Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

تقدم هذه المقالة بروتوكولا لإنشاء نموذج التي يسببها الربط من التهاب اللثة murine التي تنطوي علي العديد من المتعفنة الفك العلوي ، مما ادي إلى مناطق أكبر من الانسجه اللثة المعنية والعظام للتحليل اللاحق ، فضلا عن انخفاض استخدام الحيوانية. ويرد أيضا وصف لتقنية لتقييم العدلات عن طريق الفم بطريقه مماثله للمواضيع البشرية.

Abstract

المزايا الرئيسية لدراسة الفيزيولوجيا المرضية لامراض اللثة باستخدام نماذج murine هي انخفاض تكلفه الحيوانية ، ومجموعه من سلالات معدله وراثيا ، وعدد كبير من التحليلات التي يمكن اجراؤها علي حصاد الانسجه الرخوة والصلبة. غير ان العديد من هذه النظم يخضع لانتقادات اجرائيه. وكبديل لذلك ، يمكن استخدام نموذج الربط المستحث لامراض اللثة ، مدفوعا بالتطوير الموضعي والاحتفاظ بميكروبيوم الفموي الدقيق ، والذي يتم الحث عليه بسرعة ويمكن الاعتماد عليه نسبيا. لسوء الحظ ، يتم عزل المتغيرات من الربط المستحثة اللثة التركيب البروتوكول إلى مناطق التركيز من دواعم الأسنان وتخضع ليثبت تغير السابق لأوانه من الاربطه المثبتة. وهذا يقلل من كميه الانسجه المتاحة للتحليلات اللاحقة ويزيد من عدد الماشية المطلوبة للدراسة. يصف هذا البروتوكول التلاعبات الدقيقة المطلوبة لوضع الحروف المركبة المولي الموسعة مع تحسين الاحتفاظ واستخدام تقنيه شطف الرواية لاستعاده العدلات عن طريق الفم في الفئران مع نهج بديل يخفف من المذكورة أعلاه التحديات التقنية.

Introduction

مرض اللثة (PD) هو شرط العظم المرتبطة بالاعتلال المضيف كبيره والعبء الاقتصادي ، والذي يتجلى من التهاب اللثة وفقدان كل من مرفق الانسجه الرخوة والدعم العظمي للأسنان المتضررة1،2،3،4. وتخضع هذه العملية للتفاعلات بين الميكروبات الفموية والجهاز المناعي الفطري للمضيف. ويرتبط أيضا مع تفاقم الامراض التهابيه الجهازية الأخرى بما في ذلك مرض السكري, امراض القلب والاوعيه الدموية, والسرطان5,6,7,8. تاريخيا, كان الافتراض ان المرض PD يعتمد علي كميات كبيره من البكتيريا المحددة مثل البوررومناس اللثة9. ومع ذلك ، تشير الادله الاخيره إلى ان العنصر الميكروبي من PD هو توسط من قبل biofilm الأسنان. و بيوفيلم هو مجتمع منظم ومعقد من الكائنات المجهرية العديدة التي يمكن ان توجد في التكافلية الصحية والمدمرة dysbiotic الدول10,11. بيوفيلم عن طريق الفم عاده ما يتيح المقاومة للمضيف من خلال منع إنشاء بؤر البكتيريا المسببة للامراض ويعزز هيكل الانسجه اللثة المثالي ووظيفة من خلال تنظيم استجابه المناعي المضيف12,13. اضطرابات العلاقة التوازن بين الكائنات الحية المعلقة داخل تجويف الفم والجهاز المناعي المضيف قد يؤدي إلى تغييرات في التوازن الانسجه ، مما ادي إلى دسباقتريوز وتطوير السمات المميزة السريرية والشعاعية من PD5،10،12،13،14.

ومن المثير للاهتمام ، وإنشاء دسباقتريسيس عن طريق الفم ، في حين المطلوبة للشروع في PD ، ليست كافيه لدفع PD في جميع الافراد ، التملص نحو قدره الاستجابة المناعية المضيف لتخريب الانتقال من الجراثيم بين التكافلية والدول dysاحيائي15. هذا يسلط الضوء بشكل خاص علي الوسائل التي من خلالها التاثيرات PD واحده من الشخصيات الرائدة في الجهاز المناعي الفطري ، وهي الحبيبية الكرياتالسبع(pmn) ، أو العدلات ، من منظور المحلية والجهازية16،17.

في البشر ، يتم تجنيد PMNs من الدورة الدموية بمعدل ~ 2 × 106 خلايا/ساعة في الانسجه الضامة الصحية اللثة ، حيث هم السكان الكريات البيضاء المهيمنة. هنا ، يتم طردهم في وقت لاحق من التلم اللثة في تجويف الفم كعنصر من السائل كريفيكولار اللثة. في وجود PD ، يظهر العدلات داخل الدورة الدموية وتجويف الفم ، حيث تمتلك هذه الخلايا المستجيبة النمط الظاهري التهابي المفرط الذي يؤدي إلى تدمير المذكورة أعلاه من دواعم السن17،18،19،20،21،22. لذلك ، فهم دور PMNs في PD وغيرها من الظروف التهابيه الجهازية ذات اهميه قصوى.

وعلي الرغم من انه من المقبول علي نطاق واسع ان الامراض المزمنة ترتبط ارتباطا متبادلا بالشرطة العامة ، فان أليات الاساسيه لم يتم توضيحها بعد ، مما أسهم في صعوبات في أداره هذه الظروف الجهازية المرضية والتي يحتمل ان تكون مميته. نماذج الحيوانية التجريبية متعددة, كل مع مزايا فريدة من نوعها وعيوب, وقد استخدمت لدراسة الفيزيولوجيا المرضية من PD23,24. التركيز بشكل خاص علي نماذج murine ، وهناك مجموعه متنوعة من البروتوكولات التي من خلالها يتم تسهيل دراسة PD ؛ ومع ذلك ، فانها تمتلك العديد من العيوب التقنية والفسيولوجية25،26،27،28،29،30،31.

أولا ، يتطلب نموذج الماوس أنبوبي عن طريق الفم العديد من التطعيمات عن طريق الفم من مسببات الامراض اللثة البشرية لتوليد التهاب اللثة وفقدان العظام. بالاضافه إلى ذلك ، فانه عاده ما تسبقه فتره من العلاج بالمضادات الحيوية لتخريب النباتات الفموية المعلقة التي تمت25. هذا النموذج غالبا ما يتطلب التدريب المتخصصة لأداء بأمان gavage عن طريق الفم, يستخدم سوي جزء صغير من مسببات الامراض اللثة من ميكروبيوم الإنسان الأكثر تعقيدا, ويتطلب عده أشهر لتاسيس فقدان العظام السنخيه.

وعلي النقيض من ذلك ، تستخدم نماذج murine المستحثة كيميائيا التسليم عن طريق الفم من حمض السلفونيك trinitrobenzene (TNBS) أو الصوديوم كبريتات ديكسكان (مفاجات صيف دبي) ، وكلاء تستخدم عاده في إنشاء نماذج murine من التهاب القولون علي مدي فتره عده أشهر للحث علي فقدان العظام اللثة26. النماذج القائمة علي الخراج في الفم وخارج الفم متاحه ، والتي تنطوي علي القواطع murine والانسجه من ظهر فضلا عن calvarium ، علي التوالي. في نموذج الخراج السابق ، تدار عده حقن من البكتيريا ، وخلق الخراجات اللثة متعددة وندره فقدان العظام السنخيه ، والحد من استخدامها في دراسة PD. نماذج الخراج الاخيره هي أكثر بكثير عرضه لدراسة ضراوة البكتيرية ، والتهاب ، وارتشاف العظام في مواقع خارج تجويف الفم ، والذي يلغي تقييم دواعم الأسنان والفم الميكروبيوم27،28،29،30،31.

باستخدام نموذج التي يسببها الاربطه من التهاب اللثة ، وقد تم عاده تثبيت خياطه الحرير مضفر حول المولي الثاني. كبديل ، يمكن ادراج قطعه خطيه واحده من المواد خياطه بين الاولي والثانية أضراس32،33. الهدف من وضع الاربطه هو تسهيل تراكم البكتيريا وتوليد ديسبيوسيس داخل sulci اللثة ، مما ادي إلى التهاب الانسجه اللثة وتدمير الانسجه التي تتكون من دواعم الأسنان. والاهم من ذلك ، هذا النموذج قادر علي إنتاج أكبر بكثير من فقدان العظم السنخيه بالمقارنة مع نموذج أنبوبي الشفوي الأكثر استخداما34. زيادة تعقيد استخدام نموذج أنبوبي عن طريق الفم هو المقاومة الطبيعية من قبل عده سلالات من الفئران (اي ، C57BL/6) لتطوير فقدان العظام السنخيه. هذا هو أيضا إشكاليه, كما ان هذه السلالة هي الأكثر استخداما في البحوث الحيوانية المستندة إلى murine35.

