유출 협착증을 가진 Aortocaval 누공을 사용하여 중앙 정맥 협착증의 뮤린 모형

요약

대반 카발 누공은 두 벽을 통해 뮤린 적외선 대인 대공을 열등한 정맥으로 뚫고 열등한 정맥 카바의 부분 결찰을 통해 유출에 협착증을 생성하여 만들어졌습니다. 이 재현 가능한 모델은 중앙 정맥 협착증을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

초록

중앙 정맥 협착은 동맥 누공 (AVF) 실패에 기여하는 중요한 실체입니다. 뮤린 AVF 모델은 중앙 정맥 협착을 모방, 누공의 유출에 열등한 정맥 카바 (IVC)의 부분 결찰을 만들기 위해 수정되었다. 이 모델의 기술적 측면이 소개됩니다. 대반과 IVC는 복부 절개 에 따라 노출됩니다. 적외선 대공 대공및 IVC는 근위 클램핑을 위해 해부되고, 원위 대위대음은 펑크에 노출됩니다. 왼쪽 신장 정맥과 대동맥 분기 사이의 중간점에 있는 IVC는 신중하게 해부되어 8-0을 배치합니다. IVC 아래에 있는 봉합사. 대나무와 IVC를 클램핑 한 후 AVF는 25G 바늘로 두 벽을 통해 적외선 대불을 IVC로 뚫고 22G 정맥 내 (IV) 카테터와 IVC를 함께 결찰하여 생성됩니다. 카테터를 제거하여 폐색없이 재현 가능한 정맥 협착을 만듭니다. 대류와 IVC는 1 차 적인 지혈을 확인한 후에 가두지 않습니다. 중앙 정맥 협착증의 이 새로운 모형은 능력을 발휘하기 쉽고, 재현가능하며, AVF 실패에 대한 연구를 용이하게 할 것입니다.

서문

동맥 누공 (AVF)은 혈액 투석에 대한 가장 일반적인 접근이며, 이식편이나 중앙 정맥 카테터와 같은 다른 접근에 비해 우수한 개통및 감소 된 감염과 함께. 그러나 AVF의 최대 60 %가1,^2,3을성숙시키지 못합니다. 최근 체계적인 검토에 따르면 1 년 의 1 차적인 가성비는 단지 60% 4. 정맥 유출을 따라 협착은 주로 AVF 성숙의 실패를 야기^5,6. 누공에 협착근 근위 경향이 특정 특성 위치가 있습니다 : 방사성 누공에 대한 병선 astomotic 스윙 세그먼트, brachiocephalic 누공에 대한 두개 아치 영역과 이전에 누공에 대한 중앙 정맥 입측 쇄신 또는 내부 경정맥 카테터^7,8.

중앙 정맥 협착증은 AVF가없는 환자에서 종종 자각 증상이 없지만 누공 흐름 9에 의해 도전 할 때 정맥 고혈압뿐만 아니라 누공 성숙의실패에 의한 심자 말단 부종을 일으킬 수 있습니다. 중앙 정맥 협착증의 병리생리학은 장치 배치 후에 염증 및 활성화 된 응고 캐스케이드와 가장 관련이 있습니다. 더욱이, 카테터 팁의 일정한 움직임뿐만 아니라 누공에서 증가된 흐름은 전단 응력의 변화시킬 수 있으며, 이로 인해 혈소판 증착 및 정맥벽이 두꺼워지게^{한다 10.} 중앙 정맥 협착증에 기인한 AVF 실패의 근본적인 기계장치를 이해하기 위하여는, AVF를 가진 중앙 정맥 협착증을 모방하는 동물 모형이 필요합니다.

우리는 인간 AVF의 임상 과정을 수행하고 마스터하고 다시 요약하기 쉬운 뮤린 대공관 누공 모델을 설립했습니다. ¹¹ 우리는 정맥 협착증을 가진 새로운 뮤린 AVF 모형을 만들기 위하여 몇몇 이전에 설치한 뮤린 모형의 개념 그리고 기술을 적용했습니다. 우리는 중앙 정맥 협착증의 연구에 사용될 수있는 유출 누공에 IVC 협착이있는 뮤린 대공 관 누공 모델을 소개합니다.

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프로토콜

모든 실험은 예일 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인으로 수행되었다.

1. 마취 및 수술 전 절차

1. 오토클레이브를 통해 모든 수술 기구와 재료를 살균하십시오. 열 지지 장치가 따뜻하다는 것을 확신하도록 켜십시오 (40-42 °C).
2. 9-11주 된 C57BL/6 마우스를 아크릴 유도 챔버에 넣고 기화된 2.5% 이소플루란과 0.8 L/min 산소로 마취시다. 마취 유도는 약 3 분 이 걸립니다.
3. 챔버에서 마우스를 제거합니다. 발가락 핀치, 귀 핀치 및 꼬리 핀치로 마취의 깊은 면을 확인하십시오. 수술 부위에 마우스를 놓고 실리콘 마스크를 사용하여 2.5 % 이소플루란을 전달하십시오. 0.1 mg/kg의 진통에서 부프레노르핀을 제공하고 눈에 안과 연고를 바르소하십시오.
4. 목의 복부 쪽에서 털 제거제 인 Nair를 사용하여 하복부까지 털을 제거하십시오.
5. 10 % 포비도 요오드 및 70 % 이소 프로판올이있는 2 단계 스크럽을 사용하여 수술 부위를 정화하고 소독하십시오. 외과 용 드레이프를 바하십시오.

2. 수술 절차

1. 클램프 및 펑크 부위 노출
   1. 멸균 기구를 준비하고 수술 내내 멸균을 유지하기 위해 멸균 장갑을 착용하십시오.
   2. 피부 깊은 중간선 복부 절개를 하부 간 가장자리의 수준에서 치골 바로 위에 메스로 만듭니다. 복강을 열기 위해 가위로 근육을 잘라냅니다.
   3. 복부에 리트랙터를 삽입하고 오른쪽으로 창자를 당깁니다. 식염수에 흠뻑 젖은 거즈를 감싸서 촉촉하게 유지하세요. 방광과 정액 소포 (수컷 마우스에서)를 retreive하고 꼬리 쪽으로 당깁니다. 대동맥과 IVC의 전체 보기를 얻기 위해 마이크로 바늘 홀더로 직장과 retroperitoneum 사이의 장간관을 해부하십시오.
   4. 마이크로 니들 홀더를 사용하여 후복막 조직을 둘러싼 측면 및 등지에서 적외선 대단과 IVC en bloc을 해부하여 함께 클램프합니다.
   5. 주변 조직을 해부하여 왼쪽 신장 정맥에서 대동맥 분기까지의 거리의 약 3 분의 3에 대동맥 천자 부위를 노출시다.
2. IVC 해부
   1. 적외선 신장 IVC와 대치 사이의 해부는 즉시 왼쪽 신장 정맥에 말단. 왼쪽 신장 정맥과 대동맥 분기 사이의 중간까지 해부를 확장하여 협착에 대한 상류 및 하류의 적외선 IVC를 수술 후 관찰 할 수 있습니다.
      참고 : IVC와 대동맥 사이의 무딘 해부는 IVC와 대동맥 사이의 결합 조직이 상대적으로 느슨한 왼쪽 신장 정맥에 즉시 말단에서 수행되어야합니다.
   2. 그 수준에서 대장에서 IVC를 분리하고 주변 조직에서 IVC를 해부하는 창을 만듭니다. 8-0 배치 폴리아미드 모노필라멘트 봉합사는 먼저 IVC 및 대불(그림1A)아래에 봉합사를 배치한 다음, 창문을 통해 봉합사 끝을 당겨 IVC(그림1B)아래에 봉합사를 놓는다.
      참고: IVC는 깨지기 쉽기 때문에 대동맥 출현을 따라 해부하는 것은 IVC뿐만 아니라 작은 IVC 또는 대동맥 가지가 손상되는 것을 방지하기 위한 창을 만드는 데 유용합니다. 출혈이 발생하면 통제 할 수 없습니다. IVC에 서로 다른 측면 분기가 있는 경우 8-0 나뭇가지에 의한 봉합.
3. AVF 생성
   1. 바늘 끝에서 ~ 4mm 지점에서 45-60 ° 각도로 25G 바늘을 구부립니다.
   2. 마이크로 수술 클립을 적용하여 적외선 대진및 IVC를 클램프합니다.
   3. 대동맥을 중간및 회전하여 분기를 둘러싼 결합 조직을 파악하여 대동맥의 펑크 부위를 복부 쪽으로 약간 펴서 노출시다.
   4. 대장을 적당한 위치에 잡고, 조리된 25 G 바늘을 사용하여 대회를 통해 IVC내로구멍을 뚫는다(도 1C).
   5. 대인을 풀어 내고 대공의 왼쪽에서 당기는 주변 조직으로 펑크 부위를 덮습니다. 바늘을 꺼내면 면봉을 사용하여 천자 부위를 부드럽게 누릅니다.
4. IVC 협착증의 생성
   1. IVC에 22 G IV 카테터 의 팁을 놓습니다(재료 표참조). 8-0과 함께 IV 카테터와 IVC를 리게이트 봉합사(그림1D)를제거한 다음 IV 카테터를 제거합니다.
   2. 기본 지혈 (그림1E)을 확인한 다음 대류와 IVC를 풀습니다. 지혈을 보장하기 위해 천자 부위를 1 분 더 덮으하십시오.
      참고 : 협착에 대한 IVC 혈전증 말단을 피하기 위해 너무 오래 고정하지 마십시오.
   3. 장기를 원래 위치로 되돌리고 6-0 봉합사로 복부를 닫습니다.

3. 수술 후 절차

1. 복부 상처의 폐쇄 후, 이소플루란 흡입을 중단하십시오. 마우스를 침구가 없는 개별 케이지에 넣고 저체온증을 방지하기 위해 열 지지 장치에 케이지를 놓습니다.
   참고: 마우스가 흉골 의 힘을 달성하고 유지할 때까지 관찰됩니다. 지역 IACUC의 권고에 따라 진통 및 상처 치료를 포함한 수술 후 치료를 적용하십시오. 진통을 위해 우리는 0.1 mg/kg의 근육내 로 부프레노르핀을 사용하며, 필요에 따라 수술 후 48시간 동안 12시간마다 사용됩니다.
2. 도플러 초음파를 사용하여 수술 후 AVF 개질을 확인하십시오 (재료 표참조). 또한 필요에 따라 다른 용기 및 유동 특성을 측정합니다.

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결과

수컷 마우스는 AVF와 IVC 협착증을 모두 만들기 위해 위에서 언급한 수술을 받았습니다. 대조군 마우스는 AVF를 동시 생성하지 않고 IVC를 둘러싼 조직의 개복술 및 해부, 예를 들어, 가짜 절차 또는 IVC 협착증의 생성만을 겪었다.

IVC는 수술 후 7일째에 도플러 초음파로관찰하였다(도 2). IVC의 누공 및 협착 부?...

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토론

뮤린 AVF 모델은 AVF 성숙도^13,14로이어지는 기본 메커니즘 및 분자 이벤트를 연구하는 데 사용되어 왔다. 이 연구에서, 우리는 누공의 유출 관에 IVC 협착을 가진 새로운 뮤린 대공 관누공 모형을 만들기 위하여 확립된 뮤린 AVF 모형을 수정했습니다. 우리의 결찰 모델은 혈관 결찰을 사용하는 몇몇 이전에 기술된 뮤린 모형과 유사합니다. 심부정맥 혈전증?...

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자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
20-60 Mhz scan head	VisualSonics Inc.	RMV-704
8-0 Sterile Micro Suture, 6mm (140 µ), 3/8 Circle, TAP Point Needle	AROSuture	T06A08N14-13	polyamide monofilament sutures
Induction Chamber, 2 Liter 3.75"W x 9.00"D x 3.75"H	VetEquip	941444
Isoflo, Isoflurane liquid	Zoetis	26675-46-7
Mice, C57BL/6J	The Jackson Laboratory	664
Pet Bed Microwave Heating Pad	Snuggle Safe	6250
PrecisionGlide Needle 25G	BD	305122
Surflo I.V. Catheter 22G	Terumo	SR-OX2225CA	0.85mm outer diameter
Vascular clamp	Roboz Surgical Instrument	RS-5424
Vevo770 High Resolution Imaging System	VisualSonics Inc.	770