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  • Materiales
  • Referencias
  • Reimpresiones y Permisos

Resumen

El presente protocolo describe un método de procesamiento de desintoxicación eficiente y estándar para Tiebangchui salteado de Zanba utilizando CRITIC combinado con el método de superficie de respuesta Box-Behnken.

Resumen

La raíz seca de Aconitum pendulum Busch., llamada Tiebangchui (TBC) en chino, es una de las medicinas tibetanas más famosas. Es una hierba ampliamente utilizada en el noroeste de China. Sin embargo, muchos casos de envenenamiento han ocurrido debido a la intensa toxicidad de TBC y porque sus dosis terapéuticas y tóxicas son similares. Por lo tanto, encontrar un método seguro y eficaz para reducir su toxicidad es una tarea urgente. Una búsqueda a través de los clásicos de la medicina tibetana muestra que el método de procesamiento de TBC salteado con Zanba se registró en la "Especificación de procesamiento de la medicina tibetana de la provincia de Qinghai (2010)". Sin embargo, los parámetros de procesamiento específicos aún no están claros. Por lo tanto, este estudio tiene como objetivo optimizar y estandarizar la tecnología de procesamiento de TBC salteado de Zanba.

Primero, se realizó un experimento de un solo factor en cuatro factores: el grosor de la rebanada de TBC, la cantidad de Zanba, la temperatura de procesamiento y el tiempo. Con el contenido de alcaloides monoéster y diéster en TBC salteado de Zanba como índices, se utilizó CRITIC combinado con el método de superficie de respuesta Box-Behnken para optimizar la tecnología de procesamiento de TBC salteado de Zanba. Las condiciones de procesamiento optimizadas de TBC salteado de Zanba fueron un grosor de rebanada TBC de 2 cm, tres veces más Zanba que TBC, una temperatura de procesamiento de 125 °C y 60 min de salteado. Este estudio determinó las condiciones de procesamiento optimizadas y estándar para el uso de TBC salteado de Zanba, proporcionando así una base experimental para el uso clínico seguro y la producción industrial de TBC salteado de Zanba.

Introducción

La raíz seca de Aconitum pendulum Busch y A. flavum Hand.-Mazz., una de las medicinas tibetanas más famosas, se llama Tiebangchui (TBC) en chino 1,2. Las raíces secas de TBC son útiles para disipar el frío y el viento, reducir el dolor y calmar el shock. Fue registrado en el primer volumen de "Estándares de medicamentos (medicina tibetana) del Ministerio de Salud de la República Popular de China", que establece que las raíces secas de TBC se usan comúnmente para tratar la artritis reumatoide, moretones y otras enfermedades del resfriado3. Sin embargo, la dosis terapéutica clínica de TBC es similar a su dosis tóxica, y los incidentes de envenenamiento o muerte han sido frecuentemente reportados debido al uso inadecuado4. Por lo tanto, reducir la toxicidad y preservar la eficacia de TBC se ha convertido en un punto caliente de investigación a lo largo de los años.

En la medicina tibetana, el procesamiento es uno de los métodos más efectivos para atenuar la toxicidad de TBC. De acuerdo con la "Especificación de procesamiento de la medicina tibetana de la provincia de Qinghai (2010)", las hierbas originales (TBC) deben colocarse en una olla de hierro y saltearse con Zanba hasta que la Zanba se vuelva amarilla, después de lo cual se elimina la Zanba y las hierbas se secan al aire 5,6. Sin embargo, no se han documentado parámetros de proceso específicos, lo que dificulta el control de la tecnología de procesamiento y la calidad del TBC salteado con Zanba. El método CRITIC es un método de ponderación objetiva que puede evitar la fuzzificación y la subjetividad, y mejorar la objetividad del pesaje7. El método de superficie de respuesta de Box-Behnken puede reflejar directamente la interacción entre cada factor a través del ajuste polinómico8. La combinación de la superficie de respuesta Box-Behnken y el método CRITIC se utiliza comúnmente para optimizar la tecnología de procesamiento para adquirir el protocolo de procesamiento optimizado 9,10. En este trabajo, se utilizaron como índices de evaluación un alcaloide monoéster-diterpenoide (MDA) (benzoilaconitina) y dos alcaloides diésteres-diterpenoides (DDA) (aconitina, 3-desoxiaconitina). CRITIC combinado con el método de superficie de respuesta Box-Behnken se aplicó para optimizar la tecnología de procesamiento de TBC salteado de Zanba y establecer un método de procesamiento estándar para un uso clínico seguro.

Protocolo

El método de procesamiento TBC salteado de Zanba fue optimizado y estandarizado por CRITIC combinado con el método de superficie de respuesta Box-Behnken. La benzoilaconitina, la aconitina y la 3-deoxiaconitina se utilizaron como índices de evaluación durante este procedimiento.

1. Preparación de la solución de muestra

  1. Preparar la solución madre de la sustancia de referencia. Pesar exactamente 9,94 mg de benzoilaconitina, 8,49 mg de aconitina y 6,25 mg de 3-deoxiaconitina (Tabla de materiales) en una balanza analítica electrónica y colocarlos en un matraz aforado de 10 ml. Luego, agregue una solución de metanol de ácido clorhídrico al 0,05% para disolver los sólidos y completar el volumen a 10 ml. Finalmente, agitar bien la mezcla para obtener la solución madre de la sustancia de referencia con concentraciones másicas de 0,9940 mg/ml de benzoilaconitina, 0,8490 mg/ml de aconitina y 0,6250 mg/ml de 3-deoxiaconitina.
    PRECAUCIÓN: El ácido clorhídrico es un material altamente corrosivo11. Use la protección adecuada, como guantes, una bata de laboratorio, gafas protectoras y una capucha extractora.
  2. Prepare la solución de muestra de prueba.
    1. Pesar 2 g de polvo TBC salteado con Zaba en un matraz cónico.
      1. Prepare TBC salteado de Zanba pesando 30 g de TBC (2 cm) y 90 g de Zanba y añadiéndolos a la máquina de salteado precalentada. Ajuste el tiempo y la temperatura de la máquina salteada a 40 min y 140 °C, respectivamente. Configure la máquina para completar el procesamiento.
      2. Use una máquina trituradora de alta velocidad para moler el TBC salteado de Zaba por separado en muestras de polvo que pueden pasar a través de un tamiz de malla 50 (0.355 mm).
    2. Añadir 3 ml de solución de amoníaco y 50 ml de una solución mezclada de alcohol isopropílico y acetato de etilo (una proporción de 1:1 v/v) en el matraz cónico anterior, basado en estudios previos12,13.
      NOTA: Para preparar la solución de amoníaco, añadir 40 ml de solución concentrada de amoníaco en un matraz aforado de 100 ml y llenar con agua purificada hasta la línea de medición. Tome las medidas de protección adecuadas cuando use una solución concentrada de amoníaco, ya que tiene un olor fuerte.
    3. Pesar la muestra anterior y el matraz cónico y registrar el peso. Ultrasonicado durante 30 min (voltaje: 220 V, frecuencia: 40 kHz).
      NOTA: Los alcaloides de aconitina se descomponen fácilmente por calor. Por lo tanto, la temperatura de extracción ultrasónica debe ser inferior a 25 ° C.
    4. Pesar la muestra y el matraz cónico después de la extracción ultrasónica.
    5. Compensar el peso perdido añadiendo una mezcla de alcohol isopropílico y acetato de etilo (proporción de 1:1 v/v).
    6. Filtre la solución de muestra. Evaporar 25 ml del filtrado a sequedad utilizando un evaporador rotativo a 40 °C.
    7. Disuelva el residuo agregando 5 ml de solución de metanol de ácido clorhídrico al 0,05%, filtre la solución a través de un filtro de jeringa de 0,2 μm y analícela realizando cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).
  3. Prepare una solución mixta de referencia que contenga 0.1988 mg/ml de benzoilaconitina, 0.0509 mg/ml de aconitina y 0.0938 mg/ml de 3-desoxiaconitina.
    NOTA: Cada patrón (0,9940 mg de benzoilaconitina, 0,2545 mg de aconitina y 0,4690 mg de 3-deoxiaconitina) se disuelve en un matraz aforado de 5 ml en metanol de ácido clorhídrico al 0,05% como medio de disolución.
  4. Preparar tampón de acetato de amonio 0,04 M disolviendo 6,16 g de acetato de amonio (Tabla de materiales) en 2 L de agua ultrapura (fase móvil A). Ajuste el pH a 8.50 usando amoníaco.
    PRECAUCIÓN: El amoníaco es un material peligroso. Use la protección adecuada, como guantes, una bata de laboratorio, gafas protectoras y una capucha extractora.
  5. Filtrar 2 L de ultrapuro 100% acetonitrilo (fase móvil B) y desgasificarlo.
    PRECAUCIÓN: El acetonitrilo es un material peligroso13. Use la protección adecuada, como guantes, una bata de laboratorio, gafas protectoras y una capucha extractora.

2. Estado cromatográfico

  1. Inyecte 10 μL de las soluciones de muestra pretratadas en un sistema de HPLC con bombas binarias. Utilice un sistema de HPLC que emplee una columna ODS-3 (5 μm x 4,6 mm x 250 mm; trabajando a 30 °C) con fases móviles A y B para la separación MDA y DDA. Inyecte cada muestra tres veces para la replicación técnica.
  2. Programe el método como se muestra en la Tabla 1 para la columna ODS-3. Establezca un caudal de 1,0 ml/min y la longitud de onda de detección como 235 nm.
  3. Registre las áreas pico de cada compuesto objetivo.
    NOTA: Los detalles de los instrumentos se pueden encontrar en la Tabla de materiales.

3. Prueba de adaptabilidad del sistema

NOTA: Consulte la sección 2 para conocer las condiciones cromatográficas para realizar los pasos 3.1-3.5.

  1. Investigar la relación lineal entre la concentración y el área pico.
    1. Prepare varias concentraciones - 19.88, 39.76, 59.64, 159.04, 198.80 y 497.00 μg / ml - de solución de benzoilaconitina.
    2. Prepare varias concentraciones - 8.49, 16.98, 25.47, 33.96, 50.94 y 169.80 μg / ml - de solución de aconitina.
    3. Prepare varias concentraciones - 1.875, 12.50, 37.50, 62.50, 93.75 y 125.00 μg / ml - de solución de 3-deoxiaconitina.
    4. Inyecte las soluciones de referencia anteriores de baja concentración de masa a alta concentración de masa y registre las áreas máximas.
    5. Obtener tres ecuaciones de regresión lineal a partir de la gráfica de la concentración de la solución de referencia (μg/L) contra el área del pico.
      NOTA: Asegúrese de que las concentraciones de benzoilaconitina, aconitina y 3-deoxiaconitina caigan dentro del rango lineal de esta curva estándar.
  2. Realizar pruebas de precisión inyectando continuamente seis repeticiones de 10 μL de la solución de muestra en el sistema de HPLC y ejecutar las muestras en las mismas condiciones de HPLC descritas en la sección 2. Registre las áreas máximas de benzoilaconitina, aconitina y 3-deoxiaconitina.
  3. Realizar experimentos de pruebas de estabilidad inyectando 10 μL de la solución de muestra preparada y determinar las áreas pico después de 0 h, 2 h, 4 h, 8 h, 12 h y 24 h.
    NOTA: Las áreas pico son registradas automáticamente por el sistema HPLC referenciado. Estos puntos de tiempo fueron basados en literatura relevante15,16,17.
  4. Realice la prueba de reproducibilidad tomando el mismo lote de TBC salteado con Zanba para preparar seis soluciones de muestra de prueba en paralelo de acuerdo con el método del paso 1.2. Inyecte 10 μL de cada muestra en el sistema de HPLC y ejecute las muestras como se describe en la sección 2.
    NOTA: La reproducibilidad se evaluó comparando las diferencias de concentración entre las seis muestras.
  5. Realice el experimento de recuperación preparando seis porciones del mismo lote de TBC salteado con Zaba para la solución de prueba. Luego, agregue ~ 100% de la sustancia de referencia de cada componente índice en seis porciones de la solución de prueba para calcular la tasa de recuperación. Inyectar estas muestras (10 μL) en el sistema de HPLC en las mismas condiciones descritas en la sección 2 y calcular la tasa de recuperación utilizando la ecuación (1):
    figure-protocol-8069(1)
    NOTA: En la Ec. (1), A es la cantidad del componente que debe medirse en la solución de ensayo, B es la cantidad de sustancia de referencia añadida y C es el valor medido de la solución que contiene la sustancia de referencia y la muestra TBC salteada de Zanba.

4. Experimentos de un solo factor

  1. Comparación del grosor de la rebanada
    1. Prepare cinco grupos para las pruebas, cada uno con 30 g de TBC, donde el grosor del TBC es de 0.5, 1, 2, 3 y 4 cm, respectivamente. Pesar una cantidad de Zanba que es tres veces mayor que la de TBC (90 g).
      NOTA: TBC es tóxico. Use la protección adecuada, como guantes, una bata de laboratorio, gafas y una campana extractora, y tenga cuidado durante el proceso de corte. A través del pre-experimento, se encontró que se requería tres veces la cantidad de Zanba para el contacto completo entre TBC y Zanba. Por lo tanto, en el diseño experimental formal, el estudio seleccionó tres veces la cantidad de Zanba al examinar el grosor de la rebanada.
    2. Ajuste la temperatura y la hora de la salteadora automática a 140 °C y 40 min, respectivamente.
    3. Agregue ~ 30 g de TBC y 90 g de Zanba en la máquina después de que la máquina automática de salteado se haya calentado hasta la temperatura establecida.
    4. Prepare las soluciones de ejemplo siguiendo el paso 1.2. Calcular el contenido de los MDA y DDAs en diferentes productos de procesamiento de acuerdo con la curva estándar (Tabla 2). Calcule la puntuación completa basada en los resultados a través del método CRITIC en la sección 6.
    5. De esta manera, compare las cantidades de Zanba, así como las temperaturas y tiempos de procesamiento para la optimización de las condiciones.
  2. Comparación de la cantidad de Zanba
    1. Realice cinco grupos de pruebas, cada una con 30 g de TBC (2 cm), donde la cantidad de Zanba es una, dos, tres, cuatro y cinco veces más que TBC, respectivamente.
    2. Encienda la máquina salteada para su procesamiento. Ajuste la hora y la temperatura de la máquina salteada a 40 min y 140 °C.
    3. Prepare las soluciones de ejemplo siguiendo el paso 1.2. Calcular el contenido de los MDA y DDAs en diferentes productos de procesamiento de acuerdo con la curva estándar (Tabla 2). Calcule la puntuación completa basada en los resultados a través del método CRITIC en la sección 6.
  3. Comparación de la temperatura de procesamiento
    1. Realizar cinco grupos de pruebas, cada una con 30 g de TBC (2 cm) y 90 g de Zanba.
    2. Encienda la máquina salteada para su procesamiento. Ajuste la temperatura de procesamiento a 100 °C, 120 °C, 140 °C, 160 °C y 180 °C. Establezca el tiempo de procesamiento en 40 min.
      NOTA: A través de experimentos previos, se encontró que la velocidad de amarilleo de Zanba es muy baja cuando la temperatura de procesamiento es inferior a 100 ° C, y Zanba es fácil de quemar y volverse negro si la temperatura es demasiado alta (por encima de 180 ° C). Por lo tanto, 100 °C y 180 °C se establecieron para ser los valores mínimo y máximo de temperatura durante el procesamiento, respectivamente.
    3. Prepare las soluciones de ejemplo siguiendo el paso 1.2. Registre las áreas pico de los MDA y DDA. Calcular el contenido de los MDA y DDAs en diferentes productos de procesamiento de acuerdo con la curva estándar (Tabla 2). Calcule la puntuación completa basada en los resultados a través del método CRITIC en la sección 6.
      NOTA: El experimento implica altas temperaturas de 160 °C y 180 °C. Preste atención a la seguridad durante el experimento, de acuerdo con el código de seguridad del laboratorio.
  4. Comparación del tiempo de procesamiento
    1. Realizar cinco grupos de pruebas, cada una con 30 g de TBC (2 cm) y 90 g de Zanba.
    2. Encienda la máquina salteada para su procesamiento. Establezca el tiempo de procesamiento en 20, 40, 60, 80 y 100 minutos. Ajuste la temperatura a 140 °C.
    3. Prepare las soluciones de ejemplo siguiendo la descripción del paso 1.2. Registre las áreas pico de los MDA y DDA. Calcular la calidad de los MDA y DDAs en diferentes productos de procesamiento de acuerdo con la curva estándar (Tabla 2). Calcule la puntuación completa basada en los resultados a través del método CRITIC en la sección 6.

5. Optimización de la tecnología de procesamiento de TBC Zanba-salteado utilizando la metodología de superficie de respuesta (RSM)

  1. Diseño de superficie de respuesta Box-Behnken
    1. Determine el rango de espesor de la rebanada (A, 1-3 cm), la cantidad de Zanba (B, 2-4x), la temperatura de procesamiento (C, 100-140 °C) y el tiempo de procesamiento (D, 40-80 min) mediante experimentos preliminares utilizando pruebas de un solo factor (paso 4.1-4.4).
      NOTA: Los valores codificados de cuatro variables y sus niveles se muestran en la Tabla 3. Tres niveles de cada variable se codificaron como -1, 0 y 1.
  2. Utilice software para generar la matriz y analizar los modelos de superficie de respuesta.
    NOTA: Las capturas de pantalla para el uso del software se muestran en Archivo complementario 1.
    1. Utilice un diseño de Box-Behnken de tres niveles y cuatro factores compuesto por 24 experimentos (como se hizo en este estudio) y mida cinco réplicas (orden de ejecución 1, 9, 14, 16 y 25) para calcular la suma de errores puros de los cuadrados (Tabla 4). Establezca la puntuación completa (Y) como respuesta (pasos 1-4, Archivo complementario 1).
      1. En la página de inicio, haga clic en Nuevo diseño (paso 1, Archivo complementario 1) y, en el panel izquierdo de la página Diseño, haga clic en Superficie de respuesta | Box-Behnken y establecer los parámetros de los cuatro factores de la tabla (paso 2, Archivo complementario 1).
      2. Haga clic en Siguiente (paso 2, Archivo complementario 1), establezca los nombres de las respuestas y haga clic en Finalizar (paso 3, Archivo complementario 1).
      3. Genere el diseño de la superficie de respuesta mediante la operación anterior (paso 4, Archivo complementario 1).
  3. Complete el experimento basado en los 29 escenarios diseñados para la superficie de respuesta.
  4. Prepare las soluciones de ejemplo siguiendo el paso 1.2.
  5. Registre las áreas pico de los MDA y DDA.
    NOTA: Las áreas pico son registradas automáticamente por el sistema HPLC referenciado.
  6. Calcular la calidad de los MDA y DDAs en los diferentes productos de procesamiento.
  7. Calcule la puntuación completa basada en los resultados a través del método CRITIC en el paso 6.
    Nota: El método específico se ilustra en el paso 6.
  8. Ingrese la puntuación completa obtenida de 29 ensayos en la computadora y analícela utilizando el software de referencia (paso 5, Archivo complementario 1).
  9. Realizar la validación estadística de las ecuaciones polinómicas y los análisis de superficie de respuesta trazados en gráficos de modelos 3D a través del software (pasos 6-8, Archivo complementario 1).
    1. En el panel de navegación izquierdo, en Análisis (+), haga clic en Y y, a continuación, haga clic en Iniciar análisis en la ventana Configurar (paso 6, Archivo complementario 1).
    2. Haga clic en ANOVA en el menú superior y observe la tabla de resultados que muestra el análisis de varianza (paso 7, Archivo complementario 1).
    3. En el menú superior, haga clic en Gráficos de modelo y luego en Superficie 3D para obtener los gráficos de superficie de respuesta que reflejan los efectos de los parámetros de procesamiento en las puntuaciones sintéticas (paso 8, Archivo complementario 1).
  10. Realizar la validación del modelo de superficie de respuesta por triplicado en las condiciones óptimas previstas (paso 9, Archivo Suplementario 1) para verificar la estabilidad de la tecnología de procesamiento. En el panel de navegación izquierdo, en Optimización, haga clic en Numérica Luego, en el menú superior, haga clic en Soluciones. Observe las condiciones óptimas previstas.

6. Evaluación del modelo

NOTA: Este paso debe realizarse después de que se haya completado cada experimento de un solo factor o experimento de superficie de respuesta. Después de completar cada experimento (por ejemplo, comparación del grosor del corte), se mide el contenido de MDA y DDA en las diferentes muestras para obtener cinco conjuntos de datos, de acuerdo con el paso 1.2 y la sección 2. Los datos figuran en el cuadro suplementario S1.

  1. Procesamiento adimensional del índice
    NOTA: Este paso transforma el valor medido (Xij) en un valor relativo adimensional, de modo que el valor de cada índice está en el mismo nivel de cantidad. Esta operación puede facilitar el análisis exhaustivo y la comparación de indicadores en diferentes unidades u órdenes de magnitud18. A efectos ilustrativos, se han utilizado los valores de espesor de los sectores para los cálculos que se muestran a continuación (cuadro suplementario S1).
    1. Estandarizar el contenido del MDA (obtener yMDA; MDA se refiere a benzoilaconitina) utilizando la fórmula en la Ec. (2).
      NOTA: El índice "i" representa uno de cuatro factores, y el grosor del corte es el primer factor investigado. Por lo tanto, el valor de i es igual a 1. El índice "j" representa cada nivel de factores; Así, cuando el grosor de la rebanada es el primer nivel (0,5 cm), j es igual a 1; Cuando el grosor de la rebanada es el quinto nivel (4 cm), j es igual a 5. Los contenidos de MDA (Xij) en el TBC procesado con espesores de 0,5, 1, 2, 3 y 4 cm fueron 0,9693, 1,0876, 1,3940, 1,4185 y 1,3614 mg/g, respectivamente. Así, x j,max es 1.4185 y xj, min es 0.9693.
      figure-protocol-19055(2)
      Así figure-protocol-19171
      Aquí, Xij es el contenido medido del MDA del experimento en el factor i-ésimo y en el nivel j-ésimo; xj, min es el contenido mínimo del MDA en este grupo de experimentos; y xj, max es el contenido máximo del MDA en este grupo de experimentos. Así, i = 1, 2, ..., m, y j = 1, 2, ..., n.
      NOTA: Por lo tanto, los valores estandarizados del MDA son 0.0000, 0.2634, 0.9455, 1.0000 y 0.8729 usando Eq. (2).
    2. Estandarizar el contenido total de los PDD (obtener yDDAs; DDAs se refiere a aconitina y 3-deoxiaconitina) utilizando la fórmula en la Ec. (3).
      NOTA: i es uno de cuatro factores, y j es cada nivel de los factores; Xij es el contenido medido de los DDA del experimento en el factor i-ésimo y en el nivel j-ésimo; xj, min es el contenido mínimo de los DDA en este experimento grupal de datos; y xj, max es el contenido máximo de los DDA en este experimento grupal de datos. De esta manera, i = 1, 2, ..., m y j = 1, 2, ..., n. Los contenidos de los DDAs (Xij) en el TBC procesado con espesores de 0,5, 1, 2, 3 y 4 cm fueron 0,3492, 0,2692, 0,2962, 0,5354, 0,5124 mg/g, respectivamente. Así, x j,max es 0.5354 y xj, min es 0.2692.
      figure-protocol-20700(3)
      figure-protocol-20812
      NOTA: Los valores estandarizados son 0.6995, 1.0000, 0.8986, 0.0000 y 0.0864 usando Eq. (3).
  2. Calcule la intensidad de contraste correspondiente (S i), el conflicto (δ i), la información (C i) y el peso del índice (W i) según Eqs. (4) a (7), respectivamente19,20.
    NOTA: i = 1, 2, ..., m. yij son los datos estandarizados del contenido MDA o DDAs del experimento en el factor i-ésimo y en el nivel j-ésimo.
    1. Para estimar la intensidad del contraste, primero calcule el valor promedio de MDA.
      figure-protocol-21649
      Donde figure-protocol-21747 es el valor promedio del MDA.
      figure-protocol-21869(4)
      figure-protocol-21981
    2. Para calcular el valor del conflicto, primero estime el coeficiente de correlación γij utilizando la función CORREL en Excel21.
      figure-protocol-22259(5)
      figure-protocol-22371
    3. Calcule los valores de información de la siguiente manera.
      figure-protocol-22534(6)
      figure-protocol-22647
      NOTA: De manera similar, C1, DDAS = 0.7210
    4. Calcule el peso del índice de la siguiente manera.
      figure-protocol-22868(7)
      figure-protocol-22981
      NOTA: Por lo tanto, los coeficientes de peso de los MDA y DDA en comparación con el espesor del corte se establecieron como 0,4945 y 0,5055, respectivamente.
  3. Calcule las puntuaciones completas de los espesores de las rebanadas.
    figure-protocol-23327
    figure-protocol-23420
    figure-protocol-23513
    figure-protocol-23606
    figure-protocol-23699
    NOTA: Y13 es el valor máximo. Por lo tanto, el mejor parámetro de espesores de corte es el tercer nivel: 2 cm.

   

Resultados

En este estudio, el gradiente de elución utilizado tuvo una buena resolución (Figura 1) para los tres componentes del índice en TBC Zanba-salteado-frito, según lo determinado después de la depuración repetida. Los tres componentes del índice en TBC Zanba-salteado tuvieron una buena relación lineal dentro de un rango de concentración específico (Tabla 2). La precisión (Tabla 5), la estabilidad (Tabla 6), la repetibilidad (Tabla 7) y la recuperació...

Discusión

TBC es una importante medicina tibetana con los efectos de disipar el frío y aliviar el dolor. Se ha utilizado principalmente para tratar lesiones traumáticas y artralgia reumática en China durante miles de años24,25,26. Los alcaloides diterpenoides son ingredientes activos y tóxicos de TBC27,28,29. Los principales efectos tóxicos...

Divulgaciones

Los autores no tienen conflictos de intereses que revelar.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado financieramente por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (No. 82130113), la Fundación de Ciencias Postdoctorales de China (No. 2021MD703800), la Fundación de Ciencias para Jóvenes del Departamento de Ciencia y Tecnología de la Provincia de Sichuan (No. 2022NSFSC1449) y el Programa de Promoción de la Investigación "Xinglin Scholars" de la Universidad de Medicina Tradicional China de Chengdu (No. BSH2021009).

Materiales

NameCompanyCatalog NumberComments
3-DeoxyaconitineChengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.DST221109-033
AconitineChengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.DSTDW000602
Ammonium acetateTianjin Kermel Chemical Reagent Co., LtdChromatographic grade
BenzoylaconitineChengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.DSTDB005502
Design-Expert softwareStat-Ease, Inc., Minneapolis, MN, USAversion 13.0
Electronic analytical balanceShanghai Liangping Instruments Co., Ltd.FA1004
High performance liquid chromatographySHIMADZU Co., Ltd.LC-20A
High-speed smashing machineBeijing Zhongxing Weiye Instrument Co., Ltd.FW-100
Millipore filterTianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltdφ13 0.22 Nylon66
stir-Fry machineChangzhou Maisi Machinery Co., LtdType 5
TiebangchuiGannan Baicao Biotechnology Development Co., Ltd20211012
Ultra pure water systemicRephiLe Bioscience, Ltd.Genie G
Ultrasonic cleansing machineNingbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., LtdSB2200
Zanba27 Chuanzang Road, Ganzi County-

Referencias

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  2. Wang, J., Meng, X. H., Chai, T., Yang, J. L., Shi, Y. P. Diterpenoid alkaloids and one lignan from the roots of Aconitum pendulum Busch. Natural Products and Bioprospecting. 9 (6), 419-423 (2019).
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