نموذج ما قبل السريرية للتبرع القلبي بعد الوفاة الدورة الدموية

Summary

يُظهر هذا البروتوكول نهجاً بسيطاً ومرناً لتقييم عوامل التكييف الجديدة أو الاستراتيجيات الرامية إلى زيادة جدوى التبرع القلبي بعد الوفاة الدورة الدموية.

Abstract

الطلب على زرع القلب آخذ في الارتفاع. ومع ذلك، فإن توافر الأعضاء محدود بسبب ندرة المانحين المناسبين. التبرع بالأعضاء بعد الوفاة الدورة الدموية (DCD) هو حل لمعالجة هذا التوافر المحدود، ولكن بسبب فترة من نقص التروية الدافئة لفترات طويلة وخطر الإصابة في الأنسجة، نادرا ما ينظر إلى استخدامه الروتيني في زرع القلب. في هذه المخطوطة نقدم بروتوكول مفصل يحاكي عن كثب الممارسات السريرية الحالية في سياق DCD مع الرصد المستمر لوظيفة القلب، مما يسمح لتقييم استراتيجيات وتدخلات القلب الجديدة للحد من إصابة نقص التروية والانصهار.

في هذا النموذج، يتم بدء بروتوكول DCD في الفئران لويس التخدير عن طريق وقف التهوية للحث على الموت الدورة الدموية. عندما ينخفض ضغط الدم الانقباضي أقل من 30 مم زئبق، يبدأ وقت الإقفاري الدافئ. بعد فترة إقفارية دافئة محددة مسبقاً، يتم مسح القلوب بمحلول قلبي نُوَمُرَي، يتم شراؤه، وتحميله على نظام التسريب القلبي السابق في لانغندورف. بعد 10 دقائق من إعادة التسريب الأولي والاستقرار، يتم تقييم إعادة تأهيل القلب باستمرار لمدة 60 دقيقة باستخدام مراقبة الضغط داخل البطين. يتم تقييم إصابة القلب عن طريق قياس تروبونين القلب T ويتم قياس حجم احتشاء عن طريق تلطيخ النسيج. يمكن تعديل الوقت الإقفاري الدافئ وتفصيله لتطوير الكمية المطلوبة من الضرر الهيكلي والوظيفي. يسمح هذا البروتوكول البسيط بتقييم مختلف استراتيجيات تكييف القلب الواقية من القلب التي أدخلت في لحظة الشلل القلبي، والانصهار الأولي و / أو خلال التسريب الجسم الحي السابق. ويمكن استنساخ النتائج التي تم الحصول عليها من هذا البروتوكول في نماذج كبيرة، مما يسهل الترجمة السريرية.

Introduction

زرع الأعضاء الصلبة بشكل عام وزرع القلب، علىوجه الخصوص، هي في ارتفاع في جميع أنحاء العالم 1،². الطريقة القياسية لشراء الأعضاء هي التبرع بعد موت الدماغ (DBD). وبالنظر إلى معايير الإدراج الصارمة من DBD، يتمقبول أقل من 40٪ من القلوب المعروضة 3، وبالتالي الحد من العرض في مواجهة الطلب المتزايد وتوسيع قائمة انتظار الجهاز. ولمعالجة هذه المسألة، يعتبر استخدام الأعضاء المتبرع بها بعد الوفاة في الدورة الدموية حلاً محتملاً⁴.

في الجهات المانحة DCD، ومع ذلك، مرحلة الهلوال بعد سحب الرعاية وفترة من نقص التروية الدافئة غير المحمية قبل الإنعاش لا مفر منه⁵. يمكن أن تؤدي إصابة الأعضاء المحتملة بعد الوفاة في الدورة الدموية إلى خلل في الأعضاء، مما يفسر التردد في اعتماد عمليات زرع القلب DCD بشكل روتيني. ويقال أن 4 مراكز فقط استخدام قلوب DCD سريريا، مع معايير صارمة التي تشمل أوقات نقص التروية الدافئة قصيرة جدا والمانحين الشباب دون الأمراض المزمنة^6،7. لأسباب أخلاقية وقانونية، يمكن تطبيق تدخلات محدودة أو غير محددة في مجال حماية القلب في المتبرعين قبل الوفاة الدورة الدموية^5و8و9. وبالتالي، فإن أي تخفيف للتخفيف من إصابة نقص التروية (IR) يقتصر على العلاجات القلبية التي بدأت خلال التسريب المبكر مع حلول القلب، ولا تسمح بإجراء تقييم وظيفي مناسب. وقد تم اقتراح التسريب القلب الجسم الحي السابق (EVHP) وإعادة تكييف القلب DCD باستخدام منصات مخصصة كحل بديل ودرس من قبل مختلف العلماء^{10،11،12،13} . يوفر EVHP فرصة فريدة لتقديم عوامل ما بعد التكييف إلى قلوب DCD لتحسين الانتعاش الوظيفي. ومع ذلك، للترجمة السريرية الفعالة، لا يزال يتعين معالجة العديد من القضايا التقنية والعملية، وهذا يزيد من تفاقمه عدم وجود توافق في الآراء حول مجموعة من التسريب والمعايير الوظيفية لتحديد قابلية الزراعة^{6، 8}.

هنا نبلغ عن تطوير بروتوكول DCD الحيوان الصغير قبل السريرية القابلة لإعادة الاستخدام جنبا إلى جنب مع نظام التسريب القلب في الجسم الحي السابق التي يمكن استخدامها للتحقيق في الجهاز بعد تكييف بدأت في وقت الشراء، خلال التسريب الأولي، و /أو في جميع أنحاء EVHP.

Protocol

وتتفق جميع بروتوكولات رعاية الحيوانات والبروتوكولات التجريبية مع دليل رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، وقد وافقت عليها اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها التابعة لمركز مستشفى جامعة مونتريال للبحوث.

1 - الأعمال التحضيرية الأولية

1. تشغيل حمام الماء لتسخين نظام توصيل القلب (الشكل1A)ونظام التسريب في الجسم الحي السابق (الشكل1B). تعيين درجة حرارة المياه إلى 38.5 درجة مئوية لدرجة حرارة الحل من 37 درجة مئوية. يمكن رؤية صور الإعداد في الشكل التكميلي 1A، B.
2. إعداد 1 لتر من محلول القلب. إضافة 1 مل من هيدروكلوريد ليدوكائين 2٪ و 10 مل من 2 مل كيلو كل (التركيز النهائي 20 مل) إلى 1 لتر من البلازما-Lyte A (140 مل Na، 5 MM K، 1.5 MM Mg، 98 مل كل، 27 مليون متر خلات، 23 مل غلوكونات). تصحيح الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 باستخدام 6 N حمض الهيدروكلوريك.
   تحذير: هذا النموذج حساس للغاية لدرجة الحموضة. تصحيح درجة الحموضة خاطئ (خارج النطاق الفسيولوجي 7.3-7.4) أو الحلول غير المستقرة للنقطة الهيدروجينية قد يعرض التجربة للخطر أو يوفر بيانات غير موثوقبها.
3. إعداد 4 L من كريسب الحل (113 مل NaCl، 4.5 مليون متر ككل، 1.6 مليون متر شمال مجلس الإدارة₂بو_4،1.25 مليون متر CaCl_2،1 مليون متر MgCl₂∙6H₂O، 5.5 m M D-الجلوكوز، 25 mM NaHCO_3). يجب أن تكون كتل الركيزة لكل 1 لتر من الحل على النحو التالي: 6.1 غرام من حمض الكلس، 0.3355 غرام من كل من الكل، 0.2035 غرام من MgCl₂∙6H₂O، 0.192 غرام من NaH₂PO_4،0.1387 غرام من CaCl₂، 0.99 غرام من الجلوكوز، 2.1 غرام من NaHCO₃ ، الحجم النهائي من 1 لتر في المياه منزوعة الأيونات فائقة النقاء. إضافة NaHCO ₃ الماضي لتجنب هطول الأمطار. قم بتصفية الحل باستخدام فلتر بـ 0.22 ميكرو متر وتخزينه اليلة. تصحيح الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 عندما يكون الحل في 37 درجة مئوية وفقاعة مع 5٪ CO₂/ 95٪ O_2.
4. ملء دائرة Langendorff مع حل كريبس وبدء مضخة النظام. تأكد من عدم ترك أي فقاعات داخلالأنابيب. ضبط سرعة المضخة التمعجية إلى 80 دورة في الدقيقة (ما يعادل 1 لتر / دقيقة). باستخدام اتجاهين وقف الديك، وضبط تدفق للحفاظ على بالتنقيط بطيئة من خلال قنية الأبهر حتى يتم إرفاق القلب (الشكل1B). الحفاظ على عينة من حل كريبس (15 مل) في أنبوب conic 50 مل على الجليد لنقل القلب.
5. ملء نظام توصيل القلب مع محلول القلب اللبلها. مرة واحدة تتم إزالة فقاعات، والتبديل الدائرة إلى المالحة باستخدام 3 طريقة وقف الديك (الشكل1A). ضبط معدل بالتنقيط. يجب أن يقطر المالحة ببطء من طرف القسطرة للتأكد من عدم حقن أي محلول قلبي قبل وفاة الحيوان.

2. إعداد الحيوانات

1. باستخدام غرفة استنشاق، والحث على التخدير مع 3٪ isoflurane. بمجرد أن لا يستجيب الحيوان، قم بإجراء حقن الكيتامين داخل اقابية (75 مغ/كغ) وإكسلازين (5 ملغ/كغ) أو مخدر مناسب بالمثل، باتباع اللوائح المحلية، للحفاظ على التخدير لبقية الإجراء. تأكد من عمق التخدير من خلال عدم رد فعل على قرصة اصبع القدم وردود الفعل palpebral.
2. تنبيب الحيوان باستخدام قسطرة I.V. 14 G، 2 بوصة. بدء التهوية في 50 التنفس في الدقيقة الواحدة، مع ضغط مجرى الهواء تقتصر على 20 سم₂O.
3. وضع الحيوان على لوحة التدفئة تعيين إلى "المتوسطة" وتغطية مع لوحة ماصة للحفاظ على درجة حرارة الجسم. أدخل مسبار درجة حرارة المستقيم وأرفق مستشعر مقياس التأكسج بالنبض عبر الجلد بأحد القدمين. الحفاظ على درجة حرارة المستقيم عند 37 درجة مئوية في جميع أنحاء الإجراء.
4. الوصول إلى الأوعية الدموية
   1. قم بعمل شق جلد خط الوسط من 3 إلى 4 سم في الرقبة باستخدام المقص. باستخدام مقص منحني طرف حادة، تشريح حادة الأنسجة تحت الجلد وفضح العضلات القصين الحق. باستخدام ملقط غير صادم، حرك العضلات أفقياحتى يتم تحديد الشريان السباتي الأيمن (النابض)، والوريد الوداجي (غير النابض) والعصب المبهم (الأبيض) بصريا (الشكلالتكميلي 2A). افصل العصب المبهم بعناية عن الشريان السباتي باستخدام مقص منحني غير حاد.
   2. حقن الهيبارين (2000 وحدة إطواب/كغ) عن طريق الوريد الوداجي الأيمن. تطبيق الضغط على موقع الحقن بعد سحب إبرة لتجنب تسرب الدم.
   3. باستخدام ملقط منحني، تمرير اثنين من الغرز الحرير 5-0 حول الشريان السباتي. قم بإرفاق خياطة القاصية بقوة لخلع الشريان السباتي في الجانب العلوي من الشريان المكشوف. إبقاء خياطة القريبة غير مقيدة. سيتم استخدام سحب خياطة القريبة للسيطرة على النزيف في الخطوة التالية (الشكلالتكميلي 2B). يجب أن تكون المسافة بين الغرز حوالي 2سم.
   4. باستخدام مجهر مجسم لتحسين التصور، قم بعمل شق بدقة 1 مم مع مقص الجراحة الدقيقة فوق الجدار الأمامي للشريان السباتي. أدخل قسطرة I.V. مغلقة مقاس 22 غرام و1 بوصة باتجاه القوس الأبهري. يتم توصيل القسطرة إلى 2 طريقة وقف الديك، مما يسمح للاتصال محول الضغط لرصد مستمر، مع إمكانية حقن المالحة أو القلب عن طريق نظام تسليم القلب (الشكل1A).

3. بدء التبرع القلبي بعد الوفاة الدورة الدموية (DCD) بروتوكول

ملاحظة: ويمكن رؤية جدول زمني كامل للبروتوكول في الشكل 2.

1. إعادة تقييم عمق التخدير عن طريق إجراء قرصة اصبع القدم وتقييم رد الفعل palpebral. إذا لوحظ رد فعل، قم بإجراء حقن داخل اقابي الكيتامين (37.5 ملغم/كغم) وإكسلازين (2.5 ملغم/كغم). إعادة تقييم بعد 5 دقائق. إذا لم يتم ملاحظة أي استجابة متابعة الإجراء. يجب أن يتم إجراء المشبك القصبةالهوائية فقط في الحيوانات التخدير بشكل كاف.
2. أطفئ جهاز التنفس الصناعي وخلع الحيوان. باستخدام ملقط البعوض، المشبك القصبة الهوائية. وتعتبر هذه اللحظة بداية للمرحلة المعوّلة. ابدأ في حساب الوقت الإقفاري الدافئ الوظيفي (WIT) عندما ينخفض ضغط الدم الانقباضي الذروة إلى أقل من 30 مم زئبق، أو إذا ظهر الرجفان الزفير البطيني أو الرجفان البطيني، كل ما يأتي أولاً (الشكل3).
   ملاحظة: وينبغي أن يكون مدى الضرر متناسباً مع الضرر الذي يلحق بـ WIT. هناك حاجة إلى تجارب لتحسين الوقت WIT وفقا للمخدر المستخدمة، سلالة الحيوان، والجنس والوزن المختار. في السيطرة على الحيوانات، مباشرة بعد تأمين وصول الأوعية الدموية السباتي، يتم حقن القلبويتم شراؤها القلب كما هو موضح في الخطوة التالية (الشكل 2). وتعتبر بداية التسريب مع الشلل القلبي كنهاية WIT.
3. في نهاية WIT، إجراء استئصال العقم الوسيط. حافظ على الصدر مفتوحاً باستخدام مُسحب ألم. باستخدام مقص، فتح الوريد الأجوف السفلي وكلا الأذينين لتجنب خلع عضلة القلب أو إعادة تدوير القلب (الشكل التكميلي 3). المشبك الأبهر فوق الحجاب الحاجز. من خلال الشريان السباتي القسطرة سابقا، ضخ محلول القلب الجنبي في ضغط مستمر من 60 ملم زئبق لمدة 5 دقائق باستخدام نظام الولادة القلب. يمكن تعديل ضغط التسريب عن طريق تغيير ارتفاع عمود الماء.
4. في نهاية التسريب القلبي، تشريح الشريان الأبهري القريب الصاعد من الشريان الرئوي باستخدام ملقط منحني (الشكلالتكميلي 4A). قطع الشريان الأبهري إلى الشريان تحت الترقوة الأيسر. تأكد من طول الأبهر لا يقل عن 0.5 سم للتعليب لجهاز Langendorff.
5. عقد القلب من الشريان الأبهري، واستكمال استئصال الشرايين عن طريق فصل القلب عن الأوردة الرئوية وغيرها من الهياكل الصدرية (الشكلالتكميلي 4B). بسرعة، غمر القلب في حل كريبس الجليد الباردة للنقل السريع إلى نظام الجسم الحي السابق. الحفاظ على تشريح وأوقات النقل قصيرة قدر الإمكان (5 دقائق).

4. السابقين فيفو القلب التسريب (EVHP) والتقييم الوظيفي القلب

1. افتح التجويف الأبهري باستخدام الملقط. Deair الأبهر عن طريق ملء التجويف مع حل كريبس نازف لتجنب إجبار فقاعات في الأوعية التاجية. خفض قنية في الأبهر، مع الحرص على عدم تمرير الجذر الأبهري أو تلف منشورات الصمام الأبهري. إصلاح الإعداد مع المشبك الصغيرة.
2. باستخدام 2 طريقة stopcock، وزيادة تدفق للبحث عن التسريبات المحتملة في الأبهر. إذا لم يتم الكشف عن أي منها، إصلاح بإحكام الأبهر إلى قنية باستخدام خياطة الحرير 2-0. فتح كامل تدفق إلى قنية. الحفاظ على الضغط الأبهري في ضغط فسيولوجي من 60-70 مم زئبق (تعديلها عن طريق تغيير ارتفاع النظام). في هذه اللحظة يتم البدء في التسريب الأولي ووقت التثبيت. ويمكن تعديل الضغط الأبهري وفقا لخطة المحقق التجريبية.
3. تدوير القلب حتى قاعدة القلب (الأذينين) تواجه جهاز استشعار الضغط. توسيع فتحة الأذينالبطيني الأيسر عن طريق تشريح الأوردة الرئوية. أدخل بالون اللاتكس المتصل بمستشعر الضغط. تأكد من أن البالون في وضع كامل داخل البطين عن طريق الفحص البصري. ملء البالون ببطء مع المالحة حتى يتم تعيين الضغط الانبساطي نهاية (EDP) إلى 15 ملم زئبقي. ضبط حسب الحاجة للحفاظ على EDP ثابت (محدد مسبقا EDP الفسيولوجية). ويمكن تعديل هذا البرنامج وفقا للأهداف التجريبية لكل محقق.
4. أدخل قطب السرعة في الوجه الأمامي للقلب (المسالك البطينية اليمنى). تجنب ثقب الأوعية التاجية. وبمجرد ملاحظة الضرب التلقائي، يبدأ في سرعة 300 نبضة في الدقيقة الواحدة.
5. بعد 10 دقائق من الاستقرار، بدء تسجيل قياس الضغط داخل البطين المستمر. وتعتبر هذه اللحظة بداية مرحلة التكييف والتقييم (الوقت 0) التي سوفتستمر لمدة 1 ح (الشكل 2). قد تكون إعادة التكييف لفترات طويلة، ولكن من المتوقع انخفاض في الانقباض حسب الوقت في جميع القلوب.
6. في بداية إعادة التكييف، جمع النفايات السائلة القلبية إسقاط من أوردة القلب لمدة 5 دقائق لتقييم تدفق التاجي خط الأساس والتحليلات البيوكيميائية. لتروبونين T كرر كل 15 دقيقة (مرات 0، 15، 30، 45 و 60 دقيقة). للتحليلات الأخرى هناك حاجة إلى إضفاء الطابع الفردي على أوقات الجمع (الشكل2).

5. نهاية التجربة

1. إزالة القلب من جهاز Langendorff.
2. باستخدام شفرة فولاذية عالية الكربون مستقيمة (شفرة ميكروتومي أو ما شابه ذلك)، قم بإزالة قاعدة القلب (بما في ذلك الشريان الأبهري والشريان الرئوي).
3. مع البطين الأيمن التي تواجه أسفل، وقطع الشرائح البطينية عرضية من سمك 1-2 ملم. في قسم تمثيلي واحد (عادة الثالث) المكوس البطين الأيمن والمفاجئة تجميد البطين الأيسر. ويمكن استخدام هذه العينة في التحليلات البيوكيميائية.
4. غمر الأقسام المتبقية في لأعدت حديثا 5٪ 2,3,5-تريبنيل-تيترازولويوم كلوريد في المخزن الاحتياطي للفوسفات التجاري المالحة درجة الحموضة 7.4 لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية. الأنسجة القابلة للحياة هي الطوب الأحمر الملون.
5. يغسل مرتين مع الفوسفات العازلة المالحة درجة الحموضة 7.4 وإصلاح مع 10٪ فورمالين في 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها. يغسل مرتين مع الفوسفات المخزنة المالحة الحموضة 7.4 والحفاظ على كل شريحة مغمورة.
6. سحب السائل الزائد والوزن كل شريحة. التقاط الصور الملونة الرقمية لكلا الجانبين. استخدم التحليلات اللامعية لحساب حجم احتشاء النسبة المئوية والصحيح للشريحة والوزن البطيني الكلي. تلوين يتلاشى مع مرور الوقت. يجب التقاط الصور في أقرب وقت ممكن.

6 - تحليلات البيانات

1. حفظ كافة بيانات الضغط في ملف جديد لكل الحيوان.
2. بالنسبة لتحليلات الضغط، حدد ما لا يقل عن 200 دورة ضغط لكل نقطة زمنية. يمكن إجراء التحليلات خارج الخط (بعد الانتهاء من التجربة) باستخدام برامج مخصصة (أي LabChart). وتشمل المعلمات الشائعة المتاحة القلب والأوعية الدموية: أقصى ضغط ولدت، نهاية الضغط الانبساطي، +ديسيبل / dt (المنحدر الأكثر انحدارا خلال الضغط فوق منحنى الضغط، وهو مؤشر على القدرة العقدية البطينية)، -dP / dt (المنحدر الأكثر انحدارا خلال ضربة قاضية من منحنى الضغط، وهو مؤشر على قدرة الاسترخاء البطيني) من بين أمور أخرى.
   ملاحظة: لتحليل التروبونين، من المتوقع زيادة في إطلاق التروبونين عند التسريب. بعد 1 ساعة من التسريب في نظام EVHP، قد تنخفض مستويات التروبونين إلى خط الأساس، مع التشديد على الحاجة إلى توقيت دقيق في جمع ومناولة هذه العينات.

النتائج

بعد التنبيب، ينخفض ضغط الدم بسرعةفي نمط يمكن التنبؤ به (الشكل 3). الوقت المتوقع للموت هو أقل من 5 دقائق.

ويبين الشكل 4 متوسط منحنى الضغط/الوقت في بداية إعادة التكييف بعد 0 و10 و15 دقيقة من معدل الذكاء. سوف تعمل على تحسين وظيفة العقد مع مرور الوقت. وس...

Discussion

يقدم البروتوكول المعروض هنا نموذجًا بسيطًا ومريحًا ومتعدد الاستخدامات لـ DCD القلبي، مما يتيح الفرصة لتقييم التعافي الوظيفي القلبي، وتلف الأنسجة، واستخدام عوامل حماية القلب بعد التكييف لتحسين تعافي المتبرعين القلوب تجاهل خلاف ذلك لزرع. تم تحسين أنظمة التسريب القلبي (EVHP) من الجسم الحي الس...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.9% Sodium Chloride. 1 L bag	Baxter		Electrolyte solution for flushing in the modified Langendorff system.
14 G 2" I.V catheter	Jelco	4098	To act as endotracheal tube.
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride	Milipore-Sigma	T8877	Vital coloration
22 G 1" I.V catheter	BD	383532	I.V catheter with extension tube that facilitates manipulation for carotid catheterization
Adson Dressing Fcp, 4 3/4", Serr	Skalar	50-3147	Additional forceps for tissue manipulation
Alm Self-retaining retractor 4x4 Teeth Blunt 2-3/4"	Skalar	22-9027	Tissue retractor used to maintain the chest open.
Bridge amp	ADinstruments	FE221	Bridge amp for intracarotid blood pressure measurement
Calcium chloride	Milipore-Sigma	C1016	CaCl2 anhydrous, granular, ≤7.0 mm, ≥93.0% Part of the Krebs solution
D-(+)-Glucose	Milipore-Sigma	G8270	D-Glucose ≥99.5% Part of the Krebs solution
DIN(8) to Disposable BP Transducer	ADinstruments	MLAC06	Adapter cable for link between bridge amp and pressure transducer
Disposable BP Transducer (stopcock)	ADinstruments	MLT0670	Pressure transducer for intracarotid blood pressure measurement
dPBS	Gibco	14190-144	Electrolyte solution without calcium or magnesium.
Eye Dressing Fcp, Str, Serr, 4"	Skalar	66-2740	Additional forceps for tissue manipulation
Formalin solution, neutral buffered, 10%	Milipore-Sigma	HT501128	Fixative solution
Heating Pad	Sunbean	756-CN
Heparin sodium 1,000 UI/mL	Sandoz		For systemic anticoagulation
Hydrochloric Acid 36,5 to 38,0%	Fisher scientific	A144-500	Diluted 1:1 for pH correction
Ketamine	Bimeda		Anesthetic. 100 mg/mL
LabChart	ADinstruments		Control software for the Powerlab polygraph, allowing off-line analyses. Version 7, with blood pressure and PV loop modules enabled
Left ventricle pressure balloon	Radnoti	170404	In latex. Size 4.
Lidocaine HCl 2% solution	AstraZeneca		Antiarrhythmic for the cardioplegic solution
Magnesium Chloride ACS	ACP Chemicals	M-0460	MgCl2+6H2O ≥99.0% Part of the Krebs solution
Micro pressure sensor	Radnoti	159905	Micro pressure sensor and amplifier connected to the intraventricular balloon
Pacemaker	Biotronik	Reliaty	Set to generate a pulse each 200 ms for a heart rate of 300 bpm.
pH bench top meter	Fisher scientific	AE150
Physiological monitor	Kent Scientific	Physiosuite	For continuous monitoring of rodent temperature and saturation during the procedure
Plasma-Lyte A	Baxter		Electrolyte solution used as base to prepare cardioplegia
Potassium Chloride	Milipore-Sigma	P4504	KCl ≥99.0% Part of the Krebs solution
Potassium Chloride 2 meq/ml	Hospira		Part of the cardioplegic solution
PowerLab 8/30 Polygraph	ADinstruments		Electronic polygraph
Silk 2-0	Ethicon	A305H	Suture material for Langendorff apparatus
Silk 5-0	Ethicon	A302H	Suture material for carotid
Small animal anesthesia workstation	Hallowell EMC	000A2770	Small animal ventilator
Sodium bicarbonate	Milipore-Sigma	S5761	NaHCO3 ≥99.5% Part of the Krebs solution
Sodium Chloride	Milipore-Sigma	S7653	NaCl ≥99.5% Part of the Krebs solution
Sodium Hydroxide pellets	ACP chemicals	S3700	Diluted to 5 N (10 g in 50 mL) for pH correction
Sodium phosphate monobasic	Milipore-Sigma	S0751	NaH2PO4 ≥99.0% Part of the Krebs solution
Stevens Tenotomy Sciss, Str, Delicate, SH/SH, 4 1/2"	Skalar	22-1240	Small scisors for atria and cava vein opening
Tissue slicer blades	Thomas scientific	6727C18	Straight carbon steel blades for tissue slicing at the end of the protocol
Tuberculin safety syringe with needle 25 G 5/8"	CardinalHealth	8881511235	For heparin injection
Veterinary General Surgery Set	Skalar	98-1275	Surgery instruments including disection scisors and mosquito clamps
Veterinary Micro Set	Skalar	98-1311	Surgery instruments with microscisors used for carotid artery opening
Working Heart Rat/Guinea Pig/Rabbit system	Radnoti	120101BEZ	Modular working heart system modified for the needs of the protocol. Includes all the necesary tubbing, water jacketed reservoirs and valves, including 2 and 3 way stop cock
Xylazine	Bayer		Sedative. 20 mg/mL