وقد وضعت الإجراءات القائمة التي وصفتها مارتشيسان وآخرون ، وابي وهاجيشينليس لتبسيط القانون التقني الذي يضع الحروف33،36. ولسوء الحظ ، يتطلب البروتوكول السابق معدات متخصصة مطبوعه بالابعاد الثلاثية ولديه القدرة علي فقدان الاربطه المبكرة ، مما يزيد من استخدام الماشية والتكاليف المرتبطة بالوقت الإضافي الذي يقضيه في غرفه العمليات. وعلاوة علي ذلك ، كلا البروتوكولين توليد مناطق صغيره فقط من دواعم الأسنان المريضة المتاحة للدراسة.

وترتكز المزايا التي تكمن في هذه التقنية علي الدراسة المتزامنة لتشوات الفم والمناعة التي تحكم دواعم اللثة ، واستخدام الماشية منخفضه التكلفة ذات الخلفيات الوراثية المتنوعة ، والممارسات البسيطة للإسكان والتربية. وعلي هذا النحو ، ينبغي ان تكون الأهداف هي تعظيم حجم الانسجه المريضة ، وفي محاولة لممارسه مبادئ الحد من البحوث الحيوانية ، خفض الاستهلاك الحيواني إلى مستوي منخفض قدر الإمكان. وهذا يتطلب ضمان ان جميع الكائنات أليفه قادره علي الادراج في التحاليل التجريبية37. ومع ذلك ، تجدر الاشاره إلى انه بغض النظر عن النموذج الحيواني من الامراض اللثة يتم استخدامها ، لا يوجد نموذج واحد الذي يشمل كل عنصر من عناصر الفيزيولوجيا المرضية PD البشرية.

يستخدم هذا البروتوكول الجديد وضع الربط حول أسنان الفك العلوي متعددة باستخدام الاجهزه والمواد الموجودة داخل معظم المختبرات. فانه يسمح كميه كافيه من الوقت لتثبيت بسهوله وبثقة الاربطه التي من غير المرجح ان تقطع قبل الأوان. وأخيرا ، كما يقدم PMNs تنسيق تدمير دواعم الأسنان في PD ، يتم أيضا تقديم منهجيه جديده لاستعاده العدلات عن طريق الفم بطريقه مماثله للبشر.

Protocol

وقد امتثلت جميع الدراسات المتعلقة بالmurine للوائح الاخلاقيه ذات الصلة ووافقت عليها لجنه الرعاية الحيوانية التابعة لجامعه تورنتو ومجلس أخلاقيات البحوث (البروتوكول 20011930).

1. تركيب الاربطه

ملاحظه: هذا هو اجراء العمليات الجراحية غير معقمه التي يمكن القيام بها في مسرح التشغيل القياسية. استخدام الكائنات الخالية من الجراثيم (غير مغطاه هنا) ولايات التعامل داخل مجلس السلامة البيولوجية ، واستخدام الاداات العقيمة ، والتلقيح من تجويف الفم مع مسببات الامراض اللثة للتسبب في المظاهر السريرية للتهاب اللثة.

