LC-TIMS-TOF MS/MS kullanılarak Fentanil Analog Tarama

Özet

Fentanil analoglarının alıkonma sürelerine, hareketliliklerine ve kütle spektrometresi parçalanma modellerine dayalı olarak taranması için bir yöntem.

Özet

Fentanil kullanımı ve son yıllarda fentanil analoglarının ortaya çıkması, genel olarak toplum için artan bir endişe haline gelmiştir. Fentanil ve analogları, Amerika Birleşik Devletleri'nde ölümcül ve ölümcül olmayan aşırı dozlara en çok katkıda bulunanlardır. En son fentanil ile ilişkili aşırı doz vakaları, yasadışı olarak üretilen fentanil ve buna bağlı aşırı etki ile bağlantılıdır. Bu çalışmada, fentanil analoglarının taranması için yüksek verimli bir analitik protokol tanımlanmıştır. Tamamlayıcı sıvı kromatografisi, sıkışmış iyon hareketlilik spektrometrisi ve tandem kütle spektrometresinin kullanılması, tek bir taramada tek bir numuneden yüzlerce fentanil analogunun ayrılmasına ve atanmasına izin verir. Açıklanan yaklaşım, hareketlilik tuzağında paralel birikim kullanarak veriye bağımlı edinim ve veriden bağımsız edinimin son gelişmesinden ve ardından çarpışma kaynaklı ayrışma kullanılarak sıralı parçalanmadan yararlanır. Fentanil analogları, tutma sürelerine, hareketliliklerine ve MS parçalanma modellerine göre güvenle atanır.

Giriş

Fentanil ve analogları, Amerika Birleşik Devletleri'nde ölümcül ve ölümcül olmayan aşırı dozlara en çok katkıda bulunanlardır ^1,2. Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezi (CDC), 2013'ten 2021'e kadar sentetik opioide bağlı aşırı doz ölümlerinin sayısının 258.000'in üzerinde olduğunu bildirdi. Yalnızca 2021'de, 68.000'den fazla aşırı doz ölümü sentetik opioidlere atfedilebilir ve bu da ülkedeki tüm aşırı doza bağlı ölümlerin toplam %82'sini oluşturur³. 2013'ten bu yana, değişen potansiyele sahip yüzlerce fentanil analoğu tanımlanmıştır⁴

Protokol

1. Numune hazırlama

1. Fentanil analog tarama kitini teslim alındıktan sonra -20 °C'de saklayın. 500 μL saf LC/MS sınıfı metanol ilavesiyle her numuneyi 400 μg/mL'lik bir nihai konsantrasyona yeniden süspanse edin.
2. 1 saat boyunca 400 rpm'de bir plaka karıştırıcı veya girdap kullanarak veya 15 dakika orta hızda girdap kullanarak karıştırın. Yeniden süspansiyondan sonra şişeleri -20 °C'de saklayın.
3. Her standardı saf LC / MS dereceli metanol kullanarak 1 ng / mL'lik bir nihai konsantrasyona seyreltin.
4. Standartları, her grup herhangi bir izomerik standart içermeyecek şekilde gruplara a....

Tartışmalar

Yüksek izomerik içerik içeren biyolojik numunelerin analitik olarak ayrılması analitik olarak zor olabilir. Bu yazıda, açıklanan yöntem, 250 opioid standart kitinden toplam 185 analog için 29 izomer setini karakterize etmeyi amaçlamaktadır. Test grubu hazırlığı sırasında, deneysel olarak ayırt edilemeyen m/z ile iki analog olmadığından emin olmak önemlidir. Burada açıklanan veriler, eğer bu yöntem bir saha deneyinde kullanılacaksa, insan tabanlı bir matristen.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ammonium formate for HPLC	Fluka	17843-50G
Eppendorf Snap-Cap Microcentrifuge Safe-Lock Tubes	Fisher	05-402-25
ESI-L Low Concentration Tuning mix	Agilent	G1969-85000
Fentanyl Analog Screening (FAS) Kit	Cayman Chemical	9003237, 9003286, 9003380, 9003381	kit of 250 snthetic opioids, 210 fentanyl analogs, broken up into one kit and emergent panel versions 1-4
Formic acid Optima LC/MS	Fisher	A117-50
Onyx guard column (5 x 4.6 mm)	Phenomenex	CHO-7649	guard column for C18 columns
Onyx monolithic C18 HPLC column (100 x 4.6 mm)	Phenomenex	CHO-7643	reverse phase C18 LC column
Optima grade acetonitrile	Fisher	A996-4
Optima grade methanol	Fisher	A454-4
Optima grade water	Fisher	W7-4
Pipette	Fisher	05-719-510	kit of 1-10 µL, 10-100 µL, and 100-1000 µL pipette
Pipette tips 10µL	Fisher	94060100
Pipette tips 1000µL	Fisher	94056710
Pipette tips 200µL	Fisher	94060310
Plate mixer	IKA	MS 3 D S1	IKA MS 3 digtital
Prominence LC-20 CE ultrafast liquid chromatograph	Shimadzu, Japan		equiped with DGU-20A5, LC-20AD, SIL-20AC, CTO-20A, SPD-M20A, CBM-20A, SPD-20A
timsTOF Pro	Bruker Daltonics Inc., Billerica, MA		timsTOF instrument with PASEF