Cystometric ve dış üretral sfinkter ölçümleri implant kateter ve tekrarlanan ölçülerini izin elektrotları ile uyanık Sıçanlarda

Özet

Bu iletişim kuralı, ilk dış üretral sfinkter elektrotlar ve ikinci, idrar kesesi ve dış üretral fonksiyonun ölçümü ile kombine bir idrar kesesi kateter kalıcı implantasyonu cerrahi işlem açıklar sfinkter implante uyanık hayvanlarda.

Özet

Alt Üriner sistem işlev esas olarak cystometric mesane fonksiyon analiz Rodents yoluyla değerlendirilmektedir. Geleneksel cystometries genellikle olarak terminal analiz üretan anestezi altında gerçekleştirilir. İyi anestezik ilaçların mesane fonksiyon üzerinde etkili olabileceği bilinmektedir. Bu nedenle, bu teknik amacı hafifçe ölçülü uyanık sıçan idrar kesesi ve dış üretral sfinkter cystometric ölçümleri gerçekleştirmektir. Bu amaçla, mesane sondası mesane kubbe yerleştirilir. Daha sonra iki elektrot ikili dış üretral sfinkter için implante edilir ve bir yere elektrot için non-yanıt veren bir iskelet kas dikmiş. Mesane kateter ve üç elektrotlar sonunda boyun bölgesine subkutan tünel ve koşum takımı için yapıştırılmış. Bu teknik ile alt idrar yolu Alt Üriner sistem işlev değerlendirmek için aynı hayvan birden fazla zaman noktalarında ölçülebilir. Bu teknik ile ana uygulamanın aynı anda idrar kesesi ve dış üretral sfinkter işlevi uyanık sıhhatli rats ve bir hastalık veya yaralanma indüksiyon sonra takip olduğunu. Ayrıca, sonraki alt Üriner Sistem izleme sırasında değerlendirme hastalık/yaralanma ve tedavi etkinliği izlemek için gerçekleştirilebilir.

Giriş

İdrar Muhafazası ve işlev ve fonksiyon bozukluğu geçersiz kılma çözümlemek için en çalışmaları kemirgen modeller kullandık. Refleksleri sıralı aktivasyonu ile micturition elde edilir. Bu refleksleri koordinasyonu verimli geçersiz kılma¹için esastır. Cystometric kayıt teknikleri onun sinirsel kontrol¹altında mesane fonksiyon analiz etmek için değerli araçlar sağlar.

Çoğu geleneksel cystometries Sıçanlarda anestezi, esas olarak üretan², tek, son analizde olarak yapılır ve idrar kesesi sadece odaklanmak. Nörojenik Alt Üriner Sistem disfonksiyon (NLUTD) gibi bazı patolojiler, idrar kesesi, hem de dış üretral sfinkter mesane çıkışı ise işlevsiz^3,4. Eğer sadece bir tek cystometric ölçüm mesane muayene NLUTD takip, zor yapar. İnsanlar için karşılaştırılabilir güvenilir sonuçlar elde etmek için doğru bir şekilde idrar kesesi ve dış üretral sfinkter işlevi ve onun etkileşimleri²ölçmek için önemlidir. Ayrıca, anestezi mesane fonksiyon^2,5,6değiştirmek büyük olasılıkla olduğundan işlev de uyanık, fareler çözümlemesi çok önemlidir. İyi bir cystometric uyanık hayvanlarda kayıt mesane fonksiyon ve arıza⁷tanımlaması temelidir.

Küçük hayvan Sistometri istasyonu (örneğin, Catamount Sistometri istasyonu (CCS)) kullanılan küçük uyanık hayvanlar⁸' cystometric çözümlemesi yapma bir birimdir. Kalıcı mesane kateter ve implante dış üretral sfinkter elektrotlar aracılığıyla, tekrarlayan ölçümler bir uzun zaman dönemleri²üzerinde gerçekleştirilebilir. Böylece, CCS için değerli bir araç sağlar Nörojenik sigara ve NLUTD değerlendirme kemirgen modelinde, pathomechanisms kısa veya orta vadeli takip sırasında değiştirebilirsiniz. Ayrıca, bu yöntem uyanık Sıçanlarda mesane ölçümleri yapmak için bir restrainer kullanarak bir yapay doku azaltılmış cystometric analiz içerir.

Bu yazıda, biz kalıcı olarak mesane kateter ve dış üretral sfinkter elektrotlar, uyanık Sıçanlarda cystometric ölçümleri ile birlikte implant cerrahi yaklaşım tarif.

Protokol

Burada açıklanan tüm yordamları hayvan araştırma için Avusturya Devlet Etik Komitesi tarafından kabul edildi (Bundesministerium für Wissenschaft, Forschung und Wirtschaft, WF / V /3b) ve laboratuvar değerlendirme Derneği ile uyumlu olduğunu Hayvan bakım kuralları hayvan kullanmak için. Bu yaklaşım için kullanılan sıçan kadın, 12 haftalık Lewis fareler vardı. Steril aletlerin protokol boyunca kullanın.

1. malzeme hazırlama

1. Kateter imalatı
   1. Kateter (polietilen boru PE-50) hayvan boyutuna sığacak şekilde uygun uzunluğu (20-25 cm) kesti.
      Not: tünel ve kolay kullanım için bazı ekstra uzunluğu bırak.
   2. Bir ucu yuvarlak bahşiş almak için bir çakmak ile flare. Son uygun açılış ve kateterin künt bitişi için kontrol edin.
   3. Sadece alevlendi sonuna altında yatıyor kadar 2 mm uzun silikon tüp kateter koyun.
2. Elektrotlar imalatı
   1. 20-25 cm (hayvan boyutuna bağlı olarak uygun uzunluk) politetrafloroetilen kaplı çelik tel hazırlayın.
   2. Gümüş tel uzunluğu 2 cm hazırlamak ve sonuna kadar küçük bir döngü kalır büküm. Teflon yalıtım bir ucunda 2 mm kapalı şerit. Soyulmuş çelik tel biten bükülmüş gümüş tel lehim.
   3. Geleneksel oje kaplama bölgede geçerlidir. 4-mm uzun polietilen boru kaplamalı bölgede hazırlamak ve sıkıştırma forseps ısı uygulayarak sonunda mühür.

2. hayvan hazırlık

1. Anestezi
   1. Anestezi için genel bir kurum tarafından onaylı bir uygun anestezi kokteyl kullanın.
   2. Medetomidine (0.15 mg/kg), midazolam (0,08 mg/kg) ve fentanil (0.01 mg/kg) anestezi kokteyl hazırlamak ve İntramüsküler 1 mL şırınga tarafından 27 Gauge iğne ile enjekte.
2. Cerrahi hazırlık
   1. Karın genital bölge ve scapulae düzeyde sirt bölgesi de dahil olmak üzere elektrik bir ustura ile tıraş.
   2. Karın dezenfekte ve bölgeleri % 70 etanol ilk ve o zaman 3 alternatif scrubs povidone-iyot solüsyonu ile boyun.

3. mesane kateter implantasyon

1. Üçüncü ve dördüncü emzik (yaklaşık 2-2.5 cm uzunluğunda) düzeyde düşük orta hat laparatomi cilt ve karın kas için Cerrahi makas için neşterden kullanarak gerçekleştirin.
2. Mesane karın duvarı Kraniyo-Kaudal yönde rehberlik ederek ortaya çıkarmak ve yeniden konumlandırma önlemek için mesane arkasında bir forseps arkasına yerleştirerek bu pozisyonda düzeltebilirim.
3. 6-0 absorbe olmayan monofilament dikiş bir konik uçlu iğneyle kullanarak mesane dome çevresinde çanta-dize dikiş yerleştirin.
4. Mesane kubbe çanta-dizge, bistüri ucu veya 18 G iğne, mesane sondası eklemek içinde deşmek (bkz. iletişim kuralı adım 1).
5. Steril fizyolojik % 0,9 Sodyum Klorür çözüm ile doldurulmuş kateter takın ve kateterin alevlendi açılış sadece mesane kubbe altında konumlandırılmış kadar mesane kateter dikkatli bir şekilde geri çek.
6. Çanta-dize dikiş kateter çevresinde güvenli ve stop-dikiş kateter vücut daha fazla fiksasyon için etrafında olun.
7. Sızıntı mesane kubbe ile yavaş yavaş kateter ile mesane steril fizyolojik % 0,9 Sodyum Klorür çözüm ile doldurarak olup olmadığını denetleyin.

4. üretral sfinkter elektrot implantasyon

1. Üç elektrotlar implantasyon için hazırlamak (bkz. iletişim kuralı adım 1).
2. Bir elektrot daha fazla gelecek null elektrot tanımlanması için renkli kalıcı keçeli kalem ile işaretleyin. Elektrotlar % 70 etanol ile dezenfekte.
   Not: Kateterler ısı ve kimyasal sterilizasyon işlemleri için uygun değildir. Bunun yerine soğuk sterilize elektrotlar 24 h için.
3. Belgili tanımlık karın kesme kasık kemiğine kadar Cerrahi makas tarafından genişletmek ama kasık symphysis kesmeyin.
4. Üretra tanımlamak ve künt bir cep üretra her iki tarafta iyi forseps kullanarak oluşturmak, ancak damarları veya sinir travması.
5. Bu pencere içinde üretra yakınında uygun yağ torbalar tanımlayın.
6. Uygun yağ kese için çift taraflı elektrotlar 6-0 absorbe olmayan monofilament dikiş kullanarak düzeltebilirsiniz.
   Not: Elektrotlar son konumunu üretra orta bölge ikili olmalıdır.
7. 6-0 absorbe olmayan monofilament dikiş ile birlikte iki elektrot bağla.
8. Dikiş işaretli boş elektrot karın duvarı kas üretra bir mesafede. Tek dikiş ile birlikte tüm üç elektrot bağla.

5. tünel

1. Tünel için scapulae arasında bir küçük cilt kesi yapmak.
2. Elektrot tel boyun için tünel ve doğru yerleşim için son bir kontrol yapın ve tünel sonra elektrotlar konumunu doğrulayın.
3. Tünel mesane kateter scapulae seviyesine - mesane mesane büküm önlemek için kateter tünel oluşturma sırasında dikkat. Bu amaçla, kateter sadece mesane büküm önlemek için mesane kubbe girmeden önce tutun.
4. Karın kasları sürekli ya da dikiş 4-0 polyfilament absorbe dikiş ile yakın. Cilt kesi tarafından kesintiye uğramış yatak dikiş kapatın.
5. Elektrot tel ve kateter maksimal şişkinlik var tam uzunlukta için hayvan germek.
6. Kateter ve elektrot telleri battı içinde dikiş omuz kas sabitleyin.
7. 4-0 sütür ile tek bir dikiş tarafından cilt kapatın.

6. emniyet kemeri montaj

1. Hayvan başının üzerine emniyet kemeri çekerek bir koşum takımı belgili tanımlık hayvan için uygun ve bir bitiş pozisyonu arasında iki silikon şeritler için ön ayakları çekin. Dağıtımcı ile ameliyat öncesi hayvan ağırlıkça koşum boyutunu denetleyin.
2. Elektrot tel boyutunu için bir matkap tarafından mesane kateter koşum takımı ve elektrotlar ısmarlama delikten merkez deliği için tünel.
3. Koşum silikon şeritler çekerek ayarlayın. Çok gevşek olmadığından koşum ayarlamak ama fare hareket yeteneğini korumak için biraz boşluk kalır emin olun.
4. Bir kablo kayışı silikon şeritler düzeltmek için kullanın.
5. 23-G tıpa bağlanmak ve koşum takımı için nihayet düzeltebilirim mesane kateter uzunluğu koşum yukarıda 3 cm kesim.

7. elektrot bağlayıcı imalatı

1. Üç küçük ısı küçültme tüpler (null elektrot için farklı bir renk) hazırlayın. İki daha fazla ısı küçültme tüplerde uygun bir daha büyük boyut hazırlayın.
2. Elektrot tel sonra çok gevşek veya çok kısa olmadan kadın fişini takacağım edebilmek için en uygun bir uzunlukta uzunluğunu kısaltmak. Üç kablo (yaklaşık 2 mm) Teflon yalıtım şerit ve bir dizeye çelik tel büküm.
3. Büyük ısı küçültme tüpler üzerinde tüm teller yer, tüm üç kablo için tek tek küçük tüpler ve renkli tüp null elektrot için kullanın.
4. Erkek 3-bağlantı-fiş elektrotlar lehim. Ortada boş elektrot yerleştirin ve lehimli üç küçük bireysel tüpler yukarıdaki alanı Daralt.
5. Bireysel tüp sonlar sonundaki büyük tüp ve son büyük tüp ilk erkek fiş sınıra küçültmek.
6. Erkek fiş koşum takımı ve saptamak için daha fazla güvenlik için bant parçası ile sabit kadın konektörüne bağlayın.

