قياسات العضلة العاصرة الاحليل سيستوميتريك والخارجية في الفئران مستيقظا مع القسطرة مزروع واقطاب السماح للقياسات المتكررة

Summary

هذا البروتوكول الأول يصف العملية الجراحية لزرع قسطرة المثانة جنبا إلى جنب مع أقطاب مصرة الاحليل الخارجي، والثانية، قياس وظيفة المثانة والإحليل الخارجية الدائمة العضلة العاصرة في الحيوانات مستيقظا مزروع.

Abstract

يتم تقييم الدالة المسالك البولية السفلي أساسا عن طريق تحليل وظيفة المثانة سيستوميتريك في القوارض. وعادة ما تتم سيستوميتريس التقليدية كتحليل المحطة الطرفية تحت التخدير يوريتان. فمن المعروف جيدا أن المخدرات مخدر يمكن أن يؤثر على وظيفة المثانة. وبالتالي، يهدف هذا الأسلوب لإجراء قياسات سيستوميتريك المثانة ومصرة الاحليل الخارجي في الفئران مستيقظا طفيفة من ضبط النفس. ولهذا الغرض، يتم زرع قسطرة مثانة في قبة المثانة. في وقت لاحق، هي مزروع قطبين الثنائية إلى العضلة العاصرة الاحليل الخارجي وهو خياطة قطب الأرضي للهيكل العظمى وعضلات غير مستجيبة. قسطرة المثانة والأقطاب الثلاثة أخيرا نفق تحت الجلد في منطقة الرقبة والملصقة على تسخير. مع هذه التقنية، يمكن قياس المسالك البولية السفلي في نقاط زمنية متعددة في نفس الحيوان لتقييم وظيفة الجهاز البولي السفلي. التطبيق الرئيسي من هذا الأسلوب هو متابعة المتزامنة المثانة ومصرة الاحليل الخارجية الدالة في الفئران صحية مستيقظا وبعد التعريفي للمرض أو الإصابة. وعلاوة على ذلك، يمكن إجراء الرصد اللاحقة المسالك البولية السفلي أثناء تقييم الإصابة/المرض ورصد فعالية العلاج.

Introduction

واستخدمت معظم الدراسات لتحليل تخزين البول ويفرغ الدالة والخلل، نماذج القوارض. من خلال تفعيل متتابعة من ردود الفعل، ينتج ميكتوريشن. تنسيق ردود الفعل هذه أمر ضروري لفعالية تبطل¹. توفر تقنيات تسجيل سيستوميتريك أدوات قيمة لتحليل وظيفة المثانة البولية تحت تحكم العصبية¹.

سيستوميتريس الأكثر تقليدية في الفئران القيام به كإجراء تحليل واحدة ونهائية في التخدير، أساسا يوريتان²، والتركيز على المثانة البولية فقط. ومع ذلك، في بعض الأمراض مثل الخلل العصبية في المسالك البولية السفلي (نلوتد)، هو المثانة البولية، ليس فقط، بل أيضا منفذ المثانة، الاحليل المصرة الخارجية، مختلة^3،4. وهذا يجعل نلوتد صعوبة في المتابعة، إلا إذا كان يتم فحص المثانة في قياس سيستوميتريك واحد. للحصول على نتائج موثوقة قابلة للمقارنة للبشر، من الضروري لقياس كل من المثانة البولية ووظيفة العضلة العاصرة الاحليل الخارجية و التفاعلات²بدقة. وعلاوة على ذلك، من الأهمية بمكان لإجراء التحليلات الفنية في الفئران مستيقظا التخدير من المرجح جداً أن يغير المثانة الدالة^2،،من⁵⁶. سيستوميتريك جيدة تسجيل في الحيوانات مستيقظا هو الأساس لتحديد دالة وعطل المثانة⁷.

محطة سيستوميتري الحيوانات الصغيرة المستخدمة (مثلاً، كاتاماونت سيستوميتري محطة (قانون الأحوال المدنية)) وحدة لإجراء تحليلات سيستوميتريك في الحيوانات الصغيرة مستيقظا⁸. عن طريق قسطرة مثانة دائم واقطاب مزروع مصرة الاحليل الخارجي، يمكن إجراء القياسات المتكررة على مدى فترات وقت أطول². وهكذا، احتجاز ثاني أكسيد الكربون يوفر أداة قيمة لغير العصبية والتقييمات نلوتد في نموذج القوارض، التي يمكن تغيير باثوميتشانيسمس أثناء متابعة قصيرة أو متوسطة الأجل. بالإضافة إلى ذلك، يتضمن هذا الأسلوب تحليلاً سيستوميتريك خفضت الحرفية باستخدام ريسترينير لإجراء قياسات المثانة في الفئران مستيقظا.

في هذه الورقة، ويصف لنا النهج الجراحية بشكل دائم زرع قسطرة مثانة واقطاب مصرة الاحليل الخارجي، جنبا إلى جنب مع قياسات سيستوميتريك في الفئران مستيقظا.

Protocol

وافق جميع الإجراءات الموصوفة هنا لجنة "الأخلاقيات الحكومية النمساوية" للبحوث الحيوانية (بونديسمينيستيريوم für Wissenschaft، Forschung und Wirtschaft، WF/V/3b) وكانت متفقة مع الرابطة "تقييم المختبر" الرعاية الحيوانية المبادئ التوجيهية لاستخدام الحيوان. وكانت الفئران المستخدمة لهذا النهج الفئران لويس أنثى، عمره 12 أسبوع. استخدام أدوات معقمة في جميع أنحاء البروتوكول.

1-المواد من إعداد

1. الصناعات التحويلية للقسطرة
   1. قطع القسطرة (البولي إثيلين أنابيب PE-50) في الطول المناسب (20 إلى 25 سم) لتناسب حجم الحيوان.
      ملاحظة: ترك بعض طول إضافي للاتصال النفقي وأسهل معالجة.
   2. اشتعال نهاية واحدة مع أخف وزنا للحصول على نصيحة مستدير الزوايا. الاختيار النهائي افتتاح المناسبة وكليلة نهاية القسطرة.
   3. ضع أنبوب سيليكون طويلة 2 مم على القسطرة حتى يقع أسفل نهاية اندلعت.
2. تصنيع أقطاب كهربائية
   1. إعداد أسلاك فولاذية المغلفة تترافلوروايثيلين من 20-25 سم (الطول المناسب تبعاً للحجم الحيوان).
   2. إعداد سلك فضة 2 سم في الطول، وتطور النهايات حتى تبقى حلقة صغيرة. علامات إيقاف 2 مم العزل تفلون في نهاية واحدة. لحام الأسلاك الفضية الملتوية تنتهي بأسلاك الفولاذ جردت.
   3. تطبيق طلاء الأظافر التقليدية في منطقة الطلاء. إعداد أنابيب البولي إثيلين طويلة 4 ملم على منطقة المغلفة، وختم النهاية بتطبيق الحرارة على الملقط ضغط.

2-إعداد الحيوان

1. التخدير
   1. استخدام تخدير مناسبة كوكتيل وافقت مؤسسة عامة التخدير.
   2. إعداد كوكتيل التخدير مع الميدازولام (0.08 مغ/كغ)، ميديتوميديني (0.15 مغ/كغ) وشيفتشنكو (0.01 مغ/كغ)، وحقن العضل بحقنه 1 مل بإبرة قياس 27.
2. إعداد العمليات الجراحية
   1. يحلق في البطن مع حلاقة كهربائية، بما في ذلك منطقة الأعضاء التناسلية والمنطقة الخلفية على مستوى سكابولاي.
   2. تطهير البطن والرقبة المناطق مع 70% إيثانول الأولى و 3 ثم التناوب يدعك بمحلول بوفيدون.

3-المثانة قسطرة غرس

1. القيام فتح البطن خط منتصف منخفضة المستوى من حلمه الثالث والرابع (حوالي 2 إلى 2.5 سم في الطول) باستخدام مشرط للجلد ومن مقص جراحة للعضلات البطن.
2. كشف المثانة عن طريق توجيه جدار البطن في اتجاه cranio والذيلية وإصلاحه في هذا الموقف بوضع الجزء الخلفي من الملقط خلف المثانة لتجنب إعادة تحديد المواقع.
3. المكان خياطة محفظة-سلسلة حول قبة المثانة استخدام خياطة شعيرات غير امتصاص 6-0 بإبرة تفتق تلميح.
4. جداً قبة المثانة داخل المحفظة-السلسلة، أما طرف مشرط أو إبرة ز 18، إدخال قسطرة المثانة (راجع الخطوة 1 من البروتوكول).
5. أدخل القسطرة المعبأة مع الحل كلوريد الصوديوم 0.9% الفسيولوجية العقيمة وسحب قسطرة المثانة بعناية حتى اندلعت فتح القسطرة يتوضع أسفل قبة المثانة.
6. تأمين خياطة محفظة-سلسلة حول القسطرة وجعل وقف خياطة الجروح حول الهيئة قسطرة لتثبيت المزيد.
7. التحقق من وجود تسرب عبر قبة المثانة بملء المثانة عن طريق القسطرة ببطء مع العقيمة الحل كلوريد الصوديوم 0.9% الفسيولوجية.

4-الاحليل المصرة زرع قطب كهربائي

1. إعداد ثلاثة أقطاب لغرس (راجع الخطوة 1 من البروتوكول).
2. وضع علامة على قطب واحد بقلم اللباد دائمة ملونة لزيادة التعرف على مسرى فارغة مستقبلا. تطهير أقطاب مع الإيثانول 70%.
   ملاحظة: القسطرة ليست مناسبة للحرارة وإجراءات التعقيم الكيميائي. وبدلاً من ذلك تعقيم الباردة أقطاب ح 24.
3. تمديد شق البطن بالمقص الجراحي تصل إلى عظم العانة، ولكن لا تقطع الارتفاق العانة.
4. تحديد مجرى البول وإنشاء جيب صريحا باستخدام الملقط غرامة على كلا الجانبين من مجرى البول، ولكن تجنب الصدمات الناجمة عن السفن أو الأعصاب.
5. تحديد الحقائب الدهون المناسبة القريبة من مجرى البول داخل هذا الإطار.
6. إصلاح الأقطاب على أساس ثنائي للحقيبة الدهون المناسبة باستخدام خياطة شعيرات غير الامتصاص 6-0.
   ملاحظة: ينبغي الموقف النهائي من الأقطاب الثنائية في المنطقة منتصف مجرى البول.
7. ربط قطبين جنبا إلى جنب مع خياطة شعيرات غير الامتصاص 6-0.
8. خياطة مسرى null ملحوظة إلى عضلة جدار البطن بعد مسافة من مجرى البول. ربط جميع الأقطاب الثلاثة مشفوعة خياطة واحدة.

5-الاتصال النفقي

1. جعل شق جلد صغيرة بين سكابولاي للاتصال النفقي.
2. نفق الأسلاك الكهربائي في الرقبة والقيام الاختيار نهائي للموضع الصحيح، والتحقق من موقف أقطاب بعد النفق.
3. قسطرة المثانة النفق إلى مستوى سكابولاي--إيلاء الاهتمام إلى المثانة أثناء الاتصال النفقي القسطرة لتجنب التواء المثانة. ولهذا الغرض، إجراء القسطرة قبل دخول قبة المثانة لتجنب التواء المثانة.
4. إغلاق عضلات البطن بغرز مستمرة أو متقطعة مع امتصاص بوليفيلامينت 4-0 في خياطة الجروح. إغلاق شق الجلد بخيوط فراش مقاطعته.
5. تمتد الحيوان إلى طوله الكامل أن يكون انتفاخ القصوى من الأسلاك الكهربائي والقسطرة.
6. إصلاح أسلاك القسطرة والقطب التي غرقت في خياطة لعضلة الكتف.
7. إغلاق الجلد بغرزة واحدة مع خياطة 4-0.

6-تسخير المناسب

1. صالح تسخير للحيوان عن طريق سحب تسخير على رأسه الحيوان وسحب الأمامية لوضع نهاية بين شرائح سيليكون اثنين. تحقق من حجم مفعل بوزن الحيوان قبل الجراحة مع الموزع.
2. قسطرة المثانة إلى الحفرة المركزية لتسخير والأقطاب من خلال ثقب مصنوعة خصيصا بحفر النفق ضبط حجم الأسلاك الكهربائي.
3. ضبط تسخير بسحب شرائح السيليكون. ضبط تسخير حتى أنها ليست فضفاضة جداً، ولكن ضمان بقاء بعض المساحة الاحتفاظ بالقدرة على الانتقال من الفئران.
4. استخدام حزام كيبل لإصلاح شرائط السيليكون.
5. قطع طول قسطرة المثانة إلى سم 3 أعلاه تسخير والاتصال بسداده 23-ز، وأخيراً إصلاحه لتسخير.

7-تصنيع الموصل الكهربائي

1. إعداد ثلاثة أنابيب تقليص الحرارة الصغيرة (بلون مختلف لمسرى فارغة). إعداد اثنان أنابيب انكمش الحرارة زيادة في حجم أكبر مناسب.
2. تقصير طول الأسلاك الكهربائي الطول أمثل لتكون قادرة على سد العجز في وقت لاحق للتوصيل الإناث دون أن تكون فضفاضة جداً أو قصيرة جداً. علامات إيقاف العزل تفلون للأسلاك الثلاثة (حوالي 2 مم)، وتطور أسلاك الفولاذ إلى سلسلة.
3. ضع أنابيب تقليص الحرارة الكبيرة على كل الأسلاك ووضع أنابيب صغيرة للأسلاك الثلاثة كل على حدة واستخدام أنبوب الملونة لمسرى فارغة.
4. لحام كهربائي للذكور 3-الاتصال-سد. ضع مسرى فارغة في الوسط، وتقليص مجال الثلاثة الصغيرة الفردية أنابيب أعلاه ملحوم.
5. تقليص الأولى أنابيب أكبر في نهاية نهايات الأنبوب الفردية وأنبوب كبير النهائي للحدود التوصيل الذكور.
6. قم بتوصيل القابس الذكور موصل الإناث الثابتة لتسخير والإصلاح مع قطعة من الشريط لمزيد من السلامة.

8-بعد انتهاء عملية جراحية الرعاية

1. تنظيف المناطق الجراحية وتطهير مع بوفيدون.
2. وضع الحيوان على وسادة تدفئة حتى استيقظ وإعطاء محلول كلوريد الصوديوم 0.9% لاستبدال المياه، استناداً إلى المبادئ التوجيهية الرعاية الحيوانية المحلية أثناء وبعد الجراحة.
3. إدارة المسكنات (ميلوكسيكام 1 مغ/كغ) والمضادات الحيوية (سولفادوكسينوم 200 ملغ، تريميثوبريموم 40 ملغ، 15 مغ/كغ) كحل مجتمعة حقن تحت الجلد. مرتين يوميا، تعطي المسكنات (صباحا ومساء)، ومرة واحدة يوميا تعطي المضادات الحيوية، لمدة خمسة أيام بعد ذلك.
4. تواصل مع المضادات الحيوية في نفس الجرعة على مدى فترة المتابعة كلياً في حقن اثنين إلى ثلاثة في الأسبوع.
5. التحقق يوميا لمناسبة ملائمة لتسخير والقيام تفتيش الميداني جراحي، خاصة في منطقة الرقبة. ضبط تسخير إذا كان يحصل ضيق للغاية عن طريق سحب بعناية في شرائط السيليكون.
6. مسح القسطرة بانتظام مرة كل أسبوع لتجنب حصار.

9-التحضير لقياس سيستوميتريك

1. إجراء القياسات سيستوميتريك الأولى بعد ستة أيام بعد العمليات الجراحية.
   ملاحظة: قياسات سابقة يمكن أن يتأثر بمسكن تهيج الأدوية و/أو urothelial بسبب زرع القسطرة.
2. قم بتشغيل المفتاح الرئيسي، والكمبيوتر، ومكبر للصوت فريق الإدارة البيئية.
3. ملء المضخة المحاقن مع درجة حرارة الغرفة تسخينها كلوريد الصوديوم 0.9%. فتح روابط ثلاثية واحدة تلو الأخرى على نحو تنازلي، بدءاً من المضخة، وتدفق الأنابيب.
   ملاحظة: التحقق بعناية لفقاعات الهواء المتبقية، كما ستغير فقاعات القياسات سيستوميتريك.

10-معايرة

1. بدء تشغيل البرنامج أوروفلووميتير البرنامج والذهاب للمعايرة.
2. إغلاق موصل ثلاثي للمضخة والحيوان.
3. فتح الصمام لكنها متصلة واضغط صفر في البرنامج.
4. ضبط الضغط في لكنها إلى 100 ملم زئبق، والضغط 100 ملم زئبق زر في البرنامج. وتؤكد الصحافة لإنقاذ التسوية المعايرة. سيتم إغلاق النافذة تلقائياً.
5. إغلاق الصمام إلى لكنها وفتح الروابط الثلاثية من المضخة للحيوان ليكون جاهزاً للقياس.

11-الحيوان (الحيوانات DB) قاعدة بيانات

1. لتسجيل الحيوانات، يعطي الحيوان على معرف موجزة.
2. قم بإدخال المزيد من البيانات، مثل تاريخ العلوم، بداية علاج، وتاريخ زرع القسطرة، والمجموعة التجريبية، وتاريخ الميلاد للحيوان.
3. أخيرا تسجيل البيانات، اضغط "تخزين سجل" وحفظ الملف.

12-قياس الإعدادات قبل التسجيل

1. بدء تشغيل البرنامج عن طريق الضغط على زر ابدأ.
2. حدد الحيوان واضغط على مقياس الكتلة الفارغة وضغط صفر.
   ملاحظة: يجب الاهتمام أثناء وضع الحيوان في ريسترينير، مثل أي كبل عالق، كما يمكن أن يؤدي هذا إلى إزالة سلك كابل فريق الإدارة البيئية.

13-إعداد الحيوان

1. قم بإزالة القسطرة وقم بفصل القابس فريق الإدارة البيئية من تسخير.
2. وضعت الفئران ريسترينير. أغلق ريسترينير وقفل تسخير مع المشبك.
3. الحصول على القسطرة والتوصيل فريق الإدارة البيئية من ريستراينير.
4. مكان ريسترينير في وحدة كاتاماونت. وضع الذيل من خلال الأنبوب وإصلاح الأنبوب مع الشريط لتجنب الحركات.
5. في توصيل الذكور فريق الإدارة البيئية إلى رابط تسجيل الإناث فريق الإدارة البيئية.
6. اضغط صفر الضغط مرة أخرى ثم قم بتوصيل القسطرة إلى أنبوب الملء/تسجيل. التحقق من الضغط في البرنامج.
   ملاحظة: يجب أن يكون الضغط إيجابية، وحوالي 5-10 سم ح₂س عند خط الأساس. إذا كان الضغط السلبي، قطع القسطرة القنية، اضغط صفر الضغط، ومن ثم إعادة القسطرة.

14-التسجيل

1. إذا كان متصلاً بالقسطرة وكبل فريق الإدارة البيئية، اضغط على تسجيل وتشغيل المضخة.
2. التكيف مع سرعة سد الاحتياجات التجريبية في ميكروليتر/دقيقة.
3. ملاحظة الوقت يبدأ التسجيل ودرجة حرارة الغرفة في كتاب السجل.
4. لوقف سيستوميتريك تسجيل، تتوقف المضخة بالضغط على تشغيل المضخة واضغط تسجيل مرة أخرى.
   ملاحظة: سيتم إيقاف المضخة والضوء الأخضر في الضخ قبالة.
5. قطع الاتصال القسطرة واستخدام المكونات سداده ز 23 لإغلاق نهاية القسطرة. قم بفصل كابل فريق الإدارة البيئية.
6. فتح الجبهة في ريستراينير وتوجيه الفئران من ريستراينير.
   ملاحظة: التعامل مع الفئران بعناية، ورصد الأسلاك لتجنب أي قفل الكابلات.
7. توصيل القسطرة مرة أخرى في تسخير. إعادة توصيل القابس فريق الإدارة البيئية إلى تسخير، ووضع قطعة من الشريط حول المكونات.
   ملاحظة: إذا كان الحيوان حالة مرضية المسالك البولية السفلي، نعرب عن المثانة في نهاية يدوياً لتجنب أوفيرديستينشن المثانة.
8. وضع الحيوان بالعودة إلى قفصة المنزل.
9. قم بإغلاق البرنامج بالضغط على الخروج.
10. تنظيف ريسترينير والكأس.
11. إغلاق الروابط الثلاثية للمضخة والمآخذ الحيوان.
12. إيقاف تشغيل الكمبيوتر، ووحدة فريق الإدارة البيئية، والنظام عن طريق التبديل الرئيسية.
    ملاحظة: يتم حفظ البيانات في مجلد منفصل "تسجيل البيانات" مع ملف مجلد فرعي لمعرف الجرذ المقاسة. يتم فرز التسجيلات واحد في مجلدات معرف فأر واحد حسب التاريخ.

النتائج

تخطيطي تبين عملية القياسات سيستوميتريك مستيقظا يرد في الشكل 1 ، والتشريح الداخلي لزرع قسطرة المثانة ويرد في الشكل 2. جراحة تستغرق حوالي 2 حاء التسكين بعد الجراحة والمضادات الحيوية، كما هو موضح في البروتوكول، تشمل الألم والالتهابات على مدى...

Discussion

هذا البروتوكول وصف العملية الجراحية قسطرة دائمة وغرس أقطاب الاحليل المصرة وسيستوميتريك تسجيل تقنية في الفئران مستيقظا، وخفة ضبط النفس بما في ذلك كل من التحليل المتزامن للمثانة البولية و العضلة العاصرة الاحليل الخارجي.

هي خطوات حاسمة خلال جراحة زرع قسطرة المثانة، تجنب الت...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Polyethylene tubing PE 50	Becton Dickinson	427411	Catheter
Prolene 6-0 (BV-1, 9.3 mm, 3/8c)	Ethicon	EH7403H	Suture
Teflon coated steel wire	Cooner wire	AS631	Electrode material
Silver wire 0.250 mm	World Precision Instruments	AGW1030	Electrode material
Rotilabo - PVC tube	Carl Roth	97241	Harness
Vicryl rapide 4-0 (P-3, 13 mm, 3/8c)	Ethicon	V4940H	Suture
Quick Connect Single Harness	SAI Infusion Technologies	QCH-23CW	Harness
Shrinking tubes	ChiliTec	17894	Electrode soldering
Soldering wire Pb60 Sn40	Stannol	LD0029	Electrode soldering
Fluxing agent 157	Castolin Eutectin	157 0150	Electrode soldering
Conn Unshrouded Header HDR 3 POS, 2.54mm Solder ST Thru-Hole Box	Preci-dip	801-87-050-10-001101	Electrode soldering
Conn Socket Strip SKT 50 POS 2.54mm, Solder ST Thru-Hole Box	Preci-dip	890-18-003-10-001101	Electrode soldering
Rat Cystometry Package (contains pump, scale, pressure transducer, hardware for cystometric analysis)	Catamount Research and Development Inc.	CAT-CYT-R
Differential amplifier with active headstage	AD instruments	DP-311	EMG amplifier
Restrainer Medium size for rats 200-300 g	emka Technologies	HLD-RM
Uro Dyn Software	Zürich of University		MTA-based
Female rats (Strain Lewis) 12 weeks of age	Charles River, Sulzfeld, Germany		animals