JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

تم إنشاء ناسور الشريان الأبهري عن طريق ثقب الشريان الأبهري تحت الكلى من خلال كلا الجدران في الوريد الأجوف السفلي، وأعقب ذلك خلق تضيق في تدفقه عن طريق الربط الجزئي للفينا كافا السفلي. يمكن استخدام هذا النموذج القابل للاستنساخ لدراسة تضيق الوريد المركزي.

Abstract

تضيق الوريد المركزي هو كيان مهم يساهم في فشل الناسور الشرياني الوريدي (AVF). تم تعديل نموذج Murine AVF لإنشاء ربط جزئي للفينا كافا السفلي (IVC) في تدفق الناسور، تقليد تضيق الوريد المركزي. وأدخلت الجوانب التقنية لهذا النموذج. يتعرض الشريان الأبهري وIVC، بعد شق في البطن. يتم تشريح الأبهر تحت الكلى وIVC للقط قريب ، ويتم الكشف عن الأبهر القاصي للثقب. يتم تشريح IVC في نقطة الوسط بين الوريد الكلوي الأيسر والانقسام الأبهري بعناية لوضع 8-0 خياطة تحت IVC. بعد لقط الشريان الأورطا وIVC، يتم إنشاء AVF عن طريق ثقب الشريان الأبهر تحت الكلى من خلال كلا الجدران في IVC مع إبرة 25 G، تليها ربط 22 G داخل الوريد (IV) القسطرة وIVC معا. ثم تتم إزالة القسطرة، مما يخلق تضيق وريدي قابل للاستنساخ دون انسداد. يتم فك الأبهر وIVC بعد التأكد من الانزم الأولي. هذا النموذج الجديد من تضيق الوريد المركزي من السهل القيام به، استنساخها، وسوف تسهل الدراسات على فشل AVF.

Introduction

الناسور الشرياني الوريدي (AVF) هو أكثر الحالات شيوعًا لغسيل الكلى، مع درجة فائقة من الثبات وانخفاض العدوى مقارنة بالنفاذات الأخرى مثل الطعوم أو القسطرة الوريدية المركزية. ومع ذلك, ما يصل إلى 60% من AVF تفشل في النضج1,2,3; وأفادت مراجعة منهجية حديثة أن معدلات اللياقة الأولية في سنة واحدة كانت فقط 60٪4. تضيق على طول تدفق وريدي يسبب في الغالب فشل النضج AVF5،6. هناك بعض المواقع المميزة المعرضة لتضيق الناسور القريب من الناسور: الجزء البديل جنبا إلى جنب لناسور الرأس الإشعاعي، ومنطقة قوس الرأس لناسور البرخيوسيفالي والوريد المركزي للناسور مع سابقا وضع القسطرة تحت الترقوة تحت الترقوة أو الوريد الوداجي الداخلي7،8.

غالباً ما يكون تضيق الوريد المركزي عديم الأعراض في المرضى الذين لا يعانون من AVF ، ولكن يمكن أن يسبب وذمة الأطراف ipsilateral عن طريق ارتفاع ضغط الدم الوريدي وكذلك فشل نضج الناسور عند تحديه من قبل تدفق الناسور9. الفيزيولوجيا المرضية لتضيق الوريد المركزي هو على الأرجح تتعلق بالالتهاب وتتالي التخثر المنشط بعد وضع الجهاز. وعلاوة على ذلك، فإن الحركة المستمرة لطرف القسطرة وكذلك زيادة التدفق من الناسور يمكن أن تغير إجهاد القص، مما يؤدي إلى ترسب الصفائح الدموية وسماكة الجدار الوريدي10. لفهم الآليات الأساسية الكامنة وراء فشل AVF الناجم عن تضيق الوريد المركزي، مطلوب نموذج حيواني يحاكي تضيق الوريد المركزي مع AVF.

لقد أنشأنا نموذج الناسور الأبهري المورين التي من السهل أن تؤدي وإتقان ويلخص المسار السريري للAVF الإنسان. 11 طبقنا مفاهيم وتقنية العديد من نماذج المورين التي أنشئت سابقا لإنشاء نموذج AVF murine رواية مع تضيق وريدي. نقدم نموذج ناسور الأورّافيال المورين مع تضيق IVC في ناسور التدفق إلى الخارج التي يمكن استخدامها لدراسة تضيق الوريد المركزي.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

وقد أجريت جميع التجارب بموافقة اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها في جامعة ييل.

1. التخدير والإجراءات السابقة للعمليات الجراحية

  1. تعقيم جميع الأدوات والمواد الجراحية عن طريق الأوتوكلاف. قم بتشغيل جهاز الدعم الحراري للتأكد من أنه دافئ (40-42 درجة مئوية).
  2. ضع فأرC57BL/6 البالغ من العمر 9-11 أسبوعًا في غرفة الحث الأكريليكية وقم بالتخدير مع الإسيوفروران المتبخر بنسبة 2.5% والأكسجين بـ 0.8 لتر/دقيقة. يستغرق الحث على التخدير حوالي 3 دقائق.
  3. إزالة الماوس من الغرفة. تأكيد مستوى عميق من التخدير عن طريق قرصة اصبع القدم، قرصة الأذن وقرصة الذيل. وضع الماوس في موقف supine على المنطقة الجراحية وتسليم 2.5٪ isoflurane باستخدام قناع السيليكون. توفير البوبرينورفين في 0.1 ملغ / كغ مسكن وتطبيق مرهم العيون على العينين.
  4. إزالة الفراء من الجانب البطني من الرقبة إلى أسفل البطن باستخدام نير، مزيل الشعر.
  5. تطهير وتطهير الموقع الجراحي باستخدام فرك خطوتين مع 10٪ البوفيدون اليود و 70٪ isopropanol. تطبيق الستائر الجراحية.

2- الإجراءات التنفيذية

  1. تعرض مواقع المشبك والثقب
    1. إعداد الأدوات المعقمة وارتداء قفازات معقمة للحفاظ على العقم طوال الجراحة.
    2. قم بعمل شق بطن يعمق الجلد مع مشرط من مستوى حافة الكبد السفلي إلى أعلى العانة مباشرةً. قطع من خلال العضلات مع مقص لفتح تجويف البطن.
    3. أدخل مسحبفي البطن واسحب الأمعاء إلى الجانب الأيمن. أبقها رطبة بتغليفها بالشاش المنقوع بالمالحة. إعادة تعادة المثانة والحويصلات المنوية (في الفئران الذكور) وسحبها إلى الجانب الكُد. تشريح mesentery بين المستقيم والرجعية مع حامل إبرة صغيرة للحصول على عرض كامل من الأبهر وIVC.
    4. تشريح الأبهر تحت الكلى وIVC في الكتلة من الأنسجة الرجعية المحيطة الجانبية والظهرية المحيطة مع حامل إبرة صغيرة لعبور المشبك معا.
    5. تشريح الأنسجة المحيطة لفضح موقع ثقب الأبهر في ما يقرب من ثلاثة أرباع المسافة من الوريد الكلوي الأيسر إلى الانقسام الأبهري.
  2. تشريح IVC
    1. تشريح بين IVC تحت الكلى والأبهر على الفور إلى الوريد الكلوي الأيسر. توسيع تشريح تشريح تشريح إلى منتصف الطريق بين الوريد الكلوي الأيسر والانقسام الأبهري، بحيث يمكن ملاحظة IVC تحت الكلى، سواء في المنبع أو المصب إلى تضيق، بعد الجراحة.
      ملاحظة: يجب إجراء تشريح حاد بين IVC والأبهر من القاصي على الفور إلى الوريد الكلوي الأيسر حيث النسيج الضام بين IVC والأبهر فضفاضة نسبيا.
    2. جعل نافذة لفصل IVC من الأبهر في هذا المستوى وتشريح IVC من الأنسجة المحيطة بها. وضع 8-0 خياطة خيوط أحادية البولي أميد أولا تحت IVC والأبهر (الشكل1A)،ثم وضع خياطة تحت IVC فقط (الشكل1B)عن طريق سحب نهاية خياطة من خلال النافذة.
      ملاحظة: بما أن IVC هش، فإن تشريح على طول السبتية الأبهرية مفيد لجعل نافذة لمنع IVC وكذلك IVC الصغيرة أو الفروع الأبهرية من التلف. في حالة حدوث نزيف، فمن المرجح أن يكون لا يمكن السيطرة عليه. إذا كان لدى IVC فروع جانبية متميزة، ضع 8-0 خياطة غير محتفى إلى الفروع.
  3. إنشاء AVF
    1. ثني إبرة 25 G إلى زاوية 45-60 درجة عند نقطة ~ 4 ملم من طرف الإبرة.
    2. المشبك الأبهر تحت الكلى وIVC عن طريق تطبيق مقطع الجراحة الدقيقة.
    3. تدوير الأبهر ميدياليا وcaudally عن طريق استيعاب النسيج الضام المحيطة الانقسام لفضح موقع ثقب من الأبهر امتدت قليلا إلى الجانب البطني.
    4. عقد الأبهر في وضع مناسب، ثقب من خلال الأبهر في IVC باستخدام إبرة 25 G أعدت (الشكل1C).
    5. حرر الأبهر وغطي موقع الثقب بالأنسجة المحيطة التي تسحب من الجانب الأيسر من الأبهر. إخراج الإبرة واضغط على موقع ثقب بلطف باستخدام مسحة القطن يميل لhemostasis.
  4. خلق تضيق IVC
    1. ضع طرف قسطرة 22 G IV (انظر جدولالمواد) على IVC طولياً. قم بضم القسطرة الرابعة وIVC مع 8-0 خياطة (الشكل1D)،ومن ثم إزالة القسطرة الرابعة.
    2. تأكيد الهيموستاسي الأولي (الشكل1E) ومن ثم فك المشبك الأبهر وIVC. تغطية موقع ثقب 1 دقيقة أكثر لضمان hemostasis.
      ملاحظة: لا المشبك لفترة طويلة جداً وذلك لتجنب تجلط الوريد الدولي البعيدة إلى تضيق.
    3. إعادة الأعضاء إلى مواقعها الأصلية وإغلاق البطن مع 6-0 الغرز.

3 - الإجراءات اللاحقة للعمليات الجراحية

  1. بعد إغلاق جرح البطن، توقف عن استنشاق الأيسوفلوران. وضع الماوس في قفص الفردية خالية من الفراش ووضع القفص على جهاز الدعم الحراري لمنع انخفاض حرارة الجسم.
    ملاحظة: يتم ملاحظة الماوس حتى تحقيق والحفاظ على recumbency صارمة. تطبيق الرعاية بعد العملية الجراحية بما في ذلك التسكين والعناية بالجروح وفقا لتوصيات IACUC المحلية. للتسكين نستخدم البوبرينورفين في 0.1 ملغ / كغ العضل كل 12 ساعة لمدة 48 ساعة بعد الإجراءات الجراحية وبعد ذلك حسب الحاجة.
  2. تأكيد AVF patency بعد الجراحة باستخدام دوبلر الموجات فوق الصوتية (انظر جدول المواد). بالإضافة إلى ذلك، قياس خصائص السفن والتدفق الأخرى حسب الاقتضاء.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

خضعت الفئران الذكور للعملية المذكورة أعلاه لإنشاء كل من AVF وتضيق IVC. خضعت فئران التحكم فقط لاستئصال البطن وتشريح الأنسجة المحيطة بـ IVC، على سبيل المثال، إجراء صوري، أو فقط إنشاء تضيق IVC دون إنشاء AVF في وقت واحد.

وقد لوحظ الانسداد الأوفي المو...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

وقد تم استخدام نموذج Murine AVF لدراسة الآليات الأساسية والأحداث الجزيئية المؤدية إلى النضج AVF13،14. في هذه الدراسة، قمنا بتعديل نموذج AVF murine أنشئت لإنشاء نموذج جديد الناسور الأبهري مورين مع تضيق IVC في المسالك تدفق الناسور. لدينا نموذج الربط يشبه العديد من نماذج ا?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

وقد دعم هذا العمل المعهد الوطني للصحة في الولايات المتحدة (NIH) منحة R01-HL128406; وزارة شؤون المحاربين القدماء في الولايات المتحدة الطب الحيوي مختبر البحث والتطوير برنامج الجدارة مراجعة جائزة I01-BX002336؛ وكذلك مع الموارد واستخدام المرافق في VA كونيتيكت نظام الرعاية الصحية، ويست هافن، CT.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
20-60 Mhz scan headVisualSonics Inc.RMV-704
8-0 Sterile Micro Suture, 6mm (140 µ), 3/8 Circle, TAP Point NeedleAROSutureT06A08N14-13polyamide monofilament sutures
Induction Chamber, 2 Liter
3.75"W x 9.00"D x 3.75"H		VetEquip941444
Isoflo, Isoflurane liquidZoetis26675-46-7
Mice, C57BL/6JThe Jackson Laboratory664
Pet Bed Microwave Heating PadSnuggle Safe6250
PrecisionGlide Needle 25GBD305122
Surflo I.V. Catheter 22GTerumoSR-OX2225CA0.85mm outer diameter
Vascular clampRoboz Surgical InstrumentRS-5424
Vevo770 High Resolution Imaging SystemVisualSonics Inc.770

References

  1. Dember, L. M., et al. Effect of clopidogrel on early failure of arteriovenous fistulas for hemodialysis: a randomized controlled trial. JAMA. 299 (18), 2164-2171 (2008).
  2. Dixon, B. S. Why don't fistulas mature? Kidney International. 70 (8), 1413-1422 (2006).
  3. Wilmink, T., Hollingworth, L., Powers, S., Allen, C., Dasgupta, I. Natural History of Common Autologous Arteriovenous Fistulae: Consequences for Planning of Dialysis. European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 51 (1), 134-140 (2016).
  4. Al-Jaishi, A. A., et al. Patency rates of the arteriovenous fistula for hemodialysis: a systematic review and meta-analysis. American Journal of Kidney Diseases. 63 (3), 464-478 (2014).
  5. Rocco, M. V., Bleyer, A. J., Burkart, J. M. Utilization of inpatient and outpatient resources for the management of hemodialysis access complications. American Journal of Kidney Diseases. 28 (2), 250-256 (1996).
  6. Roy-Chaudhury, P., Sukhatme, V. P., Cheung, A. K. Hemodialysis vascular access dysfunction: a cellular and molecular viewpoint. Journal of the American Society of Nephrology. 17 (4), 1112-1127 (2006).
  7. Quencer, K. B., Arici, M. Arteriovenous Fistulas and Their Characteristic Sites of Stenosis. AJR: American Journal of Roentgenology. 205 (4), 726-734 (2015).
  8. Kian, K., Asif, A. Cephalic arch stenosis. Semin Dial. 21 (1), 78-82 (2008).
  9. Agarwal, A. K. Central vein stenosis. American Journal of Kidney Diseases. 61 (6), 1001-1015 (2013).
  10. Glanz, S., et al. Axillary and subclavian vein stenosis: percutaneous angioplasty. Radiology. 168 (2), 371-373 (1988).
  11. Yamamoto, K., et al. The mouse aortocaval fistula recapitulates human arteriovenous fistula maturation. American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 305 (12), H1718-H1725 (2013).
  12. North American Symptomatic Carotid Endarterectomy Trial. Methods, patient characteristics, and progress. Stroke. 22 (6), 711-720 (1991).
  13. Kuwahara, G., et al. CD44 Promotes Inflammation and Extracellular Matrix Production During Arteriovenous Fistula Maturation. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (6), 1147-1156 (2017).
  14. Protack, C. D., et al. Eph-B4 regulates adaptive venous remodeling to improve arteriovenous fistula patency. Scientific Reports. 7 (1), 15386(2017).
  15. Payne, H., Brill, A. Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis. J Vis Exp. (130), (2017).
  16. Nam, D., et al. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 297 (4), H1535-H1543 (2009).
  17. Ene-Iordache, B., Remuzzi, A. Disturbed flow in radial-cephalic arteriovenous fistulae for haemodialysis: low and oscillating shear stress locates the sites of stenosis. Nephrology, Dialysis, Transplantation. 27 (1), 358-368 (2012).
  18. Yamamoto, K., et al. Disturbed shear stress reduces Klf2 expression in arterial-venous fistulae in vivo. Physiological reports. 3, (2015).
  19. Remuzzi, A., Ene-Iordache, B. Novel paradigms for dialysis vascular access: upstream hemodynamics and vascular remodeling in dialysis access stenosis. Clinical Journal of the American Society of Nephrology. 8 (12), 2186-2193 (2013).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

149

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved