JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف هذا البروتوكول طريقة لجمع السائل الخلالي القلب من معزولة، القلب الفئران بيرفوسد. لفصل جسديا انفصال الخلالي من الشريان التاجي الوريدي بيرفوسيت، يتم قلب قلب بيرفوسد لانجندورفف، ويتم جمع ترانزودات (السائل الخلالي) التي تشكلت على سطح القلب باستخدام غطاء اللاتكس لينة.

Abstract

يصف هذا البروتوكول نهج فريد من نوعه التي تمكن من جمع ترانزودات القلب (كت) من معزولة، المالحة بيرفوسد القلب الفئران. بعد العزلة والنضح إلى الوراء من القلب وفقا لتقنية لانجندورفف، قلب مقلوب إلى موقف رأسا على عقب واستقر ميكانيكيا من قبل القسطرة البالونية إدراجها في البطين الأيسر. ثم، يتم وضع غطاء اللاتكس رقيقة - يلقي سابقا لتتناسب مع متوسط ​​حجم القلب الفئران - على سطح النخابية. يتم توصيل منفذ غطاء اللاتكس إلى أنابيب السيليكون، مع افتتاح القاصي 10 سم تحت مستوى القاعدة من القلب، وخلق شفط طفيف. كت التي تنتج بشكل مستمر على سطح النخابية يتم جمعها في قارورة تبريد الجليد لمزيد من التحليل. تراوحت نسبة تشكيل كت من 17 إلى 147 ميكرولتر / دقيقة (ن = 14) في السيطرة والقلوب احتشاء، والذي يمثل 0.1-1٪ من الشريان التاجي الوريدية بيرفوسيت. تحليل بروتيوميك وعالية بيرفوكشفت كروماتوغرافيا السائل رمانس (هبلك) أن كت التي تم جمعها يحتوي على مجموعة واسعة من البروتينات والأيض بورينرجيك.

Introduction

فشل القلب (هف) هو السبب الرئيسي للوفاة في البشر في جميع أنحاء العالم 1 . هف غالبا ما يحدث بسبب التهاب عضلة القلب، والإهانات الدماغية لعضلة القلب، والبطين الأيسر إعادة عرض، مما يؤدي إلى التدهور التدريجي في وظيفة مقلص القلب ونوعية المرضى من الحياة. وعلى الرغم من أن التقدم في أمراض القلب وجراحة القلب قد أدى إلى انخفاض ملحوظ في معدل الوفيات الناجمة عن فيروس الورم الحليمي البشري، إلا أنها مجرد "مؤخر" مؤقت لعملية مرضية تقدمية لا محالة تحمل مراضة كبيرة. ولذلك، فإن النقص الحالي في العلاج الفعال يؤكد الحاجة إلى تحديد الأهداف الجزيئية الجديدة التي يمكن أن تمنع أو حتى عكس هف. وهذا يشمل التغيرات في المصفوفة خارج الخلية، والاستجابة المناعية القلبي غير المنضبط، والتفاعلات بين الخلايا القلبية وغير القلبية 2 .

من المهم أن ندرك أن المكروية التي تتعرض لخلايا القلب إلى ديريكتيلي الأشكال الاستجابة المناعية والتجدد من القلب المصاب. في القلب المعزول، المالح بيرفوسد، يتم إنشاء كت على سطح القلب في شكل قطرات صغيرة مستمدة من الفضاء السائل الخلالي ( أي المكروية)، سواء في ظل الظروف الفسيولوجية والفيزيائية المرضية 3 ، 4 ، 5 . ولذلك، فإن تحليل كت ( أي السائل الخلالي) قد يساعد على تحديد العوامل التي تنظم الأيض القلبية وظيفة مقلص 6 أو تؤثر على وظائف الخلايا المناعية بعد الهجرة إلى القلب المصاب. يحتمل أن يؤدي ذلك إلى وضع استراتيجيات علاجية جديدة لعلاج هف.

جمع كت من قلوب الفئران هو من الناحية الفنية تحديا. في قلوب لانجندورفف بيرفوسد العادية، ومجموعة حصرية من كت صعبة لأن خليط من كت مع الشريان التاجيy الوريدية السائلة بيرفوسيت يضعف بشكل غير متوقع أي تركيز من الأيضات / الإنزيمات الصادرة عن الفضاء الخلالي. إحدى الاستراتيجيات الممكنة للتغلب على هذا القيد هو استبعاد النفايات السائلة الوريدية عن طريق تحفيز الرئة وفي نفس الوقت ربط الوريد الرئوي 7 . ومع ذلك، فإن هذه الطريقة تواجه صعوبات المرتبطة القنية وربط الشريان الرئوي والوريد، مما تسبب في تسرب محتمل من النفايات السائلة الوريدية في ترانزودات القلب. تم استخدام مفهوم استخدام نموذج القلب العكسي لأول مرة من قبل مجموعة كامرميه التي قلبت قلب بيرفوسد المعزول في وضع رأسا على عقب ووضعت غطاء اللاتكس الرقيق على سطح النخابية لاستمرار عينة كت دون تلوث النفايات السائلة الوريدي 8 ، 9 . باستخدام هذا الإجراء، وقد أظهرت كت لتوفير مقياس حساس جدا من الأيض الصادرة عن القلب 9 ،ونقل الشعرية من الأحماض الدهنية 8 ، والجسيمات الفيروسية 10 .

في الآونة الأخيرة، وقد تورط العوامل باراكرين التي قد تنظم الاستجابة المناعية المحلية وزيادة الأوعية الدموية القلبية 11 في الآثار المفيدة للعلاج القائم على الخلايا الجذعية لأمراض القلب. تحليل كت في قلب عكس قد يساعد على تحديد كيميائيا هذه العوامل باراكرين الفردية. وبالإضافة إلى ذلك، كت قد يساعد على تحديد العوامل التي تنطوي عليها في تنشيط الجسم الحي من الخلايا المناعية في القلب.

الوصف المفصل لجمع كت من سطح القلب، المقدمة هنا، هو مفيد تجريبيا للباحثين دراسة التفاعل بين الخلايا المناعية، الخلايا الليفية، الخلايا البطانية، و كارديوميوسيتس فيما يتعلق وظيفة القلب الشاملة. كما ذكر أعلاه، السائل الخلالي يحمل المعلومات للاتصال خلية إلى خلية داخل القلب، وإش يمكن تقييم مريح من قبل مجموعة من كت. الوصف التقني المفصل، بما في ذلك بروتوكول الفيديو لكيفية جمع كت من قلب عكسها، ينبغي أن يسهل التطبيق المستقبلي لهذه التقنية الفريدة.

Protocol

تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل الوكالة التنظيمية المحلية ( لانوف من نوردرهين-ويستفالين، ألمانيا)، وتم تنفيذها وفقا للمبادئ التوجيهية لاستخدام الحيوان. تم تغذية الحيوانات مع نظام غذائي تشاو القياسية وتلقت مياه الصنبور ليبيتوم الإعلانية . جميع المعدات والمواد الكيميائية اللازمة لكل خطوة من خطوات التجربة متوفرة في جدول المواد .

1. إعداد كاب اللاتكس والبطين داخل البطيني

  1. جعل قالب الألومنيوم باستخدام آلة طحن يطابق متوسط ​​حجم القلب الفئران (وزن الجسم من 300-350 ز). البولندية العفن مع رقيق (10/0) ​​ورقة الصنفرة.
    ملاحظة: وترد مقاييس مفصلة من القالب في الشكل 1A .
  2. عموديا إصلاح الرقبة من قالب الألومنيوم إلى آلة طحن لإعداد غطاء اللاتكس.
    ملاحظة: آلة الطحن يسبب العفن لتدوير ببطء. بدلا من ذلك، يمكن استخدام محرك كهربائي. لى>
  3. صب 20 مل من اللاتكس السائل (شراؤها تجاريا، انظر جدول المواد ) في كوب زجاجي 50 مل.
  4. خفض العفن حتى مغمورة الجسم كله من القالب في حل اللاتكس.
  5. رفع ببطء القالب (5 سم / دقيقة) في حين الدورية.
  6. إبقاء الدورية العفن لمدة إضافية 15 دقيقة، حتى يتم تعزيز اللثي على سطح القالب.
  7. إضافة حوالي 1 غرام من مسحوق التلك إلى سطح القالب (مغطاة بالفعل من قبل فيلم اللاتكس رقيقة) لمنع الضرر أثناء فصل.
  8. فصل بلطف مع الأصابع غطاء اللاتكس المجففة بالفعل من سطح القالب. غطاء اللاتكس هو الآن جاهزة للاستخدام ( الشكل 1B ).
  9. توصيل منفذ من غطاء اللاتكس إلى 15 سم أنابيب السيليكون (إد = 0.2 مم)، وتستخدم في وقت لاحق لجمع كت.
  10. ملء بالون البطين اللاتكس بالماء وثبات إصلاحه على قنية معدنية على شكل L متصلة 1 مل، حقنة مملوءة بالماء (> الشكل 1C).
    ملاحظة: سيتم استخدام هذا لضمان وضع مستقيم من القلب (انظر أدناه).
  11. تأكد من أن البالون محكم من خلال إجراء العديد من اختبارات الانكماش / تضخيم مع حقنة 1 مل المرفقة.
  12. ربط قنية، عن طريق وقف ثلاث نقاط، إلى محول الضغط لقياس المستقبل للضغط داخل البطين المتقدمة ( الشكل 1C ).

2. إعداد كريبس-هنسليت العازلة (جسر الملك حسين) ونظام لانجندورفف الإرواء

  1. إعداد نظام نضح لانجندورفف باستخدام إما تدفق ثابت (مدفوعا مضخة الأسطوانة) أو الضغط المستمر (التي تم إنشاؤها بواسطة ضغط ثابت في عمود الزجاج) واسطة.
    ملاحظة: وقد وصفت تفاصيل إعداد القلب لانجندورفف سابقا 12 .
  2. إعداد 2 لتر من جسر الملك حسين المعدل (في ملي: 116.02 كلوريد الصوديوم، 4.63 بوكل، 1.10 مغسو 4 · 7H 2 O، 1.21 K 2 هبو 4 ، 2.52 كاكل 2 · 2H 2 O، 24.88 ناهكو 3 ، 8.30 D- الجلوكوز، و 2.0 البيروفات الصوديوم).
    1. تزن جميع المواد الكيميائية ولكن كاكل 2 وحلها في 1.8 لتر من الماء المقطر المزدوج في قارورة 2 لتر.
    2. فقاعة المتوسطة مع الكربوجين (95٪ O 2 /5٪ كو 2 ) لمدة 5 دقائق على الأقل للتوازن (الرقم الهيدروجيني: 7.4) تحت التحريك المغناطيسي.
    3. إضافة 0.74 غرام من كاكل 2 .2H 2 O ورفع الحجم الإجمالي إلى 2 لتر مع الماء المقطر المزدوج.
    4. مواصلة التحريك و فقاعات وسط مع كاربوجين لمدة 5 دقائق إضافية.
    5. تصفية جسر الملك حسين من خلال مرشح 0.2 ميكرون للقضاء على الجسيمات الصغيرة التي قد تعيق دوران الأوعية الدقيقة للقلب.
  3. إعداد نظام نضح لانجندورفف.
    1. وضع جسر الملك حسين تصفيتها في حمام الماء قبل تحسنت (38 درجة مئوية). والحفاظ على محتدما مع كاربوجين لتوليد ضغط 100 سمه 2 O إنزيد(ه) خزان الملك حسين.
    2. ربط الخزان إلى العمود الزجاجي لإنشاء 100 سمه 2 O الضغط الهيدروستاتيكي ل نضح لانغندورفف مع جسر الملك حسين. مواصلة فقاعة جسر الملك حسين داخل العمود مع الكربوجين.
    3. ضبط درجة حرارة نظام الاحترار بحيث درجة الحرارة في منفذ القنية الأبهر هو 37 درجة مئوية.
    4. تأكد من أن نظام أنابيب خالية من فقاعة.
    5. أكسجين جسر الملك حسين مع الكربوجين لمدة 5 دقائق إضافية، حتى بو 2 في جسر الملك حسين يصل إلى 500-600 مم زئبق (يقاس من قبل محلل غاز الدم).
  4. إعداد نظام نضح لتشغيل إما على ضغط مستمر من 100 سمه 2 O أو في تدفق مستمر من حوالي 10-20 مل / دقيقة باستخدام التبديل اليدوي. بدلا من ذلك، استخدم قابلة للتبديل سث تحكم مضخة للتبديل على الفور إلى وضع نضح.

3. عزل والقنية من القلب

ملاحظة: ذكر الفئران ويستار مع وزن الجسم من 300-350 غرام استخدمت بحيث أحجام قلوب المتطابقة قبل-- يلقي اللاتكس كاب. خضعت الفئران إما ربط من اليسار الشرياني تنازلي (لاد) لمدة 50 دقيقة، تليها ضخه أو كانت تعمل الشام. تم الإبلاغ عن تفاصيل منهجية تحريض احتشاء عضلة القلب (مي) في مكان آخر 13 . أجريت التجارب قلب قلب في الحيوانات احتشاء بعد 5 أيام من العملية.

  1. تخدير الفئران باستخدام المرذاذ إيسوفلوران (2٪ V / V) متصلا غرفة عقد الحيوان (20 L).
  2. نقل الفئران إلى جدول العملية (وليس درجة الحرارة التي تسيطر عليها) بعد التوصل التخدير العميق.
  3. رفع الجلد والعضلات تحت القص مباشرة باستخدام ملقط وقطع حول الهامش السفلي من الأضلاع مع مقص الثقيلة.
  4. باستخدام مقص غرامة، وجعل قطع صغيرة في الحجاب الحاجز، على هامش الضلع. قطع الأضلاع كودالي لجعل رفرف من جدار الصدر البطني بأكمله.
  5. انتزاع بلطف القلب مع الإبهام أند مؤشر والوسطى الأصابع ورفع ببطء ذلك صعودا بحيث الأوعية القلبية تصبح امتدت قليلا.
  6. استئصال القلب حتى الشريان الأورطي يتعرض بالكامل.
  7. وضع القلب في كوب 100 مل تحتوي على 50 مل من جسر الملك حسين الباردة الجليد (4 درجات مئوية) ونقله إلى جهاز نضح.
  8. على الفور جبل القلب عن طريق الشريان الأبهر على قنية نازف وتشديد بشكل آمن مع خياطة (4-0). تجنب فقاعات الهواء دخول القلب.
  9. تطبيق ضغط نضح المستمر (100 سمه 2 O). بدلا من ذلك، يمكن تطبيق معدل تدفق كامل (بدءا من 20 مل / دقيقة).
    ملاحظة: الوقت من افتتاح الصدر إلى المرفق من القلب إلى قنية نضح يجب أن يستغرق حوالي 3 دقائق في أيدي مشغل من ذوي الخبرة.

4. عكس قلب نموذج

  1. تدوير بلطف قنية الأبهر حتى الجدار الخلفي للقلب هو في إن وجه الرأي.
  2. إزالة النسيج الضام مع مقصلفضح فتح الأذين الأيسر، مما يجعلها جاهزة للقنية داخل البطيني.
  3. إدراج البالون اللاتكس مفرغة تعلق على قسطرة جامدة عبر الأذين الأيسر في البطين الأيسر.
  4. تضخيم البالون حتى يملأ تجويف البطين بأكمله (يتم تضخيم حجم تضخيمها مسبقا على حقنة).
  5. قلب القلب حتى رأسا على عقب، ودعمه من قبل القسطرة البالونية داخل البطين.
  6. كما هو مبين في الشكل 1C ، استقرار ميكانيكيا قلب مقلوب في وضع مستقيم باستخدام البالون داخل البطيني مع قسطرة معدنية جامدة.
  7. ضبط الموقف من القلب لتجنب التواء المفرط للجذر الأبهر.
  8. ضبط الضغط الانبساطي إلى 3-5 ملم زئبقي (يقاس بالون داخل البطين؛ انظر الشكل 1C ).
  9. مراقبة سطح النخابية من القلب والتأكد من أن قطرات صغيرة تشكل.
  10. ضع غطاء اللاتكس oإلى سطح القلب عن طريق دفعه بلطف لتغطية كامل القلب باستخدام الأصابع.
  11. تأكد من أن غطاء اللاتكس يغطي معظم سطح البطين.
  12. إزالة فقاعات الهواء، إن وجدت، داخل الغطاء والأنابيب عن طريق امتصاص بلطف مع حقنة 1 مل.
  13. ضبط افتتاح القاصي من أنابيب كت كتل إلى 10 سم تحت المستوى الأفقي للقلب.
    ملاحظة: هذا الإجراء يضمن امتصاص طفيف من قبل الضغط الهيدروستاتيكي السلبي.
  14. جمع قطرات من كت في أنبوب جمع 1.5 مل وضعها في الجليد مختلطة 1: 1 مع كلوريد الصوديوم. جمع حوالي 0.15-1.5 مل من كت.
    ملاحظة: خليط الجليد / كلوريد الصوديوم يستقر درجة الحرارة في أنبوب جمع إلى أقل من الصفر (حوالي -4 درجة مئوية).
    ملاحظة: الوقت أخذ العينات يعتمد على الغرض التجريبي. معدل تدفق كت هو حوالي 27 ± 20 ميكرولتر / دقيقة في الحيوانات التي تسيطر عليها صور (ن = 3) و 100 ± 47 ميكرولتر / دقيقة للحيوانات تاج التاجي (ن = 11).
  15. وزن و المفاجئة تجميد عينات كتفي النيتروجين السائل وتخزينها في -80 درجة مئوية للقياسات في وقت لاحق.

5. تحليل كت

  1. استخدام السائل كت لتحليل الأيض، اعتمادا على السؤال العلمي.
    ملاحظة: تم جمع البيانات الواردة في الشكل 2 والشكل 3 من نضح الضغط المستمر (100 سمه 2 O)، وحوالي 0.15-1.5 مل من السائل المقطعي تم جمعها في غضون فترة 10 دقيقة. هذه المرة وحجم كانت كافية للبروتين (الحد الأدنى: 50 ميكرولتر؛ الشكل 2 ) 14 و هبلك (الحد الأدنى: 20 ميكرولتر؛ الشكل 3 ) 15 تحليل مختلف البيورين.

النتائج

نموذج قلب عكس تمكن جمع القلب ترانزودات الخلالي في معزولة، الرجعية بيرفوسد القلب الفئران ( الشكل 1A -C ). عندما بيرفوسد عند ضغط مستمر من 100 سمه 2 O، تراوحت نسبة تشكيل السوائل الخلالي بين 17 و 147 ميكرولتر / دقيقة، والتي تصل ?...

Discussion

ويستند نموذج قلب عكس على راسخة لانجندورفف تقنية نضح القلب 12 ويتم تنفيذها ببساطة عن طريق قلب القلب إلى موقف رأسا على عقب وعقد هذا الموقف باستخدام جامدة البالون داخل البطين القسطرة. في مثل هذه الطريقة، يمكن أن ينفصل القلب ترانزديتات الخلالي جسديا من الشري...

Disclosures

ويعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

Acknowledgements

تم تمويل هذه الدراسة من قبل نسك 81570244، فوكو 23/2013، و سفب 1116 / B01 ومعهد بحوث القلب والأوعية الدموية دوسلدورف (كاريد).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Latex SolutionProChemieZ-Latex LA-TZhttp://kautschukgesellschaft.de/%E2%80%A8z-latex-la-tz
Aluminum MoldHome made-Reverse heart model
Universal OvensMemmertUNB 400Reverse heart model
Latex BalloonHugo SachsSize 4Reverse heart model
Milling MachineProxxonMF70Reverse heart model
Sodium ChlorideSigmaSZBD0810VChemicals
Sodium Hydrogen CarbonateRoth68852Chemicals
Potassium ChlorideMerck49361Chemicals
Magnesium Sulphate HeptahydrateMerck58861Chemicals
Potassium Dihydrogen PhosphateMerck48731Chemicals
D(+)-Glucose AnhydrousMerck83371Chemicals
Calcium Chloride DihydrateFluka21097Chemicals
BalanceVWRSE 1202Weighing chemicals
Double Distilled WaterMillpore-Disolving chemicals
Medical Pressure TransducerGold-Langendorff apparatus
Medical Flow ProbeTransonic3PXNLangendorff apparatus
Heating Circulating BathHaake B3 ; DC1Langendorff apparatus
Laboratory and Vaccum TubingTygonR-3603Langendorff apparatus
Animal Research FlowmetersTransonicT206Langendorff apparatus
PowerLab Data Acquisition DeviceAD InstrumentsChart 7.1Langendorff apparatus
LabChart Data Acquisition SoftwareAD InstrumentsChart 7.1Langendorff apparatus
Peristaltic PumpGlisonMINIPULS 3Langendorff apparatus
Glass Water Columnhome made-Langendorff apparatus
Water Bath Protective AgentVWR462-7000Langendorff apparatus
Sterile Disposable Filters (0.2 µm)Thermo Scientific595-4520Langendorff apparatus
Blood gas analyzersRadiometerABL90 FLEX PLUSGas analyzer
70% ethanolVWRUN1170Cleaning  tubings
100% ethanolMerck64-17-5Cleaning tubings
Wistar RatsJanvier-Animals
Stainless ScissorsAESCULAPBC702RSurgical Instruments
Stainless ScissorsAESCULAPBC257RSurgical Instruments
Big ForcepsAESCULAP-Surgical Instruments
8m/m Stainless ForcepsF.S.T11052-10Surgical Instruments
superfine (10/0) emery paper3M051111-11694Reverse heart model

References

  1. Henkel, D. M., Redfield, M. M., Weston, S. A., Gerber, Y., Roger, V. L. Death in heart failure: a community perspective. Circ Heart Fail. 1 (2), 91-97 (2008).
  2. Limana, F., et al. Myocardial infarction induces embryonic reprogramming of epicardial c-kit(+) cells: role of the pericardial fluid. J Mol Cell Cardiol. 48 (4), 609-618 (2010).
  3. Brunner, F. Cardiac tissue endothelin-1 levels under basal, stimulated, and ischemic conditions. J Cardiovasc Pharmacol. 26, S44-S46 (1995).
  4. de Lannoy, L. M., et al. Renin-angiotensin system components in the interstitial fluid of the isolated perfused rat heart. Local production of angiotensin I. Hypertension. 29 (6), 1240-1251 (1997).
  5. Strupp, M., Kammermeier, H. Interstitial Lactate And Glucose-Concentrations Of the Isolated-Perfused Rat-Heart before, during And after Anoxia. Pflugers Arch. 423 (3-4), 232-237 (1993).
  6. Wienen, W., Jungling, E., Kammermeier, H. Enzyme-Release into the Interstitial Space of the Isolated Rat-Heart Induced by Changes in Contractile Performance. Cardiovasc Res. 28 (8), 1292-1298 (1994).
  7. De Deckere, E. A., Ten Hoor, ., P, A modified Langendorff technique for metabolic investigations. Pflugers Arch. 370 (1), 103-105 (1977).
  8. Tschubar, F., Rose, H., Kammermeier, H. Fatty acid transfer across the myocardial capillary wall. J Mol Cell Cardiol. 25 (4), 355-366 (1993).
  9. Wienen, W., Kammermeier, H. Intra- and extracellular markers in interstitial transudate of perfused rat hearts. Am J Physiol. 254 (4 Pt 2), H785-H794 (1988).
  10. Sasse, A., Ding, Z. P., Wallich, M., Godecke, A., Schrader, J. Vascular transfer of adenovirus is augmented by nitric oxide in the rat heart. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 287 (3), H1362-H1368 (2004).
  11. Gnecchi, M., Zhang, Z., Ni, A., Dzau, V. J. Paracrine mechanisms in adult stem cell signaling and therapy. Circ Res. 103 (11), 1204-1219 (2008).
  12. Herr, D. J., Aune, S. E., Menick, D. R. Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts. J Vis Exp. (101), e52908 (2015).
  13. Ding, Z., et al. Epicardium-Derived Cells Formed After Myocardial Injury Display Phagocytic Activity Permitting In Vivo Labeling and Tracking. Stem Cells Transl Med. 5 (5), 639-650 (2016).
  14. Hartwig, S., et al. Secretome profiling of primary human skeletal muscle cells. Biochim Biophys Acta. 1844 (5), 1011-1017 (2014).
  15. Smolenski, R. T., Lachno, D. R., Ledingham, S. J. M., Yacoub, M. H. Determination of sixteen nucleotides, nucleosides and bases using high-performance liquid chromatography and its application to the study of purine metabolism in hearts for transplantation. J Chromatogr. 527 (2), 414-420 (1990).
  16. Decking, U. K., Juengling, E., Kammermeier, H. Interstitial transudate concentration of adenosine and inosine in rat and guinea pig hearts. Am J Physiol. 254 (6 Pt 2), H1125-H1132 (1988).
  17. Heller, L. J., Mohrman, D. E. Estimates of interstitial adenosine from surface exudates of isolated rat hearts. J Mol Cell Cardiol. 20 (6), 509-523 (1988).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

124

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved