マウス肺内気管移植:肺移植後の閉塞性気道疾患を調査するためのモデル

要約

マウス肺内気管移植(IPTT)モデルは、肺移植後の閉塞性気道疾患(OAD)の研究に有用です。同種移植後の気道閉塞における肺特異的な免疫学的および血管新生挙動に関する洞察を高い再現性で提供します。ここでは、IPTTの手順と期待される結果について説明します。

要約

マウス肺内気管移植(IPTT)は、肺移植後の閉塞性気道疾患(OAD)のモデルとして使用されます。私たちのチームによって最初に報告されたこのモデルは、その高い技術的再現性と免疫学的行動と治療的介入の調査への適合性により、OADの研究に使用されています。

IPTTモデルでは、げっ歯類の気管移植片が胸膜からレシピエントの肺に直接挿入されます。このモデルは、移植片を皮下または大網に移植する異所性気管移植(HTT)モデルや、ドナーの気管がレシピエントの気管を置き換える同所性気管移植(OTT)モデルとは異なります。

IPTTモデルの実装を成功させるには、高度な麻酔および外科的スキルが必要です。麻酔スキルには、レシピエントの気管内挿管、適切な換気パラメータの設定、麻酔からの回復後の適切なタイミングでの抜管が含まれます。手術技術は、肺内に移植片を正確に配置し、空気漏れや出血を防ぐために内臓胸膜を効果的に密閉するために不可欠です。一般的に、学習プロセスには約2か月かかります。

HTTおよびOTTモデルとは対照的に、IPTTモデルでは、同種移植片気道は関連する肺微小環境で気道閉塞を発症します。これにより、研究者は肺特異的な免疫学的および血管新生を研究することができます 肺移植後の気道閉塞に関与するプロセス。さらに、このモデルは、ヒトの肺同種移植片にも見られる第三次リンパ器官(TLO)を示すという点でもユニークです。TLOはT細胞集団とB細胞集団で構成され、免疫細胞の動員を指示する高い内皮細静脈の存在を特徴としています。したがって、それらは移植片の受容と拒絶に重要な役割を果たす可能性があります。IPTTモデルは、肺移植同種移植片における気道閉塞の発症に関与する肺内免疫およびプロフィブロシス経路を研究するための有用なツールであると結論付けています。

概要

肺移植は、末期呼吸器疾患の患者に対する有効な治療法として確立されています。しかし、ヒト肺移植レシピエントの生存率中央値は約6年にとどまり、閉塞性気道疾患(OAD)の一種である閉塞性細気管支炎(OB)の発症が移植後1年目以降の主な死因となっています¹。

OADの根底にあるメカニズムを調査するために、いくつかの動物モデルが利用されています。そのようなモデルの 1 つが異所性気管移植 (HTT) モデル² です。このモデルでは、気管移植片がレシピエントの皮下組織または大網に移植されます。虚血による気管移植片上皮細胞の喪失が起こり、その後、ドナー上皮細胞のアロレ活性リンパ球浸潤およびアポトーシスが起こります。線維芽細胞と筋線維芽細胞は気管の周りを移動し、細胞外マトリックスを生成します。最後に、気道内腔の完全な線維性閉塞が起こります。HTTモデルは技術的に単純で、 in vivo 環境を提供し、高い再現性を提供します。

OADを研究するための別のモデルは、ラット同所性気管移植(OTT)モデルであり、気管移植片をレシピエントの気管に挿入して生理学的換気を維持し^ます3。このモデルでは、虚血によってドナー上皮細胞が枯渇すると、気管内のレシピエント上皮細胞に置き換わり、中等度の線....

プロトコル

すべての動物は、カナダ動物管理評議会が「実験動物の飼育と使用に関するガイド」に定めたガイドラインに従って処理されました。実験プロトコルは、トロント総合病院研究所の動物管理委員会、大学ヘルスネットワークによって承認されました。

1.ドナー手術

注:BALB/cマウスは、実験のドナーの例として使用されています。すべての手順は、滅菌技術を利用して実行する必要があります。

1. 手順の前に、各マウスの重量を記録します。
2. CO2チャンバーを使用してマウスを安楽死させます。
3. 死亡が確認されたら、マウスを仰臥位に置き、手足をテープで固定します。
4. 70%イソプロピルアルコールで殺菌して手術部位を準備します。
   注意: 必要に応じて、地元の動物倫理委員会の推奨に従って、切開部位から毛皮を切り取ります。
5. 中腹部から子宮頸部前部まで、皮膚を正中切開します。
6. 脂肪パッドを慎重に引っ込め、ストラップの筋肉を横方向に動かし、気管を周囲の結合組織から分離して、気管にアクセスします。鉗子を使用して、気管と食道の間にスペースを作ります。
7. 剣状骨を持ち上げ、横隔膜を切断します。
8. 胸骨を上げ、止血剤を挿入して胸骨から首の領域への明確な経路を確保しま....

ディスカッション

マウスのIPTT手順には、重要なステップが含まれています。麻酔に関しては、最初の重要なステップは気管内挿管です。マウスを適切な高さに保持し、足をテーブルの上に置いて声帯を視覚化し、即時挿管を容易にすることが不可欠です。さらに、慎重な呼吸量と呼気終末陽圧(PEEP)の調整が必要です。典型的には、500μLの呼吸量および2cmH2O_のPEEPは、体重25〜30gのマウスに十分である。?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
BALB/cJ	The Jackson Laboratory	8-10 weeks 25-30 g	Male, Donor
BD 1 mL Syringe	Becton Dickinson	309659
BD PrecisionGlide Needle Aiguile BD PrecisionGlide	Becton Dickinson	305122
Bovie Change-A-Tip Deluxe High-Temperture	Bovie	DEL1
C57BL/6J	The Jackson Laboratory	8-10 weeks 25-30 g	Male, Recipient
Dumont #5/45 Forceps	F·S·T	11251-35
Ethicon Ligaclip Multiple -Clip Appliers-	Ethicon	LX107
Extra Fine Graefe Forceps	F·S·T	11150-10
Glover Bulldog Clamp	Integra	320-127
Halsted-Mosquito Hemostats	F·S·T	13009-12
Horizon Titanium Ligating Clips	Teleflex	001201
Leica M651 Manual surgical microscope for microsurgical procedures	Leica
Magnetix Fixator with spring lock	CD+ LABS	ACD-001
Microsurgical Scissor	Jarit	277-051
Mouse and Perinatal Rat Ventilator Model 687	Harvard	55-0001
Perfadex Plus	XVIVO	19850
Retractor Tip Blunt - 2.5 mm	CD+ LABS	ACD-011
small animal table	CD+ LABS	ACD-003
Surgipro Blue 24" CV-1 Taper, Double Armed	Covidien	VP702X
Systane ointment	Alconn	1444062
System Elastomer	CD+ LABS	ACD-007
Terumo Surflo IV Catheter, 20 G x 1 in	Terumo Medical Corporation	SR-OX2025CA
VMT table Top	benson	91803300