Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Предложен метод скрининга аналогов фентанила, основанный на времени их удержания, подвижности и масс-спектрометрической картине фрагментации.

Аннотация

Употребление фентанила и появление аналогов фентанила в последние десятилетия вызывает все большую озабоченность у общества в целом. Фентанил и его аналоги являются основными причинами смертельных и несмертельных передозировок в Соединенных Штатах. Большинство последних случаев передозировки, связанной с фентанилом, связаны с незаконно изготовленным фентанилом и связанной с ним чрезвычайной потенцией. В настоящей работе мы описываем высокопроизводительный аналитический протокол для скрининга аналогов фентанила. Использование комплементарной жидкостной хроматографии, спектрометрии подвижности захваченных ионов и тандемной масс-спектрометрии позволяет отделять и назначать сотни аналогов фентанила из одного образца за одно сканирование. Описанный подход использует преимущества последних разработок в области сбора, зависящего от данных, и сбора данных, использующего параллельное накопление в ловушке мобильности с последующей последовательной фрагментацией с использованием диссоциации, вызванной столкновением. Аналоги фентанила уверенно назначаются исходя из времени их удержания, подвижности и характера фрагментации РС.

Введение

Фентанил и его аналоги являются основными причинами смертельных и несмертельных передозировок в Соединенных Штатах 1,2. Центр по контролю и профилактике заболеваний (CDC) сообщил, что число смертей, связанных с передозировкой синтетическими опиоидами, с 2013 по 2021 год составило более 258 000. Только в 2021 году более 68 000 смертей от передозировки могут быть связаны с синтетическими опиоидами, что составляет 82% всех смертей, связанных с передозировкой, в стране3. С 2013 года были выявлены сотни аналогов фентанила, с различной эффективностью

протокол

1. Подготовка образцов

  1. Храните набор для скрининга аналогов фентанила при температуре -20 °C после их получения. Суспендируйте каждый образец до конечной концентрации 400 мкг/мл путем добавления 500 мкл чистого метанола класса LC/MS.
  2. Перемешивайте с помощью пластинчатого миксера или вортексера при 400 об/мин в течение 1 ч или вихревом на средней скорости в течение 15 мин. После ресуспензии хранить флаконы при температуре -20 °C.
  3. Разбавьте каждый стандарт до конечной концентрации 1 нг/мл с использованием чистого метанола класса LC/MS.
  4. Сгруппируйте стандарты в группы таким образом....

Результаты

Набор для скрининга аналогов фентанила из 250 стандартов аналогов был разделен на 14 групп: 12 групп по 17 аналогов и 2 группы по 16 аналогов, чтобы избежать м/з помех. Кроме того, каждый аналог характеризуется m/z, временем удержания (RT), подвижностью (K) и характером фрагментац?.......

Обсуждение

Аналитическое разделение биологических образцов с высоким содержанием изомерных веществ может быть аналитически сложным. В данной работе описанный метод направлен на характеристику 29 наборов изомеров, в общей сложности 185 аналогов из 250 стандартных наборов опиоидо?.......

Раскрытие информации

Мэтью Уиллеттс и Мелвин А. Парк являются сотрудниками компании Bruker Daltonics Inc, производителя коммерческого инструмента timsTOF Pro2. Все остальные авторы не заявляют о конфликте интересов.

Благодарности

Автор хотел бы выразить признательность доктору Сезару Рамиресу за первоначальную поддержку во время разработки метода.

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Ammonium formate for HPLCFluka17843-50G
Eppendorf Snap-Cap Microcentrifuge Safe-Lock TubesFisher05-402-25
ESI-L Low Concentration Tuning mixAgilentG1969-85000
Fentanyl Analog Screening (FAS) Kit Cayman Chemical9003237, 9003286, 9003380, 9003381kit of 250 snthetic opioids, 210 fentanyl analogs, broken up into one kit and emergent panel versions 1-4
Formic acid Optima LC/MSFisherA117-50
Onyx guard column (5 x 4.6 mm) PhenomenexCHO-7649guard column for C18 columns
Onyx monolithic C18 HPLC column (100 x 4.6 mm)PhenomenexCHO-7643reverse phase C18 LC column
Optima grade acetonitrile FisherA996-4
Optima grade methanolFisherA454-4
Optima grade waterFisherW7-4
PipetteFisher05-719-510kit of 1-10 µL, 10-100 µL, and 100-1000 µL pipette
Pipette tips 10µLFisher94060100
Pipette tips 1000µLFisher94056710
Pipette tips 200µLFisher94060310
Plate mixerIKA MS 3 D S1IKA MS 3 digtital
Prominence LC-20 CE ultrafast liquid chromatographShimadzu, Japanequiped with DGU-20A5, LC-20AD, SIL-20AC, CTO-20A, SPD-M20A, CBM-20A, SPD-20A
timsTOF ProBruker Daltonics Inc., Billerica, MAtimsTOF instrument with PASEF 

Ссылки

  1. Gladden, R. M., Martinez, P., Seth, P. Fentanyl Law Enforcement Submissions and Increases in Synthetic Opioid-Involved Overdose Deaths - 27 States, 2013-2014. Morbidity and Mortality Weekly Report. 65 (33), 837-843 (2016).
  2. Rudd, R. A., Seth, P., David, F., Scholl, L.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

213data dependent analysisdata independent analysis

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены