لاسلكيه الكهربائية تسجيل الخلايا العصبية من قبل Tetrodes المنقولة في بحريه السباحة الأسماك

Summary

يتم تقديم تقنيه لاسلكيه جديده لتسجيل الإشارات العصبية خارج الخلية من الدماغ من السباحة بحريه ذهبيه. يتكون جهاز التسجيل من اثنين من tetrodes ، ميكرودرايف ، مسجل البيانات العصبية ، وحاله للماء. جميع أجزاء هي مخصصه الصنع باستثناء مسجل البيانات وموصل لها.

Abstract

أليات العصبية التي تحكم سلوك الأسماك لا تزال غير معروفه في معظمها ، علي الرغم من ان الأسماك تشكل غالبيه جميع الفقاريات. القدرة علي تسجيل نشاط الدماغ من الأسماك تتحرك بحريه من شانه ان يدفع البحوث علي الأساس العصبي للسلوك الأسماك إلى حد كبير. وعلاوة علي ذلك ، فان التحكم الدقيق في موقع التسجيل في الدماغ أمر بالغ الاهميه لدراسة النشاط العصبي المنسق عبر المناطق في دماغ السمك. هنا ، نقدم تقنيه التي تسجل لاسلكيا من الدماغ من الأسماك السباحة بحريه في حين السيطرة علي عمق موقع التسجيل. ويستند النظام علي مسجل العصبية المرتبطة بزرع جديده متوافقة مع المياه التي يمكن ضبط موقع التسجيل بواسطة tetrodes التي تسيطر عليها microdrive. وتتجلى قدرات النظام من خلال تسجيلات من الدماغ الذهبي.

Introduction

الأسماك هي المجموعة الأكبر والأكثر تنوعا من الفقاريات ، ومثل الفقاريات الأخرى انها تظهر القدرات المعرفية المعقدة مثل التنقل ، والتنشئة الجماعية ، والنوم ، والصيد ، الخ. ومع ذلك ، تبقي أليات العصبية التي تحكم سلوك الأسماك بالنسبة للجزء الأكبر غير معروف.

في العقود القليلة الماضية ، تم تنفيذ التسجيلات خارج الخلية من الأسماك المعباه في المقام الأول للتحقيق في جوانب مختلفه من الأساس العصبي للسلوك^1،2. علي الرغم من ان هذا الأسلوب هو المناسب لبعض النظم الحسية ، والتحقيق في الطيف الكامل للأساس العصبي للسلوك من الصعب ان لم يكن من المستحيل في الحيوانية المعباه. وشملت التطورات الاولي تسجيل من الخلايا mauthner من السباحة المربوطة الأسماك^3,4. مهما, [موتنر] خلايا بشكل غير متناسب كبيره وال يسجل عمل احتمال اتساع, اي يستطيع ذهبت مثل عال بما ان قليل من [مف], يسهل تسجيل. وفي وقت لاحق ، وصف كانفيلد وآخرون دليلا علي المفهوم عند استخدام الحيوانية المربوطة لتسجيل من الدماغ الدماغي من الأسماك⁵. آخر تقنيه حديثه لتسجيل النشاط العصبي من الأسماك هو تصوير الكالسيوم (راجع التعليقات من قبل Orger و de Polavieja⁶، و Vanwalleghem et al.⁷). تم تطوير هذه التقنية للاستخدام مع اليرقات الزكية لان الجلد والجمجمة شفافة خلال مرحله اليرقات. ومع ذلك ، لا يمكن استخدام هذه التقنية لدراسة السلوكيات المعقدة في مراحل لاحقه من التطوير.

هنا ، نقدم تقنيه جديده لتسجيل النشاط العصبي خارج الخلية من أدمغه اسماك السباحة بحريه. وهذه صيغه معدله للبروتوكول الموصوف في فينيبينسكي وآخرون⁸. الابتكار الرئيسي هو أضافه microdrive الذي يجعل من الممكن للسيطرة علي موقف الأقطاب بعد الجراحة. تم تصميم هذه التقنية للتسجيل من الدماغ من السمك الذهبي باستخدام مجموعه من tetrodes التي ترتبط بمسجل البيانات العصبية عبر microdrive. الاعداد بأكمله هو لاسلكيه والراسية إلى جمجمة السمكة. الوزن النوعي للنظام يعادل الوزن الخاص بالماء عن طريق أضافه تعويم صغير يسمح للأسماك بالسباحة بحريه.

وتستند هذه التقنية علي استخدام مسجل البيانات العصبية التي تضخيم ، digitizes ، ويخزن الاشاره في جهاز الذاكرة علي متن الطائرة. يتم استخدام نظام القياس عن بعد المسجل لبدء ووقف التسجيلات ، وللمزامنة مع كاميرا الفيديو. في هذا البروتوكول ، يتم استخدام مسجل العصبية 16 قناه ، وجزءا لا يتجزا من مربع للماء مع ميكرودرايف.

يتم تصنيع التجمع microdrive من اثنين من المكونات الرئيسية: microdrive نفسها والإسكان microdrive (الشكل 1ا ، ب). السكن يحمل microdrive و tetrodes ، وأيضا بمثابه مرساه بين الجمجمة وصندوق المسجل (الشكل 1ج). هو ملفقه مربع المسجل PVC باستخدام عمليه اله ومختومه باستخدام O-حلقه (الشكل 1E-G، انظر أيضا الشكل التكميلي 1، الشكل التكميلي 2، والشكل التكميلي 3 لرسم تخطيطي ثلاثي الابعاد [3d]). في نهاية واحده ، يتم إرفاق قطعه من رغوة البوليسترين إلى مربع المسجل للتعويض عن وزن الزرع وتوفير الأسماك مع زرع الطفو محايده. بناء microdrive الموصوفة في البروتوكول يتبع الاجراء الذي قدمه Vandecasteele et al.⁹ مع تعديل لإرفاق microdrive إلى السكن (الشكل 1ا). وتقدم جميع الخطوات الرئيسية.

والاجراء الموصوف في البروتوكول لاعداد جمجمة السمكة مماثل للاجراء الوارد في فينيبينسكي وآخرون⁸ ويرد وصفه بإيجاز في البروتوكول. بعد يوم واحد من الجراحة ، يتم استرداد الأسماك بشكل كامل من اثار التخدير وتكون جاهزه للتجارب السلوكية. لاحظ انه يمكن تعديل الموقع تيركب عن طريق تحويل المسمار microdrive. المسمار لديه تباعد من 300 μm لكل دوران كامل والتقدم من 75 μm ينصح حتى يتم الوصول إلى موقع الدماغ المستهدف. وينبغي استشاره أطلس الدماغ المناسبة لاستهداف منطقه الدماغ محدده من الفائدة. فانه من المستحسن لاختبار معاوقه القطب في كل مره يتم تخدير الأسماك للبطارية أو استبدال بطاقة الذاكرة.

Protocol

يجب ان تتم الموافقة علي جميع إجراءات الجراحة من قبل لجان الأخلاق المحلية بشان رعاية الماشية (مثل IACUC).

1. بناء المساكن الميكرودرايف

1. لبناء المساكن ، وقطع 1 مم لوحه نحاسية واسعه في 19 مم × 29 مم × 1 ملم لوحه باستخدام منشار. قطع اثنين من الشقوق 5.5 ملم علي كل من الجانبين طويلة عمودي علي الحافة ، مثل ان كل شق هو 6.5 ملم بعيدا عن الجانبين الضيقة (الشكل 2ا).
2. باستخدام كماشة ، اضعاف المنطقة بين الشقوق علي الجانبين طويلة إلى الداخل ، ثم اضعاف الجزء السفلي الداخل والجانب العلوي إلى الخارج للحصول علي السكن (الشكل 2ب ، ج).
3. باستخدام بت مثقاب 3 ملم ، وجعل ثقوب لمسامير في الإسكان microdrive.
   ملاحظه: سيتم استخدام هذه الثقوب في وقت لاحق لإرفاق السكن إلى مربع المسجل (الشكل 2د).
4. لحام الجانبين من السكن.
5. باستخدام ملف دائري غرامه ، وتوليد صغيره ، 1.5 ملم في نصف قطرها ، وشق نصف دائري في الجزء السفلي من السكن (الشكل 2ه).
   ملاحظه: سيتم استخدام هذا في وقت لاحق لادراج أنبوب الفولاذ المقاوم للصدا لتوجيه الأقطاب الكهربائية.
6. استخدام مثقاب 1 ملم لجعل ثقب في الجزء الخلفي من السكن لل tetrodes (الشكل 2و).
   ملاحظه: تم العثور علي نموذج ثلاثي الابعاد للسكن في ملف السكن التكميلي. stl.

2. بناء ميكرودرايف

1. باستخدام القاطع ، وقطع قطعه ثلاثه دبوس من صف واحد الذكور راس دبوس قطاع (الشكل 1ح). باستخدام كماشة ، وسحب دبوس الأوسط.
2. باستخدام قطع ، وقطع الدبابيس المتبقية إلى 10 ملم في الطول (2 ملم اقل من طول المسمار). احتمال آخر هو استخدام المسمار أطول (انظر الخطوة 2.4).
3. حفر حفره باستخدام مثقاب ال#65 من خلال ثقب دبوس الأوسط. حفر مؤشر ترابط باستخدام الصنبور 00 − 99.
4. تجميع microdrive وألواح النحاسية (7.5 مم × 2.5 مم × 0.6 مم ، راجع الشكل التكميلي 4) بحيث تلامس اللوحات النحاسية الدبابيس. ادراج المسمار (#00-90 رئيس جولة ، 12 ملم ، والنحاس) من خلال لوحه النحاس الأول ، ثم من خلال الموضوع راس دبوس ولوحه النحاس الثاني. وأخيرا ، ضع الجوز علي المسمار وتشديد بلطف علي microdrive تجميعها.
5. لحام دبابيس مع لوحات من النحاس الأصفر ، والجوز مع غيض من المسمار.
6. جندي ميكرودرايف في السكن microdrive في أربع نقاط علي جانبي لوحات النحاس microdrive.
7. قطع أنبوب الفولاذ المقاوم للصدا واحد 6 ملم طويلة مع القطر الداخلي من 1.5 مم واخر أنبوب الفولاذ المقاوم للصدا 3 ملم طويلة مع القطر الداخلي من 1.2 مم. البولندية نهايات الأنابيب لتجنب نهايات حاده.
8. الغراء أنبوب طويل مم 6 إلى شق نصف دائري صغير في الجزء السفلي من الإسكان microdrive باستخدام الايبوكسي. الغراء 3 مم الفولاذ المقاوم للصدا طويلة إلى راس دبوس ، اصطف مع أنبوب 6 ملم طويلة علي السكن.
9. قطع قطعتين أنبوب سيليكون طويلة 5 سم مع قطر 0.64 ملم وأنبوب بوليميد طويلة واحده 5 سم مع قطر 0.250 مم.
10. ادراج الأنابيب الثلاثة في أنابيب الفولاذ المقاوم للصدا اثنين. الغراء الأنابيب إلى أنبوب الفولاذ المقاوم للصدا تعلق علي راس دبوس باستخدام الغراء سيانوكريلات. برغي المحرك الصغير علي طول الطريق حتى وقطع الأنابيب الزائدة من اعلي وأسفل أنابيب الصلب اثنين.
    ملاحظه: القرص الصغير مع السكن جاهز الآن للاستخدام (الشكل 1ج).

3. اعداد صفيف التيرود

1. لتلفيق زرع اثنين من tetrode مع أربعه أقطاب علي كل tetrode ، واعداد ثمانيه أسلاك ، كل 12 سم طويل ، Formvar معزولة ، من 25 ميكرون قطرها أسلاك التنغستن.
   ملاحظه: نفس التصميم يمكن ان تستوعب أربعه tetrodes.
2. وضع حامل للوحه واجهه القطب الكهربائي 16 قناه (بنك الامارات المتوسط-16) PCB (انظر جدول المواد) تحت المجهر.
3. باستخدام ملقط لينه يميل وأخف وزنا ، وأزاله طلاء قباله كل من الأسلاك الثمانية علي جانب واحد باستخدام اللهب.
   ملاحظه: هذا هو لضمان ان السلك سوف تكون متصلة بشكل صحيح إلى موصل PCB في وقت لاحق.
4. دفع سلك في واحده من الثقوب في بنك الامارات المصرفية-16 مع الجانب المغلفة في الحفرة. ضع دبوس واضغط عليه باستخدام كماشة. تحقق من الاتصال عن طريق قياس المقاومة بين دبوس والجانب غير المصقول من السلك.
   ملاحظه: المقاومة علي ترتيب عشرات أوم.
5. كرر الخطوة 3.4 مع كل ثمانيه أسلاك.
6. الشريط مجموعتين من أربعه أسلاك معا باستخدام شريط لاصق في نهاية كل سلك.
   ملاحظه: سيتم لصق كل مجموعه معا في وقت لاحق لتشكيل تيركب.
7. قطع قطعه واحده من الأسلاك التنغستن 12 سم طويلة مع قطر 50 μm. قم بتوصيله بأحدي اتصالات بنك الامارات المفتوحة 16.
   ملاحظه: هذا السلك سيكون بمثابه القطب المرجعي.
8. قطع اثنين من الأسلاك الفضية العارية 12 سم طويلة مع قطر 75 μm التي ستكون بمثابه أسباب للتسجيل مسجل. حام السلكين إلى الاتصال الأرضي في بنك الامارات المتوسط-16.
9. عقد المصرف الكتروني للاستثمار-16 أعلاه جهاز تحول الميكانيكية ووضع نهاية شريط لاصق من مجموعه واحده من أربعه أسلاك علي جهاز ضبط بمحركات. تطبيق 130 جولات في اتجاه عقارب الدورة تليها 20 تناوب عكس اتجاه عقارب الدقيقة. تطبيق الغراء سيانوكريلات لتغطيه التيرود.
10. انتظر الغراء لعلاج. اقطع الشريط اللاصق
11. كرر الخطوات 3.9 و 3.10 مع التيركب الثاني.
    ملاحظه: ينتج هذا الانتهاء من صفيف اثنين-tetrode (الشكل 1D).

4. تجميع الزرع

1. برغي المحرك الصغير علي طول الطريق إلى أسفل.
2. باستخدام 1 × 3 متر فيليبس جولة مسامير الراس ، ونعلق علي المصرف الخاص-16 إلى لوحه PVC.
3. باستخدام ملاقط نهاية لينه ، وسحب كل tetrodes والأسلاك من خلال ثقب في الجبهة من غطاء مربع المسجل.
4. باستخدام 2 × 6 متر فيليبس مسامير الراس المسطحة ، ونعلق لوحه PVC إلى غطاء مربع المسجل. الحفاظ علي موصل بنك الامارات المتوسط-16 في الاتجاه الصحيح بحيث يمكن تركيبها علي المسجل في بنك الصحة العام-16. تاكد من ان مصرف الامارات-16 ثابت في مكانه لتجنب التحف المتحركة في الاشاره المسجلة.
5. ختم الأسلاك إلى مربع باستخدام الايبوكسي. تطبيق اقل قدر ممكن لان الختم الأساسي سيتم عن طريق درجه حرارة الغرفة مبركن (تليفزيون) في وقت لاحق.
6. نعلق الإسكان microdrive إلى غطاء مربع المسجل باستخدام مسامير 2 مم.
7. الموضوع tetrodes وجميع الأسلاك من خلال ثقب في الظهر من الإسكان microdrive. الموضوع tetrodes من خلال أنابيب السيليكون اثنين في microdrive. الموضوع الأسلاك التنغستن 50 μm من خلال أنبوب بوليميد في microdrive.
8. الغراء tetrodes والأسلاك إلى أنابيبها عن طريق تطبيق الغراء سيانوكريلات إلى الطرف العلوي من الأنابيب ، لضمان الحركة يتسق مع microdrive. برغي المحرك الصغير علي طول الطريق إلى الأعلى.
9. تطبيق النفط الناعمة (انظر جدول المواد) علي التيرود المكشوفة والأسلاك داخل الإسكان microdrive لمنع الحركة.
10. قطع النافذة السفلية لطبق بيتري بحجم 12 مم × 14.5 ملم باستخدام شفره حلاقه ساخنه. نعلق النافذة علي الجبهة من السكن microdrive مع الايبوكسي. الحفاظ علي الأسلاك الارضيه خارج النافذة.
11. تطبيق طلاء التليفزيون علي التيروديس المكشوفة والأسلاك بين غطاء صندوق المسجل والإسكان microdrive.
12. بعد الشفاء من التليفزيون ، اغلق الصندوق بوزن صغير في الداخل ، وأدمجه في الماء بين عشيه وضحيها لضمان عدم تسرب الماء إلى الصندوق.
13. قطع tetrodes والأسلاك المرجعية إلى الطول المطلوب باستخدام مقص حاد.
14. إرفاق رغوة البوليسترين ملحوظ مقذوف (انظر جدول المواد) إلى المربع. اضبط حجمه بحيث يكون الطفو متوازنا عند غمره في حمام مائي.
15. تراجع النصائح التيركب في محلول البلاتين الأسود واستخدام التيار المباشر (-0.2 μA) لمعطف الأقطاب الكهربائية وضبط مقاومه الأقطاب حسب الرغبة. استخدم اختبار مقاومه متعدد الأقطاب (انظر جدول المواد) لقياسات الطلاء والمقاومة.
    ملاحظه: في الشاحب ذهبيه ، قيمه 40 kOhm هو أفضل. اعتمادا علي التطبيق ، يمكن تعديل مقاومه القطب عن طريق تعديل طلاء البلاتين الأسود^10،11.

5. اعداد التخدير — 1% MS-222 حل الأسهم

تحذير: ويشمل اعداد التخدير استخدام مسحوق MS-222 ، وهو مسرطن. التالي ، يجب ان يتم الخطوات 5.2 و 5.3 في غطاء المحرك الكيميائي باستخدام القفازات.

1. أضافه 100 mL من الماء إلى أنبوب التي يمكن ان تحتوي علي أكثر من 100 mL.
2. في غطاء المحرك الكيميائي ، ضع لوحه ترجيح يمكن التخلص منها علي مقياس. أضف 1 غرام من مسحوق MS-222 باستخدام ملعقة ، ثم أضف البودرة إلى الأنبوب.
3. هز الأنبوب جيدا.
   ملاحظه: في شكل سائل ، يمكن استخدام MS-222 خارج غطاء المحرك الكيميائي يرتدي قفازات ولكن لا يتطلب قناع.
4. وضع لوحه الترجيح القابل للتصرف علي نطاق. أضف 2 غ من بيكربونات الصوديوم باستخدام ملعقة ، ثم أضف البودرة إلى الأنبوب. هز الأنبوب جيدا.

6. اعداد جمجمة السمكة

ملاحظه: في هذه المرحلة ، والأسماك جاهزه لجراحه زرع. قبل الجراحة ، تاكد من ان جميع المكونات والإمدادات قد تم تعقيمها من قبل الإجراءات المناسبة. لهذه الخطوة ، وهناك حاجه للخروج من المياه علي شكل حرف U حامل السمك. في هذا البروتوكول ، يتم استخدام حامل ألمنيوم الذي يناسب راس 15 سم لذيل سمكه ذهبيه طويلة. هذا النظام يحمل الأسماك من الماء في حين النبض الخياشيم مع الماء المؤكسد. لمزيد من التفاصيل انظر Vinepinsky وآخرون⁸.

1. وضع الأسماك في 0.02 ٪ MS-222 حمام المياه لمده 20 دقيقه حتى الأسماك نائما.
2. باستخدام قفازات معقمه ، وإخراج الأسماك من الماء ووضعها في حامل.
   ملاحظه: المياه المؤكسدة النبض الأسماك يحتوي علي MS-222 بتركيز 0.02 ٪ ، بحيث تبقي الأسماك تخدير اثناء الجراحة.
3. باستخدام ملعقة معقمه ، ضع ليدوكائين 5% معجون علي الجلد فوق المكان المخصص للجراحة لمده 10 دقائق ، ثم قم بازاله ليدوكائين.
   ملاحظه: استشر أطلس الدماغ المناسب لاستهداف منطقه الدماغ المحددة.
4. باستخدام مشرط معقم بشفره 15 ، قم بازاله الجلد فوق الجمجمة في منطقه الزرع.
5. باستخدام الحفر الأسنان مع 0.7 mm لقم الحفر ، حفر 4 ثقوب في الجمجمة. ادراج 1 مم المسمار (3 ملم طويلة) في كل حفره وتطبيق الغراء السيانولات علي الثقوب الحق قبل ادراج المسمار.
6. باستخدام الملمع الأسنان ، وتطبيق الاسمنت الأسنان علي مسامير وعلي هامش الجمجمة المكشوفة.
7. باستخدام الحفر الأسنان ، وجعل ثقب قطرها 5 ملم في الجمجمة فوق منطقه الدماغ من الفائدة. أزاله الانسجه الدهنية بين الجمجمة والدماغ وفضح الهدف منطقه الدماغ باستخدام ملاقط غرامه والمناديل الورقية الناعمة. يجب الحرص علي عدم الاضرار الاوعيه الدموية الكبيرة تحت الجمجمة.
   ملاحظه: في نهاية هذه المرحلة ، والأسماك مستعدة لزرع المسبار. يتم وصف الخطوات الرئيسية الخاصة بهذا البروتوكول فقط هنا. العديد من الإجراءات بعد العملية الجراحية (مثل الوثائق المفصلة عن صحة الحيوانية وتعقيم أدوات الجراحة والمنطقة) لا يتم عرضها أو مناقشتها لأنها تنطبق علي جميع الجراحات مع الأسماك أو الكائنات الصغيرة.

7. زرع المسبار

ملاحظه: لإكمال الخطوة الاخيره في البروتوكول ، هناك حاجه إلى المتلاعب الذي يمكنه الاحتفاظ بالغرس في مكانه اثناء إدخاله إلى المخ.

1. استخدام مناور لعقد غطاء مربع المسجل مع tetrodes مشيرا إلى أسفل نحو الدماغ الأسماك.
2. ثني القطب المرجعي بحيث عندما يتم خفض tetrodes في الدماغ ، والمرجع يبقي خارج الدماغ.
3. قطع الأراضي بحيث انها تناسب في الجمجمة. بشكل اختياري ، قم بتوصيل سلك ارضي واحد بأحد مسامير الجمجمة.
4. خفض الزرع بحيث يتم ادراج الأقطاب الكهربائية في الدماغ في حين ان الجزء السفلي من السكن microdrive بالقرب من الجمجمة.
5. بدء ربط زرع إلى الجمجمة عن طريق تطبيق كميه صغيره من الاسمنت الأسنان بين السكن وأقرب المسمار الجمجمة.
6. بعد الشفاء من الجزء الأول من الاسمنت الأسنان ، وتطبيق الاسمنت الأسنان وإغلاق الحفرة فوق الجمجمة والجمجمة المكشوفة بأكملها.
   ملاحظه: عاده ما تكون هناك حاجه إلى عده جولات من تطبيقات الاسمنت الأسنان من أجل تغطيه كامل الجمجمة المكشوفة.
7. تثبيت المسجل والبطارية في المربع وختم مربع مع جميع البراغي.
8. تطبيق المضادات الحيوية والمسكنات المحلية وفقا لنوع من الأسماك المستخدمة للتجارب.
9. اغسل خياشيم السمكة بالماء العذب حتى تبدا السمكة في الاستيقاظ. أزاله الأسماك من حامل ووضعه مره أخرى في خزان المنزل.
   ملاحظه: يتم استرداد الأسماك بالبالكامل في غضون 60 دقيقه بعد الجراحة.
10. تاكد من ان الأسماك قادره علي السباحة بحريه مع زرع (الشكل 3، الفيديو التكميلية 1). إذا لزم الأمر ، وأعاده ضبط حجم رغوة البوليسترين مقذوف فوق مربع المسجل بحيث يمكن للأسماك التوازن بسهوله.

النتائج

اثناء جلسة التسجيل ، سبحت السمكة الذهبية بحريه في خزان مياه مربع بينما تم تسجيل النشاط العصبي في الدماغ. وكان الهدف من هذه التجارب لدراسة كيفيه النشاط العصبي للخلايا واحده يحدد سلوك الأسماك. وللقيام بذلك ، يلزم تحديد النشاط الشائك في البيانات المسجلة. النشاط الدماغ ، في ?...

Discussion

ويفصل هذا البروتوكول الخطوات التي ينطوي عليها غرس صفيف التيركب في الدماغ الذهبي للسباحة بحريه. هذه التقنية تنفذ المسجل العصبي الذي يضخم ويسجل الإشارات المكتسبة من ما يصل إلى 16 قنوات جنبا إلى جنب مع microdrive التي يمكن ضبط موقف تيركب في الدماغ. Microdrive يجعل من الممكن لضبط الموقف في الدماغ لتحسين ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.7 mm round drill bits			Compatible with the drill.
15-blade Scalpel	Sigma-Aldrich
16 channel PCB board	Neurlynx	EIB-16
1X3M phillips flat head screws			Stainless steel. Any type.
1X3M phillips round head screws			Stainless steel. Any type.
27 cm X 19 cm X 1 mm brass plate			See Figure 2
2X6M phillips flat head screws			Stainless steel. Any type.
3140 RTV coating	Dow Crowning	2767996
75 µm Silver wire	A-M Systems
Brass machine screws #00-90		947-1006
Brass plates 7.5mm X 2.5mm X 0.6mm			A 3D drawing is provided. See supplementary 1
Coated Tungsten wire 25µm	California Fine Wire Company	5000160	Depending on the appication the tetrodes can be fabricated from any type of wire. Popular wires are nicrome wires that can be found with lower diameters (eg. A-M systems, 762000)
Coated Tungsten wire 50µm	A-M Systems	795500	Can be replaced with any other wire with low impedance
Cyanoacrilic glue
Dental Burnisher	ComDent UK		Any small sterille stainless-still tool will do.
Dental cement - GCFujiPLUS	GC	431011	Other dental cements would probably will work as well although we have never tried any other.
Dental drill or nail polish drill			Dental drills are expensive, a nail polish drill can be a cheap replacement.
Drill bit #65		947-65
Fast curing epoxy			Any 5 minutes curing epoxy can be used here.
Logger box with O-ring sealing			A 3D drawing is provided. See supplementary 1-3. The box should be machine fabricated (do not use 3D printers). Use transperant material, to be able to see the indicator LEDs on the logger.
Motorized turning device			Custom made as described in "open ephys" website. Can also be purchusaed from neurolynx ("Tetrode Spinner 2.0") or bulit by other means.
Mouselog-16 Neural logger	Deuteron Technologies Ltd		There are several neural loggers available on the market, including: SpikeGadget (UH32 32channels) and Neurologger 2/2A/2B of Alexei Vyssotski. It should be noted that weight is not a major contraint since it can be counterbalanced with floating Styrofoam
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	Ethtl 3-aminobenzoate methanesulfonate 98%
Nano-Z plating	White Matter LLC		The nano-Z can be bought from several supllieres. Any impedance meter can be used, e.g. IMP-1 / 6662 / 2788, BAK Electronics.
PCB pins	Neurlynx	Neuralynx EIB Pins
Polymide tubing 250µm	A-M Systems	822000
Rechargable battery			3.7 Lipo battery, 370 mAh. Holds about 6 hours of recording. Smaller or larger battries can be used to reduce the weight or extend recording time.
Silicone tubing 0.64 mm	A-M Systems	806100
Stainless steel 1.5 mm	A-M Systems	846000
Sudium Bicarbonate	Sigma Aldrich	S9625
Tap #00-90		947-1301
Vaseline			Any type of soft petroleum skin protectant can be used here.