A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يعد نموذج زرع القصبة الهوائية داخل الرئة (IPTT) ذا قيمة لدراسة مرض مجرى الهواء المسد (OAD) بعد زرع الرئة. يقدم نظرة ثاقبة على السلوك المناعي والوعائي الخاص بالرئة في طمس مجرى الهواء بعد الخيفي مع قابلية عالية للاستنساخ. هنا ، نصف إجراء IPTT ونتائجه المتوقعة.

Abstract

يستخدم زرع القصبة الهوائية داخل الرئة (IPTT) كنموذج لمرض مجرى الهواء المسد (OAD) بعد زرع الرئة. تم الإبلاغ عن هذا النموذج في البداية من قبل فريقنا ، وقد اكتسب استخداما في دراسة OAD نظرا لقابليته العالية للتكاثر التقني وملاءمته للتحقيق في السلوكيات المناعية والتدخلات العلاجية.

في نموذج IPTT ، يتم إدخال طعم القصبة الهوائية للقوارض مباشرة في رئة المتلقي من خلال غشاء الجنب. يختلف هذا النموذج عن نموذج زرع القصبة الهوائية غير المتجانسة (HTT) ، حيث يتم زرع الطعوم في مواقع تحت الجلد أو تحت الجلد ، وعن نموذج زرع القصبة الهوائية التقويمية (OTT) حيث تحل القصبة الهوائية للمتبرع محل القصبة الهوائية للمتلقي.

يتطلب التنفيذ الناجح لنموذج IPTT مهارات تخدير وجراحة متقدمة. تشمل مهارات التخدير التنبيب الرغامي للمتلقي ، وتحديد معايير التهوية المناسبة ، ونزع الأنبوب في الوقت المناسب بعد الشفاء من التخدير. المهارات الجراحية ضرورية لوضع الكسب غير المشروع بدقة داخل الرئة ولضمان الإغلاق الفعال لغشاء الجنب الحشوي لمنع تسرب الهواء والنزيف. بشكل عام ، تستغرق عملية التعلم حوالي 2 أشهر.

على عكس نماذج HTT و OTT ، في نموذج IPTT ، يطور مجرى الهواء الخيفي طمس مجرى الهواء في البيئة المكروية للرئة ذات الصلة. يسمح هذا للباحثين بدراسة العمليات المناعية والأوعية الدموية الخاصة بالرئة التي تنطوي على طمس مجرى الهواء بعد زرع الرئة. علاوة على ذلك ، يعد هذا النموذج فريدا أيضا من حيث أنه يعرض الأعضاء اللمفاوية الثالثية (TLOs) ، والتي تظهر أيضا في الطعم الخيفي للرئة البشرية. تتكون TLOs من مجموعات الخلايا التائية والبائية وتتميز بوجود الأوردة البطانية العالية التي توجه تجنيد الخلايا المناعية. لذلك ، من المحتمل أن يلعبوا دورا حاسما في قبول الكسب غير المشروع ورفضه. نستنتج أن نموذج IPTT هو أداة مفيدة لدراسة المسارات المناعية داخل الرئة والبروليفية المشاركة في تطوير طمس مجرى الهواء في الطعم الخيفي لزراعة الرئة.

Introduction

تم تأسيس زراعة الرئة كعلاج فعال للمرضى الذين يعانون من أمراض الجهاز التنفسي في المرحلة النهائية. ومع ذلك ، فإن متوسط معدل البقاء على قيد الحياة لمتلقي زراعة الرئة البشرية هو حوالي 6 سنوات فقط ، مع تطور التهاب القصيبات المسد (OB) ، وهو نوع من مرض انسداد مجرى الهواء (OAD) ، كونه سببا رئيسيا للوفاة بعد السنة الأولى بعد الزرع1.

تم استخدام العديد من النماذج الحيوانية للتحقيق في الآلية الكامنة وراء OAD. أحد هذه النماذج هو نموذج زرع القصبة الهوائية غير المتجانسة (HTT)2. في هذا النموذج ، يتم زرع ترقيع القصبة الهوائية في الأنسجة تحت الجلد أو الثرب للمتلقي. يحدث فقدان الخلايا الظهارية الطعم الرغامي النا....

Protocol

تم التعامل مع جميع وفقا للمبادئ التوجيهية التي وضعها المجلس الكندي لرعاية في دليل رعاية واستخدام التجارب. تمت الموافقة على البروتوكول التجريبي من قبل لجنة رعاية التابعة لمعهد أبحاث مستشفى تورنتو العام ، شبكة الصحة الجامعية.

1. جراحة المتبرع

ملاحظة: تستخدم الفئران BALB / c كمثال على المتبرعين للتجربة. يجب تنفيذ جميع الإجراءات باستخدام تقنية معقمة.

  1. قبل الإجراء ، سجل وزن كل ماوس.
  2. القتل الرحيم للماوس باستخدام غرفة CO2 .
  3. بمجرد تأكيد الوفاة ، ضع الماوس في وضع ضعيف وقم بتأمين الأطراف بشريط.
  4. تحضير المنطقة الجراحية عن طريق تعقيمها بكحول الأيزوبروبيل بنسبة....

النتائج

بناء على خبرتنا ، تتطلب الكفاءة في هذا النموذج عادة ما يقرب من 2 أشهر من التدريب. بمجرد تحقيق الكفاءة ، تتطلب إجراءات المتبرع عادة 15 دقيقة ، بينما تتطلب إجراءات المتلقي حوالي 30 دقيقة. معدل الوفيات المتوقع للمشغل المدرب هو 0٪.

في الشكل 4 أ، يظهر الطعم الخيفي الر?.......

Discussion

يتضمن إجراء IPTT للفأر خطوات حاسمة. فيما يتعلق بالتخدير ، فإن الخطوة الأولى الحاسمة هي التنبيب الرغامي. من الضروري حمل الماوس على ارتفاع مناسب مع وضع أرجله على الطاولة لتصور الحبال الصوتية وتسهيل التنبيب الفوري. بالإضافة إلى ذلك ، من الضروري تعديل حجم الجهاز التنفسي الدقيق وضغط الزفير النه?.......

Disclosures

ليس لدى مؤلفي هذه المخطوطة أي تضارب في المصالح للكشف عنه.

Acknowledgements

يود المؤلفون أن يشكروا جيروم فاليرو على تحرير هذه المخطوطة. تم إنشاء الشكل 1 والشكل 3I و J و L باستخدام BioRender.com.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
BALB/cJThe Jackson Laboratory8-10 weeks 25-30 gMale, Donor
BD 1 mL SyringeBecton Dickinson309659
BD PrecisionGlide Needle Aiguile BD
PrecisionGlide
Becton Dickinson305122
Bovie Change-A-Tip Deluxe High-TempertureBovieDEL1
C57BL/6JThe Jackson Laboratory8-10 weeks 25-30 gMale, Recipient
Dumont #5/45 ForcepsF·S·T11251-35
Ethicon Ligaclip Multiple -Clip Appliers-EthiconLX107
Extra Fine Graefe ForcepsF·S·T11150-10
Glover Bulldog ClampIntegra320-127
Halsted-Mosquito HemostatsF·S·T13009-12
Horizon Titanium Ligating ClipsTeleflex001201
Leica M651 Manual surgical microscope for microsurgical proceduresLeica
Magnetix Fixator with spring lockCD+ LABSACD-001
Microsurgical ScissorJarit277-051
Mouse and Perinatal Rat Ventilator Model 687Harvard55-0001
Perfadex PlusXVIVO19850
Retractor Tip Blunt - 2.5 mmCD+ LABSACD-011
small animal tableCD+ LABSACD-003
Surgipro Blue 24" CV-1 Taper, Double ArmedCovidienVP702X
Systane ointmentAlconn1444062
System ElastomerCD+ LABSACD-007
Terumo Surflo IV Catheter, 20 G x 1 inTerumo Medical CorporationSR-OX2025CA
VMT table Topbenson91803300

References

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

201 Tirthialy

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved