فحص الفنتانيل التناظري باستخدام LC-TIMS-TOF MS / MS

Summary

طريقة لفحص نظائر الفنتانيل بناء على وقت الاحتفاظ بها وحركتها ونمط تجزئة قياس الطيف الكتلي.

Abstract

أصبح استخدام الفنتانيل وظهور نظائر الفنتانيل على مدى العقود الأخيرة مصدر قلق متزايد للمجتمع ككل. الفنتانيل ونظائره هي المساهمين الرئيسيين في الجرعات الزائدة القاتلة وغير المميتة في الولايات المتحدة. ترتبط أحدث حالات الجرعة الزائدة المرتبطة بالفنتانيل بالفنتانيل المصنع بشكل غير مشروع والفعالية الشديدة المرتبطة به. في هذا العمل ، نصف بروتوكولا تحليليا عالي الإنتاجية لفحص نظائر الفنتانيل. يسمح استخدام الكروماتوغرافيا السائلة التكميلية ، ومطياف الحركة الأيونية المحاصرة ، وقياس الطيف الكتلي الترادفي بفصل وتخصيص مئات نظائر الفنتانيل من عينة واحدة في مسح واحد. يستفيد النهج الموصوف من التطور الأخير للاكتساب المعتمد على البيانات والاكتساب المستقل للبيانات باستخدام التراكم المتوازي في فخ التنقل متبوعا بالتجزئة المتسلسلة باستخدام التفكك الناجم عن الاصطدام. يتم تعيين نظائر الفنتانيل بثقة بناء على وقت الاحتفاظ بها وحركتها ونمط تجزئة مرض التصلب العصبي المتعدد.

Introduction

الفنتانيل ونظائره هم المساهمون الرئيسيون في الجرعات الزائدة القاتلة وغير المميتة في الولايات المتحدة ^1,2. أفاد مركز السيطرة على الأمراض والوقاية منها (CDC) أن عدد الوفيات الناجمة عن الجرعات الزائدة من المواد الأفيونية الاصطناعية من عام 2013 حتى عام 2021 كان أكثر من 258,000. في عام 2021 وحده ، يمكن أن يعزى أكثر من 68,000 حالة وفاة بجرعة زائدة إلى المواد الأفيونية الاصطناعية ، أي ما مجموعه 82٪ من جميع الوفيات المرتبطة بالجرعة الزائدة في البلاد³. منذ عام 2013 ، تم تحديد المئات من نظائر الفنتانيل ، مع قوة متفاوتة⁴. مع ظهور نظائر الفن....

Protocol

1. إعداد العينة

1. قم بتخزين مجموعة الغربلة التناظرية للفنتانيل في درجة حرارة -20 درجة مئوية بمجرد استلامها. أعد تعليق كل عينة إلى تركيز نهائي قدره 400 ميكروغرام / مل بإضافة 500 ميكرولتر من الميثانول النقي LC / MS.
2. امزج باستخدام خلاط الألواح أو الدوامة عند 400 دورة في الدقيقة لمدة 1 ساعة أو دوامة بسرعة متوسطة لمدة 15 دقيقة. بعد إعادة التعليق ، قم بتخزين القوارير عند -20 درجة مئوية.
3. قم بتخفيف كل معيار إلى تركيز نهائي قدره 1 نانوغرام / مل باستخدام ميثانول نقي بدرجة LC / MS.
4. قم بتجميع المعايير في مجموعات ، بحيث لا تحتوي كل مجموعة على أي معايير أيزومرية انظر الجدول التكميلي 1 <....

النتائج

تم تقسيم مجموعة الغربلة التناظرية الفنتانيل المكونة من 250 معيارا من النظائر إلى 14 مجموعة: 12 مجموعة من 17 نظيرا ومجموعتين من 16 نظيرا ، لتجنب تداخلات m / z. يتميز كل نظير أيضا بنمط تجزئة m / z ووقت الاحتفاظ (RT) والتنقل (K) ونمط تجزئة MS / MS.

يتم عرض أمثلة على الانفصال ال.......

Discussion

يمكن أن يكون الفصل التحليلي للعينات البيولوجية التي تحتوي على محتوى أيزوميري عالي تحديا من الناحية التحليلية. في هذه الورقة ، تهدف الطريقة الموصوفة إلى توصيف 29 مجموعة أيزومر ، ليصبح المجموع 185 نظيرا من 250 مجموعة قياسية من المواد الأفيونية. أثناء إعداد مجموعة الاختبار ، م.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ammonium formate for HPLC	Fluka	17843-50G
Eppendorf Snap-Cap Microcentrifuge Safe-Lock Tubes	Fisher	05-402-25
ESI-L Low Concentration Tuning mix	Agilent	G1969-85000
Fentanyl Analog Screening (FAS) Kit	Cayman Chemical	9003237, 9003286, 9003380, 9003381	kit of 250 snthetic opioids, 210 fentanyl analogs, broken up into one kit and emergent panel versions 1-4
Formic acid Optima LC/MS	Fisher	A117-50
Onyx guard column (5 x 4.6 mm)	Phenomenex	CHO-7649	guard column for C18 columns
Onyx monolithic C18 HPLC column (100 x 4.6 mm)	Phenomenex	CHO-7643	reverse phase C18 LC column
Optima grade acetonitrile	Fisher	A996-4
Optima grade methanol	Fisher	A454-4
Optima grade water	Fisher	W7-4
Pipette	Fisher	05-719-510	kit of 1-10 µL, 10-100 µL, and 100-1000 µL pipette
Pipette tips 10µL	Fisher	94060100
Pipette tips 1000µL	Fisher	94056710
Pipette tips 200µL	Fisher	94060310
Plate mixer	IKA	MS 3 D S1	IKA MS 3 digtital
Prominence LC-20 CE ultrafast liquid chromatograph	Shimadzu, Japan		equiped with DGU-20A5, LC-20AD, SIL-20AC, CTO-20A, SPD-M20A, CBM-20A, SPD-20A
timsTOF Pro	Bruker Daltonics Inc., Billerica, MA		timsTOF instrument with PASEF