8. ameliyat sonrası bakım

1. Cerrahi alanlarda temiz ve dezenfekte povidone-iyot ile.
2. Bir Isıtma yastığı kadar uyanık hayvan getirin ve su değişimi, sırasında ve ameliyat sonrası üzerinde yerel hayvan bakımı yönergeleri dayalı için % 0,9 Sodyum Klorür çözüm vermek.
3. Analjezikler yönetmek (Meloksikam 1 mg/kg) ve antibiyotik (sulfadoxinum 200 mg, trimethoprimum 40 mg, 15 mg/kg) kombine enjeksiyon çözüm olarak subkutan. Günde iki kez, analjezikler (sabah ve akşam) ver ve bir kez günlük antibiyotik, sonraki beş gündür.
4. Antibiyotik, aynı doz haftada iki ya da üç enjeksiyonları, Bütün takip sürecinde devam.
5. Günlük koşum uygun provası için kontrol ve özellikle boyun bölgesinin bir cerrahi alan kontrol edin. Silikon şeritler dikkatle çekerek çok sıkı alırsa koşum ayarlayın.
6. Haftada bir kez bir abluka önlemek için kateter düzenli olarak yıkayın.

9. Cystometric ölçüm için hazırlık

1. İlk cystometric ölçümleri altı ameliyat sonrası gün sonra gerçekleştirin.
   Not: Önceki ölçümleri analjezik ilaç ve/veya ürotelyal tahriş nedeniyle kateter implantasyon tarafından etkilenebilir.
2. Açma/kapama, bilgisayar ve EMG amplifikatör açın.
3. Enjektör pompa oda sıcaklığında ısındı % 0,9 Sodyum Klorür ile doldurun. Üç yönlü konektörler bir birbiri ardına pompa başlayarak azalan bir şekilde açın ve tüpler floş.
   Not: kabarcıklar cystometric ölçümleri değiştirecek gibi dikkatle kalan hava kabarcıkları için kontrol edin.

10. Kalibrasyon

1. Program uroflowmeter yazılım başlatın ve Kalibrasyon için gidin.
2. Pompa ve hayvan için üç yollu Bağlayıcısı'nı kapatın.
3. Bağlı Manometre Vana açın ve program sıfır tuşuna basın.
4. Basıncı 100 mmHg için Manometre, ayarlamak ve programda 100 mmHg düğmesine basın. Basın onaylamak kalibrasyon ayarı kaydetmek için. Pencereyi otomatik olarak kapanır.
5. Manometre Vana kapatın ve hayvan ölçüm için hazır olmak için pompa üç yönlü konektörler açın.

11. hayvan veritabanı (hayvan DB)

1. Hayvan kayıt için hayvan özlü bir kimliği verin
2. SCI, tedavi başlangıcı, tarihi kateter implantasyonu, deney grubu ve hayvanın Doğum tarihi gibi daha fazla veri girin.
3. Son olarak verileri günlüğe kaydetmek için "kaydı depolamak" tuşuna basın ve dosyaya kaydedin.

12. ölçüm ayarlarını kayıt önce

1. Yazılım programını Başlat düğmesine basarak başlatın.
2. Hayvan seçin ve Dara ölçek ve sıfır basınç basın.
   Not: hiçbir kablo kaldı öyle ki, bu bir tel EMG kablonun çıkarılması için neden olabilir hayvan restrainer yerleştirerek süre dikkat.

13. hayvan hazırlık

1. Kateter fişini çıkarın ve EMG tak koşum bağlantısını kesin.
2. Fare restrainer koymak. Restrainer kapatıp koşum bir kelepçe ile kilitleyin.
3. Kateter ve EMG tak restrainer dışarı almak.
4. Restrainer catamount birimine yerleştirin. Kuyruk tüpten koymak ve tüp hareketleri önlemek için bant ile düzeltin.
5. Erkek EMG fiş kaydı kadın EMG konektörüne bağlayın.
6. Sıfır basınç bir kez daha basın ve kateter dolum/kayıt tüp bağlanın. Yazılım, basınç kontrol edin.
   Not: Basınç pozitif, 5-10 cm H₂O satır taban çizgisi, etrafında olmalıdır. Basınç negatifse, kateter kanül, sıfır basınç basın söküp sonra kateter takın.

14. kayıt

1. Kateter ve EMG kablo bağlantınız varsa, çalışma pompa ve kayıt tuşuna basın.
2. Doldurma hızı μL/dak deneysel ihtiyaçlarına adapte.
3. Zaman unutmayın kayıt başlar ve seyir defteri oda sıcaklığında.
4. Kayıt cystometric durdurmak için pompa pompa çalıştırmak basarak tarafından durdurmak ve bir kez daha kayıt tuşuna basın.
   Not: Pompa kapalı olacak ve yeşil ışık pompa kapalıdır.
5. Kateter kesin ve 23 G Tıpa tak sonda sonunda kapatmak için kullanın. EMG kablosunu çıkarın.
6. Restrainer önü açık ve restrainer dışında fare Kılavuzu.
   Not: fare dikkatli bir şekilde ele ve herhangi bir kabloların kilitleme önlemek için teller izlemek.
7. Kateter geri koşum takın. EMG tak koşum için yeniden takın ve teyp fiş çevresinde bir parça koy.
   Not: hayvan patolojik bir alt üriner sistem durumu varsa, mesane sonunda el ile mesane overdistention önlemek için hızlı.
8. Hayvan ev onun kafes geri koy.
9. Programı tarafından çıkış tuşuna basarak kapatın.
10. Temiz restrainer ve kabı.
11. Üç yönlü konektörler pompa ve hayvan çıkışı kapatın.
12. Bilgisayar, EMG ünitesi ve açma/kapama düğmesi üzerinden sistemi kapatın.
    Not: Veri ayrı klasör "Günlüğe kaydedilen veri" ölçülen sıçan kimliği alt klasör dosyasıyla birlikte kaydedilir Tek kayıtları tek fare kimliği klasörlerde tarihe göre sıralanır.

Sonuçlar

Uyanık cystometric ölçümleri işlemi gösteren bir şematik Resim 1 ' de sunulmuştur ve mesane kateter implantasyon için iç anatomi Şekil 2' de gösterilmiştir. Ameliyat yaklaşık 2 h. ameliyat sonrası analjezi alır ve antibiyotikler, iletişim kuralında, açıklandığı gibi ağrı ve enfeksiyonlar ameliyattan sonra beş gün içinde kapak. Hiç acı belirtisi yok bundan sonra fark edildi. Karın, karın dikiş ve ...

Tartışmalar

Bu iletişim kuralı bir kalıcı kateter ve üretral sfinkter elektrotlar implantasyon ve tekniği uyanık, hafifçe ölçülü sıçan idrar kesesi her iki eşzamanlı analizi de dahil olmak üzere kayıt cystometric cerrahi işlem açıklanır ve Dış üretral sfinkter.

Ameliyat sırasında kritik adım kaçağı ve geniş manipülasyon kaçınarak mesane kateter dikkatli implantasyonu vardır. Ayrıca, hassas implantasyon üretral dış sfinkter ikili elektrot dış üretral sfinkter bir ...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Polyethylene tubing PE 50	Becton Dickinson	427411	Catheter
Prolene 6-0 (BV-1, 9.3 mm, 3/8c)	Ethicon	EH7403H	Suture
Teflon coated steel wire	Cooner wire	AS631	Electrode material
Silver wire 0.250 mm	World Precision Instruments	AGW1030	Electrode material
Rotilabo - PVC tube	Carl Roth	97241	Harness
Vicryl rapide 4-0 (P-3, 13 mm, 3/8c)	Ethicon	V4940H	Suture
Quick Connect Single Harness	SAI Infusion Technologies	QCH-23CW	Harness
Shrinking tubes	ChiliTec	17894	Electrode soldering
Soldering wire Pb60 Sn40	Stannol	LD0029	Electrode soldering
Fluxing agent 157	Castolin Eutectin	157 0150	Electrode soldering
Conn Unshrouded Header HDR 3 POS, 2.54mm Solder ST Thru-Hole Box	Preci-dip	801-87-050-10-001101	Electrode soldering
Conn Socket Strip SKT 50 POS 2.54mm, Solder ST Thru-Hole Box	Preci-dip	890-18-003-10-001101	Electrode soldering
Rat Cystometry Package (contains pump, scale, pressure transducer, hardware for cystometric analysis)	Catamount Research and Development Inc.	CAT-CYT-R
Differential amplifier with active headstage	AD instruments	DP-311	EMG amplifier
Restrainer Medium size for rats 200-300 g	emka Technologies	HLD-RM
Uro Dyn Software	Zürich of University		MTA-based
Female rats (Strain Lewis) 12 weeks of age	Charles River, Sulzfeld, Germany		animals