Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف هذا البروتوكول طريقة معالجة فعالة وقياسية لإزالة السموم ل Zanba-stir-Fried Tiebangchui باستخدام CRITIC جنبا إلى جنب مع طريقة سطح استجابة Box-Behnken.

Abstract

الجذر المجفف لبندول Aconitum Busch. ، المسمى Tiebangchui (TBC) باللغة الصينية ، هو واحد من أشهر الأدوية التبتية. وهو عشب يستخدم على نطاق واسع في شمال غرب الصين. ومع ذلك ، فقد حدثت العديد من حالات التسمم بسبب السمية الشديدة ل TBC ولأن جرعاتها العلاجية والسامة متشابهة. لذلك ، فإن إيجاد طريقة آمنة وفعالة لتقليل سميتها مهمة ملحة. يظهر البحث في كلاسيكيات الطب التبتي أن طريقة معالجة TBC المقلية مع Zanba تم تسجيلها في "مواصفات معالجة الطب التبتي في مقاطعة تشينغهاي (2010)". ومع ذلك ، فإن معلمات المعالجة المحددة ليست واضحة بعد. وبالتالي ، تهدف هذه الدراسة إلى تحسين وتوحيد تكنولوجيا معالجة TBC المقلي Zanba.

أولا ، أجريت تجربة أحادية العامل على أربعة عوامل: سمك شريحة TBC ، وكمية Zanba ، ودرجة حرارة المعالجة ، والوقت. مع محتويات قلويد أحادي الإستر وديستر في TBC المقلي Zanba-stir-fried كمؤشرات ، تم استخدام CRITIC جنبا إلى جنب مع طريقة سطح استجابة Box-Behnken لتحسين تقنية معالجة TBC المقلي Zanba. كانت ظروف المعالجة المثلى ل TBC المقلية من Zanba عبارة عن شريحة TBC بسمك 2 سم ، وثلاثة أضعاف Zanba أكثر من TBC ، ودرجة حرارة معالجة 125 درجة مئوية ، و 60 دقيقة من القلي السريع. حددت هذه الدراسة ظروف المعالجة المثلى والمعيارية لاستخدام TBC المقلي Zanba-stir-fried TBC ، وبالتالي توفير أساس تجريبي للاستخدام السريري الآمن والإنتاج الصناعي ل Zanba-stir-fried TBC.

Introduction

الجذر المجفف لبندول Aconitum Busch و A. flavum Hand.-Mazz. ، أحد أشهر الأدوية التبتية ، يسمى Tiebangchui (TBC) باللغة الصينية 1,2. تساعد الجذور المجففة ل TBC في تبديد البرد والرياح وتقليل الألم وتهدئة الصدمة. تم تسجيله في المجلد الأول من "معايير الأدوية (الطب التبتي) لوزارة الصحة في جمهورية الصين الشعبية" ، والتي تنص على أن الجذور المجففة ل TBC تستخدم عادة لعلاج التهاب المفاصل الروماتويدي والكدمات وأمراض البرد الأخرى3. ومع ذلك ، فإن الجرعة العلاجية السريرية ل TBC تشبه جرعتها السامة ، وقد تم الإبلاغ عن حوادث التسمم أو الوفاة بشكل متكرر بسبب الاستخدام غير السليم4. لذلك ، أصبح الحد من السمية والحفاظ على فعالية TBC نقطة ساخنة للبحث على مر السنين.

في الطب التبتي ، تعد المعالجة واحدة من أكثر الطرق فعالية لتخفيف سمية TBC. وفقا ل "مواصفات معالجة الطب التبتي لمقاطعة تشينغهاي (2010)" ، يجب وضع الأعشاب الأصلية (TBC) في وعاء حديدي وتقلى مع Zanba حتى يتحول لون Zanba إلى اللون الأصفر ، وبعد ذلك تتم إزالة Zanba وتجفيف الأعشاب في الهواء 5,6. ومع ذلك ، لم يتم توثيق أي معلمات عملية محددة ، مما يجعل التحكم في تكنولوجيا المعالجة وجودة TBC المقلي Zanba أمرا صعبا. طريقة CRITIC هي طريقة وزن موضوعية يمكنها تجنب التشويش والذاتية ، وتعزيز موضوعية الوزن7. يمكن أن تعكس طريقة سطح استجابة Box-Behnken بشكل مباشر التفاعل بين كل عامل من خلال التركيب متعدد الحدود8. يشيع استخدام الجمع بين سطح استجابة Box-Behnken وطريقة CRITIC لتحسين تقنية المعالجة للحصول على بروتوكول المعالجة الأمثل 9,10. في هذا البحث ، تم استخدام قلويد أحادي الإستر ثنائي التربينويد (MDA) (البنزويلاكونيتين) واثنين من قلويدات ديستر-ديتيربينويد (DDAs) (الأكونيتين ، 3-ديوكسياكونيتين) كمؤشرات تقييم. تم تطبيق CRITIC جنبا إلى جنب مع طريقة سطح استجابة Box-Behnken لتحسين تقنية معالجة TBC المقلية Zanba وإنشاء طريقة معالجة قياسية للاستخدام الآمن السريري.

Protocol

تم تحسين طريقة معالجة TBC المقلية Zanba وتوحيدها بواسطة CRITIC جنبا إلى جنب مع طريقة سطح استجابة Box-Behnken. تم استخدام البنزويلاكونيتين والأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين كمؤشرات تقييم خلال هذا الإجراء.

1. إعداد حل العينة

  1. تحضير محلول مخزون المواد المرجعية. قم بوزن 9.94 مجم من البنزويلاكونيتين و 8.49 مجم من الأكونيتين و 6.25 مجم من 3-ديوكسياكونيتين (جدول المواد) على ميزان تحليلي إلكتروني وضعها في دورق حجمي سعة 10 مل. ثم أضف 0.05٪ من محلول ميثانول حمض الهيدروكلوريك لإذابة المواد الصلبة وتكوين الحجم إلى 10 مل. أخيرا ، رج الخليط جيدا للحصول على محلول مخزون المادة المرجعية بتركيزات كتلة 0.9940 مجم / مل بنزولاكونيتين ، 0.8490 مجم / مل أكونيتين ، و 0.6250 مجم / مل من 3-ديوكسياكونيتين.
    تنبيه: حمض الهيدروكلوريك مادة شديدة التآكل11. استخدم الحماية المناسبة ، مثل القفازات ومعطف المختبر والنظارات الواقية وغطاء الدخان.
  2. تحضير محلول عينة الاختبار.
    1. تزن 2 غرام من مسحوق TBC المقلي في دورق مخروطي.
      1. تحضير TBC المقلي بزنبا بوزن 30 جم من TBC (2 سم) و 90 جم من Zanba وإضافتهما إلى آلة القلي السريع المسخنة مسبقا. اضبط وقت ودرجة حرارة آلة القلي السريع على 40 دقيقة و 140 درجة مئوية على التوالي. اضبط الجهاز لإكمال المعالجة.
      2. استخدم آلة تحطيم عالية السرعة لطحن TBC المقلي Zanba بشكل منفصل إلى عينات مسحوق يمكن أن تمر عبر غربال 50 شبكة (0.355 مم).
    2. أضف 3 مل من محلول الأمونيا و 50 مل من محلول مختلط من كحول الأيزوبروبيل وخلات الإيثيل (نسبة 1: 1 فولت / فولت) في القارورة المخروطية أعلاه ، بناء على الدراسات السابقة12,13.
      ملاحظة: لتحضير محلول الأمونيا ، أضف 40 مل من محلول الأمونيا المركز إلى دورق حجمي سعة 100 مل واملأه بالماء النقي إلى خط القياس. اتخاذ التدابير الوقائية المناسبة عند استخدام محلول الأمونيا المركز لأنه ذو رائحة قوية.
    3. وزن العينة أعلاه وقارورة مخروطية وتسجيل الوزن. الموجات فوق الصوتية لمدة 30 دقيقة (الجهد: 220 فولت ، التردد: 40 كيلو هرتز).
      ملاحظة: تتحلل قلويدات الأكونيتين بسهولة عن طريق الحرارة. وبالتالي ، يجب أن تكون درجة حرارة الاستخراج بالموجات فوق الصوتية أقل من 25 درجة مئوية.
    4. وزن العينة والقارورة المخروطية بعد الاستخراج بالموجات فوق الصوتية.
    5. تعويض الوزن المفقود عن طريق إضافة خليط من كحول الأيزوبروبيل وخلات الإيثيل (نسبة 1: 1 فولت / فولت).
    6. قم بتصفية عينة الحل. تبخر 25 مل من الراشح حتى يجف باستخدام مبخر دوار عند 40 درجة مئوية.
    7. قم بإذابة البقايا بإضافة 5 مل من محلول ميثانول حمض الهيدروكلوريك 0.05٪ ، وقم بتصفية المحلول من خلال مرشح حقنة 0.2 ميكرومتر ، وقم بتحليله عن طريق إجراء كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC).
  3. تحضير محلول مرجعي مختلط يحتوي على 0.1988 ملغم/مل بنزويلاكونيتين، 0.0509 ملغم/مل أكونيتين، و0.0938 ملغم/مل 3-ديوكسياكونيتين.
    ملاحظة: يتم إذابة كل معيار (0.9940 مجم من البنزولاكونيتين ، 0.2545 مجم من الأكونيتين ، و 0.4690 مجم من 3-ديوكسياكونيتين) في دورق حجمي سعة 5 مل في ميثانول حمض الهيدروكلوريك 0.05٪ كوسط ذوبان.
  4. تحضير 0.04 M أسيتات الأمونيوم العازلة عن طريق إذابة 6.16 g من خلات الأمونيوم (جدول المواد) في 2 L من الماء عالي النقاء (المرحلة المتنقلة A). اضبط الرقم الهيدروجيني على 8.50 باستخدام الأمونيا.
    تنبيه: الأمونيا مادة خطرة. استخدم الحماية المناسبة ، مثل القفازات ومعطف المختبر والنظارات الواقية وغطاء الدخان.
  5. قم بتصفية 2 لتر من الأسيتونيتريل عالي النقاء بنسبة 100٪ (المرحلة المتنقلة B) وقم بتفريغها.
    تنبيه: الأسيتونيتريل مادة خطرة13. استخدم الحماية المناسبة ، مثل القفازات ومعطف المختبر والنظارات الواقية وغطاء الدخان.

2. حالة الكروماتوغرافيا

  1. حقن 10 ميكرولتر من محاليل العينات المعالجة مسبقا في نظام HPLC باستخدام مضخات ثنائية. استخدم نظام HPLC يستخدم عمود ODS-3 (5 ميكرومتر × 4.6 مم × 250 مم ؛ يعمل عند 30 درجة مئوية) مع المرحلتين المتنقلتين A و B لفصل MDA و DDAs. حقن كل عينة ثلاث مرات للتكرار الفني.
  2. برمجة الطريقة كما هو موضح في الجدول 1 لعمود ODS-3. اضبط معدل تدفق 1.0 مل / دقيقة والطول الموجي للكشف على 235 نانومتر.
  3. سجل مناطق الذروة لكل مركب مستهدف.
    ملاحظة: يمكن العثور على تفاصيل الأدوات في جدول المواد.

3. اختبار قدرة النظام على التكيف

ملاحظة: راجع القسم 2 للاطلاع على الشروط الكروماتوغرافية لتنفيذ الخطوات من 3.1 إلى 3.5.

  1. تحقق من العلاقة الخطية بين التركيز ومنطقة الذروة.
    1. تحضير تركيزات مختلفة - 19.88 ، 39.76 ، 59.64 ، 159.04 ، 198.80 ، و 497.00 ميكروغرام / مل - من محلول البنزويلاكونيتين.
    2. تحضير تركيزات مختلفة - 8.49 ، 16.98 ، 25.47 ، 33.96 ، 50.94 ، و 169.80 ميكروغرام / مل - من محلول الأكونيتين.
    3. تحضير تركيزات مختلفة - 1.875 ، 12.50 ، 37.50 ، 62.50 ، 93.75 ، و 125.00 ميكروغرام / مل - من محلول 3-ديوكسياكونيتين.
    4. حقن المحاليل المرجعية المذكورة أعلاه من تركيز الكتلة المنخفض إلى تركيز الكتلة العالي وتسجيل مناطق الذروة.
    5. احصل على ثلاث معادلات انحدار خطية من مخطط تركيز المحلول المرجعي (ميكروغرام / لتر) مقابل منطقة الذروة.
      ملاحظة: تأكد من أن تركيزات البنزويلاكونيتين والأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين تقع ضمن النطاق الخطي لهذا المنحنى القياسي.
  2. قم بإجراء اختبار دقيق عن طريق الحقن المستمر لستة تكرارات من 10 ميكرولتر من محلول العينة في نظام HPLC وتشغيل العينات في ظل نفس ظروف HPLC الموضحة في القسم 2. سجل مناطق الذروة من البنزويلاكونيتين والأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين.
  3. قم بإجراء تجارب اختبار الثبات عن طريق حقن 10 ميكرولتر من محلول العينة المحضر وتحديد مناطق الذروة بعد 0 ساعة و 2 ساعة و 4 ساعات و 8 ساعات و 12 ساعة و 24 ساعة.
    ملاحظة: يتم تسجيل مناطق الذروة تلقائيا بواسطة نظام HPLC المشار إليه. استندت هذه النقاط الزمنية إلى الأدبيات ذات الصلة15،16،17.
  4. قم بإجراء اختبار قابلية التكاثر عن طريق أخذ نفس الدفعة من TBC المقلي Zanba-stir-fried لإعداد ستة محاليل لعينات الاختبار بالتوازي وفقا للطريقة في الخطوة 1.2. حقن 10 ميكرولتر من كل عينة في نظام HPLC وتشغيل العينات كما هو موضح في القسم 2.
    ملاحظة: تم تقييم قابلية التكاثر من خلال مقارنة اختلافات التركيز بين العينات الست.
  5. قم بإجراء تجربة الاسترداد عن طريق تحضير ستة أجزاء من نفس الدفعة من TBC المقلي من Zanba لمحلول الاختبار. ثم أضف ~ 100٪ من المادة المرجعية لكل مكون فهرس إلى ستة أجزاء من محلول الاختبار لحساب معدل الاسترداد. حقن هذه العينات (10 ميكرولتر) في نظام HPLC في ظل نفس الظروف الموضحة في القسم 2 وحساب معدل الاسترداد باستخدام المعادلة (1):
    figure-protocol-6660(1)
    ملاحظة: في مكافئ (1) ، A هي كمية المكون المراد قياسها في محلول الاختبار ، B هي كمية المادة المرجعية المضافة ، و C هي القيمة المقاسة للمحلول الذي يحتوي على المادة المرجعية وعينة TBC المقلية Zanba.

4. تجارب أحادية العامل

  1. مقارنة سمك الشريحة
    1. قم بإعداد خمس مجموعات للاختبارات ، كل منها يحتوي على 30 جم من TBC ، حيث يبلغ سمك TBC 0.5 و 1 و 2 و 3 و 4 سم على التوالي. تزن كمية من Zanba تساوي ثلاثة أضعاف كمية TBC (90 جم).
      ملاحظة: TBC سامة. استخدم الحماية المناسبة ، مثل القفازات ومعطف المختبر والنظارات الواقية وغطاء الدخان ، وكن حذرا أثناء عملية القطع. من خلال التجربة المسبقة ، وجد أن ثلاثة أضعاف كمية Zanba كانت مطلوبة للاتصال الكامل بين TBC و Zanba. لذلك ، في التصميم التجريبي الرسمي ، اختارت الدراسة ثلاثة أضعاف كمية Zanba عند فحص سمك الشريحة.
    2. اضبط درجة حرارة ووقت آلة القلي السريع الأوتوماتيكية على 140 درجة مئوية و 40 دقيقة على التوالي.
    3. أضف ~ 30 جم من TBC و 90 جم من Zanba إلى الماكينة بعد تسخين آلة القلي السريع الأوتوماتيكية إلى درجة الحرارة المحددة.
    4. قم بإعداد حلول العينة باتباع الخطوة 1.2. احسب محتويات MDA و DDAs في منتجات المعالجة المختلفة وفقا للمنحنى القياسي (الجدول 2). احسب النتيجة الشاملة بناء على النتائج عبر طريقة CRITIC في القسم 6.
    5. بهذه الطريقة ، قارن كميات Zanba ، وكذلك درجات حرارة المعالجة وأوقات تحسين الظروف.
  2. مقارنة كمية زانبا
    1. قم بإجراء خمس مجموعات من الاختبارات ، تحتوي كل منها على 30 جم من TBC (2 سم) ، حيث تكون كمية Zanba واحدة واثنين وثلاثة وأربعة وخمسة أضعاف TBC ، على التوالي.
    2. قم بتشغيل آلة القلي السريع للمعالجة. اضبط وقت ودرجة حرارة آلة القلي السريع على 40 دقيقة و 140 درجة مئوية.
    3. قم بإعداد حلول العينة باتباع الخطوة 1.2. احسب محتوى MDA و DDAs في منتجات المعالجة المختلفة وفقا للمنحنى القياسي (الجدول 2). احسب النتيجة الشاملة بناء على النتائج عبر طريقة CRITIC في القسم 6.
  3. مقارنة درجة حرارة المعالجة
    1. قم بإجراء خمس مجموعات من الاختبارات ، كل منها يحتوي على 30 جم من TBC (2 سم) و 90 جم من Zanba.
    2. قم بتشغيل آلة القلي السريع للمعالجة. اضبط درجة حرارة المعالجة على 100 درجة مئوية و 120 درجة مئوية و 140 درجة مئوية و 160 درجة مئوية و 180 درجة مئوية. اضبط وقت المعالجة على 40 دقيقة.
      ملاحظة: من خلال التجارب المسبقة ، وجد أن سرعة اصفرار Zanba منخفضة جدا عندما تكون درجة حرارة المعالجة أقل من 100 درجة مئوية ، ومن السهل حرق Zanba وتحويله إلى اللون الأسود إذا كانت درجة الحرارة مرتفعة جدا (فوق 180 درجة مئوية). لذلك ، تم تعيين 100 درجة مئوية و 180 درجة مئوية لتكون القيم الدنيا والقصوى لدرجة الحرارة أثناء المعالجة ، على التوالي.
    3. قم بإعداد حلول العينة باتباع الخطوة 1.2. سجل مناطق الذروة ل MDA و DDAs. احسب محتوى MDA و DDAs في منتجات المعالجة المختلفة وفقا للمنحنى القياسي (الجدول 2). احسب النتيجة الشاملة بناء على النتائج عبر طريقة CRITIC في القسم 6.
      ملاحظة: تتضمن التجربة درجات حرارة عالية تبلغ 160 درجة مئوية و 180 درجة مئوية. انتبه إلى السلامة أثناء التجربة ، وفقا لرمز السلامة الخاص بالمختبر.
  4. مقارنة وقت المعالجة
    1. قم بإجراء خمس مجموعات من الاختبارات ، كل منها يحتوي على 30 جم من TBC (2 سم) و 90 جم من Zanba.
    2. قم بتشغيل آلة القلي السريع للمعالجة. اضبط وقت المعالجة على 20 و 40 و 60 و 80 و 100 دقيقة. اضبط درجة الحرارة على 140 درجة مئوية.
    3. قم بإعداد نماذج الحلول باتباع الوصف الوارد في الخطوة 1.2. سجل مناطق الذروة ل MDA و DDAs. احسب جودة MDA و DDAs في منتجات المعالجة المختلفة وفقا للمنحنى القياسي (الجدول 2). احسب النتيجة الشاملة بناء على النتائج عبر طريقة CRITIC في القسم 6.

5. تحسين تكنولوجيا المعالجة ل Zanba-stir-fried TBC باستخدام منهجية سطح الاستجابة (RSM)

  1. تصميم سطح استجابة Box-Behnken
    1. حدد نطاق سمك الشريحة (A ، 1-3 سم) ، وكمية Zanba (B ، 2-4x) ، ودرجة حرارة المعالجة (C ، 100-140 درجة مئوية) ، ووقت المعالجة (D ، 40-80 دقيقة) من خلال التجارب الأولية باستخدام اختبارات أحادية العامل (الخطوة 4.1-4.4).
      ملاحظة: القيم المشفرة لأربعة متغيرات ومستوياتها موضحة في الجدول 3. تم ترميز ثلاثة مستويات من كل متغير ك -1 و 0 و 1.
  2. استخدم البرنامج لإنشاء المصفوفة وتحليل نماذج سطح الاستجابة.
    ملاحظة: يتم عرض لقطات الشاشة لاستخدام البرنامج في الملف التكميلي 1.
    1. استخدم تصميم Box-Behnken المكون من ثلاثة مستويات وأربعة عوامل يتكون من 24 تجربة (كما هو الحال في هذه الدراسة) ، وقم بقياس خمس نسخ متماثلة (ترتيب التشغيل 1 و 9 و 14 و 16 و 25) لحساب مجموع الخطأ الخالص للمربعات (الجدول 4). قم بتعيين النتيجة الشاملة (Y) كاستجابة (الخطوات 1-4 ، الملف التكميلي 1).
      1. في الصفحة الرئيسية ، انقر فوق تصميم جديد (الخطوة 1 ، الملف التكميلي 1) ، وفي اللوحة اليمنى من صفحة التصميم ، انقر فوق سطح الاستجابة | Box-Behnken وقم بتعيين معلمات العوامل الأربعة في الجدول (الخطوة 2 ، الملف التكميلي 1).
      2. انقر فوق التالي (الخطوة 2 ، الملف التكميلي 1) ، وقم بتعيين أسماء الردود ، وانقر فوق "إنهاء" (الخطوة 3 ، الملف التكميلي 1).
      3. قم بإنشاء تصميم سطح الاستجابة من خلال العملية المذكورة أعلاه (الخطوة 4 ، الملف التكميلي 1).
  3. أكمل التجربة بناء على 29 سيناريو مصممة لسطح الاستجابة.
  4. قم بإعداد حلول العينة باتباع الخطوة 1.2.
  5. سجل مناطق الذروة ل MDA و DDAs.
    ملاحظة: يتم تسجيل مناطق الذروة تلقائيا بواسطة نظام HPLC المشار إليه.
  6. حساب جودة MDA و DDAs في منتجات المعالجة المختلفة.
  7. احسب النتيجة الشاملة بناء على النتائج عبر طريقة CRITIC في الخطوة 6.
    ملاحظة: يتم توضيح الطريقة المحددة في الخطوة 6.
  8. أدخل النتيجة الشاملة التي تم الحصول عليها والمكونة من 29 تجربة في الكمبيوتر وقم بتحليلها باستخدام البرنامج المرجعي (الخطوة 5 ، الملف التكميلي 1).
  9. إجراء التحقق الإحصائي من المعادلات متعددة الحدود وتحليلات سطح الاستجابة المرسومة في الرسوم البيانية نموذج 3D من خلال البرنامج (الخطوات 6-8 ، الملف التكميلي 1).
    1. في جزء التنقل الأيمن، ضمن التحليل (+)، انقر فوق Y، ثم انقر فوق بدء التحليل في نافذة التكوين (الخطوة 6، الملف التكميلي 1).
    2. انقر فوق ANOVA في القائمة العلوية ولاحظ جدول النتائج الذي يعرض تحليل التباين (الخطوة 7 ، الملف التكميلي 1).
    3. في القائمة العلوية ، انقر فوق الرسوم البيانية النموذجية ثم 3D Surface للحصول على مخططات سطح الاستجابة التي تعكس تأثيرات معلمات المعالجة على الدرجات الاصطناعية (الخطوة 8 ، الملف التكميلي 1).
  10. إجراء التحقق من صحة نموذج سطح الاستجابة في ثلاث نسخ في ظل الظروف المثلى المتوقعة (الخطوة 9 ، الملف التكميلي 1) للتحقق من استقرار تقنية المعالجة. في جزء التنقل الأيسر ، ضمن التحسين ، انقر فوق رقمي ثم ، في القائمة العلوية ، انقر فوق حلول. مراقبة الظروف المثلى المتوقعة.

6. تقييم النموذج

ملاحظة: يتم تنفيذ هذه الخطوة بعد اكتمال كل تجربة أحادية العامل أو تجربة سطح الاستجابة. بعد اكتمال كل تجربة (على سبيل المثال ، مقارنة سمك الشريحة) ، يتم قياس محتوى MDA و DDAs في العينات المختلفة للحصول على خمس مجموعات بيانات ، وفقا للخطوة 1.2 والقسم 2. وترد البيانات في الجدول التكميلي S1.

  1. معالجة بدون أبعاد للفهرس
    ملاحظة: تقوم هذه الخطوة بتحويل القيمة المقاسة (Xij) إلى قيمة نسبية بلا أبعاد، بحيث تكون قيمة كل مؤشر عند نفس مستوى الكمية. يمكن أن تسهل هذه العملية التحليل الشامل ومقارنة المؤشرات بوحدات أو أوامر مختلفة من الحجم18. ولأغراض التوضيح، استخدمت قيم سمك الشريحة للحسابات المبينة أدناه (الجدول التكميلي S1).
    1. توحيد محتوى MDA (الحصول على yMDA ؛ يشير MDA إلى البنزويلاكونيتين) باستخدام الصيغة في Eq. (2).
      ملاحظة: يشير المؤشر "i" إلى أحد العوامل الأربعة ، وسمك الشريحة هو العامل الأول الذي تم التحقيق فيه. ومن ثم ، فإن قيمة i تساوي 1. يشير المؤشر "j" إلى كل مستوى من العوامل. وبالتالي ، عندما يكون سمك الشريحة هو المستوى الأول (0.5 سم) ، فإن j يساوي 1 ؛ عندما يكون سمك الشريحة هو المستوى الخامس (4 سم) ، j يساوي 5. كانت محتويات MDA (Xij) في TBC المعالج بسماكات 0.5 و 1 و 2 و 3 و 4 سم 0.9693 و 1.0876 و 1.3940 و 1.4185 و 1.3614 مجم / جم على التوالي. وبالتالي ، x j ، الحد الأقصى هو 1.4185 و xj ، الحد الأدنى هو 0.9693.
      figure-protocol-15493(2)
      هكذا figure-protocol-15610
      هنا ، Xij هو المحتوى المقاس ل MDA للتجربة في العامل i-th وعلى مستوى j-th ؛ xj ، min هو الحد الأدنى لمحتوى MDA في هذه المجموعة من التجارب ؛ و xj ، max هو الحد الأقصى لمحتوى MDA في هذه المجموعة من التجارب. وهكذا ، i = 1 ، 2 ، ... ، m ، و j = 1 ، 2 ، ...
      ملاحظة: وبالتالي ، فإن القيم القياسية ل MDA هي 0.0000 و 0.2634 و 0.9455 و 1.0000 و 0.8729 باستخدام مكافئ (2).
    2. توحيد المحتوى الإجمالي ل DDAs (الحصول على yDDAs ؛ يشير DDAs إلى الأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين) باستخدام الصيغة في Eq. (3).
      ملاحظة: i هو واحد من أربعة عوامل ، و j هو كل مستوى من العوامل ؛ Xij هو المحتوى المقاس ل DDAs للتجربة في العامل i-th وعلى مستوى j-th ؛ xj, min هو الحد الأدنى لمحتوى DDAs في تجربة البيانات الجماعية هذه؛ و xj ، max هو الحد الأقصى لمحتوى DDAs في تجربة البيانات الجماعية هذه. بهذه الطريقة ، i = 1 ، 2 ، ... ، m ، و j = 1 ، 2 ، ... كانت محتويات DDAs (Xij) في TBC المعالجة بسماكات 0.5 و 1 و 2 و 3 و 4 سم 0.3492 ، 0.2692 ، 0.2962 ، 0.5354 ، 0.5124 ملغم / جم ، على التوالي. وبالتالي ، x j ، الحد الأقصى هو 0.5354 و xj ، الحد الأدنى هو 0.2692.
      figure-protocol-17029(3)
      figure-protocol-17141
      ملاحظة: القيم القياسية هي 0.6995 و 1.0000 و 0.8986 و 0.0000 و 0.0864 باستخدام مكافئ (3).
  2. احسب شدة التباين المقابلة (S i) والتعارض (δ i) والمعلومات (C i) ووزن المؤشر (W i) وفقا ل Eqs. (4) إلى (7) ،على التوالي 19,20.
    ملاحظة: i = 1 ، 2 ، ... ، m. yij هي البيانات الموحدة لمحتوى MDA أو DDAs للتجربة في العامل i-th وعلى مستوى j-th.
    1. لتقدير شدة التباين ، احسب أولا متوسط قيمة MDA.
      figure-protocol-17861
      أين figure-protocol-17957 هو متوسط قيمة MDA.
      figure-protocol-18068(4)
      figure-protocol-18180
    2. لحساب قيمة التعارض ، قم أولا بتقدير معامل الارتباط γij باستخدام الدالة CORREL في Excel21.
      figure-protocol-18420(5)
      figure-protocol-18532
    3. احسب قيم المعلومات على النحو التالي.
      figure-protocol-18673(6)
      figure-protocol-18786
      ملاحظة: وبالمثل ، C1 ، DDAS = 0.7210
    4. احسب وزن المؤشر على النحو التالي.
      figure-protocol-18984(7)
      figure-protocol-19097
      ملاحظة: لذلك ، تم تحديد معاملات الوزن ل MDA و DDAs مقارنة بسمك الشريحة على أنها 0.4945 و 0.5055 على التوالي.
  3. احسب الدرجات الشاملة لسمك الشريحة.
    figure-protocol-19359
    figure-protocol-19452
    figure-protocol-19545
    figure-protocol-19638
    figure-protocol-19731
    ملاحظة: Y13 هي القيمة القصوى. لذلك ، فإن أفضل معلمة لسمك التقطيع هي المستوى الثالث - 2 سم.

   

النتائج

في هذه الدراسة ، كان لتدرج الشطف المستخدم دقة جيدة (الشكل 1) لمكونات المؤشر الثلاثة في TBC المقلي Zanba ، كما تم تحديده بعد تصحيح الأخطاء المتكرر. كان لمكونات المؤشر الثلاثة في TBC المقلي Zanba-stir-fried علاقة خطية جيدة ضمن نطاق تركيز محدد (الجدول 2). كانت الدقة (الجدول 5...

Discussion

TBC هو دواء تبتي مهم له آثار تبديد البرد وتخفيف الألم. وقد استخدم في الغالب لعلاج الإصابات المؤلمة وآلام المفاصل الروماتيزمية في الصين لآلاف السنين24،25،26. قلويدات Diterpenoid هي مكونات نشطة وسامة من TBC27،28،

Disclosures

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.

Acknowledgements

تم دعم هذا العمل ماليا من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 82130113) ، ومؤسسة علوم ما بعد الدكتوراه الصينية (رقم 2021MD703800) ، ومؤسسة العلوم للشباب في قسم العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة سيتشوان (رقم 2022NSFSC1449) ، وبرنامج تعزيز أبحاث "علماء Xinglin" بجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (رقم. BSH2021009).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
3-DeoxyaconitineChengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.DST221109-033
AconitineChengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.DSTDW000602
Ammonium acetateTianjin Kermel Chemical Reagent Co., LtdChromatographic grade
BenzoylaconitineChengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.DSTDB005502
Design-Expert softwareStat-Ease, Inc., Minneapolis, MN, USAversion 13.0
Electronic analytical balanceShanghai Liangping Instruments Co., Ltd.FA1004
High performance liquid chromatographySHIMADZU Co., Ltd.LC-20A
High-speed smashing machineBeijing Zhongxing Weiye Instrument Co., Ltd.FW-100
Millipore filterTianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltdφ13 0.22 Nylon66
stir-Fry machineChangzhou Maisi Machinery Co., LtdType 5
TiebangchuiGannan Baicao Biotechnology Development Co., Ltd20211012
Ultra pure water systemicRephiLe Bioscience, Ltd.Genie G
Ultrasonic cleansing machineNingbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., LtdSB2200
Zanba27 Chuanzang Road, Ganzi County-

References

  1. Li, C. Y., et al. Aconitum pendulum and Aconitum flavum: A narrative review on traditional uses, phytochemistry, bioactivities and processing methods. Journal of Ethnopharmacology. 292, 115216 (2022).
  2. Wang, J., Meng, X. H., Chai, T., Yang, J. L., Shi, Y. P. Diterpenoid alkaloids and one lignan from the roots of Aconitum pendulum Busch. Natural Products and Bioprospecting. 9 (6), 419-423 (2019).
  3. Yu, L., et al. Traditional Tibetan medicine: therapeutic potential in rheumatoid arthritis. Frontiers In Pharmacology. 13, 938915 (2022).
  4. Zhao, R., et al. One case of ventricular arrhythmia caused by poisoning of traditional Chinese medicine Aconitum pendulum Busch. Journal of People's Military Medical. 61 (4), 346-348 (2018).
  5. Qinghai Medical Products Administration. Processing specification of Tibetan medicine of Qinghai province. Qinghai Nationalities Publishing House. , 96-97 (2010).
  6. Li, J., et al. Comparison of three objective weighting methods to optimize the extraction process of Jianwei Chupi granules. Journal of Guangdong Pharmaceutical University. 38 (6), 91-97 (2022).
  7. Feng, Z. G., et al. Processing methods and the underlying detoxification mechanisms for toxic medicinal materials used by ethnic minorities in China: A review. Journal of Ethnopharmacology. 305, 116126 (2023).
  8. Hsu, Y. T., Su, C. S. Application of Box-Behnken design to investigate the effect of process parameters on the microparticle production of ethenzamide through the rapid expansion of the supercritical solutions process. Pharmaceutics. 12 (1), 42 (2020).
  9. Cheng, F., et al. Optimization of the baked drying technology of Cinnamomi Ramulus based on CRITIC combined with box-behnken response surface method. Journal of Chinese Medicinal Materials. 2022 (8), 1838-1842 (2022).
  10. Huang, X., et al. Optimization of microwave processing technology for carbonized Gardenia jasminoides by Box-Behnken response surface methodology based on CRITIC weighted evaluation. Chinese Herbal Medicines. 48 (6), 1133-1138 (2017).
  11. Elling, U., et al. Derivation and maintenance of mouse haploid embryonic stem cells. Nature Protocols. 14 (7), 1991-2014 (2019).
  12. Gu, J., Wang, Y. P., Ma, X. Simultaneous determinnation of three diester diterpenoid alkaloids in the toots of Aconiti flavi et penduli by HPLC method. Chinese Pharmaceutical Affairs. 28 (6), 618-621 (2014).
  13. Zhang, Y., Fu, X. UPLC simultaneous determination of six esteric alkaloids components in Aconitum Flaram Hand.Mazz. Asia-Pacific Traditional Medicine. 16 (5), 62-65 (2020).
  14. Rumachik, N. G., Malaker, S. A., Paulk, N. K. VectorMOD: Method for bottom-up proteomic characterization of rAAV capsid post-translational modifications and vector impurities. Frontiers In Immunology. 12, 657795 (2021).
  15. Wang, Y. J., Tao, P., Wang, Y. Attenuated structural transformation of aconitine during sand frying process and antiarrhythmic effect of its converted products. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2021, 7243052 (2021).
  16. Wang, H. P., Zhang, Y. B., Yang, X. W., Zhao, D. Q., Wang, Y. P. Rapid characterization of ginsenosides in the roots and rhizomes of Panax ginseng by UPLC-DAD-QTOF-MS/MS and simultaneous determination of 19 ginsenosides by HPLC-ESI-MS. Journal of Ginseng Research. 40 (4), 382-394 (2016).
  17. vander Leeuw, G., et al. Pain and cognitive function among older adults living in the community. Journals of Gerontology Series A. Biological Sciences and Medical Sciences. 71 (3), 398-405 (2016).
  18. Lao, D., Liu, R., Liang, J. Study on plasma metabolomics for HIV/AIDS patients treated by HAART based on LC/MS-MS. Frontiers in Pharmacology. 13, 885386 (2022).
  19. Li, Y., et al. Evaluation of the effectiveness of VOC-contaminated soil preparation based on AHP-CRITIC-TOPSIS model. Chemosphere. 271, 129571 (2021).
  20. Zhong, S., Chen, Y., Miao, Y. Using improved CRITIC method to evaluate thermal coal suppliers. Scientific Reports. 13 (1), 195 (2023).
  21. Lewis, N. S., et al. Magnetically levitated mesenchymal stem cell spheroids cultured with a collagen gel maintain phenotype and quiescence. Journal of Tissue Engineering. 8, (2017).
  22. Chinese Pharmacopoeia Committee. . Pharmacopoeia of the People's Republic of China. 4, (2020).
  23. Li, G., et al. Effect of response surface methodology-optimized ultrasound-assisted pretreatment extraction on the composition of essential oil released from tribute citrus peels. Frontiers in Nutrition. 9, 840780 (2022).
  24. Liu, X. F., et al. Hezi inhibits Tiebangchui-induced cardiotoxicity and preserves its anti-rheumatoid arthritis effects by regulating the pharmacokinetics of aconitine and deoxyaconitine. Journal of Ethnopharmacology. 302, 115915 (2023).
  25. Smolen, J. S., et al. Rheumatoid arthritis. Nature Reviews.Disease Primers. 4, 18001 (2018).
  26. Wang, F., et al. C19-norditerpenoid alkaloids from Aconitum szechenyianum and their effects on LPS-activated NO production. Molecules. 21 (9), 1175 (2016).
  27. Wang, B., et al. Study on the alkaloids in Tibetan medicine Aconitum pendulum Busch by HPLC-MSn combined with column chromatography. Journal of Chromatographic Science. 54 (5), 752-758 (2016).
  28. Liu, S., et al. A review of traditional and current methods used to potentially reduce toxicity of Aconitum roots in Traditional Chinese Medicine. Journal of Ethnopharmacology. 207, 237-250 (2017).
  29. Qiu, Z. D., et al. Online discovery of the molecular mechanism for directionally detoxification of Fuzi using real-time extractive electrospray ionization mass spectrometry. Journal of Ethnopharmacology. 277, 114216 (2021).
  30. El-Shazly, M., et al. Use, history, and liquid chromatography/mass spectrometry chemical analysis of Aconitum. Journal of Food and Drug Analysis. 24 (1), 29-45 (2016).
  31. Chan, T. Y. K. Aconitum alkaloid poisoning because of contamination of herbs by aconite roots. Phytotherapy Research. 30 (1), 3-8 (2016).
  32. Guo, L., et al. Exploring microbial dynamics associated with flavours production during highland barley wine fermentation. Food Research International. 130, 108971 (2020).
  33. Guo, T. L., Horvath, C., Chen, L., Chen, J., Zheng, B. Understanding the nutrient composition and nutritional functions of highland barley (Qingke): A review. Trends in Food Science & Technology. 103, 109-117 (2020).
  34. Wu, H., et al. Anti-myocardial infarction effects of Radix Aconiti Lateralis Preparata extracts and their influence on small molecules in the heart using matrix-assisted laser desorption/ionization-mass spectrometry imaging. International Journal of Molecular Sciences. 20 (19), 4837 (2019).
  35. Huang, G., et al. Study on cardiotoxicity and mechanism of "Fuzi" extracts based on metabonomics. International Journal of Molecular Sciences. 19 (11), 3506 (2018).
  36. Li, S. L., et al. An insight into current advances on pharmacology, pharmacokinetics, toxicity and detoxification of aconitine. Biomedicine & Pharmacotherapy. 151, 113115 (2022).
  37. Xie, Y., et al. Optimization of processing technology of braised Rehmanniae Raidx based on multiple indexes and response surface technology and correlation between components and color. Journal of Chinese Traditional Medicine. 47 (18), 4927-4937 (2022).
  38. Yang, X. Q., Xu, W., Xiao, C. P., Sun, J., Feng, Y. Z. Study on processing technology of Atractylodes chinensis with rice water and its pharmacodynamics of anti-diarrhea. Chinese Herbal Medicines. 53 (1), 78-86 (2022).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

195 Aconitum Busch Zanba stir fried Tiebangchui CRITIC

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved