في تقييم فيفو الضامة السنخيه افيروسيتوسيس بعد التعرض للأوزون

Summary

تصف هذه المخطوطة بروتوكولا لتحديد ما إذا كان التعرض للأوزون ، وهو معيار من ملوثات الهواء ، يضعف الضامة السنخيه الافيروسيتوسيسه في الجسم المجري. يستخدم هذا البروتوكول الكواشف والتقنيات المستخدمة بشكل شائع ويمكن تكييفها مع نماذج متعددة من الإصابات الرئوية لتحديد الآثار علي افيروسيتوسيس الضامة السنخيه.

Abstract

الأوزون (O₃) هو معيار ملوث الهواء الذي يفاقم ويزيد من حدوث الامراض الرئوية المزمنة. ومن المعروف O₃ التعرض للحث علي التهاب رئوي ، ولكن يعرف القليل بشان كيفيه التعرض يغير العمليات الهامه لحل التهاب. افيروسيتوسيس هو عمليه القرار ، حيث الضامة الخلايا ابوتوتيك. الغرض من هذا البروتوكول هو قياس الضامة السنخيه افيروسيتوسيس بعد O₃-الناجمة عن أصابه الرئة والتهاب. وقد وصفت عده طرق لقياس الافيروسيتوسيس ؛ ومع ذلك ، معظم تتطلب التلاعب السابقين الجسم الآخر. وصفت بالتفصيل هنا هو بروتوكول لقياس في الجسم الضام السنخيه افيروسيتوسيس 24 ح بعد O₃ التعرض ، الذي يتجنب التلاعب الجسم السابق من الضامة وبمثابه تقنيه بسيطه التي يمكن استخدامها لتمثيل بدقه الاضطرابات في عمليه الحل هذه. البروتوكول هو طريقه غير مكثفه من الناحية الفنية وغير مكلفه نسبيا التي تنطوي علي الجسم كله O₃ استنشاق متبوعا بلعوم الطموح من الخلايا ابوتوتيك (اي خلايا T jurkat) بينما تحت التخدير العام. ثم يقاس افيروسيتوسيس الضامة السنخيه بتقييم المجهري الخفيفة من الضامة التي تم جمعها من غسل البرونزية (BAL). يتم قياس افيروسيتوسيس أخيرا عن طريق حساب مؤشر افيروسيتيك. وبشكل جماعي ، فان الطرق المبينة تحدد النشاط افيروسيتيك في الرئة في الجسم المجري بينما تعمل أيضا علي تحليل الآثار الصحية السلبية لل O₃ أو الشتائم المستنشقة الأخرى.

Introduction

تتعرض الرئة باستمرار إلى الإهانات البيئية ، بما في ذلك الجسيمات الهوائية ، والفيروسات ، والبكتيريا ، والغازات المؤكسدة التي تؤدي إلى التهاب رئوي^1،2،3. هذه الإهانات يمكن ان تضر تبادل الغاز والحث^{علي أصابه الانسجه لا رجعه فيه 4,5}. الضامة السنخيه ، التي تشكل حوالي 95 ٪ من الخلايا المناعية الموجودة في murine والرئتين البشرية في التوازن ، هي المنظمين الحرجة من التهاب رئوي بعد الإهانات البيئية^{1،2، 3،4،5}. الضامة السنخيه ضرورية خلال الدفاع المضيف عن طريق التخدير والقضاء علي مسببات الامراض. في الاونه الاخيره ، وقد ثبت الضامة السنخيه لتعزيز التوازن الانسجه وحل التهاب من خلال افيروسيتوسيس^6،7. افيروسيتوسيس هو عمليه الفاجريه التي تبتلع الضامة والقضاء علي خلايا ابوتوتيك^8،9،10. افيروسيتوسيس أيضا نتائج في إنتاج وسطاء (اي ، آيل-10 ، tgf-β ، pge₂، وأكسيد النيتريك) التي تزيد من زيادة العملية ، مما ادي إلى حل التهابات^{9،10،11 و12و16و18}. هذه العملية ضرورية لمنع النخر الثانوي وتعزيز التوازن الانسجه^12,13,14. وقد ربطت العديد من الدراسات ضعف الافيروسيتوسيس مع مختلف امراض الرئة المزمنة, بما في ذلك الربو, مرض الانسداد الرئوي المزمن, والتليف الرئوي مجهول العلة^{8,9,15, 16و17}.

O₃ هو معيار الملوثات الجوية التي تفاقم ويزيد من الاصابه بامراض الرئة المزمنة^19،20،21. O₃ يستحث التهاب الرئة والاصابه ، ومن المعروف ان يضعف الضامة السنخيه من مسببات الامراض البكتيرية^22،23. ومع ذلك ، فمن غير المعروف ما إذا كان O₃ يضعف الضامة السنخيه افيروسيتوسيس. التحقيق O₃-التي يسببها التعديلات في افيروسيتوسيس الضامة السنخيه سوف توفر البصيرة المحتملة في كيفيه التعرض يمكن ان يؤدي إلى حدوث امراض الرئة المزمنة وتفاقم. ويرد أدناه طريقه بسيطه لتقييم الضامة السنخيه افيروسيتوسيس في رئتي الفئران الإناث بعد التعرض الحاد O₃ .

الأسلوب المبينة posseses العديد من المزايا علي بروتوكولات افيروسيتوسيس الأخرى التي يشيع استخدامها في الميدان عن طريق القضاء علي استخدام الاصباغ الفلورية مكلفه, قياسات تدفق واسعه النطاق الخلوي, والتلاعب السابقة الجسم الضام من السنخيه^{24 ،25}. بالاضافه إلى ذلك ، يقيس هذا البروتوكول افيروسيتوسيس الضامة السنخيه في سياق البيئة المجهرية الرئة ، والتي يمكن ان تؤثر علي وظيفة الضامة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

وقد تمت الموافقة علي جميع الأساليب من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانية (IACUC) من جامعه ولاية كارولينا الشرقية.

1-الأوزون (O₃) والتعرض للهواء المصفي (اليوم الأول)

1. وضع حد اقصي 12 الإناث C57BL/6J الفئران ، 8-12 أسابيع من العمر ، في قفص من الصلب (مع 12 مقصورات منفصلة) مع الاغطيه شبكه سلكيه في O₃ غرفه التعرض.
2. وضع ميزان الحرارة في غرفه التعرض مع القفص لتسجيل بدقه درجه الحرارة والرطوبة.
3. تشغيل الأكسجين والاشعه فوق البنفسجية (UV) الخفيفة التي تعلق علي الجهاز.
   ملاحظه: تدفق الهواء المنظم (ال> 30 تغيرات جوية/ساعة) مع درجه الحرارة التي تسيطر عليها (22-23 درجه مئوية) والرطوبة النسبية (45 ٪-50 ٪) يتم الحصول عليها من قبل جهاز O₃ . O₃ يتم إنشاؤها من قبل النظام في غرفه التعرض عن طريق توجيه 100 ٪ الأكسجين من خلال مولد ضوء الاشعه فوق البنفسجية ، ثم خلط مع إمدادات الهواء المصفاة.
4. ضبط O₃ تركيز إلى 1 جزء في المليون وتسجيل بانتظام o₃ مستويات كل 10 دقيقه ل 3 ح. مراقبه باستمرار درجه الحرارة والرطوبة من الهواء الغرفة ، كما هو O₃ تركيز مع ضوء الاشعه فوق البنفسجية الضوئية.
   ملاحظه: يتم تنفيذ التعرض للهواء المصفاة في جهاز مماثل ، مع إمدادات الهواء المصفاة فقط تتدفق من خلال غرفه التعرض.
5. أعاده الكائنات إلى أقفاص الخاصة بهم مع الفراش ، والغذاء ، والماء الإعلان حسب بعد 3 ساعات من O₃/تصفيه التعرض للهواء.

2-اعداد الخط الخلوي للخلايا التائية (اليوم الثاني)

ملاحظه: يجب ان تجري جميع الإجراءات في مجلس الوزراء السلامة البيولوجية من الدرجة الثانية.

1. الثقافة Jurkat T الخلايا في 24 مل من الخلايا القاعدية الثقافة المتوسطة + 10 ٪ من البنسلين + 5 ٪ البنسيلين/ستربتوميسين في 37 درجه مئوية + 5 ٪ CO₂ (جدول المواد). الخلايا التائية هي خط الخلية المعلقة التي يمكن الحفاظ عليها من خلال المرور 1:6-1:8 في وسائل الاعلام قبل تسخينها الوسائط كل 3 أيام. لا تهز.
2. لاعداد الخلايا ابوتوتيك ، تنمو لهم 90 ٪ كونفلوينسي في كل قارورة (الذي يستغرق 3-4 يوما لتحقيق بعد المرور). لهذه الدراسة ، استخدم الخلايا من خمسه T75 قوارير للحصول علي عدد كاف من الخلايا المستخدمة في هذا البروتوكول.
   ملاحظه: تحتوي قارورة متموج علي حوالي 20-24 مليون خليه.
3. ماصه الخلايا (التي هي القارورة بأكملها) من كل قارورة (حوالي 24 مل) ونقل الخلايا إلى أنبوب المخروطية معقمه 50 mL باستخدام ماصه المصلية. استخدام أنابيب مخروطيه متعددة لقوارير متعددة.
4. عد الخلايا عن طريق أزاله 11 μl قسامه من الخلايا من أنبوب مخروطي 50 mL وتخلط مع 11 μl من تريلون الأزرق وصمه عار وماصه 11 μl علي الشرائح مقياس القولون.
5. ادراج شريحة في عداد الخلية الألى وتسجيل عدد من الخلايا الحية لحساب إجمالي عدد الخلايا في كل قارورة عن طريق ضرب عدد من الخلايا الحية بنسبه 24 ، كما تحتوي كل قارورة 24 مل من وسائل الاعلام.
6. الطرد المركزي تعليق الخلية في 271 x ز ل 5 دقيقه في درجه حرارة الغرفة (RT) إلى خلايا بيليه.
7. تجاهل ماده طافي عن طريق الطموح وأعاده تعليق بيليه الخلية في وسائل الاعلام للحصول علي 3.0 x 10⁶ خلايا لكل مل.
8. Aliquot 5 مل من الخلايا في 100 مم × 20 ملم الانسجه ثقافة النسيج (سيتم استخدام ما يقرب من تسعه اطباق; المبلغ الإجمالي للخلايا في كل طبق يجب ان يكون ~ 15 × 10⁶).
9. استخدام طبق واحد للسيطرة/غير مكشوف ، وسوف يتعرض الاطباق المتبقية للاشعه فوق البنفسجية.
10. تعيين الرابط الاشعه فوق البنفسجية إلى مستوي الطاقة الصحيح ، اضغط علي زر الطاقة ، وادخل "600" باستخدام لوحه الأرقام ، والتي سيقرا الجهاز كما 600 μJ/سم² × 100.
    ملاحظه: وحدات الطاقة المتداخلة UV في μJ/cm² x 100; ولذلك ، لتحقيق 60 ميليجوليس/سم²، تحويل وحدات لتتناسب مع crosslinker الاشعه فوق البنفسجية.
11. تشع جميع الاطباق مع الخلايا ، وليس بما في ذلك السيطرة ، في 60 ميليجولز (mJ)/سم² باستخدام الرابط فوق البنفسجية. أزاله الغطاء العلوي من الاطباق ثقافة الانسجه اثناء التعرض للاشعه فوق البنفسجية ، كما ضوء الاشعه فوق البنفسجية لن تخترق الغطاء البلاستيكي.
12. احتضان جميع الاطباق في حاضنه ثقافة الخلية ، بما في ذلك السيطرة غير المكشوفة ، في 37 درجه مئوية في 5 ٪ CO₂ لمده 4 ساعات.
13. تاكيد موت الخلايا المبرمج عن طريق تدفق الخلوي باستخدام الكشف عن الفحص المبرمج الذي يحتوي علي الملحق V و بروبيديوم يوديد (PI) (علامات للمبرمج ونخر ، علي التوالي) بعد 4 ح من الحضانة ، في تعليمات الشركة المصنعة^{26، 27}-
    ملاحظه: الاشعه المشعة الخلايا T في الخلية المتقاطعة للاشعه فوق البنفسجية في مستوي الطاقة من 600 μJ/سم²، بعد الحاضنة 4 ح سوف يؤدي إلى ≥ 75 ٪ من ابوتوتيك (علي حد سواء في وقت مبكر ومتاخر) الخلايا وجود النمط الظاهري ابوتوتيك أكثر من أواخر النمط الظاهري. وهذا يجعل من السهل علي الضامة السنخيه للتعرف عليها وابتلاع كما اغشيها غير قابله للاختراق, علي عكس الخلايا المتاخره ابوتوتيك, مما يؤدي إلى مؤشر افيروسيتيك اعلي والتصوير أكثر دقه من الضامة السنخيه افيروسيتوسيس في هذه الدراسة.
    1. تجمع 333 μL (1 × 10⁶ خلايا) من الخلايا التائية من العديد من الاطباق (علي حد سواء "لا الاشعه فوق البنفسجية" و "الاشعه فوق البنفسجية مكشوفة") معا لاستخدامها لأنابيب تحليل التعويض.
    2. Aliquot 333 μL من الخلايا T Jurkat في غير ملون ، المرفق في الخامس وصمه عار واحده ، PI وصمه عار واحده ، لا الاشعه فوق البنفسجية التحكم ، و 600 μJ/سم² UV-مكشوف المسمي تدفق أنابيب الخلوية.
    3. أنابيب الطرد المركزي في 188 x ز لمده 5 دقائق في RT وصب supernatant.
    4. غسل الخلايا عن طريق أعاده تعليق في 500 μL من البرد ، 1x الفوسفات-مخزنه المالحة (تلفزيوني).
    5. أجهزه الطرد المركزي والخلايا بيليه في 188 x ز لمده 5 دقائق في RT. تجاهل سوبرناتنت بعد طرد.
    6. اعداد 400 μL من 1x العازلة ملزمه لكل أنبوب تدفق عن طريق تمييع 10x ملزمه العازلة مع الماء المقطر في حين ان الخلايا يطرد.
    7. اعداد الضم في V و PI كاشف الحاضنة (100 μL لكل عينه/أنبوب) في تعليمات الشركة المصنعة.
    8. Decant علي ماده طافي بعد طرد وبلطف أعاده تعليق جميع الأنابيب في 400 μl من 1x العازلة ملزمه ، ثم أضافه 100 μl من المرفق الخامس الحاضنة كاشف لكل أنبوب عينه. وأخيرا ، أضافه 100 μL من الملحق الخامس وصمه عار واحده و PI وصمه عار واحده لأنابيب كل منهما ، ولكن لا تضيف اي شيء ابعد من 1x العازلة ملزمه للأنبوب غير ملون.
    9. احتضان الأنابيب في الظلام لمده 15 دقيقه في RT.
    10. الطرد المركزي جميع الخلايا في 188 x ز لمده 5 دقائق في RT والفائقة صب.
    11. أعاده التوقف المرحلي الخلايا في 400 μL من المخزن المؤقت للربط 1x ، ثم تحليل عينات للخلايا المبرمج عن طريق تدفق الخلوية. جمع ما لا يقل عن 10,000 الاحداث لكل أنبوب للسماح تمثيل دقيق لتلطيخ.
14. الجمع بين جميع الخلايا المشعة من الاطباق إلى أنبوب مخروطي 50 mL والخلايا بيليه بطرد في 271 x ز لمده 5 دقائق في RT.
15. تجاهل ماده طافي من الأنبوب عن طريق الطموح وأعاده التعليق الخلايا في 24 مل من الفوسفات معقمه مخزنه المالحة (تلفزيوني) والخلايا بيليه بطرد في 271 x ز ل 5 دقيقه في درجه حرارة الغرفة.
16. تجاهل ماده طافي من الأنبوب عن طريق الطموح وأعاده تعليق الخلايا في كميه من القناات التلفزيونية المستخدمة للجرعات الفئران التي وافقت عليها iacuc. الجرعة المستخدمة بين 5-10 × 10⁶ خلايا/50 μl لكل ماوس; لذلك ، ل 10 الفئران ، أعاده التعليق في 500 μL (عدد الخلايا في كل جرعه يختلف اعتمادا علي كيفيه العديد من الخلايا المستزرعة للإشعاع).
    ملاحظه: ماكياج علي الأقل جرعتين إضافيتين لحساب اي سائل قد تلتصق بجانبي طرف الماصة مما يؤدي إلى فقدان الخلايا.

3. murine بلعوم تقطير خلايا ابوتوتيك (اليوم 2)

1. اعداد جرعات من الخلايا ابوتوتيك باستخدام ماصه P200 قبل تخدير الفئران لتسريع الاجراء. وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية ، يتم استخدام حجم 50 μL يحتوي علي حوالي 5-10 x 10⁶ خلايا لبلعوم (منطوق) تقطير لضمان أفضل النتائج.
2. تخدير الفئران في غرفه واضحة مع 2 ٪ ايزوفلواني بمعدل تدفق 1 لتر/دقيقه أو وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية. تخدير واحد إلى اثنين من الفئران في كل مره. يتم تحديد الرقم بمستوي الراحة لمجرب. مراقبه نمط التنفس وتاكيد الأنفاس العميقة مرئية مع 2-3 ليالي التهم بين الأنفاس. التحقق من عمق التخدير بسبب عدم وجود استجابه لقرصه اصبع القدم.
3. وضع الماوس في موقف ضعيف شبه recumbent. استخدام سلسله الجراحية تعادل بين أوتاد علي لوحه مائله الأكريليك ورقه لتعليق من قبل القواطع الفك العلوي.
4. باستخدام زوج من الملقط غير الحاد غير المثبت ، وانتزاع بخفه وسحب اللسان الماوس. غرس الخلايا ابوتوتيك في تجويف الفم مع ماصه P200. الجرعات ناجحه عندما الفئران جعل الضوضاء طقطقه 1 – 2 ق بعد إعطاء الجرعة.
   ملاحظه: رعاية لتجنب حمل الصدمة اما إلى اللسان أو بلعوم قبل تقطير الخلية ابوتوتيك.
5. مع اصبع القفاز ، ومنع بلطف الأنف حتى يستنشق الماوس في حين تراجع اللسان. تغطيه الأنف حتى لا يكون السائل مرئيا في تجويف الفم والماوس قد اتخذت اثنين أو أكثر من الاستنشاق.
   ملاحظه: كما الفئران هي التي تلزم الأنف التنفس ، وتغطي الأنف يساعد علي ضمان ان الماوس سوف يستنشق الخلايا ابوتوتيك في الرئتين.
6. أزاله الماوس من مجلس التلقيح والعودة إلى القفص للسماح الانتعاش من التخدير. ضع الماوس علي ظهره لمنع الفراش أو الحطام من عرقله فتحتي خلال revovery.
7. الانتظار 90 دقيقه بعد الماوس يتعافى من التخدير للسماح الضامة السنخيه لابتلاع تدفق الخلايا ابوتوتيك بعد كل الفئران قد استيقظت من التخدير. عاده ، الصحوة بعد التخدير سوف يستغرق 1-2 دقيقه ، والتي لا ينبغي ان تؤثر علي نتيجة/توقيت تقطير.

4-جمع السوائل القصبية ومعالجتها (اليوم الثاني)

1. موت ببطء كل الماوس لكل المبادئ التوجيهية المؤسسية 90 دقيقه بعد الماوس قد استيقظ من التخدير من الجرعات مع الخلايا ابوتوتيك. هنا ، يتم استخدام حقنه مميته من الكيتامين و اكسيليازين (90 ملغم/كغ و 10 ملغم/كغم ، علي التوالي) متبوعه باستئصال الحجاب الحاجز.
   ملاحظه: هذه النقطة الزمنيه يسمح الوقت الكافي ل الضامة السنخيه للشعور وابتلاع الخلايا ابوتوتيك³⁸.
2. تزن جميع الفئران (ز) علي مقياس وسجل الأوزان. استخدام وزن الجسم لحساب حجم BAL (26.25 mL/kg وزن الجسم).
3. وضع الفئران علي ظهورهم ورذاذ 70 ٪ الايثانول لتعقيم منطقه الصدر والرقبة.
4. جعل 2 "قطع طوليه فقط تحت القص علي طول الجانب البطني بأكمله مع مقص الجراحية ، واثناء عقد القص مع ملقط ، نك الحجاب الحاجز للسماح للرئتين بالسقوط مره أخرى في تجويف الصدر.
5. قطع جانبيا علي طول الجانبين من القفص الصدري للسماح للرئتين مساحة أكبر لتوسيع عندما lavaging ، ثم اضعاف تجويف الصدر مره أخرى مع ملقط.
6. جعل 1 "قطع عمودي علي طول الاوعيه الدموية من خلال الرقبة لفضح القصبة الهوائية.
7. استخدم ملقطين لسحب العضلات والانسجه من القصبة الهوائية وفضحها. تجنب النزيف المحتمل اضافيه وقطع القصبة الهوائية ، لأنه محاط بالاوعيه الدموية ، والعضلات الطولية ، والنسيج الضام.
8. استخدام ابره لجعل فتحه في القصبة الهوائية (حوالي ربع المسافة إلى أسفل من الراس) وادراج قني (18 G x 1.25 ") مع حقنه محمله مسبقا مع 1x تلفزيوني (26.25 ml/kg وزن الجسم ، ~ 0.7-1.0 ml في 8-10 الأسبوع الإناث القديمة C57Bl/6j الماوس) أتحرك في البند hea.
9. دفع حجم من تلفزيوني في الرئتين ببطء للسماح الرئتين لتضخيم ثم ، سحب حجم العودة إلى الحقنه. كرر هذه العملية ما مجموعه 3 مرات.
10. جمع السائل غسل المجمعة من كل ماوس محدده في أنبوب 15 مل.
11. الطرد المركزي غسل البرونزية في 610 x ز ل 6 دقيقه في 4 درجه مئوية وجمع ماده طافي في أنبوب 1.5 mL وتجميد في-80 درجه مئوية. بيليه يمثل الخلايا من الفضاء البرونزي.
12. أزاله خلايا الدم الحمراء المتبقية في السائل BAL التي تم جمعها عن طريق أضافه 1 مل من ACK ربك تحلل العازلة إلى بيليه الخلية ، ثم دوامه جيدا و lyse لمده 1 دقيقه علي الجليد. بعد ذلك ، أضافه 4 مل من تلفزيوني لوقف رد فعل تحلل.
13. الخلايا بيليه بواسطة طرد في 610 x ز ل 6 دقيقه في 4 درجه مئوية ويستنشق ماده طافي مع الشفط فراغ.
14. أعاده التعليق الخلايا في 1 مل من 1x تلفزيوني + 10 ٪ لكل أنبوب عينه BAL. عد الخلايا علي مقياس الكريات الدموية للقياس الكمي لإجمالي خلايا المجال الجوي من كل عينه (لا التريلا الأزرق). الطرد المركزي 120 μL من كل عينه علي الشرائح في 56 x ز لمده 3 دقائق ، وذلك باستخدام التسارع المتوسطة والطارد الخلوي. جفف الشرائح بين عشيه وضحيها.

5. حساب مؤشر افيروسيتيك الضامة السنخيه (اليوم 3)

1. وصمه عار الشرائح مع الهييوكسيلين و يوزين للسماح لحساب كل من افيروسيتيك والفرق الخلايا التفاضلية ، مع ما لا يقل عن 200 خلايا تحسب من كل شريحة.
2. عرض الشرائح تحت اعداد الحقل الساطع علي المجهر البيولوجي (هدف 20x أو 40x سوف تعمل بأفضل).
3. حساب مؤشر افيروسيتيك استنادا إلى نسبه عدد من الضامة السنخيه التي الخلايا التائية الخلوية جوركات T إلى الضامة السنخيه دون امتصاص الخلايا ابوتوتيك من إجمالي 200 الضامة علي شريحة التفاضلية الخلية. تحويل النسبة إلى نسبه مئوية لإدخال البيانات. استخدم المعادلة التالية:

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

O₃ التعرض هو معروف للحث علي التهاب الرئة والاصابه ، ومطلوب افيروسيتوسيس للحفاظ علي التوازن الانسجه. C57BL/6J الفئران الإناث تعرضت لتصفيه الهواء (FA) أو 1 جزء في المليون O₃ لمده 3 ساعات والانحلال 24 ساعة بعد التعرض لفحص التهاب الرئة والاصابه. O أظهرت الفئران₃المكش?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

افيروسيتوسيس هو عمليه مضاده للالتهابات التي الضامة واضحة خلايا ابوتوتيك والحطام ، فضلا عن إنتاج متعددة الوسطاء المضادة للالتهابات^{9،10،11،12،16 ،18}. وقد قدمت نماذج متعددة من افيروسيت?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Annexin V-FITC Kit	Trevigen	4830-250-K	The TACS Annexin V-FITC Kit allows rapid, specific, and quantitative identification of apoptosis in individual cells when using flow cytometry.
BCL2 Jurkat T Cells	ATCC	ATCC CRL-2899	The BCL2 Jurkat cell line was derived by transfecting human Jurkat T cells with the pSFFV-neo mammalian expression vector containing the human BCL-2 ORF insert and a neomycin-resistant gene. Has been for models of measuring efferocytosis.
Countess II Automated Cell Counter	Thermofisher	AMQAX1000	It is a benchtop assay platform equipped with state-of-the-art optics, full autofocus, and image analysis software for rapid assessment of cells in suspension. Very easy to use.
Cytospin 4 Cytocentrifuge	Thermofisher	A78300003	Provides economical thin-layer preparations from any liquid matrix, especially hypocellular fluids such as bronchoalveolar lavage fluid.
Fetal Bovine Serum, qualified, heat inactivated	Thermofisher	16140071	Provides Nutrients to cultured cells for them to grow. It is standard for cell culture.
Kwik-Diff  Reagent 2, Eosin	Thermofisher	9990706	Eosin staining that stains cytoplasm.
Kwik-Diff Reagent 1, Fixative	Thermofisher	9990705	Fixes cells to be stained by H&E.
Kwik-Diff Reagent 3, Methylene Blue	Thermofisher	9990707	Methylene Blue staining that stains the nucleus.
Penicillin-Streptomycin	Sigma/Aldrich	P0781-100ML	Penicillin-Streptomycin is the most commonly used antibiotic solution for culture of mammalian cells. Additionally it is used to maintain sterile conditions during cell culture.
RPMI 1640 Medium, GlutaMAX Supplement	Thermofisher	61870036	RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium) was originally developed to culture human leukemic cells in suspension and as a monolayer. RPMI 1640 medium has since been found suitable for a variety of mammalian cells, including HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocytes, and carcinomas. Helps grow Jurkat T cells fast and efficiently.
Stratagene UV Stratalinker 1800 UV Crosslinker	Cambridge Scientific	16659	The Stratalinker UV crosslinker is designed to induce apoptosis, crosslink DNA or RNA to nylon, nitrocellulose, or nylon-reinforced nitrocellulose membranes.
Teledyne T400 ultraviolet light photometer	Teledyne API	T400	The Model T400 UV Absorption analyzer uses a system based on the Beer-Lambert law for measuring low ranges of ozone in ambient air.
Teledyne T703 Ozone calibrator	Teledyne API	T703	Provides feedback control of the UV lamp intensity, assuring stable ozone output.