512 بكسل في المنطقة الممسوحة ضوئيا.
  4. حساب الجذر يعني مربع (RMS أو RQ) للطلاء باستخدام متوسط ​​الانحرافات ارتفاع مأخوذة من طائرة بيانات الصورة يعني، معبرا عنه:
    figure-protocol-6790
    حيث تسى هو القيمة Z الحالية، وN هو عدد من النقاط داخل منطقة معينة.
  5. 7.5 احسب الانحراف أو يعني خشونة السطح (رع) من الصورة باستخدام،
    figure-protocol-7068
    حيث Z (خ) هو الدالة التي تصف ركان السطح الشخصي تحليلها من حيث الارتفاع (Z) وموقف (س) من العينة على طول التقييم "L". رع يمثل القيمة المتوسطة لسطح نسبة إلى الطائرة المركز.

8. زراعة الخلايا والتمايز

  1. الثقافة والتفريق بين الجنينية البشرية خط الخلايا الجذعية (HESC) H9 كما هو موضح في الحي 17.
  2. فصل الخلايا باستخدام كاشف التفكك وreplate لهم على PU134 الشرائح المغلفة في يوم 9 من عملية التمايز، في حضور وسيط الحرة المصل كما وصف في Szkolnicka 18،19.
    ملاحظة: يفضل استخدام لتفكك خلية الأنزيمية إلى انفصال الخلايا الجسدية.

9. السيتوكروم P450 الفحص وظيفية

  1. قياس النشاط CYP3A باتباع إرشادات الشركة المصنعة.
  2. احتضان HESC خلايا الكبد المشتقة في يوم 13 أو يوم 19، وسائل الإعلام دون خلايا - كعنصر تحكم السلبية، مع SUBSTR المناسبأكل لمدة 5 ساعة عند 37 درجة مئوية.
  3. جمع supernatants من الخلايا وسائل الإعلام، وإجراء الفحص وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
  4. قياس مستوى النشاط CYP وتطبيع قريب للمساحة (سم 2).

10. المناعية

  1. غسل HESC المستمدة خلايا الكبد مع برنامج تلفزيوني، لمدة 1 دقيقة، كرر مرتين.
  2. إضافة الجليد الباردة الميثانول بنسبة 100٪ لإصلاح الخلايا، ومكان في -20 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة.
  3. غسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق وتكرر مرتين.
  4. احتضان الخلايا مع PBS / T (0.1٪ توين) / 10٪ BSA لمدة 1 ساعة على RT.
  5. نضح حل PBST وإضافة الأجسام المضادة الأولية المناسبة المخفف في PBS / T (0.1٪ توين) / 1٪ BSA، احتضان عند 4 درجات مئوية مع طيف الانفعالات O / N.
  6. غسل الخلايا مع PBS / T (0.1٪ توين) / 1٪ BSA لمدة 5 دقائق وكرر ثلاث مرات.
  7. تمييع الأجسام المضادة المناسب في PBS / T (0.1٪ توين) / 1٪ BSA، إضافة إلى الخلايا واحتضان في الظلام في RT لمدة 1 ساعة مع الإثارة لطيف.
  8. غسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق وتكرر ثلاث مرات.
  9. إضافة MOWIOL 488 (التي تحتوي على دابي 1: 1،000) إلى كل بئر، إضافة ساترة بلطف للحد من عدد من فقاعات الهواء. تخزين خلايا ثابتة في 4 درجات مئوية في الظلام. مراقبة تلطيخ باستخدام مجهر مع مرشح المناسب ومصباح الفلورسنت. يتم سرد الأجسام المضادة الأولية والثانوية الأمثل في الجدول 1.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

المذيب البوليمر يؤثر على تضاريس سطح البوليمر المغلفة

كان يذوب البولي يوريثين 134 في الكلوروفورم، إما وحدها أو بالاشتراك مع التولوين أو رباعي هيدرو الفوران أو ثنائي كلورو ميثان والشرائح الزجاجية المغلفة تدور مع تركيبات ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

تعتمد العديد من الطرق الحالية المستخدمة لتوليد خلايا الكبد من الخلايا الجذعية على المصفوفات غير محددة من أصل حيواني. يمكن لهذه ركائز يكون مكلفا ومتغير بدرجة كبيرة، مما يؤثر على وظائف الخلايا والاستقرار، وهو ما يمثل عائقا كبيرا أمام التطبيق. لذا، أجرينا شاشة للمواد ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

DCH هو منظمات المجتمع المدني، مدير مؤسس ومساهم في FibromEd المنتجات المحدودة MB وJPI على المساهمين المؤسسين في FibromEd المنتجات المحدودة

Acknowledgements

ودعمت DCH، MB وFK قبل EPSRC اتبع على الصندوق. BL-V وDS تم دعم كل من MRC درجة الدكتوراة. وأيد KC بتمويل من منهاج الطب التجديدي المملكة المتحدة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Synthesis, preparation, coating and characterization of polymer PU134 coated coverslips
ShakerEdmun BühlerKS-15
IrradiatorCIS BiointernationalIBL 637 
Spin coaterSpecialty Coating SystemP-6708
Scanning Electron Microscope PhilipsXL30CPSEM
Atomic Force MicroscopeDimensionV Nanoscope, VEECO
p4-GLO CYP3A4PromegaV8902
UV bulbESCO
NanoScope analysis softwareVEECOversion 1.20
Fluorescence microscopeOlympusTH45200Use Volocity 4 Software
Tissue culture platesCorning, UK 3527
glass slidesScientific Laboratory SuppliesMIC3308
Diethylene glycolSigma–Aldrich93171
1,6-hexanediolSigma–Aldrich240117
Neopentyl glycolSigma–Aldrich408255
Adipic acidSigma–Aldrich9582
anhydrous N,N-DimethylformamideSigma–Aldrich227056
Diethyl etherSigma–Aldrich676845
titanium (IV) butoxide Sigma–Aldrich244112
1,4-butanediol Sigma–Aldrich493732
Vacuum ovenThermoscientific
4,4’-Methylenebis(phenyl isocyanate)Sigma–Aldrich101688
TetrahydrofuraneSigma–Aldrich401757
Sputter coaterBal-Tec SCD 050
Inmunostaining
Phosphate buffer saline (-MgCl2, -CaCl2)Gibco10010031Store at room temperature
PBST, PBS made up with 0.1% TWEEN 20   Scientific Laboratory Supplies LtdEC607 
Methanol  Scientific Laboratory Supplies LtdCHE5010
Bovine Serum AlbuminSigma-Aldrich, UKA7906
MOWIOL 488 DAPICalbiochem475904Made up in Tris HCl and glycerol as per manufacturers instructions
Cell culture and Functional assay
CYP3A activity pGLO kitPromegaV8902
HepatozymeGibco17705021
TryLE expressLife Technologies12604013

References

  1. Zhou, W., et al. SUMOylation of HNF4α regulates protein stability and hepatocyte function. J Cell Sci. 125 (15), 3630-3635 (2012).
  2. Banerjee, A., et al. The influence of hydrogel modulus on the proliferation and differentiation of encapsulated neural stem cells. Biomaterials. 30 (27), 4695-4699 (2009).
  3. Shanbhag, M. S., et al. Neural Progenitor Cells Grown on Hydrogel Surfaces Respond to the Product of the Transgene of Encapsulated Genetically Engineered Fibroblasts. Biomacromolecules. 11 (11), 2936-2943 (2010).
  4. Battista, S., et al. The effect of matrix composition of 3D constructs on embryonic stem cell differentiation. Biomaterials. 26 (31), 6194-6207 (2005).
  5. Tian, W. M., et al. Hyaluronic acid hydrogel as Nogo-66 receptor antibody delivery system for the repairing of injured rat brain: in vitro. Journal of Controlled Release. 102 (1), 13-22 (2005).
  6. Keshaw, H., Forbes, A., Day, R. M. Release of angiogenic growth factors from cells encapsulated in alginate beads with bioactive glass. Biomaterials. 26 (19), 4171-4179 (2005).
  7. Baharvand, H., Hashemi, S. M., Kazemi Ashtiani, S., Farrokhi, A. Differentiation of human embryonic stem cells into hepatocytes in 2D and 3D culture systems in vitro. The International Journal of Developmental Biology. 50 (7), 645-652 (2006).
  8. Cameron, K., Travers, P., Chander, C., Buckland, T., Campion, C., Noble, B. Directed osteogenic differentiation of human mesenchymal stem/precursor cells on silicate substituted calcium phosphate. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 101 (1), 13-22 (2013).
  9. Pernagallo, S., Unciti-Broceta, A., Diaz-Mochon, J. J., Bradley, M. Deciphering cellular morphology and biocompatibility using polymer microarrays. Biomedical Materials. 3 (3), 034112(2008).
  10. Li, Z., Guo, X., Matsushita, S., Guan, J. Differentiation of cardiosphere-derived cells into a mature cardiac lineage using biodegradable poly(N-isopropylacrylamide) hydrogels. Biomaterials. 32 (12), 3220-3232 (2011).
  11. Tare, R. S., Khan, F., Tourniaire, G., Morgan, S. M., Bradley, M., Oreffo, R. O. C. A microarray approach to the identification of polyurethanes for the isolation of human skeletal progenitor cells and augmentation of skeletal cell growth. Biomaterials. 30 (6), 1045-1055 (2009).
  12. Khan, F., Tare, R. S., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. C., Bradley, M. Strategies for cell manipulation and skeletal tissue engineering using high-throughput polymer blend formulation and microarray techniques. Biomaterials. 31 (8), 2216-2228 (2010).
  13. Zhang, R., et al. A thermoresponsive and chemically defined hydrogel for long-term culture of human embryonic stem cells. Nature Communications. 4 (1335), (2013).
  14. Medine, C. N., et al. Developing high-fidelity hepatotoxicity models from pluripotent stem cells. Stem Cells Translational Medicine. 2 (7), 505-509 (2013).
  15. Hay, D. C., et al. Unbiased screening of polymer libraries to define novel substrates for functional hepatocytes with inducible drug metabolism. Stem Cell Research. 6 (2), 92-102 (2011).
  16. Lucendo-Villarin, B., Khan, F., Pernagallo, S., Bradley, M., Iredale, J. P., Hay, D. C. Maintaining hepatic stem cell gene expression on biological and synthetic substrata. BioResearch Open Access. 1 (1), 50-53 (2012).
  17. Hay, D. C., et al. Highly efficient differentiation of hESCs to functional hepatic endoderm requires ActivinA and Wnt3a signaling. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (34), 12301-12306 (2008).
  18. Szkolnicka, D., Zhou, W., Lucendo-Villarin, B., Hay, D. C. Pluripotent Stem Cell–Derived Hepatocytes: Potential and Challenges in Pharmacology. Annu Rev Pharmecol Toxicol. 53, 147-149 (2013).
  19. Szkolnicka, D., et al. Accurate prediction of drug-induced liver injury using stem cell-derived populations. Stem Cells Translational Medicine. 3 (2), 141-148 (2014).
  20. Medine, C. N., Lucendo-Villarin, B., Zhou, W., West, C. C., Hay, D. C. Robust Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Embryonic Stem Cell Populations. Journal of Visualized Experiments. (56), (2011).
  21. Freed, L. E., Vunjak-Novakovic, G. Culture of organized cell communities. Advanced Drug Delivery Reviews. 33 (1-2), 15-30 (1998).
  22. Braam, S. R., et al. Recombinant Vitronectin Is a Functionally Defined Substrate That Supports Human Embryonic Stem Cell Self-Renewal via αVβ5 Integrin. Stem Cells. 26 (9), 2257-2265 (2008).
  23. Rodin, S., et al. Clonal culturing of human embryonic stem cells on laminin-521/E-cadherin matrix in defined and xeno-free environment. Nature Communications. 5 (3195), (2014).
  24. Thaburet, J. -F. O., Mizomoto, H., Bradley, M. High-Throughput Evaluation of the Wettability of Polymer Libraries. Macromolecular Rapid Communication. 25 (1), 336-370 (2003).
  25. Lim, J. Y., Donahue, H. J. Cell Sensing and Response to Micro- and Nanostructured Surfaces Produced by Chemical and Topographic Patterning. Tissue Engineering. 13 (8), 1879-1891 (2007).
  26. Teixeira, A. I., Abrams, G. A., Bertics, P. J., Murphy, C. J., Nealey, P. F. Epithelial contact guidance on well-defined micro- and nanostructured substrates. Journal of Cell Science. 116 (10), 1881-1892 (2003).
  27. Biggs, M. J. P., Richards, R. G., Wilkinson, C. D. W., Dalby, M. J. Focal adhesion interactions with topographical structures: a novel method for immuno-SEM labelling of focal adhesions in S-phase cells. Journal of Microscopy. 231 (1), 28-37 (2008).
  28. Karuri, N. W., Porri, T. J., Albrecht, R. M., Murphy, C. J., Nealey, P. F. Nano- and microscale holes modulate cell-substrate adhesion, cytoskeletal organization, and -beta1 integrin localization in SV40 human corneal epithelial cells. IEEE Transactions on Nanobioscience. 5 (4), 273-280 (2006).
  29. Hamilton, D. W., Brunette, D. M. The effect of substratum topography on osteoblast adhesion mediated signal transduction and phosphorylation. Biomaterials. 28 (1), 1806-1819 (2007).
  30. Engler, A. J., Sen, S., Sweeney, H. L., Discher, D. E. Matrix elasticity directs stem cell lineage specification. Cell. 126 (4), 677-689 (2006).
  31. Dang, J. M., Leong, K. W. Myogenic Induction of Aligned Mesenchymal Stem Cell Sheets by Culture on Thermally Responsive Electrospun Nanofibers. Advanced Materials. 19 (19), 2775-2779 (2007).
  32. Azevedo, E. C., Nascimento, E. M., Chierice, G. O. UV and gamma irradiation effects on surface properties of polyurethane derivate from castor oil. Polímeros. 23 (3), 305-311 (2013).
  33. Rosu, L., Cascaval, C. N., Ciobanu, C., Rosu, D. Effect of UV radiation on the semi-interpenetrating polymer networks based on polyurethane and epoxy maleate of bisphenol A. Journal of Photochemistry and Photobilogy A: Chemistry. 169 (2), 177-185 (2005).
  34. Yang, X. F., Tallman, D. E., Bierwagen, G. P., Croll, S. G. Blistering and degradation of polyurethane coatings under different accelerated weathering tests. Polymer Degradation and Stability. 77 (1), 103-109 (2002).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

91 P450

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved