JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

هنا ، يتم إدخال طريقة إحداث ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي المرتبط بالتليف الرئوي (PF-PH) نموذج الفئران عن طريق حقن البيوميسين في مجرى الهواء. كما نقدم نهجا خطوة بخطوة للتحقق من صحة هذا النموذج الحيواني.

Abstract

المرضى الذين يعانون من التليف الرئوي أكثر عرضة للإصابة بارتفاع ضغط الدم الرئوي ، وهو أحد المضاعفات مع سوء التشخيص. في الوقت الحاضر ، لا تزال آلية هذا الرابط غير مفهومة جيدا. تتمثل إحدى العوائق الرئيسية أمام التقدم في هذا المجال في عدم وجود نموذج حيواني موثوق به لتكرار PF-PH. تهدف هذه الدراسة إلى إنشاء نموذج فئران PF-PH مستقر. صمت الفئران بين عشية وضحاها قبل التدخل. تحت تخدير البنتوباربيتال الصوديوم (45 مجم / كغم) ، تم تنبيب القصبة الهوائية بأنبوب PE50 تم إدخاله على عمق 3 سم (المسافة من المزمار إلى الأنبوب). تم إعطاء Bleomycin (BLM) عن طريق القصبة الهوائية كجرعة واحدة (5 ملغم / كجم ، مذاب في 0.2 مل من 0.9٪ كلوريد الصوديوم). بعد الحقن ، تم تدوير الفئران على الفور لضمان التوزيع المتساوي ل BLM. بعد 35 يوما من حقن BLM ، أظهرت الفئران ضعفا تدريجيا في وظائف الرئة وزيادة الضغط الانقباضي للبطين الأيمن وتضخم البطين الأيمن ، مما يكشف عن الخصائص المرضية لارتفاع ضغط الدم الرئوي. نحن نقدم طريقة عامة وموثوقة لإنشاء نموذج الفئران ل PF-PH.

Introduction

ارتفاع ضغط الدم الرئوي (PH) بسبب مرض الرئة الخلالي (ILD) شائع سريريا ، مع انتشار يقدر ب 10٪ إلى 80٪ في المرضى الذين يعانون من التليف الرئوي مجهول السبب (IPF) ، كما أنه يظهر بشكل متكرر في ILDs الليفيةالأخرى 1،2. أظهرت العديد من الدراسات أن تطور الرقم الهيدروجيني مرتبط بالمراضة الكبيرة وانخفاض البقاء على قيد الحياة3،4،5. بالمقارنة مع ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي في المجموعة 1 (PAH) ، لا يزال التسبب في ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي المرتبط بالتليف الرئوي (PF-PH) غير مفهوم جيدا6. الغرض من إنشاء نموذج حيواني ل PF-PH في الفئران هو توفير إطار موثوق به للبحث العلمي حول التليف الرئوي المرتبط بارتفاع ضغط الدم الرئوي واستكشاف السبل المحتملة للتطبيقات العلاجية السريرية.

Bleomycin هو محفز كلاسيكي للتليف الرئوي يستخدم على نطاق واسع في النماذجالحيوانية 7. كشفت الأبحاث الإضافية التي أجراها بلاكبيرن وآخرون 8 ومختبرنا9 أن البليومايسين يمكن أن يؤدي أيضا إلى السمات المرضية النموذجية لارتفاع ضغط الدم الرئوي ، مثل زيادة الضغط الانقباضي للبطين الأيمن (RVSP) وتضخم البطين الأيمن. ميكانيكيا ، يحفز البليومايسين التليف المتني الرئوي ، وتضيق الأوعية الدموية الناقصة ، وانخفاض كثافة فراش الأوعية الدموية الرئوية ، مما يؤدي إلى تطور ارتفاع ضغط الدم الرئوي6. بالإضافة إلى ذلك ، لاحظنا خسارة كبيرة في الخلايا البطانية الوعائية الرئوية بدءا من اليوم 7 من علاج البيوميسين ، مع تفاقم هذه الخسارة تدريجيا على مدار التجربة9. تشير هذه الظاهرة إلى أن الخلل البطاني الوعائي الرئوي الناجم عن البليومايسين قد يلعب دورا محتملا في بدء وتطور ارتفاع ضغط الدم الرئوي.

بسبب التليف الخلالي الرئوي ، يكون مرضى IPF في حالة نقص الأكسجة لفترة طويلة ، وتحدث تغيرات تعويضية في الأوعية القلبية الرئوية ، مما يؤدي إلى ارتفاع ضغط الدم الرئوي6. يمكن أن يساعدنا استخدام النماذج الحيوانية في فهم الآليات الأساسية للتليف الرئوي البشري مجهول السبب المرتبط بارتفاع ضغط الدم الرئوي. على الرغم من أن هذا النموذج لا يمكنه محاكاة السمات المرضية للأمراض البشرية بشكل كامل ، إلا أن هذا النموذج لا يزال بإمكانه تقديم رؤى قيمة. هناك العديد من النماذج التجريبية التي تحاكي التليف الرئوي ، مثل تسريب مجرى الهواء بجرعة واحدة من البيوميسين ، وتوصيل الناقل الفيروسي لعوامل النمو المتحولة ، والتعرض للسيليكا8،10. في الوقت الحاضر ، يعد نموذج BLM هو النموذج الأكثر استخداما وتميزا لأنه يمكن تحريضه بسهولة في وقت قصير وله قابلية عالية للتكرار. بالإضافة إلى ذلك ، تم تقييم التغيرات الزمنية في التليف الرئوي في نموذج فأر بليومايسين ، حيث لوحظ زيادة التعبير عن علامات التليف والجينات المرتبطة بأمراض المرض ، مثل Col1A1 و Col1A2 ، من الأيام 15-218. تم الكشف عن تغيرات القلب والأوعية الدموية ، مثل تضخم البطين الأيمن وزيادة كبيرة في RVSP ، في اليوم 3311 أو بعده. في الوقت نفسه ، قام مختبرنا سابقا بتقييم التغييرات في معلمات PH و PF لنماذج الفئران التي يسببها bleomycin9. وجدنا أنه بالإضافة إلى خصائص التليف الرئوي (PF) مثل ضعف وظائف الرئة التدريجي وترسب الكولاجين في الفئران ، ظهرت السمات النموذجية لارتفاع ضغط الدم الرئوي (PH) تدريجيا في غضون 7 إلى 35 يوما بعد تقطير مجرى الهواء الواحد للبليومايسين. أظهر مؤشر RVSP و Fulton زيادة في الاعتماد على الوقت. حاليا ، تم الإبلاغ عن العديد من المصابة بالتليف الرئوي في الأدبيات. اقترح بعض الخبراء أن نماذج الفئران أظهرت استجابة ليفية أكثر وضوحا من نماذجالفئران 12. لذلك ، من أجل دراسة تطور التليف الرئوي جنبا إلى جنب مع ارتفاع ضغط الدم الرئوي بشكل أفضل ، فإن نموذج الفئران الناجم عن البليومايسين هو المفتاح.

Protocol

تمت الموافقة على التجارب على الموضحة في هذه الدراسة من قبل لجنة رعاية واستخدامه في المستشفى الأول التابع لجامعة قوانغتشو الطبية (رقم الموافقة الأخلاقية: 2018-456).

1. شراء الفئران التجريبية

  1. قسم الفئران إلى مجموعتين: المجموعة الضابطة العادية والمجموعة النموذجية ، مع 7 فئران في كل مجموعة. استخدم ذكور فئران Sprague-Dawley (SD) البالغة من العمر 10 أسابيع والتي تزن 200 ± 20 جراما للدراسة

2. تحريض نموذج الفئران PF-PH

  1. من أجل منع ارتداد التطلعات أثناء الإجراء ، قم بصيام الفئران بين عشية وضحاها قبل النمذجة.
  2. تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق من الصوديوم البنتوباربيتال (45 مجم / كجم) لضمان الدقة والسلامة الإجرائية وتقليل آلام وإجهادها. تأكد من مستويات التخدير الجراحي من خلال عدم الاستجابة لقرص أصابع القدم. في الوقت نفسه ، ضع مرهما على عيون الفئران لمنع الجفاف.
  3. قم بتنبيب القصبة الهوائية للفأر بأنبوب PE50 يتم إدخاله على عمق 3 سم (المسافة من المزمار إلى الأنبوب).
  4. باستخدام حقنة سعة 1 مل (26 جم) ، اسحب 0.2 مل من Bleomycin (5 مجم / كجم ، مذاب في 0.2 مل من 0.9٪ كلوريد الصوديوم). حقن المحقنة التي تحتوي على BLM في مجرى الهواء من خلال قنية كجرعة واحدة. بالنسبة للفئران في المجموعة الضابطة ، قم بإجراء إعطاء محلول ملحي طبيعي معقم داخل القصبة الهوائية (0.2 مل). خلال هذه العملية ، لا تحتاج الفئران إلى تخفيف الآلام.
  5. لضمان التوزيع المتساوي للبليومايسين ، ضع الجرذ في وضع ضعيف ، وامسكه برفق ، وقم بتدويره ببطء. زاوية الدوران الموصى بها هي 30 درجة -45 درجة ، بالتناوب بين الجوانب. يجب الحفاظ على كل دورة لمدة 10-15 ثانية ، متكررة 3x-4x.
  6. ضع الفئران على وسادات التدفئة للمساعدة في الحفاظ على درجة حرارة الجسم ومراقبة حالتها عن كثب. لاحظ عندما تبدأ الفئران في التحرك من تلقاء نفسها ونقل من وسادة التدفئة إلى قفص منفصل للتعافي.
  7. بعد 5 أسابيع من حقن BLM ، قم بتقييم الفئران لتحديد ما إذا كان يمكن إنشاء نموذج PF-PH بنجاح باستخدام طرق مثل مراقبة تخطيط صدى القلب ، والقياسات الديناميكية للدم ، والتحليل النسيجي.

3. مراقبة تخطيط صدى القلب

  1. تخدير الفئران باستخدام 4٪ إيزوفلوران. قم بإزالة فرو الفئران باستخدام كريم لإزالة الشعر وتطبيق الجل بالموجات فوق الصوتية على صدره.
  2. تقييم المعلمات الوظيفية والهيكلية للقلب الأيمن في الفئران باستخدام مسبار بالموجات فوق الصوتية 250 ميجاهرتز. للحصول على أفضل عرض طويل المحور للبطين ، ضع المسبار على الجانب الأيسر من الخط المتوسط لصدر.
  3. وفقا للتشريح الفردي ، قم بتدوير المسبار بزاوية 15 درجة عكس اتجاه عقارب الساعة بالنسبة إلى الخط الجراحي الأيسر ، مع توجيه القواطع نحو كتفه الأيمن ، واضبط المحورين x و y في الوضع B بحيث يكون القلب بأكمله في وسط المجال البصري.
  4. حدد اللون لعرض لون تدفق الدم لتمييز الشريان الرئوي (إشارة تدفق الدم للشريان الرئوي في هذا الوضع زرقاء).
  5. حدد وضع PW (PW Doppler) ، ضع خط أخذ العينات أسفل الصمام الرئوي ، وقم بتدوير مقبض زاوية PW لضبط اتجاه خط أخذ العينات بحيث يكون اتجاه أخذ العينات موازيا لاتجاه تدفق الدم في الشريان الرئوي (حوالي 25 درجة). اضغط على مفتاح PW مرة أخرى واحصل على وقت تسريع تدفق الدم في الشريان الرئوي / وقت القذف (PAT / PET). قياس ما لا يقل عن خمس دورات قلبية ومتوسط. استخدم Cine لحفظ الصورة.
  6. اضبط على رأس منخفض وقدم عالية ، ضع المسبار بالموجات فوق الصوتية في قمة قلب ، وقم بقيادة الموجات فوق الصوتية على طول قمة القلب للحصول على سطح شق مكون من أربع غرف. اضبط المحورين x و y في الوضع B للتأكد من أن غرف القلب الأربع مرئية.
  7. اعرض خط القياس 2x عن طريق الضغط باستمرار على الوضع M وضعه عند تقاطع حلقة الصمام ثلاثي الشرف والجدار البطيني الأيمن. قم بقياس مسافة إزاحة الصمام ثلاثي الشرف (TAPSE) خلال ثلاث دورات قلبية على الأقل وحافظ عليها في Cine.
  8. ضع المسبار عند خط الوسط للترقوة اليمنى لصدر واضبط الزاوية بين المسبار وشق صدر على حوالي 45 درجة. اضبط الصورة في الوضع B بحيث يكون البطين البطيني الأيمن والحاجز بين البطينين مرئيين.
  9. حدد M-Mode لعرض خط القياس 2x ووضع خط القياس في منتصف الحاجز بين البطينين. كان خط أخذ العينات عموديا على الجدار الحر للبطين الأيمن. احفظ الصورة للحصول على سمك الجدار البطيني الأيمن.

4. تقدير وظائف الرئة

  1. افتح برنامج PFT وتحقق من التعرف على الجهاز. قم بالمعايرة وفقا لتعليمات المعدات لضمان دقة مستشعرات التدفق وأجهزة استشعار الضغط. قم بتعيين معلمات الاختبار في برنامج PFT ، مثل معدل التنفس ، وحجم المد والجزر ، ومدة الاختبار ، وما إلى ذلك.
  2. وضع الكشف عن هو وضع دراسات الفئران. قم بتشغيل مفتاح أداة التحكم الرئيسية وتأكد من أن مفتاح كل مضخم إشارة في وضع إيقاف التشغيل.
  3. اضبط تدفق الهواء وفقا لوزن جسم. قم بتشغيل صامولة تنظيم تدفق الهواء للشفط واضبط الإلهام على 5. قم بتشغيل صامولة تنظيم تدفق الهواء الزفيري واضبط الزفير البطيء على -4. اضبط قيمة الضغط على 60 سم H2O ثم قم بمعايرة الجهاز وفقا لترتيب تدفق FRC والتدفق والتدفق العالي وضغط الرئة بخطأ أقل من 0.5٪.
  4. تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق باستخدام البنتوباربيتال الصوديوم (45 مجم / كغ) كما في الخطوة 2.2. قطع الجلد على طول منتصف الرقبة وإزالة طبقة العضلات بطبقة.
  5. في الجزء العلوي المكشوف من القصبة الهوائية العنقية ، قم بعمل شق أفقي بين حلقات غضروف القصبة الهوائية. أدخل القنية المعدنية بسرعة في شق القصبة الهوائية ، مما يضمن وضع القنية بشكل صحيح وتأمينها. استخدم 4-0 خيوط خيوط حريرية لتثبيت القنية في القصبة الهوائية ، مما يمنعها من الانزلاق أو الإزاحت. ضع الجرذ في حجرة PFT وقم بتوصيل قنية القصبة الهوائية بواجهة قناة تدفق الهواء خارج الجهاز.
  6. انقر فوق الزر "ابدأ" وافحص السعة الحيوية القسرية (FVC) والامتثال الديناميكي للرئة. لضمان تناسق البيانات ، سجل كل مؤشر 3x على الأقل.
  7. بعد اكتمال الاختبار ، يتم حفظ البيانات وتصديرها إلى برنامج التحليل. استخدم البرامج الإحصائية لتحليل البيانات ومقارنة معلمات وظائف الرئة للمجموعات المختلفة.

5. قياسات الديناميكا الدموية والأنسجة

  1. الكشف عن الضغط الانقباضي للبطين الأيمن (RVSP)
    1. تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق باستخدام البنتوباربيتال الصوديوم (45 مجم / كغ) كما في الخطوة 2.2. تأكد من تخدير الجرذ بشكل صحيح عن طريق الضغط على إصبع القدم للتأكد من عدم استجابة الفئران. ثبت بطن الجرذ لأعلى على المقعد التجريبي وضع كريم العين على عيون الفئران لمنع الجفاف.
    2. قم بعمل شق (حوالي 4 سم) على الجانب الأيمن من الرقبة من خلال مقص جراحي وافصل الوريد الوداجي الخارجي من خلال ملقط جراحي مجهري. افصل الأوردة بطول حوالي 1 سم برفق باستخدام ملقط دقيق وأدخل خطين جراحيين في الأطراف البعيدة والقريبة.
    3. قبل التنبيب ، انقع أنبوب PE50 في محلول ملحي عادي يحتوي على 1٪ هيبارين الصوديوم أو EDTA لمدة 30 دقيقة على الأقل. اضبط المسجل الفسيولوجي لإعادة الضغط إلى الخط 0 واضبط نطاق الضغط على 0-150 مم زئبق.
    4. اربط الطرف البعيد للوريد الوداجي الخارجي بخيط حريري 4-0 ، ارفع الخط الجراحي القريب برفق ، وضعه على جدار الوريد البعيد. استخدم مقصا صغيرا لعمل شق صغير (حوالي 0.3 مم). بعد إدخال أنبوب PE50 في الوريد الوداجي الخارجي ، استخدم 4-0 خيط حريري لربط القسطرة مع الوريد الوداجي الخارجي لمنع تسرب الدم.
    5. راقب شكل موجة الضغط الوريدي على المسجل. ادفع القسطرة ببطء إلى الأذين الأيمن ، ويكون شكل موجة الأذين الأيمن مرئيا ، بسعة حوالي 0-5 مم زئبق. بعد استمرار القسطرة في التقدم من الأذين الأيمن إلى البطين الأيمن ، يمكن رؤية شكل موجة ضغط البطين الأيمن. عندما يكون الضغط مستقرا ، سجل RVP لمدة 5 دقائق ويتم حفظ البيانات وتحليلها باستخدام برنامج التحليل.
  2. الكشف عن مؤشر فولتون
    1. بعد الكشف عن RVSP ، بعد تخدير الأيزوفلوران (5٪ ، 2 لتر / دقيقةO 2) ، قم بالقتل الرحيم للفئران من خلال الاستئصال.
    2. بعد بضع الصدر ، قم بإزالة قلب الفئران السليم بالملاقط. قطع الأذن والنسيج الضام بالقرب من القلب بالمقص.
    3. قطع الجدار الحر للبطين الأيمن على طول الشريان الرئوي. هذا النسيج هو البطين الأيمن (RV). الأنسجة المتبقية هي البطين الأيسر بالإضافة إلى الحاجز بين البطينين (LV + S). بعد الفصل، قم بتصريف سطح البطين الأيمن (RV) والبطين الأيسر بالإضافة إلى الحاجز بين البطينين (LV+S) بورق ترشيح وقم بوزنها بشكل منفصل باستخدام ميزان تحليلي. بعد تسجيل وزن البطين الأيمن (RV) والبطين الأيسر بالإضافة إلى الحاجز البطيني (LV + S) ، احسب نسبة وزن البطين الأيمن إلى البطين الأيسر بالإضافة إلى الحاجز البطيني (RV / (LV + S)).
  3. تلطيخ نسيجي
    1. بعد فتح التجويف الصدري ، استخدم حقنة سعة 10 مل لسحب 3 مل من المحلول الملحي. أدخل المحقنة في الشريان الرئوي وحقن المحلول الملحي ببطء لشطف الرئتين وإزالة الدم والمخلفات الأخرى.
    2. استخدم المقص لتشريح الفص الملحق الأيمن والفص الأمامي الأيمن للرئة. ضع هذين الفصين الرئويين في 4٪ فورمالين للتثبيت للحفاظ على مورفولوجيا الأنسجة وبنيتها. ضع الفصوص الثلاثة المتبقية من الرئة بسرعة (مثل الرئة اليسرى والفص الأوسط الأيمن والفص الخلفي الأيمن) في النيتروجين السائل للتخزين المجمد ، لتكون جاهزة للتجارب اللاحقة.
    3. قم بإزالة الدهون الزائدة والأنسجة الضامة من سطح أنسجة الرئة للتأكد من أن كتل الأنسجة نظيفة وأنيقة. قم بقص فصوص الرئة إلى كتل صغيرة بقياس 5 مم × 5 مم × 3 مم. ضع كتل الأنسجة المشذبة في المجفف وقم بتجفيفها تدريجيا باستخدام سلسلة متدرجة من الكحول (60٪ ، 70٪ ، 80٪ ، 90٪ ، 100٪).
    4. اغمر أنسجة الرئة في الزيلين لمدة 2 ساعة لتحقيق الشفافية. بعد الإزالة ، انقعه في البارافين المذاب عند 56-58 درجة مئوية لمدة ساعتين لضمان التسلل الكامل. بعد ذلك ، ضع المنديل في قالب ، وضعه بحيث يكون سطح القطع متجها لأسفل للتقسيم اللاحق.
    5. قم بتقطيع كتلة الشمع على الميكروتوم بسمك 4-8 ميكرومتر13 ، وقم بتخزينها في درجة حرارة الغرفة للتلوين المرضي.
    6. أداء تلطيخ Eosin و Masson ثلاثيالألوان 14.

6. الكشف عن هيدروكسي برولين (HYP)

  1. تزن 30-100 مجم من أنسجة الرئة في أنبوب زجاجي. أضف 2 مل من محلول حمض الهيدروكلوريك (6 مول / لتر) وهضمه عند 110 درجة مئوية في فرن لمدة 2-6 ساعات حتى لا تظهر كتل كبيرة.
  2. بعد التبريد ، اضبط قيمة الأس الهيدروجيني على نطاق 6-8 باستخدام 1 مل من محلول هيدروكسيد الصوديوم (10 مول / لتر) ، ثم قم بتكثيف الماء المقطر إلى محلول 4 مل. أخيرا ، جهاز الطرد المركزي عند 28،620 × جم عند 25 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة وخذ المادة الطافية لتكون.
  3. قم بتسخين قارئ الألواح الدقيقة لمدة 30 دقيقة ، واضبط الطول الموجي على 560 نانومتر ، وقم بتصفير الجهاز باستخدام الماء المقطر.
  4. قم بتخفيف المحلول القياسي بالماء المقطر لتحضير المحاليل القياسية بتركيزات 30 و 15 و 7.5 و 3.75 و 1.875 و 0.938 و 0.469 و 0.234 ميكروغرام / مل.
  5. خذ 60 ميكرولتر من العينة الطافية واخلطها مع 60 ميكرولتر من الكاشف أ ، ثم اتركه في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة.
  6. أضف 60 ميكرولتر من الكاشف B و 120 ميكرولتر من الماء المقطر. ضع المحلول المختلط في حمام مائي 60 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. اتبع نفس الخطوات لكل تركيز من المحاليل القياسية (على سبيل المثال ، 30 ، 15 ، 7.5 ، 3.75 ، 1.875 ، 0.938 ، 0.469 ، 0.234 ميكروغرام / مل) وقم بإجراء العمليات وفقا لذلك.
  7. بعد الوقوف في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة ، خذ 200 ميكرولتر من المحلول في اللوحة المكونة من 96 بئرا للكشف عن قيمة امتصاص الضوء عند 560 نانومتر. ارسم المنحنى القياسي بتركيز المحاليل القياسية كمحور x والقيم المقاسة كمحور y ، والحصول على المعادلة y = kx + b. استبدل القيمة المقاسة للعينة في المعادلة لتحديد تركيز العينة.

النتائج

التليف الرئوي الناجم عن البليومايسين في الفئران
تم الإبلاغ عن Bleomycin كمحفز كلاسيكي للتليف الرئوي في النماذج الحيوانية7. هنا ، تم تقييم مؤشرات التليف الرئوي بعد تحفيز BLM. أولا ، بعد 35 يوما من علاج BLM ، أجرينا اختبارات وظائف الرئة ووجدنا أن كلا من FVC (

Discussion

التليف الرئوي مجهول السبب هو مرض تدريجي قاتل بمتوسط بقاء 2-3 سنوات من التشخيص ، مما يشير إلى تشخيص كئيب9. ارتفاع ضغط الدم الرئوي هو اعتلال مشترك شائع في IPF ، والذي يتدهور بسرعة IPF مع تفاقم التشخيص15. علاوة على ذلك ، كانت هناك خيارات علاجية محدودة ل IPF-...

Disclosures

ليس لدى أصحاب البلاغ أي إفصاحات مالية ذات صلة.

Acknowledgements

تم دعم هذا العمل من خلال المنح المقدمة جزئيا من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82370063 ، 82170069 ، 82120108001 ، 82241012) ، وبرنامج البحث والتطوير في مختبر قوانغتشو الوطني (GZNl2023A02013) ، والبرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2022YFE0131500) ، وإدارة العلوم والتكنولوجيا في قوانغدونغ (2024A1515011208 ، 2022A1515012052 ، 2024A1515013104 ، 202102020019 ، 202201020538 ، 202201010069 ، 2023A03J0334) ، المشروع المستقل لمختبر الدولة الرئيسي لأمراض الجهاز التنفسي (SKlRD-Z-202513) ، مؤسسة قوانغدونغ للبحوث الطبية (A2023379) جامعة قوانغتشو الطبية وخطة لتعزيز البحث العلمي في GMU وصناديق الأبحاث المفتوحة من المستشفى السادس التابع لجامعة قوانغتشو الطبية (مستشفى Qingyuan الشعبي) (202201-101).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
BleomycinMedChemExpressHY-17565A
Coupling agentHYNAUTBX-CSRH
Formalin fixativeBiosharp)BL401B
Hair removal creamLUSENLS-B-TMG-50
Hematoxylin eosin (HE) staining kitBeyotimeC0189S
IsofluraneRWD Life Science(China)R510-22-10
Masson Tri-color dyeing kitBeyotimeC0189S
Normal salineKERONGSLYS-001
syringeBeyotimeFS701-50pcs

References

  1. Sm, N., et al. Clinical significance of pulmonary hypertension in interstitial lung disease: A consensus statement from the Pulmonary Vascular Research Institute's innovative drug development initiative-Group 3 pulmonary hypertension. Pulm Circ. 12 (3), e12127 (2022).
  2. Nathan, S. D., et al. Pulmonary hypertension in chronic lung disease and hypoxia. Eur Resp J. 53 (1), 1801914 (2019).
  3. King, C. S., Shlobin, O. A. The Trouble With Group 3 Pulmonary Hypertension in Interstitial Lung Disease. Chest. 158 (4), 1651-1664 (2020).
  4. Meyer, K. C. Pulmonary fibrosis, part I: epidemiology, pathogenesis, and diagnosis. Expert Rev Respir Med. 11 (5), 343-359 (2017).
  5. Raghu, G., et al. Idiopathic Pulmonary Fibrosis (an Update) and Progressive Pulmonary Fibrosis in Adults: An Official ATS/ERS/JRS/ALAT Clinical Practice Guideline. Am J Respir Critic Care Med. 205 (9), e18-e47 (2022).
  6. Ruffenach, G., Hong, J., Vaillancourt, M., Medzikovic, L., Eghbali, M. Pulmonary hypertension secondary to pulmonary fibrosis: clinical data, histopathology and molecular insights. Respir Res. 21 (1), 303 (2020).
  7. Li, S., Shi, J., Tang, H. Animal models of drug-induced pulmonary fibrosis: an overview of molecular mechanisms and characteristics. Cell Biol Toxicol. 38 (5), 699-723 (2022).
  8. Karmouty-Quintana, H., et al. Deletion of ADORA2B from myeloid cells dampens lung fibrosis and pulmonary hypertension. FASEB J. 29 (1), 50-60 (2015).
  9. Jiang, Q., et al. Dysregulation of BMP9/BMPR2/SMAD signalling pathway contributes to pulmonary fibrosis and pulmonary hypertension induced by bleomycin in rats. Br J Pharmacol. 178 (1), 203-216 (2021).
  10. Degryse, A. L., Lawson, W. E. Progress toward improving animal models for idiopathic pulmonary fibrosis. Am J Med Sci. 341 (6), 444-449 (2011).
  11. Collum, S. D., et al. Inhibition of hyaluronan synthesis attenuates pulmonary hypertension associated with lung fibrosis. Br J Pharmacol. 174 (19), 3284-3301 (2017).
  12. Ye, X., et al. Animal models of acute exacerbation of pulmonary fibrosis. Respir Res. 24 (1), 296 (2023).
  13. León-Mancilla, B., et al. Three-Dimensional Collagen Matrix Scaffold Implantation as a Liver Regeneration Strategy. J Vis Exp. (172), e62697 (2021).
  14. Oldham, S., Rivera, C., Boland, M. L., Trevaskis, J. L. Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis (NASH) Resolution. J Vis Exp. (146), e59130 (2019).
  15. Jiang, Q., et al. Nephrectomy and high-salt diet inducing pulmonary hypertension and kidney damage by increasing Ang II concentration in rats. Respir Res. 25 (1), 288 (2024).
  16. Moore, B. B., Hogaboam, C. M. Murine models of pulmonary fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 294 (2), L152-L160 (2008).
  17. Jenkins, R. G., et al. An Official American Thoracic Society Workshop Report: Use of Animal Models for the Preclinical Assessment of Potential Therapies for Pulmonary Fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 56 (5), 667-679 (2017).
  18. Lahm, T., et al. The effects of estrogen on pulmonary artery vasoreactivity and hypoxic pulmonary vasoconstriction: Potential new clinical implications for an old hormone. Crit Care Med. 36 (7), 2174-2183 (2008).
  19. Chen, Y., et al. Tetramethylpyrazine: A promising drug for the treatment of pulmonary hypertension. Br J Pharmacol. 177 (12), 2743-2764 (2020).
  20. Zheng, Q., et al. Established pulmonary hypertension in rats was reversed by a combination of a HIF-2α antagonist and a p53 agonist. Br J Pharmacol. 179 (5), 1065-1081 (2022).
  21. Chen, J., et al. Upregulation of mechanosensitive channel Piezo1 involved in high shear stress-induced pulmonary hypertension. Thrombo Res. 218, 52-63 (2022).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE 219

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved