تحليل AtHIRD11 اضطرابات جوهرية وملزمة تجاه أيونات المعادن بالتفريد جل الشعرية وتقارب التفريد الشعرية

Summary

يجمع هذا البروتوكول توصيف عينة البروتين بالتفريد جل الشعرية وغربلة سريعة-ملزم يغاندس مشحونة بالتفريد الشعرية تقارب. من المستحسن للبروتينات مع بنية مرنة، مثل البروتينات اضطرابه جوهريا، لتحديد أي اختلافات في ربط كونفورميرس مختلفة.

Abstract

النباتات التي تعتمد بشدة على بيئتهم. من أجل التكيف مع التغيرات المجهدة (مثلاً، والجفاف والملوحة العالية)، تتطور النباتات العليا وفئات من البروتينات اضطرابه جوهريا (المشردون داخليا) للحد من التوتر التأكسدي وناضح. هذه المقالة يستخدم مزيجاً من جل الشعرية التفريد (فريق الخبراء الاستشاري) والتنقل shift تقارب التفريد (ACE) لوصف سلوك ملزمة كونفورميرس مختلفة من AtHIRD11 المشردين داخليا من نبات التمويل. يستخدم فريق الخبراء الاستشاري لتأكيد نقاء AtHIRD11 واستبعاد الأجزاء والتعديلات بوسترانسلاشونال، وغيرها من الشوائب كأسباب لأنماط معقدة الذروة. في هذا الجزء من التجربة، مفصولة هلام لزج داخل شعري واسطة كتلها مختلفة المكونات العينة مختلفة والكشف مع جهاز كشف صفيف صمام ثنائي. بعد ذلك، يجري التحقيق في سلوك ملزمة العينة نحو الأيونات المعدنية المختلفة بايس. في هذه الحالة، يجند يضاف إلى الحل المخزن المؤقت ويتم قياس التحول في وقت الترحيل من أجل تحديد ما إذا كان حدث ربط حدث أم لا. واحدة من مزايا استخدام المزيج من فريق الخبراء الاستشاري وايس لتحديد سلوك ملزمة المشردين داخليا هو إمكانية أتمتة التفريد جل والمقايسة ملزمة. وعلاوة على ذلك، فريق الخبراء الاستشاري ويبين حد أدنى للكشف من التفريد جل الكلاسيكية وايس قادرة على أن تحدد بطريقة ملزمة يجند بطريقة سريعة. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أيضا تطبيق ACE للأنواع الأخرى مشحونة من الأيونات المعدنية. بيد أن استخدام هذا الأسلوب لربط التجارب هو محدودة في قدرتها على تحديد عدد المواقع الملزمة. ومع ذلك، يمكن تكييفها مع المزيج من فريق الخبراء الاستشاري وايس لوصف سلوك ملزمة لأي عينة البروتين نحو يغاندس اتهم العديد.

Introduction

النباتات أكثر اعتماداً على بيئتها من العديد من أشكال الحياة الأخرى. إذ لا يمكن نقل النباتات إلى أماكن أخرى، لديهم للتكيف مع التغيرات في البيئة المحيطة بهم (مثلاً، الجفاف، البرد وارتفاع تركيزات الملح). ونتيجة لذلك، وضعت النباتات العليا البروتينات الإجهاد المتخصصة مثل ديهيدرينس، التي تفي بالمهام المتعددة للحد من التوتر الخلية تتصل بالملوحة العالية. هذه البروتينات ربط الماء والايونات داخل الخلايا، والحد من الأكسدة بربط Cu^{2 +}-الأيونات، والتفاعل مع فوسفوليبيدات، فضلا عن سيتوسكيليتونس. وعلاوة على ذلك، ربط Zn^{2 +}-الأيونات تسمح هذه البروتينات بمثابة عوامل النسخ. القدرة على ربط Ca^{2 +}-الأيونات بعد الفسفرة كما تم الإبلاغ عن¹.

سلوك متعدد الوظائف لهذه البروتينات يرتبط بعدم وجود مخلفات الأحماض الأمينية مسعور. وبالتالي فإنها تفتقر إلى أي التفاعلات مسعور داخل سلسلة الببتيد وبنية مقيدة أيضا. ومع ذلك، نظراً لأن هذه البروتينات تفتقر إلى هيكل تقييدية، التي يشغلونها كونفورميرس مختلفة تحت نفس الظروف. ولذلك، يمكن وصف أفضل كفرقة هياكل بدلاً من تكيف واحد. تعرف البروتينات بهذه الخصائص كما جوهريا اضطرابه البروتينات (داخليا) ومفهوم مستخدمة على نطاق واسع للبروتينات الإجهاد والحديث المتبادل بين مسارات مختلفة في الخلايا حقيقية النواة².

واحد من هذه الأشخاص المشردين داخليا المتصلة بالإجهاد هو AtHIRD11. أنها واحدة من التمويل نباتشديدة الجفاف-أعرب معظم النازحين. ومن ثم، كونفورميرس مختلفة يمكن أن تكون مفصولة دائرة نصف قطرها فعالة لشحن نسبة، والتفريد الشعرية (CE) وقد استخدمت لإجراء مزيد من التحقيقات. آيس التجارب السابقة أثبتت التفاعلات بين AtHIRD11 وأيونات المعادن الانتقالية مثل Cu^{2 +}Zn^{2 +}-، Co^{2 +}وني^{2 +}-الأيونات. ويمكن الاطلاع على النتائج المفصلة في هارا et al. ³ وناخبار et al. ⁴.

تستند الطريقة آيس التي سيتم استخدامها هنا لدينا الأعمال المنشورة في وقت سابق⁶. ومع ذلك، إضافة اسيتانيليد علامة EOF إلى عينة البروتين ليست مناسبة. AtHIRD11 يعرض أنماط ذروة واسعة، وإضافة علامة EOF إلى العينة أن تخفي قمم اثنين. ولذلك، يتم استخدام العلامة في تشغيل منفصلة. قبل النظر في سلوك ملزمة، من المؤكد أن قمم عثر عليها خلال التجارب السابقة من كونفورميرس مختلفة. وهكذا، يستخدم فريق الخبراء الاستشاري للتمييز بين كونفورميرس البروتين، تعديل بوستترانسلاشونال البروتين والشوائب، مثل أجزاء من AtHIRD11، بكتلها مختلفة. وفي وقت لاحق، التحقيق في العينة AtHIRD11 يتسم سلوك ربط نحو مختلف الأيونات المعدنية المختلفة.

والغرض من هذه المقالة وصف إعداد تجريبية للتمييز بين المشردين داخليا والمكونات الأخرى من عينة من أجل تقييم الاختلافات في سلوك ملزمة كونفورميرس مختلفة.

Protocol

1-إعداد الصكوك التفريد الشعرية

1. إعداد الشعيرات الدموية
   1. استخدام قطع زجاج لقطع والسليكا تنصهر عارية الشعرية مع طلاء خارجي بوليميد وقطر داخلي ل 50 ميكرون إلى 33 سم (لتجربة فريق الخبراء الاستشاري) و 30 سم (للتجربة ACE) طويلة الشعيرات الدموية. إجراء القطع على طبق من زجاج.
      ملاحظة: وضعت 2 الأجهزة التجريبية المختلفة للصكوك المختلفة 2. بغية استخدامها في صكوك أخرى، قد نقل طريقة الصحيحة التي يتعين القيام بها وطول شعري إلى تعديل للطول المسموح به من الصك.
   2. استخدم قلم للاحتفال في منتصف نافذة الكشف واسعة 1 سم على مسافة من 24.5 سم من طرف واحد شعري لتجربة فريق الخبراء الاستشاري وفي 21.5 سم من نهاية واحد من الشعرية للتجربة آيس (الطول الفعال).
   3. إزالة الطلاء الخارجي بوليميد من الشعيرات الدموية بحرق مع موقد اللحام، 0.5 سم قبل وبعد العلامة. وبالمثل، استخدم في موقد اللحام لإزالة 1 سم للطلاء على كلا طرفي من الشعيرات الدموية.
      ملاحظة: طول الفعال قد تختلف بشكل طفيف حيث أنها تعتمد على الصك التفريد الشعرية المستخدمة.
   4. تنظيف نهايات الشعيرات الدموية ونوافذ الكشف مع الإيثانول وأنسجة لينة.
      ملاحظة: الشعيرات الدموية غير المصقول أقل مرونة ومن المرجح أن كسر.
2. تثبيت الشعيرات الدموية
   1. تثبيت شعري في نظام CE مع نافذة الكشف عن قرب بالمأخذ.
      ملاحظة: مختلف نماذج صك CE قد نظم عقد مختلفة الشعيرات الدموية. أرجع إلى الدليل للأداة المستخدمة للتعليمات الدقيقة.

2-إعداد الحلول

1. إعداد الحلول لتحليل فريق الخبراء الاستشاري
   1. إعداد أمينوميثاني تريس (هيدروكسيميثيل) (تريس)-الحزب الديمقراطي الصربي المخزن المؤقت (mM/1% 100 w/v) في درجة الحموضة 8.0.
      1. استخدام قناع التنفس وكشك لوزن 1.00 g من دوديسيل كبريتات الصوديوم (الحزب الديمقراطي الصربي) في كوب 100 مل.
      2. إضافة ز 1.21 من تريس في الكأس 100 مل وحل استخدام 50 مل مياه وبار إثارة مغناطيسية على محرض مغناطيسية.
      3. وضع قطب درجة حموضة في الحل وضبط درجة الحموضة إلى 8.0 استخدام 1.0 M HCl.
      4. تعبئة الحل إلى قارورة حجمية 100 مل وإضافة المياه يصل إلى العلامة. اهتز برفق لتجنب أي تشكيل الرغوة.
   2. إعداد الحل هيدروكسيد الصوديوم 0.1 M.
      1. وزن ز 4.0 من هيدروكسيد الصوديوم في قارورة حجمية 100 مل. ملء ما يصل إلى العلامة مع المياه لجعل مخزون 1 م.
      2. استخدام ماصة لمبة 10 مل لنقل 10 مل هذا الحل إلى قارورة حجمية 100 مل آخر وملء ما يصل إلى العلامة مع المياه..
   3. تعد حل HCl 0.1 متر.
      1. وضع 10 مل من 10 M HCl إلى قارورة حجمية 100 مل استخدام ماصة حجمية من 10 مل وملء ما يصل إلى العلامة مع المياه. كرر هذه الخطوة للحصول على HCl 0.1 متر.
   4. إعداد الحل عينة.
      1. وزن 0.5 ملغ البروتين في أنبوب 1 مل. إضافة 0.5 مل من المخزن المؤقت جل تريس-الحزب الديمقراطي الصربي من الخطوة 2.1.1 مع ميكروبيبيتي.
      2. حل البروتين التي تهز برفق لتجنب أي تشكيل الرغوة وتحلل البروتين.
         ملاحظة: استخدم ultrasonication إذا كان لا يمكن حله البروتين كما هو موضح؛ تجنب أي تدفئة للحل.
   5. تعبئة الحلول إلى قنينة.
      1. تصفية كل حل من خلال 0.22 ميكرومتر الفينيليدن الفلوريد (PVDF) التصفية باستخدام المحاقن كافية مباشرة إلى القنينة.
         ملاحظة: للحلول التي تحتوي على هلام، الضغط الخلفي يمكن أن تكون مرتفعة بسبب لها لزوجة عالية.
      2. إعداد قنينة 15 في المجموع وعلامة كل منها لتجنب أي ميكسوبس.
         1. ملء قنينات 3 مع صوديوم متاحة تجارياً دوديسيل كبريتات (SDS) جل المخزن مؤقت على درجة الحموضة 8.
            ملاحظة: استخدام المخزن المؤقت جل المخزونات المتوفرة تجارياً يوفر نتائج أكثر دقة.
         2. ملء قنينة 1 مع 0.1 M هيدروكسيد الصوديوم وقنينة 1 مع 0.1 M HCl للتنظيف.
         3. ملء قنينة 1 مع الحل عينة.
         4. تعبئة القنينات 5 مع المياه وقارورة 4 مع 0.1 مل مياه (غمس قارورة).
            ملاحظة: تستخدم القنينات غمس كقارورة النفايات أثناء التنظيف من الشعرية قبل كل تشغيل. هي انخفضت نهايات الشعيرات الدموية في الماء شطف أي مخلفات هلام.
2. إعداد الحلول لتحليل آيس
   1. إعداد حل هيدروكسيد الصوديوم 1 متر.
      1. وزن ز 4.0 من هيدروكسيد الصوديوم في قارورة حجمية 100 مل.
      2. ملء ما يصل إلى العلامة مع المياه لجعل مخزون 1 م.
   2. تحضير حمض اتهيلينديامينيتيتراسيتيك 0.1 M (يدتا) في محلول هيدروكسيد الصوديوم 0.1 M.
      1. نقل 10 مل من هيدروكسيد الصوديوم M 0.1 في قارورة حجمي 100 مل استخدام ماصة لمبة 10 مل. ملء ما يصل إلى العلامة مع المياه.
      2. وزن ز 2.42 يدتا على متن قارب وزنها وحل المجمع الصلبة في 100 مل من 0.1 M هيدروكسيد الصوديوم.
   3. إعداد الحل تريس المخزن المؤقت (30 مم).
      1. إضافة ز 3.63 من تريس، 200 مل من المياه، وبار ضجة في كوب 500 مل. ضع في الكأس على طبق من إثارة وتشغيله.
      2. وضع قطب مقياس الأس الهيدروجيني الكأس وضبط درجة الحموضة إلى 7.4 استخدام 0.1 M HCl.
      3. تعبئة الحل في دورق حجمي 1 لتر وتعبئة ما يصل إلى العلامة بالمياه.
         ملاحظة: هذا الإجراء قد تتكرر أو حاجة دورق حجمي أكبر منذ أكثر من 1 لتر هناك حاجة لتحليل كامل.
   4. إعداد تدفق اليكتروسموتيك اسيتانيليد (EOF)-حل علامة (60 ميكرومتر).
      1. إضافة 6 مغ من اسيتانيليد و 100 مل من تريس المخزن المؤقت قارورة حجمية 100 مل.
      2. دورق حجمي في حمام الموجات فوق الصوتية وتشغيله لمدة 30 دقيقة.
   5. إعداد الحل عينة (1 ملغ/مل).
      1. وضع أنبوب ميكروسينتريفوجي 0.5 مل على توازن دقة وإضافة 0.3 ملغ مسحوق AtHIRD11 المعصوفه في الأنبوب.
      2. استخدام ميكروبيبيتي لإضافة 0.3 مل من المخزن المؤقت تريس 30 مم (درجة الحموضة 7.4) في الأنبوب. هز الأنبوب بعناية لإذابة البروتين.
   6. إعداد الحلول يجند.
      1. إعداد الحل كاكل الأسهم₂ (5 مم).
         1. تأخذ قارب وزنها ووضعها على توازن التحليلي وتزن ملغ 36.76 كاكل₂* H₂o.
         2. ميكروبيبيتي، باستخدام مسح كاكل₂* ح₂س من وزنها قارب في قارورة حجمي 50 مل مع المخزن المؤقت تريس المجهز سابقا.
         3. ملء قارورة الحجمي مع المخزن المؤقت تريس ما يصل إلى العلامة.
      2. إعداد الحلول الأسهم المتبقية (5 مم).
         1. كرر الخطوة 2.2.6.1 المعادن الأخرى باستخدام أملاح بدلاً من كاكل₂* ح₂س [مجكل₂: 23.80 ملغ، BaCl₂: ملغ 26.02, ريال (لا₃)₂: 52.91 ملغ، الحركة₂: ملغ 31.46, سيكل₄: 52.91 ملغ، كوكل ₂* 2 ح₂o: 41.47 ملغ، كوكل₂* ح 2₂o: 42.62 ملغ، زنكل₂: مغ 3.41 ونيكل₂* o: 6 ح₂ملغ 59.43].
            ملاحظة: قد حل₂ زنكل بتركيز 0.5 مم. إذ لوحظ وجود تفاعلات قوية بين الأيونات والجدار الداخلي الشعرية، التركيز انخفض بمقدار 10⁴.
      3. إعداد الحل₂ كاكل 500 ميكرومتر.
         1. ملء 10 مل الحل الأسهم₂ كاكل ووضعها في قارورة حجمية 100 مل.
         2. ملء قارورة الحجمي مع عازلة تريس إلى العلامة واهتز قارورة.
      4. إعداد الحل₂ ميكرومتر 250 كاكل.
         1. ملء 5 مل الحل الأسهم₂ كاكل ووضعها في قارورة حجمية 100 مل.
         2. ملء قارورة الحجمي مع عازلة تريس إلى العلامة واهتز قارورة.
      5. كرر الخطوتين 2.2.6.3 و 2.2.6.4 للحلول الأسهم الأخرى.
   7. ملء الحلول في القنينات.
      ملاحظة: كل التشغيل المتكرر يحتاج إلى مجموعة من قنينات مدخل ومخرج. يقلل استخدام الحلول يجند الطازجة في مداخل ومخارج التحولات في وقت الترحيل بعد كل تشغيل.
      1. ملء الحل₂ ميكرومتر 250 كاكل في حقنه 10 مل.
      2. وضع مرشح PVDF ميكرومتر 0.22 المحاقن ودفع 2 مل الحل من خلال عامل التصفية باستخدام المحاقن لتجاهل هذا الحل الذي تم تصفيته.
      3. ملء قارورة 10 تصل إلى أقصى حجم مسموح به مع الحل₂ كاكل 250 ميكرون المتبقية من المحاقن. وضع علامة على كل ك 250 ميكرون كاكل ₂ حل مدخل قنينة.
      4. ملء قارورة 10 حتى تكون مملوءة نصف مع 250 ميكرون كاكل₂ الحل. وضع علامة على كل ك 250 ميكرون كاكل ₂ الحل مأخذ قنينة.
      5. كرر الخطوات 2.2.7.1-2.2.7.4 للحلول التي تحتوي على الملح المعدنية الأخرى.
      6. كرر الخطوات لكل زوج من قنينات مدخل ومخرج 30 ملم من تريس المخزن المؤقت (درجة الحموضة 7.4) الحل باستخدام بدلاً من ذلك.
         ملاحظة: يتم استخدام المخزن المؤقت الهيدروجيني 7.4 تريس 30 ملمول/لتر بين يمتد من أجل الحصول على بيانات الوقت الهجرة للبروتين في حالة عدم وجود أيونات المعادن. من الضروري من أجل إهمال التغييرات في EOF.
      7. كرر الخطوات المذكورة أعلاه لقنينة واحدة بدلاً من ذلك باستخدام اسيتانيليد علامة EOF (60 ميكرومتر) الحل. أيضا، كرر هذه الخطوات باستخدام الحل عينة (1 ملغ/مل) بدلاً من ذلك.

3-الفصل شعري جل الغرواني الكهربي

ملاحظة: إعداد الفصل وفقا للطريقة الموضحة في الأعمال السابقة التي ناخبار et al. ⁴.

1. إعداد التحليل
   1. شرط شعري
      1. تعيين الحرارة إلى 23 درجة مئوية.
      2. تدفق شعري لمدة 10 دقيقة في بار 2.5 مع 0.1 M هيدروكسيد الصوديوم.
      3. مسح شعري لمدة 5 دقائق في شريط 2.0 مع 0.1 M HCl.
      4. تدفق شعري لمدة 2 دقيقة في بار 2.0 مع المياه.
   2. ملء المخزن المؤقت جل مخزونات النشر الاستراتيجي
      1. ملء شعري لمدة 10 دقيقة في بار 2.0 مع المخزن المؤقت جل مخزونات النشر الاستراتيجي متاحة تجارياً في pH 8.0.
   3. تدفق شعري قبل تشغيل كل فصل
      1. مسح شعري لمدة 3 دقيقة في بار 4.0 مع 0.1 M هيدروكسيد الصوديوم.
      2. تدفق شعري لمدة 1 دقيقة في بار 4.0 مع 0.1 M HCl.
      3. تدفق شعري لمدة 1 دقيقة في بار 4.0 مع المياه.
      4. تدفق شعري لمدة 10 دقيقة في بار 4.0 مع المخزن المؤقت جل الحزب الديمقراطي الصربي.
2. تشغيل الفصل
   1. حقن الحل عينة لتجارب فريق الخبراء الاستشاري (الخطوة 2.1.4) هيدروديناميكالي عن طريق تطبيق 0.1 بار لمدة 4 دقائق في المدخل.
   2. تطبيق-16.5 كيلو فولت وضغط من شريط 2.0 في كلا طرفي شعري لمدة 25 دقيقة.

4-تقارب تحليل الغرواني الكهربي الشعرية

ملاحظة: إعداد الفصل وفقا للطريقة الموضحة في الأعمال السابقة التي ناخبار et al. ⁴ والحازمي et al. ⁵.

1. شرط شعري
   1. تعيين الحرارة إلى 23 درجة مئوية.
      ملاحظة: درجة حرارة يتم استخدامها وفقا للبروتوكولات المنشورة ويمكن تغييره إلى غيرها من درجات الحرارة^54،. ومع ذلك، التفاعلات تعتمد على درجة الحرارة وستتغير تبعاً لذلك.
   2. مسح شعري لمدة 40 دقيقة في بار 2.5 مع 0.1 M هيدروكسيد الصوديوم.
   3. تدفق شعري لمدة 10 دقيقة في شريط 1.0 مع المياه.
   4. تدفق شعري لمدة 30 دقيقة في شريط 1.0 مع عازلة تريس 30 مم (درجة الحموضة 7.4).
2. إعداد أساليب آيس
   1. إعداد الأسلوب للقياسات دون يغاندس.
      ملاحظة: اسيتانيليد لم يتم إضافة إلى الحل العينة، كما أنها تخفي 2 بروتين قمم.
      1. أشطف شعري لمدة 1 دقيقة في بار 2.5 مع حل يدتا 0.1 متر.
      2. أشطف شعري لمدة 1 دقيقة في بار 2.5 مع المياه.
      3. أشطف شعري لمدة دقيقة 1.5 2.5 بار مع عازلة تريس للموازنة.
      4. حقن الحل اسيتانيليد 6 s في شريط 0.05 وتغيير المدخل وقنينات منفذاً للقنينات المخزن المؤقت تريس.
      5. تطبيق شريط 0.05 ل 2.4 s من أجل دفع الحل اسيتانيليد من غيض الداخل المزيد الشعرية.
      6. تطبيق 10.0 كيلو فولت لمدة 6 دقائق والكشف عن ذروة اسيتانيليد في موجه 200 نانومتر.
      7. كرر الخطوات 4.2.1.1. -4.2.1.6. البروتين باستخدام عينة بدلاً من الحل اسيتانيليد والكشف عن جميع قمم البروتين.
   2. إعداد الأسلوب للقياسات مع يغاندس.
      1. أشطف شعري لمدة 1 دقيقة في بار 2.5 مع حل يدتا 0.1 متر.
      2. أشطف شعري لمدة 1 دقيقة في بار 2.5 مع المياه.
      3. أشطف شعري لمدة دقيقة 1.5 2.5 بار مع الحل يجند للموازنة.
      4. حقن الحل اسيتانيليد 6 s في شريط 0.05 وتغيير المدخل وقنينات منفذاً للقنينات العازلة التي تحتوي على [ليغند].
      5. تطبيق شريط 0.05 ل 2.4 s من أجل دفع الحل اسيتانيليد من غيض الداخل المزيد الشعرية.
      6. تطبيق 10.0 كيلو فولت لمدة 6 دقائق والكشف عن ذروة اسيتانيليد في موجه 200 نانومتر.
      7. كرر الخطوات 4.2.2.1-4.2.2.6 استخدام العينة البروتين بدلاً من الحل اسيتانيليد والكشف عن جميع قمم البروتين.
   3. بدلاً من ذلك كرر الخطوات 4.2.1 و 4.2.2 لحساب التغير في نسب حجم الشحنة لتفاعلات أيون البروتين-المعادن المختلفة (وصف إطار النتائج الممثل).
      1. تغيير الحل البروتين بعد كل ح 60 إلى واحد جديد.
         ملاحظة: عند هذه النقطة، التجربة يمكن أن يكون مؤقتاً. هذا الإجراء هو المتكررة على الأقل 10 x لكل تركيز من يغاندس نظراً لنمط الذروة يختلف قليلاً من التشغيل إلى التشغيل. إذا كان يتم استخدام الحل أطول من ح 60، تصبح الاختلافات كبيرة جداً.
   4. تشغيل الأساليب
      1. تشغيل الأسلوب الموصوفة في إطار خطوة 4-2-2، باستخدام حلول يجند الأرض القلوية (كاكل₂، مجكل₂، BaCl₂، وحلول₂ سركل).
      2. الاستمرار في استخدام الطريقة الموضحة أسفل الخطوة 4-2-2، استخدام الحركة₂وسيكل₄، كوكل₂، كوكل₂، زنكل₂، وحلول₂ نيكل بدلاً من الحلول يجند الأرض القلوية.
         ملاحظة: كلوريدات المعادن الانتقالية الأخيرة أظهرت تفاعل أقوى مع شعري ولا يمكن إزالتها تماما. هذه نتيجة التفاعلات في التحولات في وقت الترحيل من التشغيل إلى التشغيل. ونتيجة لذلك، أنهم للتحقيق بعد الأيونات المعدنية الأخرى.

النتائج

ويبين الشكل 1 اليكتروفيروجرام AtHIRD11 العينة التي تم الحصول عليها أثناء تجارب فريق الخبراء الاستشاري. زيادة حجم الببتيد من اليسار إلى اليمين. العدد الأقصى 4 كتلة أكبر، ويشير إلى البروتين سليمة. على قمم أصغر 2 و 3 تمثل الشوائب الأصغر حجماً (مثل، منتجات الت?...

Discussion

لجميع CE التجارب، إعداد الشعرية خطوة حاسمة. أنها أنبوب زجاج يبلغ قطرها صغير، فإنه يمكن بسهولة كسر في المواقع حيث يتم إزالة الطلاء عند فإنه يتم معالجة. وينبغي أن يتم التثبيت شعري في الصك بعناية فائقة.

الخطوات الأساسية المتضمنة في استخدام أسلوب آيس أساسا تتعلق بالإعداد التجري?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
AtHIRD11 sample	Shizuoka University (Group Prof. M. Hara)	-	Dehydrin Protein from Arabidopsis thaliana expressed in Escherichia coli
Barefused silica capillary	Polymicro Technologies (Phoenix, USA)	106815-0017	TSP050375, 50 μm inner diameter, 363 μm outer diameter, polyimide coating
Agilent 1600A	Agilent Technologies (Waldbronn, Germany)	comercially not available anymore	Capillary electrophoresis instrument; Agilent 7100 CE can be used instead
Agilent 7100 CE	Agilent Technologies (Waldbronn, Germany)	G7100A	Capillary electrophoresis instrument
Injekt 2 mL	B. Braun (Melsungen, Germany)	4606051V	Syringe for filtration
Rotilabo-syringe filters	Carl Roth GmbH + Co. KG (Karlsruhe, Germany)	KY62.1	PVDF membrane filter for solution filtration
Eppendorf Research plus 10 μL	Eppendorf (Wesseling-Berzdorf, Germany)	3121 000.023	Micro pipette for sample handling
Eppendorf Research plus 10 μL	Eppendorf (Wesseling-Berzdorf, Germany)	3121 000.120	Micro pipette for handling the ligand solutions
Bulb pipette 10 mL	Duran Group GmbH(Mainz, Germany)	24 338 08	Preparing theNaOH solution
Bulb pipette 25 mL	Duran Group GmbH(Mainz, Germany)	24 338 14	Preparing the ligand solution
Duran glas volumetric flask 25 mL	Duran Group GmbH(Mainz, Germany)	24 671 1457	Preparing the ligand stock solution
Duran glas volumetric flask 10 mL	Duran Group GmbH(Mainz, Germany)	24 671 1054	Preparing the ligand stock solution
Proteome Lab SDS MW Gel Buffer	Beckman Coulter (Brea, USA)	comercially not available anymore	Separation during capillary gel electrophoresis / Alternative SDS buffer: CE-SDS run buffer from Bio-Rad Laboratories (München, Germany) Catalog Number: 1485032
Acetanilide	Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany)	397229-5G	Electroosmotic flow marker
Manganese(II) chloride	Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany)	13217	Ligand
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)	Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany)	431788-100G	Rinsing ingredient
Bariumchloride	Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany)	202738-5G	Ligand
Sodium dodecyl sulfate	Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany)	71729-100G	Solublizing protein for capillary gel electrophoresis
Nickel(II) chloride hexahydrate	Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany)	654507-5G	Ligand
Selenium(IV) chloride	Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany)	323527-10G	Ligand
2-amino-2-hydroxy-methylpropane-1.3-diol (Tris)	Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany)	252859-100G	Buffer ingredient
Zinc(II) chloride	Merck Millipore ( Darmstadt, Germany)	1088160250	Ligand
Strontium nitrate	Merck Millipore ( Darmstadt, Germany)	1078720250	Ligand
Calcium chloride dihydrate	Merck Millipore ( Darmstadt, Germany)	1371015000	Ligand
37% hydrochloric acid	Merck Millipore ( Darmstadt, Germany)	1003171000	Adjusting pH
Copper(II) chloride dihydrate	Riedel-de Haën (Seelze, Germany)	31286	Ligand
Sonorex Longlife RK 1028 CH 45L	Allpax (Papenburg, Germany)	10000084;0	Ultrasonic bath
Agilent ChemStation Rev. 8.04.03-SP1	Agilent Technologies (Waldbronn, Germany)	G2070-91126	Software packages to operate the CE instruments, acquisite data and evaluate it