  1. أداره التخدير داخل الصفاق إلى 8 – 12 من العمر الذكور C57BL/6 الفئران ، والتي ينبغي ان يتاقلم إلى مرفق الإسكان الخاصة بهم ، وذلك باستخدام 0.5 "26 G العقيمة ابره المعقمة و 1 مل حقنه وفقا لمؤسسه الرعاية الحيوانية المعتمدة والمبادئ التوجيهية لجنه الاستخدام (IACUC).
    ملاحظه: مزيج من الكيتامين (100 ملغم/كغ) و اكسيليازين (10 مغ/كغ) التخدير بسرعة ويؤدي بشكل موثوق المستوي المناسب من التخدير لمده الاجراء.
  2. تقييم عمق التخدير قبل وكل 15 دقيقه خلال العملية كما يتضح من فقدان منعكس دواسة.
  3. ضع الماوس علي منصة جراحيه ساخنه (الشكل 1ا). تثبيت فك والفك السفلي في موقف مفتوح باستخدام عصابات مرنه ودعم الرقبة مع لفه من القطن للمساعدة في الحفاظ علي فك في اتجاه أفقي أكثر (الشكل 1ب). تغطيه الجسم والذيل من الحيوانية للتخفيف من فقدان الحرارة اثناء العملية.
  4. وضع المجهر الجراحي في التكبير المطلوب والاضاءه (إذا لم شنت مباشره إلى المجهر) علي تجويف الفم لتصور الأسنان. في حين ان التكبير المطلوب يعتمد علي المشغل ، يتم الحصول علي التصور الأمثل لتجويف الفم في 16x.
  5. تثبيت العقيمة 5-0 الحرير مضفر خياطه حول الاولي (M1) والثانية (M2) الفك العلوي المتعفنة داخل التلم اللثة باستخدام ملقط شظية.
    ملاحظه: يمكن استخدام الغرز الحريرية مضفر من قياس أصغر لهذا الغرض لتسهيل التثبيت بشكل أسرع والحد من امكانيه تلف الانسجه الرخوة ايتروغينيك.
    1. ضع الذيل البعيد للخياطة علي الجانب الشاحب من العاج وادخل الجزء القريب بين الاتصال M2 و M3 (الشكل 2ا).
    2. التفاف خياطه حول سطح شدق من m2 وادراجه بين الاتصال من M1 و m2. تاكد من ان كلا طرفي الخياطة يتم سحبهما باحكام لدفع الغرز إلى اللثة وأزاله كل الركود (الشكل 2ب).
    3. التفاف الجزء خياطه القريبة حول M1 ، تحت ارتفاعه من كفاف ، وادراجه بين الاتصال من M1 و M2. سحب الذيل القريب من خياطه باحكام لدفع خياطه في التلم اللثة وأزاله كل الركود (الشكل 2ج).
      ملاحظه: إذا لوحظت المقاومة عند ادراج الخياطة بين M1 و M2 أو M2 و M3 ، قد يكون الاتصال مفتوحا قليلا باستخدام مستكشف الأسنان القياسية.
    4. ربط نهايات خياطه مع عقده الجراح وتقليم ذيول قصيرة قدر الإمكان. وضع عقده في اللثة كوة بين M1 و M2 علي الجانب حنكي من الأسنان الفك العلوي (الشكل 2د).
      ملاحظه: الخطوات 1-4-1-1.4.4 يمكن تكرارها علي الجانب المعاكس ، إذا لزم الأمر.
    5. تعقيم الاداات الجراحية في الزجاج الساخن حبه معقم بين كل موضوع الحيوانية.
      تحذير: نصائح الملقط حاده للغاية ويمكن ان تسبب بسهوله الصدمات الفموية والنزيف الكبير. اعداد شرائح صغيره من الشاش لأزاله الدم من تجويف الفم وممارسه الضغط علي الجروح النزيف بنشاط.
  6. بعد تركيب الاربطه ، وأزاله الماوس من الجهاز الجراحي ، ووضع في قفص نظيف تحت مصباح الحرارة ورصد حتى تعافي تماما.
  7. المنزل بشكل فردي كل الماوس مع إثراء البيئية المناسبة والسماح حسب الإعلان الوصول إلى المياه المصفاة والمهروسة القياسية تشاو في بيئة الحرارة والرطوبة التي تسيطر عليها (12-h ضوء/12-h دوره الظلام) لمده 7-11 يوما.
    ملاحظه: الطعام المهروس يقلل من القوات اللازمة للمصريب التالي تقليل الم المرتبطة بالتغذية ، ويساعد في منع الفقدان المبكر للربطة المثبتة.

2-جمع العينات

  1. الفئران موت ببطء وفقا للمبادئ التوجيهية المعتمدة IACUC.
    ملاحظه: القتل الرحيم الفردية باستخدام غرفه2 CO متبوعا خلع عنق الرحم هو الأسلوب المفضل لهذا البروتوكول. قد يتم تغيير هذا اعتمادا علي التجارب التي تتطلب حصاد انسجه اضافيه.
  2. باستخدام ماصه ، شطف علي الفور تجويف الفم مع 100 μL من تعقيم 4 درجه مئوية 1x الفوسفات-مخزنه المالحة (تلفزيوني) دون الكالسيوم والمغنيسيوم لمده 10 ليالي.
  3. كرر الخطوة 2.2 2x ووضع كل شطف في واحد 15 مل مخروطي أنابيب البولي بروبيلين العقيمة اختبار.
  4. نقل المحتويات إلى 50 مل البولي بروبلين المخروطية أنبوب اختبار معقمه عن طريق تشغيلها من خلال فلتر شبكه نايلون 40 μm.
  5. نقل هذه المحتويات إلى 15 مل البولي بروبيلين المخروطية أنبوب اختبار معقمه.
    ملاحظه: النقل النهائي للعينه إلى أنبوب أصغر يسمح لتحسين التصور من بيليه الخلوية في الخطوات القادمة.
    1. إذا رغبت في ذلك ، وأزاله الاربطه المولي (ق) ومكان في 300 μL من تعقيم 1x تلفزيوني (4 درجه مئوية ، دون الكالسيوم والمغنيسيوم) في منفصلة 15 مل البولي بروبلين المخروطية أنبوب اختبار معقمه. التحريض بلطف وأزاله خياطه من الأنبوب. يتم التعامل مع هذه العينة بشكل مطابق لعينه شطف عن طريق الفم من هذه النقطة إلى الامام.
  6. أضافه 33.3 μL من 16 ٪ بارافورمالدهيد (PFA) لتسهيل تثبيت العينة.
  7. دوامه العينات علي الفور واحتضان علي الجليد لمده 15 دقيقه.
  8. ملء أنبوب إلى 15 مل مع 1x تلفزيوني لتمييع PFA ، ثم أجهزه الطرد المركزي في 1000 x g و 4 درجه مئوية لمده 5 دقائق.
  9. يستنشق ماده طافي وأعاده تعليق بيليه في 1 مل من الفرز الخلية المنشطة مضان (facs) المخزن المؤقت في 4 درجه مئوية. عد الخلايا علي مقياس الكريات الدموية أو عداد الخلايا المؤتمت.
  10. الطرد المركزي العينة مره أخرى في 1000 الإطار الإقليمي و 4 درجه مئوية لمده 5 دقائق.
  11. يستنشق ماده طافي وأعاده تعليق بيليه في حجم مناسب من المخزن المؤقت facs للتركيز النهائي من 0.5-1.0 x 106 خلايا/50 μl من المخزن المؤقت facs.

3. تلطيخ الأجسام المضادة لتحليل تدفق الخلوي

ملاحظه: التسمية والبرد جميع أنابيب FACS المطلوبة قبل الاستخدام.

  1. أضافه 1 μL من مصل الفئران و 2 μL من مكافحه الماوس الأجسام المضادة مفتش إلى 50 μL من العينة ، دوامه فورا ، وكتله علي الجليد لمده 20 دقيقه.
  2. أضافه الأجسام المضادة المناسبة لكل عينه ، دوامه فورا ، واحتضان علي الجليد لمده 30 دقيقه في الظلام.
    ملاحظه: اختيار واحجام الأجسام المضادة تعتمد علي التجارب التجريبية الأمثل السابقة مصممه خصيصا لهذه التقنية المحددة.
  3. غسل عينات مع 1 مل من المخزن المؤقت FACS ، vortexing لفتره وجيزة و يطرد لمده 5 دقائق في 1000 x ز و 4 درجه مئوية. كرر هذه الخطوة 2x.
  4. أعاده التعليق عينات في 250 μL من المخزن المؤقت FACS ، وتغطيه أنابيب مع فيلم البارافين ، التفاف في رقائق ألومنيوم ، وعقد في 4 درجه مئوية حتى التحليل.
    ملاحظه: وهو مثالي لتحليل العينات في غضون ساعات من إكمال البروتوكول بسبب فقدان اشاره الفلورسنت خلال فترات طويلة من التخزين. ومع ذلك ، يمكن تحليل عينات 2-3 أيام في وقت لاحق إذا لزم الأمر علي الإطلاق.

النتائج

ممثل تدفق البيانات الخلوية من عينات شطف عن طريق الفم من ساذج (الشكل 3ا) وملتهبة (الشكل 3ب) murine تجويف الفم الثانوية للتهاب اللثة المستحثة التي يسببها. كما يظهر استرداد PMNs من الاربطه المثبتة (الشكل 3ج). تم معايره الفول?...

Discussion

ويتركز العنصر الأكثر اهميه المرتبطة باستخدام نموذج المستحثة الاربطه من التهاب اللثة حول الاحتفاظ بالاربطه حتى وقت التضحية أو الازاله المتعمدة. الربط بيوفيلم-ريتيكتيف المثبتة قادره علي حمل خسارة كبيره من ارتفاع العظم السنخي في عدد قليل من 6 أيام, الهضاب بين 11 – 16 الفترة اليوم39

Disclosures

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

Acknowledgements

ويدعم j. w. c. من قبل المعاهد الكندية للبحوث الصحية (CIHR). ويود المؤلفون ان يشكروا الدكتور تشونغشيانغ صن علي مساعدتها في أداء التلطيخ الأزرق التريسان.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Anti-mouse F4/80 AntibodyBioLegend123131BV421, Clone BM8
Anti-mouse Ly6G AntibodyBD560602PerCP-Cy5.5, Clone 1A8
C57BL/6 Male MiceCharles River8 to 12 weeks old
Conical Centrifuge TubeFroggaBioTB15-50015 mL
Conical Centrifuge TubeFroggaBioTB50-50050 mL
FACS BufferMultiple1% BSA (BioShop), 2mM EDTA (Merck), 1x HBSS-/- (Gibco)
FACSDivaBDv8.0.1
Fibre-LiteDolan-JennerModel 180
FlowJoTree Starv10.0.8r1
Heat Therapy PumpHallowellHTP-1500
Hot Glass Bead SterilizerElectron Microscopy Sciences66118-10Germinator 500
Iris ScissorsAlmedic7602-A8-684Straight
KetamineVetoquinol100mg/mL
LSRFortessaBDX-20
Mouse SerumSigmaM5905-5ML
Nylon Mesh FilterFisher Scientific22-363-54740 µm
ParaformaldehydeFisher Scientific2890816% (w/v), Methanol Free
Phosphate-buffered SalineSigmaD1408-500MLWithout CaCl2 and MgCl2, 10x
Plastic Disposable SyringesBD3096591 mL
Rat SerumSigmaR9759-5ML
Silk SutureCovidienSS652C13 USP 5-0
Splinter ForcepsAlmedic7726-A10-700#1
Splinter ForcepsAlmedic7727-A10-704#5
Stereo Dissecting MicroscopeCarl Zeiss28865Photo-Zusatz
Sterile Hypodemic NeedleBD30511126G X 1/2"
SyringeBD3096591 mL
XylazineRompun20mg/mL

References

  1. Hajishengallis, G. Immunomicrobial pathogenesis of periodontitis: keystones, pathobionts, and host response. Trends in Immunology. 35 (1), 3-11 (2014).
  2. Pihlstrom, B. L., Michalowicz, B. S., Johnson, N. W. Periodontal diseases. Lancet. 366 (9499), 1809-1820 (2005).
  3. Richards, D. Oral Diseases affect some 3.9 Billion people. Evidence-Based Dentistry. 14 (2), 35 (2013).
  4. Listl, S., Galloway, J., Mossey, P. A., Marcenes, W. Global Economic Impact of Dental Diseases. Journal of Dental Research. 94 (10), 1355-1361 (2015).
  5. Hajishengallis, G. Periodontitis: from microbial immune subversion to systemic inflammation. Nature Reviews Immunology. 15 (1), 30-44 (2015).
  6. Preshaw, P. M., et al. Periodontitis and diabetes: a two-way relationship. Diabetologia. 55 (1), 21-31 (2012).
  7. Kampits, C., et al. Periodontal disease and inflammatory blood cytokines in patients with stable coronary artery disease. Journal of Applied Oral Sciences. 24 (4), 352-358 (2016).
  8. Fitzpatrick, S. G., Katz, J. The association between periodontal disease and cancer: A review of the literature. Journal of Dentistry. 38 (2), 83-95 (2010).
  9. Socransky, S. S., Haffajee, A. D. Periodontal microbial ecology. Periodontology 2000. 38 (1), 135-187 (2005).
  10. Marsh, P. D. Microbial Ecology of Dental Plaque and its Significance in Health and Disease. Advances in Dental Research. 8 (2), 263-271 (1994).
  11. Berezow, A. B., Darveau, R. P. Microbial shift and periodontitis. Periodontology 2000. 55 (1), 36-47 (2011).
  12. Roberts, F. A., Darveau, R. P. Microbial protection and virulence in periodontal tissue as a function of polymicrobial communities: symbiosis and dysbiosis. Periodontology 2000. 69 (1), 18-27 (2015).
  13. Macpherson, A. J., Harris, N. L. Interactions between commensal intestinal bacteria and the immune system. Nature Reviews Immunology. 4 (6), 478-485 (2004).
  14. Hajishengallis, G., et al. Low-Abundance Biofilm Species Orchestrates Inflammatory Periodontal Disease through the Commensal Microbiota and Complement. Cell Host Microbe. 10 (5), 497-506 (2011).
  15. Löe, H., Anerud, A., Boysen, H., Morrison, E. Natural history of periodontal disease in man. Rapid, moderate and no loss of attachment in Sri Lankan laborers 14 to 46 years of age. Journal of Clinical Periodontology. 13 (5), 431-445 (1986).
  16. Lakschevitz, F. S., et al. Identification of neutrophil surface marker changes in health and inflammation using high-throughput screening flow cytometry. Experimental Cell Research. 342 (2), 200-209 (2016).
  17. Fine, N., et al. Distinct Oral Neutrophil Subsets Define Health and Periodontal Disease States. Journal of Dental Research. 95 (8), 931-938 (2016).
  18. Landzberg, M., Doering, H., Aboodi, G. M., Tenenbaum, H. C., Glogauer, M. Quantifying oral inflammatory load: oral neutrophil counts in periodontal health and disease. Journal of Periodontal Research. 50 (3), 330-336 (2015).
  19. Bender, J. S., Thang, H., Glogauer, M. Novel rinse assay for the quantification of oral neutrophils and the monitoring of chronic periodontal disease. Journal of Periodontal Research. 41 (3), 214-220 (2006).
  20. Johnstone, A. M., Koh, A., Goldberg, M. B., Glogauer, M. A Hyperactive Neutrophil Phenotype in Patients With Refractory Periodontitis. Journal of Periodontology. 78 (9), 1788-1794 (2007).
  21. Figueredo, C. M. S., Fischer, R. G., Gustafsson, A. Aberrant Neutrophil Reactions in Periodontitis. Journal of Periodontology. 76 (6), 951-955 (2005).
  22. Christan, C., Dietrich, T., Hägewald, S., Kage, A., Bernimoulin, J. -. P. White blood cell count in generalized aggressive periodontitis after non-surgical therapy. Journal of Clinical Periodontology. 29 (3), 201-206 (2002).
  23. Oz, H. S., Puleo, D. A. Animal models for periodontal disease. Journal of Biomedicine and Biotechnology. , 1-8 (2011).
  24. Struillou, X., Boutigny, H., Soueidan, A., Layrolle, P. Experimental animal models in periodontology: a review. Open Dentistry Journal. 4 (1), 37-47 (2010).
  25. Baker, P. J., Evans, R. T., Roopenian, D. C. Oral infection with Porphyromonas gingivalis and induced alveolar bone loss in immunocompetent and severe combined immunodeficient mice. Archives of Oral Biology. 39 (12), 1035-1040 (1994).
  26. Oz, H. S., Ebersole, J. L. A novel murine model for chronic inflammatory alveolar bone loss. Journal of Periodontal Research. 45 (1), 94-99 (2010).
  27. Zubery, Y., et al. Bone resorption caused by three periodontal pathogens in vivo in mice is mediated in part by prostaglandin. Infections and Immunity. 66 (9), 4158-4162 (1998).
  28. Feuille, F., Ebersole, J. L., Kesavalu, L., Stepfen, M. J., Holt, S. C. Mixed infection with Porphyromonas gingivalis and Fusobacterium nucleatum in a murine lesion model: potential synergistic effects on virulence. Infections and Immunity. 64 (6), 2094-2100 (1996).
  29. Yoshimura, M., et al. Proteome analysis of Porphyromonas gingivalis cells placed in a subcutaneous chamber of mice. Oral Microbiology and Immunology. 23 (5), 413-418 (2008).
  30. Kesavalu, L., Ebersole, J. L., Machen, R. L., Holt, S. C. Porphyromonas gingivalis virulence in mice: induction of immunity to bacterial components. Infections and Immunity. 60 (4), 1455-1464 (1992).
  31. Liu, P., Haake, S. K., Gallo, R. L., Huang, C. A novel vaccine targeting Fusobacterium nucleatum against abscesses and halitosis. Vaccine. 27 (10), 1589-1595 (2009).
  32. Jiao, Y., et al. Induction of Bone Loss by Pathobiont-Mediated Nod1 Signaling in the Oral Cavity. Cell Host Microbe. 13 (5), 595-601 (2013).
  33. Abe, T., Hajishengallis, G. Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice. Journal of Immunological Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).
  34. de Molon, R. S., et al. Long-term evaluation of oral gavage with periodontopathogens or ligature induction of experimental periodontal disease in mice. Clinical Oral Investigations. 20 (6), 1203-1216 (2016).
  35. Baker, P. J., Dixon, M., Roopenian, D. C. Genetic control of susceptibility to Porphyromonas gingivalis-induced alveolar bone loss in mice. Infections and Immunity. 68 (10), 5864-5868 (2000).
  36. Marchesan, J., et al. An experimental murine model to study periodontitis. Nature Protocols. 13 (10), 2247-2267 (2018).
  37. Flecknell, P. Replacement, reduction and refinement. ALTEX: Alternatives to Animal Experiments. 19 (2), 73-78 (2002).
  38. Fine, N., et al. Primed PMNs in healthy mouse and human circulation are first responders during acute inflammation. Blood Advances. 3 (10), 1622-1637 (2019).
  39. Viniegra, A., et al. Resolving Macrophages Counter Osteolysis by Anabolic Actions on Bone Cells. Journal of Dental Research. 97 (10), 1160-1169 (2018).
  40. Häärä, O., et al. Ectodysplasin regulates activator-inhibitor balance in murine tooth development through Fgf20 signaling. Development. 139 (17), 3189-3199 (2012).
  41. Tsukasaki, M., et al. Host defense against oral microbiota by bone-damaging T cells. Nature Communications. 9 (1), 1-11 (2018).
  42. Hiyari, S., et al. Ligature-induced peri-implantitis and periodontitis in mice. Journal of Clinical Periodontology. 45 (1), 89-99 (2018).
  43. Eskan, M. A., et al. The leukocyte integrin antagonist Del-1 inhibits IL-17-mediated inflammatory bone loss. Nature Immunology. 13 (5), 465-473 (2012).
  44. Dutzan, N., et al. A dysbiotic microbiome triggers T H 17 cells to mediate oral mucosal immunopathology in mice and humans. Science Translational Medicine. 10 (463), 1-12 (2018).
  45. Chun, J., Kim, K. Y., Lee, J., Choi, Y. The analysis of oral microbial communities of wild-type and toll-like receptor 2-deficient mice using a 454 GS FLX Titanium pyrosequencer. BMC Microbiology. 10 (1), 1-8 (2010).
  46. Rovin, S., Costich, E. R., Gordon, H. A. The influence of bacteria and irritation in the initiation of periodontal disease in germfree and conventional rats. Journal of Periodontal Research. 1 (3), 193-204 (1966).
  47. Martín, R., Bermúdez-Humarán, L. G., Langella, P. Gnotobiotic Rodents: An In Vivo Model for the Study of Microbe-Microbe Interactions. Frontiers in Microbiology. 7, 1-7 (2016).
  48. Dutzan, N., et al. On-going Mechanical Damage from Mastication Drives Homeostatic Th17 Cell Responses at the Oral Barrier. Immunity. 46 (1), 133-147 (2017).
  49. Sima, C., et al. Nuclear Factor Erythroid 2-Related Factor 2 Down-Regulation in Oral Neutrophils Is Associated with Periodontal Oxidative Damage and Severe Chronic Periodontitis. The American Journal of Pathology. 186 (6), 1417-1426 (2016).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

155

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved