أخذ العينات وتحديد وتوصيف إطلاق البلاستيك الدقيق من زجاجة تغذية الطفل البولي بروبلين أثناء الاستخدام اليومي

Summary

وقد فصلت هذه الدراسة بروتوكولا موثوقا وفعالا من حيث التكلفة لجمع البلاستيك الدقيق والكشف عنه من الاستخدام اليومي للمنتجات البلاستيكية.

Abstract

أصبحت البلاستيك الدقيق (أعضاء البرلمان) مصدر قلق عالمي بسبب المخاطر المحتملة على صحة الإنسان. دراسات حالة من المنتجات البلاستيكية (أي البلاستيك واحد استخدام أكواب وغلايات) تشير إلى أن النائب الإفراج خلال الاستخدام اليومي يمكن أن تكون عالية للغاية. تحديد مستوى إطلاق MP بدقة هو خطوة حاسمة لتحديد وتحديد مصدر التعرض وتقييم / التحكم في المخاطر المقابلة الناجمة عن هذا التعرض. على الرغم من أن بروتوكولات قياس مستويات MP في المياه البحرية أو المياه العذبة قد تم تطويرها بشكل جيد ، إلا أن الظروف التي تعانيها المنتجات البلاستيكية المنزلية يمكن أن تختلف بشكل كبير. تتعرض العديد من المنتجات البلاستيكية لدرجات حرارة عالية متكررة (تصل إلى 100 درجة مئوية) ويتم تبريدها مرة أخرى إلى درجة حرارة الغرفة أثناء الاستخدام اليومي. ولذلك من الأهمية بمكان وضع بروتوكول لأخذ العينات يحاكي سيناريو الاستخدام اليومي الفعلي لكل منتج معين. ركزت هذه الدراسة على زجاجات تغذية الأطفال القائمة على البولي بروبلين المستخدمة على نطاق واسع لتطوير بروتوكول فعال من حيث التكلفة لدراسات إطلاق MP للعديد من المنتجات البلاستيكية. ويمكن البروتوكول الذي وضع هنا من: (1) منع التلوث المحتمل أثناء أخذ العينات والكشف عنها؛ (2) منع التلوث المحتمل أثناء أخذ العينات والكشف عنها؛ (2) منع التلوث المحتمل أثناء عملية أخذ العينات والكشف عنها؛ (2) منع التلوث المحتمل أثناء عملية أخذ العينات؛ ( 2) التنفيذ الواقعي لسيناريوهات الاستخدام اليومي، وجمع دقيق للنواب المفرج عنهم من زجاجات تغذية الأطفال استنادا إلى المبادئ التوجيهية لمنظمة الصحة العالمية؛ و 3) تحديد الكيميائية فعالة من حيث التكلفة ورسم الخرائط التضاريس الفيزيائية من أعضاء البرلمان صدر من زجاجات تغذية الطفل. واستنادا إلى هذا البروتوكول، كانت نسبة الاسترداد باستخدام البوليسترين MP القياسية (قطرها 2 ميكرومتر) 92.4-101.2٪ في حين أن الحجم المكتشف كان حوالي 102.2٪ من الحجم المصمم. البروتوكول المفصل هنا يوفر طريقة موثوقة وفعالة من حيث التكلفة لإعداد عينة MP والكشف عنها ، والتي يمكن أن تستفيد بشكل كبير من الدراسات المستقبلية لإطلاق MP من المنتجات البلاستيكية.

Introduction

معظم أنواع البلاستيك غير قابلة للتحلل الحيوي ولكن يمكن تقسيمها إلى قطع صغيرة بسبب العمليات الكيميائية والفيزيائية مثل الأكسدة والاحتكاك الميكانيكي^1،2. تصنف القطع البلاستيكية التي تقل عن 5 ملم على أنها مواد بلاستيكية دقيقة (أعضاء البرلمان). أعضاء البرلمان في كل مكان وتوجد في كل ركن تقريبا في العالم. لقد أصبحت مصدر قلق عالمي بسبب المخاطر المحتملة على البشر والحياة البرية^3،4. حتى الآن ، تم العثور على تراكمات كبيرة من أعضاء البرلمان في الأسماك والطيور والحشرات^5و6 وكذلك الثدييات (الماوس ، في الأمعاء والكلى والكبد^7،8). وجدت الدراسات أن التعرض وتراكم أعضاء البرلمان يمكن أن تلحق الضرر التمثيل الغذائي الدهون من الفئران^7،8. ووجد تقييم للمخاطر يركز على الأسماك أن أعضاء البرلمان دون الميكرون يمكن أن تخترق حاجز الدم إلى الدماغ وتسبب تلف الدماغ⁹. وتجدر الإشارة إلى أنه حتى الآن تم الحصول على جميع نتائج مخاطر النائب من الدراسات الحيوانية في حين أن الخطر المحدد على صحة الإنسان لا يزال غير معروف.

