Modelo murino de estenose venosa central usando fístula Aortocaval com estenose de saída

Resumo

Uma fístula aortocaval foi criada puncionando a aorta infra-renal murino através de ambas as paredes na veia inferior oca e foi seguida pela criação de um stenosis em seu saída através da ligadura parcial da veia inferior oca. Este modelo reprodutível pode ser usado para estudar a estenose venosa central.

Resumo

O stenosis venoso central é uma entidade importante que contribui à falha arteriovenosa da fístula (AVF). Um modelo murino de AVF foi modificado para criar uma ligadura parcial da veia cava inferior (IVC) na saída da fístula, imitando o stenosis venoso central. Os aspectos técnicos deste modelo são introduzidos. A aorta e o IVC são expostos, seguindo uma incisão abdominal. A aorta infra-renal e o IVC são dissecados para o aperto proximal, e a aorta longe do ponto de origem é expor para a punctura. O IVC no ponto médio entre a veia renal esquerda e a bifurcação aórtica é dissecado com cuidado para coloc um 8-0 sutura o IVC. Após o aperto da aorta e da VCI, uma fav é criada perfurando a aorta infra-renal através de ambas as paredes para o IVC com uma agulha de 25 G, seguida de ligando um cateter intra-venoso (IV) de 22 G e IVC juntos. O cateter é então removido, criando uma estenose venosa reprodutível sem oclusão. A aorta e o IVC são apalpe após ter confirmado o hemostasis preliminar. Este modelo novo do stenosis da veia central é fácil de executar, reprodutível, e facilitará estudos na falha de AVF.

Introdução

As fístulas arteriovenosas (fav) são os acessos mais comuns para hemodiálise, com patência superior e infecção reduzida em comparação com outros acessos, como enxertos ou cateteres venosos centrais. No entanto, até 60% das AVF não amadurecem^1,2,3; uma revisão sistemática recente relatou que as taxas preliminares do patência em 1 ano eram somente 60%⁴. A estenose ao longo do fluxo venoso causa predominantemente falência da maturação da fav^5,6. Existem certos locais característicos propensos a estenose proximal à fístula: o segmento de balanço justaanastomose para a fístula radiocefálica, a região do arco cefálico para a fístula Braquiocefálica e a veia central para a fístula com previamente cateteres^deveia jugular interna ou subclávia ipsilateral^7,8.

O stenosis venoso central é frequentemente assintomático nos pacientes sem um AVF, mas pode causar o edema ipsilateral da extremidade pela hipertensão venosa assim como a falha da maturação da fístula quando desafiado pelo fluxo⁹da fístula. A patofisiologia do stenosis venoso central é mais provável relacionada à inflamação e à cascata ativada da coagulação após a colocação do dispositivo. Além disso, o movimento constante da ponta do cateter, bem como o aumento do fluxo da fístula podem alterar o estresse de cisalhamento, resultando em deposição plaquetária e espessamento da parede venosa¹⁰. Para compreender os mecanismos básicos que subjacentes à falha AVF causada pelo stenosis venoso central, um modelo animal que imita o stenosis venoso central com um AVF é exigido.

Nós estabelecemos um modelo murino da fístula do aortocaval que seja fácil de executar e dominar e recapitula o curso clínico do AVF humano. ¹¹ nós aplicamos os conceitos e a técnica de diversos modelos murino previamente estabelecidos para criar um modelo murino novo de AVF com stenosis venoso. Nós introduzimos um modelo murino do aortocaval da fístula com um stenosis de IVC na fístula do saída que pode ser usada para o estudo do stenosis venoso central.

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Protocolo

Todos os experimentos foram realizados com a aprovação do Comitê institucional de cuidados e uso de animais da Universidade de Yale (IACUC).

1. anestesia e procedimentos pré-operatórios

1. Esterilizar todos os instrumentos cirúrgicos e materiais por autoclavagem. Ligue o dispositivo de suporte térmico para ter a certeza de que está quente (40 – 42 ° c).
2. Coloc um rato velho de 9-11-Week C57Bl/6 em uma câmara acrílica da indução e anestesiá-la com o isoflurano vaporizado de 2,5% e o oxigênio de 0,8 L/min. A indução anestésica demora cerca de 3 min.
3. Retire o rato da câmara. Confirme um plano profundo da anestesia por uma pitada do dedo do pé, por uma pitada da orelha e por uma pitada da cauda. Coloque o mouse em posição supina na área cirúrgica e entregar 2,5% isoflurano usando máscara de silicone. Fornecer buprenorfina em 0,1 mg/kg analgésico e aplicar pomada oftálmicas aos olhos.
4. Retire a pele do lado ventral do pescoço para o abdômen inferior usando Nair, um removedor de pêlos.
5. Limpe e desinfete o local cirúrgico usando uma esfoliação em duas etapas com 10% de iodo-povidona e 70% de isopropanol. Aplique um drapejar cirúrgico.

2. procedimentos operativos

1. Exposição dos locais da braçadeira e da punctura
   1. Prepare instrumentos estéreis e use luvas estéreis para manter a esterilidade durante toda a cirurgia.
   2. Faça uma incisão abdominal profunda na pele com um bisturi a partir do nível da borda inferior do fígado para um pouco acima do púis. Corte através da musculatura com tesouras para abrir a cavidade abdominal.
   3. Insira um retractor no abdômen e puxe as entranhas para o lado direito. Mantenha-os húmidos envolvendo uma gaze salina encharcada. Retreive a bexiga e as vesículas seminais (em camundongos machos) e retirá-los para o lado caudal. Dissecar o mesentério entre o reto e o retroperitoneum com um suporte da micro-agulha para obter uma vista completa da aorta e do IVC.
   4. Dissecar a aorta infra-renal e o bloco do en de IVC dos tecidos retroperitoneal circunvizinhos laterais e dorsais com um suporte da micro-agulha para cruzá-los junto.
   5. Dissecar os tecidos circundantes para expor o local da punção aórtica em aproximadamente três quartos da distância da veia renal esquerda até a bifurcação aórtica.
2. Dissecção de IVC
   1. Dissecar entre o IVC infra-renal e a aorta imediatamente longe do ponto de origem à veia renal esquerda. Estender a dissecção distalmente ao meio caminho entre a veia renal esquerda e a bifurcação aórtica, de modo que o IVC infra-renal, ascendente e a jusante ao stenosis, possa ser observado postoperatively.
      Nota: a dissecção contundente entre o IVC e a aorta deve ser realizada de imediato distal à veia renal esquerda, onde o tecido conjuntivo entre o IVC e a aorta é relativamente solto.
   2. Faça uma janela para separar o IVC da aorta a esse nível e dissecar o IVC do tecido circundante. Coloque um 8-0 sutura do monofilamento da poliamida primeiramente abaixo do IVC e da aorta (Figura 1a), a seguir Posicione a sutura abaixo somente do IVC (Figura 1b) puxando a extremidade da sutura através da janela.
      Nota: uma vez que o IVC é frágil, a dissecação ao longo da adventícia aórtica é útil para fazer uma janela para impedir que o IVC, bem como pequenas IVC ou ramos aórticos de ser danificado. Se ocorrer sangramento, é provável que seja incontrolável. Se o IVC tem filiais laterais distintas, coloque um 8-0 sutura distalmente aos ramos.
3. Criação de AVF
   1. Dobre uma agulha de 25 G para um ângulo de 45 – 60 ° em um ponto ~ 4 mm da ponta da agulha.
   2. Prenda a aorta infra-renal e o IVC aplicando um grampo microsurgical.
   3. Gire a aorta medialmente e caudalmente agarrando o tecido conjuntivo em torno da bifurcação para expor o local de punção da aorta esticou-o ligeiramente para o lado ventral.
   4. Segurando a aorta em uma posição apropriada, perfure através da aorta no IVC usando a agulha preparada de 25 G (Figura 1C).
   5. Libere a aorta e cubra o local da punção com o tecido circundante puxando do lado esquerdo da aorta. Retire a agulha e pressione o local da punção suavemente usando um cotonete com ponta de algodão para hemostasia.
4. Criação da estenose do IVC
   1. Coloque uma ponta de um cateter de 22 G IV (veja a tabela de materiais) no IVC longitudinalmente. Ligate o cateter IV e o IVC junto com um 8-0 sutura (Figura 1D) e, em seguida, retire o cateter IV.
   2. Confirme a hemostasia primária (Figura 1e) e depois Desaperte a aorta e o IVC. Cubra o local da punctura 1 minuto mais para assegurar o hemostasis.
      Nota: não prenda por muito tempo para evitar trombose de VCI distal à estenose.
   3. Retorne órgãos a suas posições originais e feche o abdômen com 6-0 suturas.

3. procedimentos pós-operatórios

1. Após o fechamento da ferida abdominal, interrompa a inalação de isoflurano. Põr o rato em uma gaiola cama-livre individual e coloc a gaiola em um dispositivo térmico da sustentação para impedir a hipotermia.
   Nota: o rato é observado até atingir e manter a recumbência esternal. Aplique cuidados pós-operatórios, incluindo analgesia e tratamento de feridas, de acordo com as recomendações do IACUC local. Para analgesia utilizamos buprenorfina a 0,1 mg/kg intrasmuscularmente a cada 12 h por 48 h após os procedimentos cirúrgicos e, posteriormente, conforme necessário.
2. Confirme o patência de AVF postoperatively usando o ultra-som de Doppler (veja a tabela dos materiais). Além disso, meça outras características da embarcação e do fluxo conforme necessário.

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Resultados

Os ratos machos submeteram-se à operação mencionada acima para criar um AVF e um stenosis de IVC. Os ratos do controle submeteram-se somente à laparotomia e à dissecção dos tecidos que cercam o IVC, por exemplo, um procedimento Sham, ou somente a criação de um stenosis de IVC sem criação simultânea de um AVF.

O IVC foi observado com ultrassonografia Doppler no 7º dia após o procedimento cirúrgico (

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Discussão

O modelo murino AVF tem sido utilizado para estudar os mecanismos básicos e eventos moleculares que levam à maturação da fav^13,14. Neste estudo, nós modificamos um modelo murino estabelecido de AVF para criar um modelo murino novo da fístula do aortocaval com um stenosis de IVC no intervalo da saída da fístula. Nosso modelo da ligadura é similar a diversos modelos murino previamente descritos que usam a ligadura vascular. Um modelo murino de trombose ven...

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Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
20-60 Mhz scan head	VisualSonics Inc.	RMV-704
8-0 Sterile Micro Suture, 6mm (140 µ), 3/8 Circle, TAP Point Needle	AROSuture	T06A08N14-13	polyamide monofilament sutures
Induction Chamber, 2 Liter 3.75"W x 9.00"D x 3.75"H	VetEquip	941444
Isoflo, Isoflurane liquid	Zoetis	26675-46-7
Mice, C57BL/6J	The Jackson Laboratory	664
Pet Bed Microwave Heating Pad	Snuggle Safe	6250
PrecisionGlide Needle 25G	BD	305122
Surflo I.V. Catheter 22G	Terumo	SR-OX2225CA	0.85mm outer diameter
Vascular clamp	Roboz Surgical Instrument	RS-5424
Vevo770 High Resolution Imaging System	VisualSonics Inc.	770