في العامين الماضيين، زادت المخاوف بشأن تهديد النائب لصحة الإنسان بشكل كبير مع تأكيد مستويات تعرض الإنسان لأعضاء البرلمان. تم العثور على تراكم أعضاء البرلمان في القولون البشري¹⁰، مشيمة النساء الحوامل¹¹ وبراز الكبار¹². ومن الأهمية بمكان تحديد مستويات إطلاق ال MP بدقة لتحديد مصادر التعرض وتقييم المخاطر الصحية وتقييم كفاءة أي تدابير رقابة محتملة. في السنوات القليلة الماضية، ذكرت بعض دراسات الحالة أن البلاستيك اليومي الاستخدام (أي غلاية بلاستيكية¹³ وأكواب ذات استخدام واحد¹⁴⁾يمكن أن تطلق كميات عالية للغاية من أعضاء البرلمان. على سبيل المثال، أكواب الورق المتاح (مع الداخلية مغلفة مع البولي ايثيلين PE أو أفلام كوبوليمر)، صدر ما يقرب من 250 ميكرون الحجم أعضاء البرلمان و 102 مليون جزيئات صغيرة الحجم في كل ملليلتر من السائل بعد التعرض ل85-90 درجة مئوية الماء الساخن¹⁴. وأفادت دراسة لحاويات المواد الغذائية البولي بروبلين (PP) أن ما يصل إلى 7.6 ملغ من جزيئات البلاستيك يتم تحريرها من الحاوية خلال استخدام واحد¹⁵. وسجلت مستويات أعلى من أكياس الشاي المصنوعة من البولي ايثيلين تيريفثالات (PET) والنايلون، والتي أفرجت عن ما يقرب من 11.6 مليار عضو في البرلمان و 3.1 مليار عضو في البرلمان نانو الحجم في كوب واحد (10 مل) من المشروبات¹⁶. وبالنظر إلى أن هذه المنتجات البلاستيكية ذات الاستخدام اليومي مصممة لإعداد الأغذية والمشروبات، فمن المرجح أن يتم إطلاق كميات كبيرة من أعضاء البرلمان وأن استهلاكهم يشكل تهديدا محتملا لصحة الإنسان.

الدراسات على الإفراج عن النائب من المنتجات البلاستيكية المنزلية (أي غلاية بلاستيكية¹³ وأكواب ذات استخدام واحد¹⁴⁾هي في مرحلة مبكرة، ولكن من المتوقع أن هذا الموضوع سوف تتلقى اهتماما متزايدا من الباحثين والجمهور العام. تختلف الطرق المطلوبة في هذه الدراسات اختلافا كبيرا عن تلك المستخدمة في الدراسات البحرية أو دراسات المياه العذبة في درجة حرارة الغرفة حيث توجد بروتوكولات راسخة بالفعل^17. وعلى النقيض من ذلك، تنطوي الدراسات التي تنطوي على الاستخدام اليومي للمنتجات البلاستيكية المنزلية على درجة حرارة أعلى بكثير (تصل إلى 100 درجة مئوية)، مع تكرار ركوب الدراجات في كثير من الحالات إلى درجة حرارة الغرفة. وأشارت دراسات سابقة إلى أن البلاستيك في اتصال مع الماء الساخن يمكن أن يطلق سراح الملايين من أعضاء البرلمان^16،18. بالإضافة إلى ذلك ، قد يؤدي الاستخدام اليومي للمنتجات البلاستيكية بمرور الوقت إلى تغيير خصائص البلاستيك نفسه. ولذلك، من الأهمية بمكان وضع بروتوكول لأخذ العينات يحاكي بدقة سيناريوهات الاستخدام اليومي الأكثر شيوعا. 10 - ويعد الكشف عن الجسيمات الصغيرة الحجم تحديا رئيسيا آخر. وأشارت الدراسات السابقة إلى أن أعضاء البرلمان الإفراج عن المنتجات البلاستيكية هي أصغر من 20 ميكرومتر^16،19،20. الكشف عن هذه الأنواع من أعضاء البرلمان يتطلب استخدام مرشحات الأغشية الملساء مع حجم المسام الصغيرة. بالإضافة إلى ذلك ، من الضروري التمييز بين أعضاء البرلمان والملوثات المحتملة التي يلتقطها الفلتر. يستخدم التحليل الطيفي رامان عالية الحساسية لتحليل التركيب الكيميائي، والتي لديها ميزة تجنب الحاجة إلى قوة ليزر عالية التي من المعروف أن تدمر بسهولة جزيئات صغيرة²⁰. ومن ثم، يجب أن يجمع البروتوكول بين إجراءات المناولة الخالية من التلوث واستخدام مرشحات الأغشية المثلى وطريقة التوصيف التي تسمح بتحديد MP بسرعة ودقة.

ركزت الدراسة التي ذكرت هنا على زجاجة تغذية الطفل القائمة على PP (BFB) ، وهي واحدة من المنتجات البلاستيكية الأكثر استخداما في الحياة اليومية. وتبين أن عددا كبيرا من أعضاء البرلمان يتم تحريرها من البلاستيك BFB خلال إعداد^{الصيغة 18}. لمزيد من الدراسة للافراج عن النائب من البلاستيك اليومي ، وإعداد العينة وطريقة الكشف عن BFB مفصلة هنا. وأثناء إعداد العينة، اتبعت بعناية عملية إعداد التركيبة المعيارية (التنظيف والتعقيم والخلط) التي أوصت بها منظمة الصحة العالمية^21. ومن خلال تصميم البروتوكولات حول المبادئ التوجيهية لمنظمة الصحة العالمية، تأكدنا من أن إطلاق سراح النائب من مركبات ثنائي الفينيل متعدد الكلور يحاكي عملية إعداد حليب الأطفال التي يستخدمها الآباء. تم تصميم عملية التصفية لجمع أعضاء البرلمان الصادرين من BFBs بدقة. بالنسبة لتحديد أعضاء البرلمان كيميائيا، تم تحسين ظروف عمل التحليل الطيفي لرامان للحصول على أطياف نظيفة ويمكن التعرف عليها بسهولة من أعضاء البرلمان، مع تجنب إمكانية حرق الجسيمات المستهدفة في الوقت نفسه. وأخيرا، تم تطوير إجراء الاختبار الأمثل والقوة التطبيقية للسماح برسم خرائط تضاريس ثلاثية الأبعاد دقيقة لأعضاء البرلمان باستخدام المجهر للقوة الذرية (AFM). البروتوكول (الشكل 1) مفصلة هنا يوفر طريقة موثوقة وفعالة من حيث التكلفة لإعداد عينة MP والكشف عنها، والتي يمكن أن تستفيد بشكل كبير الدراسات المستقبلية للمنتجات البلاستيكية.

Protocol

1. إعداد الماء الساخن

1. لجميع الأجهزة التي تأتي في اتصال مع العينات، واستخدام الزجاج النظيف المصنوع من borosilicate 3.3 لمنع أي تلوث محتمل. تنظيف جميع الأواني الزجاجية تماما.
   تحذير:يمكن للخدوش الموجودة مسبقا أو بقع النقص على الأواني الزجاجية إطلاق الجسيمات أثناء عملية التدفئة والهز. نقترح أن المستخدمين التحقق من الأواني الزجاجية وتجنب استخدام الأواني الزجاجية خدش. أظهرت المقارنة بين الأواني الزجاجية المصنوعة من نظارات مختلفة (مثل الصودا والجير والبوروسيليكات) أن البوروسيليكات 3.3 تطلق أقل كمية من جزيئات الزجاج (يمكن فحصها من قبل التحليل الطيفي رامان) ، ونوصي باستخدام الأواني الزجاجية بوروسيليكاتي 3.3 في جميع الاختبارات.
2. صب 360 مل من مياه DI في كوب زجاجي. قم بتغطية الكأس بقرص زجاجي نظيف. ثم نقله إلى فرن ميكروويف العلامة التجارية الجديدة والحرارة لمدة 2.5 دقيقة في طاقة الفرن الكامل. بعد اهتزاز بلطف لإزالة أي تدرجات درجة الحرارة المحتملة بسبب تفاوت التدفئة، ودرجة حرارة المياه داخل الكأس هو 70 درجة مئوية وعلى استعداد لإعداد العينة.
3. إعداد 95 درجة مئوية من الماء لتعقيم BFB عن طريق صب 1 لتر من مياه DI في الأواني الزجاجية والتدفئة في فرن الميكروويف لمدة 14 دقيقة.
   تحذير: لا تستخدم غلايات بلاستيكية لإعداد الماء الساخن. غلاية بلاستيكية نفسها تطلق الملايين من أعضاء البرلمان في الماء الساخن خلال عملية الغليان¹³.

2. MP الإفراج أثناء إعداد الصيغة

ملاحظة: اتباع عملية إعداد التركيبة القياسية بعناية (التنظيف والتعقيم والخلط) التي أوصت بها منظمة الصحة العالمية²¹، يتم محاكاة أعضاء البرلمان الذين تم إطلاق سراحهم من BFBs أثناء إعداد الصيغة في الخطوات ال 3 التالية.

1. جمع منتجات BFB العلامة التجارية الجديدة من مخازن الصيدليات وتنظيفها جيدا بعد إزالة المنتج من التعبئة والتغليف. غسل كل BFB باستخدام مياه المنظفات (كرر 3 مرات في درجة حرارة الغرفة RT) والماء المقطر (المتكررة 3 مرات، RT). وأخيرا، شطف BFB 3 مرات باستخدام المياه DI في RT.
   تحذير: لا تنظيف BFB باستخدام سونيكيشن. على الرغم من أن سونيكيشن يستخدم على نطاق واسع في المختبرات لخلط وتنظيف، سونيكيشن من BFB يمكن أن تلحق ضررا بالغا سطح زجاجة وتسبب النائب الإفراج عن المنتجات PP في غضون 1 دقيقة.
2. نقع BFB في 95 درجة مئوية DI المياه (القسم 1.3) لتعقيم الزجاجة. لتجنب تعويم BFB، اضغط قليلا على السطح الخارجي للBFB باستخدام ملاقط الفولاذ المقاوم للصدأ وضمان أن الجسم زجاجة كاملة يغمر في الماء.
   1. بعد 5 دقائق، أخرج الزجاجة ونقلها إلى قرص زجاجي نظيف. أثناء خطوة تجفيف الهواء ، عكس الزجاجة على القرص الزجاجي حتى لا يكون هناك دليل على وجود قطرات.
3. صب 180 مل من ماء DI الساخن (70 درجة مئوية، من القسم 1.2، المطابق لإرشادات منظمة الصحة العالمية) في الزجاجة المجففة بالهواء. ثم تغطية زجاجة على الفور باستخدام طبق بيتري الزجاج ووضعه في سرير تهتز.
   1. لمحاكاة عملية خلط التركيبة، هز الزجاجة بسرعة 180 دورة في الدقيقة لمدة 60 ثانية. بعد الهز، نقل الزجاجة إلى لوحة زجاجية نظيفة والسماح لها لتبرد.

3. إعداد عينة لتحديد النائب وتحديد كمي

1. Sonicate وشطف جميع أجزاء من مرشح الزجاج (قطرها 25 ملم، قمع الزجاج، fritted قاعدة دعم الزجاج وقارورة الاستقبال) باستخدام المياه DI.
   1. ضع قطعة من الذهب المغلفة البولي PC مرشح غشاء (حجم المسام من 0.8 ميكرومتر، Au طبقة طبقة سمك 40 نانومتر) في منتصف قاعدة الزجاج.
   2. تجميع قمع الزجاج والمشبك الفولاذ المقاوم للصدأ لإصلاح مرشح الغشاء. وأخيرا توصيل مرشح الزجاج تجميعها إلى مضخة فراغ (الشكل 2).
      تحذير:لضمان أن الغشاء العصي بسلاسة على سطح القاعدة الزجاجية من المهم للحفاظ على قاعدة الزجاج الرطب. إذا لزم الأمر، ينبغي إسقاط 1-2 قطرات من الماء DI على سطح قاعدة الزجاج قبل وضع أسفل مرشح الغشاء.
2. اخلط عينة الماء المبرد بعناية في BFB (من القسم 2.3)، ثم قم بنقل كمية معينة من عينة الماء إلى القمع الزجاجي باستخدام ماصة زجاجية. قم بتشغيل مضخة الفراغ للسماح لعينة الماء بالتصفية من خلال فلتر الغشاء ببطء.
   1. بعد التصفية، اغسل الجزء الداخلي من القمع الزجاجي باستخدام مياه DI لضمان عدم وجود جزيئات ملتصقة بالقمع.
      تنبيه:لتجنب تداخل الجسيمات على سطح فلتر الغشاء ، من المهم اختيار الحجم الصحيح للمياه التي يتم تمريرها من خلال الفلتر بعناية. BFBs إطلاق عدد كبير من الجسيمات، بحيث هناك حاجة إلى مرشحات غشاء 3-5 لتصفية حجم كامل من عينة المياه.
3. قطع مضخة فراغ وتفكيك مرشح الزجاج. ثم أخرج مرشح الغشاء بعناية باستخدام ملاقط الفولاذ المقاوم للصدأ ونقله إلى زجاج غطاء نظيف. إصلاح مرشح الغشاء على الزجاج الغطاء باستخدام قطعة صغيرة من الشريط ورقة. قم بتخزين العينة على الفور في طبق بيتري زجاجي نظيف.

4. إعداد عينة لتوصيف تضاريس AFM

1. إعداد رقاقة السيليكون نظيفة. إسقاط عينة مياه 50 ميكرولتر (من القسم 2.3) على سطح رقاقة السيليكون وتجفيفها في فرن عند درجة حرارة حوالي 103 درجة مئوية. كرر هذه العملية إذا كان مستوى MP في عينة الماء منخفضا.
2. بعد ساعة واحدة من التجفيف، حرك الرقاقة إلى طبق بيتري زجاجي نظيف واتركها تبرد في مجفف.
3. بعد تبريد الرقاقة، قم بتخزين العينة في طبق بتري زجاجي جاف ونظيف.

5. تحديد النائب وتحديد كمي باستخدام التحليل الطيفي رامان

1. معايرة نظام رامان باستخدام تصحيح من أجل الصفر ورقائق السيليكون. تأكد من أن موقع الذروة من رقاقة السيليكون هو في 520.7 سم^-1 وأن كثافة الذروة أعلى من 6000 وحدة عندما كثافة الليزر هو في 100٪.
2. إعداد المعلمات من نظام رامان للحصول على أطياف MP عالية إشارة إلى ضوضاء مع تجنب حرق أعضاء البرلمان. تعيين النظام على النحو التالي: 532 نانومتر ليزر الإثارة، وإزالة الأشعة الكونية، وكثافة الليزر من 10٪ (قوة الليزر من 0.18 كيلوواط)، والقرار الطيفي من 1.5 سم^-1،وقت التعرض من 10-20 ثانية، وتراكمات من 10-40 مرة والنطاق الطيفي من 200-3200 سم^-1. وأظهر الشكل 3 أطيافا نموذجية لأعضاء البرلمان الذين تتراوح أوقات تراكمهم بين 1 و 400 ق.
   تحذير: لا تختبر الجسيمات باستخدام الليزر 100٪ مباشرة لتجنب الحرق السريع (يمكن حرقها في دقيقة واحدة إذا كان الجسيم صغيرا). استخدام كثافة منخفضة (10-50٪) لإجراء الاختبار أولا.
3. ضع عينة عامل التصفية (من القسم 3.3) في منتصف مرحلة عينة رامان. اختيار أربعة بقع تمثيلية (2 البقع في المنطقة الوسطى في حين أن 2 البقع الأخرى هي قريبة من حافة منطقة العمل، الشكل 3C) على مرشح الغشاء لإجراء الاختبار (مجموع منطقة الاختبار حول 1.5 ملم²).
4. مراقبة وتصوير الجسيمات على سطح مرشح الغشاء باستخدام المجهر البصري (100x) تليها تحديد الكيميائية باستخدام التحليل الطيفي رامان.
   1. قارن طيف رامان الذي تم الحصول عليه بأطياف البوليمر القياسية المرجعية (من المواد السائبة من BFB والنشر السابق^22).
   2. تحديد الخصائص الكيميائية للجسيمات باستخدام قمم مكثفة في نطاق 2780-2980، 1400-1640 و 709-850 سم^-1،المقابلة للاهتزازات تمتد من CH / CH₂/ CH₃ و C-C المجموعات المرتبطة بمواد البوليمر (الشكل 3).
5. تحليل حجم وكمية أعضاء البرلمان الذين تم التعرف عليهم باستخدام ImageJ.
   1. الحصول على تركيز أعضاء البرلمان في عينة المياه على أساس المنطقة التي تم اختبارها، إجمالي مساحة العمل (227 مم²⁾وحجم العينة المصفاة المعروفة.
   2. تصنيف أعضاء البرلمان المؤكدة إلى 5 مجموعات من حيث الحجم: 0.8-5 ميكرومتر، 5-20 ميكرومتر، 20-50 ميكرومتر، 50-100 ميكرومتر > 100 ميكرومتر.
   3. وأخيرا، تحديد كمية أعضاء البرلمان في لتر واحد من عينة المياه على أساس حجم العينة المصفاة، وعدد من أعضاء البرلمان سجلت واختبارها منطقة مرشح الغشاء.

6. MP الطبوغرافية التوصيف باستخدام AFM

1. تجهيز نظام AFM (NT-MDT) مع التنصت على وضع التحقيق. معايرة النظام باستخدام مقياس ارتفاع الخطوة (SHS). إعداد النظام ضمن ظروف العمل المثلى: معدل المسح الضوئي هو 1 هرتز، وحجم المسح الضوئي هو 10-50 ميكرومتر، وتردد الضبط حوالي 160 كيلوهرتز، وخط المسح الضوئي هو 512 بكسل.
2. إصلاح رقاقة السيليكون (من القسم 4.3) على مرحلة عينة AFM. مراقبة وتصوير الجسيمات المستهدفة على سطح رقاقة السيليكون، تليها تحديد الكيميائية باستخدام الأسلوب في القسم 5.
3. قم بتبديل النظام إلى وضع AFM (يتم تجميع التحليل الطيفي لرامان وAFM في نظام واحد) واختبار تضاريس أعضاء البرلمان المحددين.
4. تحليل البيانات ثلاثية الأبعاد باستخدام برنامج Gwydion 2.54. استخدم خيار التشكيل الجانبي للحصول على أبعاد الجسيمات ومتوسط الارتفاعات بينما العرض ثلاثي الأبعاد للحصول على بنية ثلاثية الأبعاد.

النتائج

للتحقق من صحة هذا البروتوكول، تم إعداد عينة المياه عن طريق إضافة كرات البلاستيك الدقيق البوليسترين القياسية (قطرها 2.0 ± 0.1 ميكرومتر) إلى مياه DI. كمية MP المضافة تتوافق مع 4,500,000 جسيم/لتر، وهو ما يشبه مستوى إطلاق MP من BFBs. وبعد الأقسام البروتوكول 2-3، تم جمع أعضاء البرلمان بنجاح(الشكل 4A...

Discussion

على الرغم من أن دراسة أعضاء البرلمان في المياه البحرية والمياه العذبة قد تم الإبلاغ عنها على نطاق واسع وتم تطوير البروتوكول القياسي ذي الصلة¹⁷، فإن دراسة المنتجات البلاستيكية ذات الاستخدام اليومي هي مجال بحثي ناشئ مهم. الظروف البيئية المختلفة التي تعاني منها المنتجات البلاس?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
AFM cantilever	NANOSENSORS	PPP-NCSTAuD-10	To obtain three-dimensional topography of PP MPs
Atomic force microscope	Nova	NT-MDT	To obtain three-dimensional topography of PP MPs
Detergent	Fairy Original	1015054	To clean the brand-new product
Gold-coated polycarbonate-PC membrane filter-0.8 um	APC, Germany	0.8um25mmGold	To collect microplastics in water and benefit for Raman test
Gwyddion software	Gwyddion	Gwyddion2.54	To determine MPs topography
ImageJ software	US National Institutes of Health	No, free for use	To determine MPs size
Microwave oven	De'longhi, Italy	815/1195	Hot water preparation
Optical microscope, x100	Mitutoyo, Japan	46-147	To find and observe the small MPs
Raman spectroscopy	Renishaw	InVia confocal Raman system	To checmically determine the PP-MPs
Shaking bed-SSL2	Stuart, UK	51900-64	To mimic the mixing process during sample preparaton
Standard polystyrene microplastic spheres	Polysciences, Europe	64050-15	To validate the robusty of current protocol
Tansfer pipette with glass tip	Macro, Brand	26200	To transfer water sample to glass filter
Ultrasonic cleaner	Witeg, Germany	DH.WUC.D06H	To clean the glassware
Vacuum pump	ILMVAC GmbH	105697	To filter the water sample