XHTW هو كيك WM كلودج مؤسسة الشباب في البحوث الطبية ، وأيضا على دعم من قبل المعاهد الوطنية للصحة / NHLBI المنح R01 - R01 HL089598 وR01HL091947 ، والضمور العضلي جمعية المنحة # 69238. RJvO وهو حاصل على زمالة جمعية الفسيولوجية الأمريكية 2008-2010 بعد الدكتوراه في علم الجينوم الفسيولوجية. كما يدعم هذا العمل في جزء من مؤسسة التحالف من أجل Leducq كناس CaMKII في اشارة الى القلب.

الجزء 1 : إعداد حقل التشغيل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتطهيرها مجال التشغيل مع ايزوبروبيل 75 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من وسادة التدفئة وعلى الحق في درجة الحرارة. نظام المقترح هو Gaymar ضخ المياه المنتشرة متصلا لوحة العلاج التي تم الاحتفاظ ب 37 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية. فمن المهم للحفاظ على درجة حرارة الجسم الطبيعية أثناء الجراحة لتفادي انخفاض سريع في معدل ضربات القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تعقيم الأدوات الجراحية في التعقيم حبة الساخن قبل الجراحة. لهذا الإجراء ، سوف تحتاج الصكوك التالية الجراحية : مقص حادة ، وبطبيعة الحال منحني ملقط X 2 ، ودفع غرامة 45 درجة الزاوية ملقط X 2 ، ربيع مقص الزاوية ، مبعاد الصدر وحامل الإبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ينبغي تطبيقها سيكون على يد القطن في حالة النزيف. </li></ol> الجزء 2 : إعداد وتركيب الانبوبة من الفئران <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تخدير الفئران في غرفة التعريفي مع 2 ٪ isoflurane مختلطة مع 0.5 -1.0 لتر / دقيقة 100 ٪ O 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم استخدام الشعر كليبرز حلق الفراء من العنق إلى مستوى وسط الصدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع الماوس في وضع الاستلقاء فوق وسادة التدفئة من أجل الحفاظ على درجة حرارة الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع الشريط المطاطي على الأسنان الأمامية للحيوان ليالي لتمديد الرقبة. باستخدام الملقط المنحني في يد واحدة ، يتم التلاعب بها اللسان برفق إلى الجانب. مع من ناحية أخرى ، يتم تنفيذ التنبيب الرغامي استخدام أنابيب PE 90. ثم يتم توصيل الأنبوب الرغامي إلى وحدة تخزين ، تدوير هارفارد القوارض الدراجات التنفس الصناعي في الأنفاس 125-150 / دقيقة وحجم المد والجزر من 0.3ml - 0.1. أثناء العملية الجراحية ، والتخدير في المحافظة 1،5-2 ٪ isoflurane مع 0،5-1،0 لتر / دقيقة 100 ٪ O 2. يتم التحقق من المستوى الصحيح للتخدير عن طريق الضغط على الماوس الظفر (إصبع القدم قرصة منعكس). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتطهيرها والجراحي الميداني مع الحل betadine تليها الكحول 70 ٪. ويتكرر هذا الإجراء ثلاث مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمنع التلوث من الحقل خلال العملية الجراحية ، يتم وضع ثنى العقيمة على الماوس ولم يتبق سوى عملية الميدانية عرضة للخطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتستخدم مجموعة من القفازات المعقمة لكل فرد الماوس. </li></ol> الجزء 3 : ربط الشريان الأورطي المستعرض <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تنفيذ جزئي لبضع الصدر الضلع الثاني تحت المجهر الجراحي والقص تراجع باستخدام مبعاد الصدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غيض غرامة 45 درجة وتستخدم ملقط الزاوية لفصل بلطف الأنسجة والدهون من الغدة الصعترية قوس الأبهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التعرف على الأبهر عرضية ، يتم وضع قطعة صغيرة من الحرير 6.0 خياطة الشرايين السباتية بين اللامسمى واليسرى (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وترتبط اثنين عقدة فضفاضة حول الأبهر عرضية وقطعة صغيرة من 27 ½ يتم وضع إبرة حادة موازية لقياس الأبهر عرضية. يرتبط بسرعة عقدة الاولى ضد الإبرة ، تليها الثانية وإزالة الإبرة فورا من أجل تسفر عن انقباض 0.4mm في القطر. التحكم في الفئران صورية ، فإن الإجراء بأكمله متطابقة باستثناء ربط الشريان الأورطي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتم إزالة مبعاد الصدر وتدفق للخارج التنفس الصناعي لمدة 2 ثانية مقروص لإعادة تضخيم الرئتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق القفص الصدري باستخدام خياطة prolene 6.0 مع نمط خياطة توقف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق خياطة الجلد باستخدام prolene 6.0 مع وجود نمط مستمر خياطة. </li></ol> الجزء 4 : في مرحلة ما بعد المنطوق الاسترداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتسكين بعد العملية ، يتم حقن الفأر مع البوبرينورفين (0،1 ملغ / كلغ) intraperitoneally. إذا كانت هناك علامات الجفاف بعد الجراحة ، ويتم إعطاء المالحة intraperitoneally العقيمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وخفضت تدريجيا تخدير للموقف قبالة وإزالة الأنبوب الرغامي عند ظهور علامات التنفس العفوي يحدث. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم نقل الماوس إلى وضعية الانبطاح وسمح لاسترداد على وسادة التدفئة. </li></ol> الجزء 5 : تأكيد نجاح عملية ربط الشريان الأورطي المستعرض <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أسبوع واحد تاك ، والفأر هو إعادة تخدير لتحديد درجة من الضغط الزائد الناتج عن ربط الشريان الأورطي عرضية. كما هو موضح أعلاه ، يتم الاحتفاظ التخدير في 1،5-2 ٪ isoflurane مع 0،5-1،0 لتر / دقيقة 100 ٪ O 2 والحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 37 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع مسبار دوبلر 20 ميغاهيرتز على الجانبين الأيسر والأيمن من الرقبة بزاوية 45 درجة للكشف عن تدفق السرعات. تم استخدام الكمبيوتر المستندة إلى معالج الاشارات دوبلر (اندوس الآلات ، وهيوستن ، تكساس) لعرض وتخزين الاشارات دوبلر 5 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعتمادا على درجة من الضغط الزائد اللازم لبروتوكول تجريبي ، يتم تضمين فقط مع الفئران السباتي الأيمن (RC) / يسار السباتي (LC) نسبة التدفق داخل نطاق معين لمزيد من التحليل. على سبيل المثال ، وعلى درجة معتدلة من الضغط الزائد يؤدي إلى نسبة 5-8 ، في حين أن أكثر تشددا مما أدى إلى تقليص عبء ضغط شديد يؤدي رOA نسبة 80-10 (الشكل 5.3A). حيوان صورية (لا تعمل إلا ligated) ، ومع ذلك ، فمن المتوقع أن يكون لها نسبة من ~ 1 (الشكل 5.3B). </li></ol> 6 : نتائج الممثل بقاء نموذجية الجراحية التالية TAC في البرية من نوع الفئران حوالي 80-90 ٪. وربط جراحية ناجحة في الشريان الأورطي عرضية يؤدي إلى سرعة تدفق دوبلر نسبة بين الشريان السباتي الأيمن والأيسر (RC / LC) من 50-10 (الشكل 1). بالمقارنة مع الفئران التي تديرها صورية (الشكل 2A) ، ومن المتوقع أن الفئران مع الضغط الزائد على وضع تضخم القلب في غضون 1-2 أسابيع ، وبعد توسع القلب 6-8 أسابيع ، تبعا لضيق للانقباض (الشكل 2B). الوفيات خلال الشهر الأول بعد TAC منخفضة عادة (&lt;20 ٪) في الفئران من النوع البري ، على الرغم من الفئران المعدلة وراثيا قد يحمل معدلات البقاء على قيد الحياة المختلفة. 6،7 <img src="/files/ftp_upload/1729/1729fig1tmb.jpg" alt="الشكل 1" border="0" /> الشكل 1. تأكيدا لربط الأورطي باستخدام مستعرض دوبلر قياس السرعة. إشارات الممثل سرعة دوبلر للحق (RC) وترك الشرايين السباتية (LC) 6 أيام ما بعد معاهدة الصداقة والتعاون. هذه التسجيلات يبرهن على وجود ربط ناجحة مع نسبة تدفق RC / LC من ~ 6.8. الرجاء <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1729/1729fig1.jpg">انقر هنا</a> لرؤية نسخة أكبر من الرقم 1. <img src="/files/ftp_upload/1729/1729fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. ممثل صور القلب الجامع عقب تاك. ألف وباء. الشام التي تديرها الماوس نوع البرية القلب. نوع البرية قلب فأر بعد 16 أسبوعا تاك. كل سطر = 1MM.

<ol>
	<li>Rockman, H. A., Ross, R. S., Harris, A. N., Knowlton, K. U., Steinhelper, M. E., Field, L. J., Ross, J., Chein, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy.">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88, 8277-8281 (1991).</li><li>Heineke, J., Molkentin, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cardiac+hypertrophy+by+intracellular+signaling+pathways.">Regulation of cardiac hypertrophy by intracellular signaling pathways.</a> Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 7, 589-600 (2006).</li><li>Hartley, C. J., Reddy, A. K., Madala, S., Michael, L. H., Entman, M. L., Taffett, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doppler+estimation+of+reduced+coronary+flow+reserve+in+mice+with+pressure+overload+cardiac+hypertrophy.">Doppler estimation of reduced coronary flow reserve in mice with pressure overload cardiac hypertrophy.</a> Ultrasound Med. Biol. 34, 892-901 (2008).</li><li>Reddy, A. K., Taffett, G. E., Li, Y. -. H., Lim, S. -. W., Pham, T. T., Pocius, J. S., Entman, M. L., Michael, L. H., Hartley, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doppler+signal+processing+for+use+in+mice:+applications.">Doppler signal processing for use in mice: applications.</a> IEEE Trans. Biomed. Eng. 52, 1771-1783 (2005).</li><li>Li, Y. -. H., Reddy, A. K., Ochoa, L. N., Pham, T. T., Hartley, C. J., Micheal, L. H., Entman, M. L., Taffett, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+age+on+peripheral+vascular+response+to+transverse+aortic+banding+in+mice.">Effect of age on peripheral vascular response to transverse aortic banding in mice.</a> J. Gerontol. 58A, 895-899 (2003).</li><li>Bourajjaj, M., Armand, A. S., Martins, d. a. C. o. s. t. a., Weijts, P. A., Nagel, B. V. a. n. d. e. r., Heeneman, R., Wehrens, S., Windt, X. H. D. e., J, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFATc2+is+a+necessary+mediator+of+calcineurin-dependent+cardiac+hypertrophy+and+heart+failure.">NFATc2 is a necessary mediator of calcineurin-dependent cardiac hypertrophy and heart failure.</a> J. Biol. Chem. 28, 22295-22303 (2008).</li><li>Oort, R. J. v. a. n., Respress, J. L., Li, N., Reynolds, C., Almeida, A. C. D. e., Skapura, D. G., Windt, L. J. D. e., Wehrens, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+development+of+pressure+overload+induced+cardiac+hypertrophy+and+dysfunction+in+an+RyR2-R176Q+knockin+mouse+model.">Accelerated development of pressure overload induced cardiac hypertrophy and dysfunction in an RyR2-R176Q knockin mouse model.</a> Hypertension. 55, (2010).</li><li>Tarnavski, O., McMullen, J. R., Schinke, M., Nie, Q., Kong, S., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cardiac+surgery:+comprehensive+techniques+for+the+generation+of+mouse+models+of+human+diseases+and+their+application+for+genomic+studies.">Mouse cardiac surgery: comprehensive techniques for the generation of mouse models of human diseases and their application for genomic studies.</a> Physiol Genomics. 16, 349-360 (2004).</li></ol>

تاك ، الذي يحاكي الإنسان تضيق الأبهر ، هو طريقة شائعة للحث على تضخم القلب وقصور في القلب لدى الفئران. مواقع بديلة لانقباض الأبهر تشمل الأبهر الصاعد والبطن. تصاعدي انقباض الأبهر يوفر الزائد المدقع وأكثر سرعة في البطين الأيسر (LV). في المقابل ، انقباض البطن الأبهر يترك ا?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Gaymar T/pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>Model TP-500</td>
<td>Circulating water pump</td>
</tr>
<tr>
<td>Temp. therapy pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>60-3414</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot bead sterilizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>18000-45</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blunt scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5980</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Angled spring scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5668</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chest retractor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>17002-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Course curved forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5138</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dumont fine 45&deg; angled forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11253-25</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>12565-14</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Electric shaver</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>General Electric</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For shaving mouse fur</td>
</tr>
<tr>
<td>PE 90 tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>427420</td>
<td>For intubation</td>
</tr>
<tr>
<td>MiniVent (ventilator)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>Type 845</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>19-027132</td>
<td>May be purchased at medical supply store</td>
</tr>
<tr>
<td>Sterile gloves</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mckesson</td>
<td>20-1565</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stereo microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Unico</td>
<td>ZM186</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-0 silk suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>18020-60</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>27 &frac12; gauge needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>305109</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-0 prolene suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mckesson</td>
<td>3286</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Buprenorphine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Institutional Animal Facility</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

transverse aortic constriction in mice

مستعرضة انقباض الأبهر (TAC) في الماوس هو نموذج تجريبي استخداما للضغط الزائد الناجم عن تضخم القلب وقصور في القلب.<sup&gt; 1</sup&gt; TAC يؤدي الى تضخم في البداية تعويض للقلب ، والتي غالبا ما يترافق مع تعزيز مؤقت لانقباض القلب. بمرور الوقت ، ومع ذلك ، استجابة لزيادة الحمل على الدورة الدموية المزمنة يصبح التأقلم ، مما أدى إلى اتساع القلب وقصور في القلب.<sup&gt; 2</sup&gt; تم التحقق من صحة النموذج لأول مرة TAC الفئران التي Rockman<em&gt; وآخرون</em&gt;.<sup&gt; 1</sup&gt; ، ومنذ ذلك الحين يستخدم على نطاق واسع باعتبارها أداة قيمة لتقليد أمراض القلب والشرايين البشرية وتوضيح العمليات الأساسية إشارات تشارك في الاستجابة ضخامي القلب والقلب التنمية الفشل. بالمقارنة مع غيرها من نماذج تجريبية من قصور في القلب ، مثل انسداد كامل للالأمامي الأيسر النازل (LAD) الشريان التاجي ، ومعاهدة الصداقة والتعاون يقدم نموذجا أكثر استنساخه من تضخم القلب ودوام أكثر تدرجا في تطوير بقصور في القلب. هنا ، نحن تصف الإجراء خطوة بخطوة لتنفيذ معاهدة الصداقة والتعاون الجراحية في الفئران. لتحديد مستوى الضغط الزائد التي تنتجها عملية ربط الشريان الأورطي ، يتم استخدام مسبار دوبلر عالية التردد لقياس النسبة بين سرعات تدفق الدم في الشرايين السباتية في اليمين واليسار.<sup&gt; 3 و 4</sup&gt; مع بقاء معدلات العمليات الجراحية في 80-90 ٪ ، الأبهر عرضية النطاقات هي تقنية فعالة لحفز تضخم البطين الأيسر وفشل القلب في الفئران.

Watch this Scientific Journal Video about Transverse Aortic Constriction in Mice at JoVE.com

Transverse Aortic Constriction in Mice

مستعرضة انقباض الأبهر (TAC) في الفأر نموذج استخداما تجريبيا لدراسة الآليات الكامنة وراء تضخم القلب والقلب التنمية الفشل. هنا ، نحن تصف إجراءات لتقليص الأبهر لخلق درجة استنساخه من تضخم القلب في الفئران.

المستعرضة في انقباض الأورطي الفئران

Transverse aortic constriction (TAC) in the mouse is a commonly used experimental model for pressure overload-induced cardiac hypertrophy and heart ...

Research

JoVE Journal

Biology

66.4K Views.  Baylor College of Medicine (BCM). مستعرضة انقباض الأبهر (TAC) في الفأر نموذج استخداما تجريبيا لدراسة الآليات الكامنة وراء تضخم القلب والقلب التنمية الفشل. هنا ، نحن تصف إجراءات لتقليص الأبهر لخلق درجة استنساخه من تضخم القلب في الفئران.

Video: Transverse Aortic Constriction in Mice

Creation of Murine Experimental Abdominal Aortic Aneurysms with Elastase 

Transient intraluminal infusion of porcine pancreatic elastase into the infrarenal segment of the abdominal aorta is the most widely used animal model of abdominal aortic aneurysm (AAA) ever since it was first described in rats by Anidjar and colleagues.1 The rationale for its development was based on the disrupted nature of elastin observed in AAAs. This rat model has been modified to produce AAAs in the infrarenal aortic region of mice.2 The model has the ability to add broad insight into the pathobiology of AAA due to the emergence of numerous transgenic and gene knockout mice. Moreover, it is a viable platform to test potential therapeutic agents for AAA. In this video, we demonstrate the elastase infusion AAA procedure used in our laboratory. 
Mice are anesthetized using 2.5% isoflurane, and a laparotomy is performed under sterile conditions. The abdominal aortais isolated with the assistance of an operating stereomicroscope (Leica). After placing temporary ligatures around the proximal and distal aorta, an aortotomy is created at the bifurcation with the tip of a 30-gauge needle. A heat-tapered segment of PE-10 polyethylene tubing is introduced through the aortotomy and secured. The aortic lumen is subsequently perfused for 5-15 minutes at 100 mm Hg with saline containing type I porcine pancreatic elastase (4.5 U/mL; Sigma Chemical Co.). After removing the perfusion catheter, the aortotomy is repaired without constriction of the lumen.

Creation of Murine Experimental Abdominal Aortic Aneurysms with Elastase

This video shows how to induce abdominal aortic aneurysms (AAA) in mice via transient intraluminal infusion of porcine pancreatic elastase into the infrarenal segment of the abdominal aorta. The model has the ability to add broad insight into the pathobiology of AAA due to the emergence of numerous transgenic and gene knockout mice.

خلق الفئران التجريبية تمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني مع إيلاستاز

Transient intraluminal infusion of porcine pancreatic elastase into the infrarenal segment of the abdominal aorta is the most widely used animal model of ...

Aortic Ring Assay

Angiogenesis, the sprouting of blood vessels from preexisting vasculature is associated with both natural and pathological processes. Various angiogenesis assays involve the study of individual endothelial cells in culture conditions (1). The aortic ring assay is an angiogenesis model that is based on organ culture. In this assay, angiogenic vessels grow from a segment of the aorta (modified from (2)). Briefly, mouse thoracic aorta is excised, the fat layer and adventitia are removed, and rings approximately 1 mm in length are prepared. Individual rings are then embedded in a small solid dome of basement matrix extract (BME), cast inside individual wells of a 48-well plate. Angiogenic factors and inhibitors of angiogenesis can be directly added to the rings, and a mixed co-culture of aortic rings and other cell types can be employed for the study of paracrine angiogenic effects. Sprouting is observed by inspection under a stereomicroscope over a period of 6-12 days. Due to the large variation caused by the irregularities in the aortic segments, experimentation in 6-plicates is strongly advised. Neovessel outgrowth is monitored throughout the experiment and imaged using phase microscopy, and supernatants are collected for measurement of relevant angiogenic and anti-angiogenic factors, cell death markers and nitrite.

Angiogenesis, the sprouting of blood vessels from pre-existing vasculature, is associated with both natural and pathological processes. Here we demonstrate an aortic ring assay that allows angiogenic potentiators and inhibitors to be directly added to aortic rings in culture. Sprouting and neovessel outgrowth can be determined by inspecting the aortic rings over a period of 6-12 days.

الأبهر خاتم الفحص

Angiogenesis, the sprouting of blood vessels from preexisting vasculature is associated with both natural and pathological processes. Various angiogenesis ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an important model for cardiovascular disease research. This study demonstrates a simple method to isolate and culture endothelial cells from the mouse aorta without any special equipment. To isolate endothelial cells, the thoracic aorta is quickly removed from the mouse body, and the attached adipose tissue and connective tissue are removed from the aorta. The aorta is cut into 1 mm rings. Each aortic ring is opened and seeded onto a growth factor reduced matrix with the endothelium facing down. The segments are cultured in endothelial cell growth medium for about 4 days. The endothelial sprouting starts as early as day 2. The segments are then removed and the cells are cultured continually until they reach confluence. The endothelial cells are harvested using neutral proteinase and cultured in endothelial cell growth medium for another two passages before being used for experiments. Immunofluorescence staining indicated that after the second passage the majority of cells were double positive for Dil-ac-LDL uptake, Lectin binding, and CD31 staining, the typical characteristics of endothelial cells. It is suggested that cells at the second to third passages are suitable for in vitro and in vivo experiments to study the endothelial biology. Our protocol provides an effective means of identifying specific cellular and molecular mechanisms in endothelial cell physiopathology.

The vascular endothelial cells play a significant role in many important cardiovascular disorders. This article describes a simple method to isolate and expand endothelial cells from the mouse aorta without using any special equipment. Our protocol provides an effective means of identifying mechanisms in endothelial cell physiopathology.

العزلة والثقافة الابتدائية من خلايا الفأر الأورطي غشائي

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Differentiation Capacity of Human Aortic Perivascular Adipose Progenitor Cells

Adipose tissue is a rich source of multi-potent mesenchymal stem cells (MSC) capable of differentiating into osteogenic, adipogenic, and chondrogenic lineages. Adipogenic differentiation of progenitor cells is a major mechanism driving adipose tissue expansion and dysfunction in response to obesity. Understanding changes to perivascular adipose tissue (PVAT) is thus clinically relevant in metabolic disease. However, previous studies have been predominately performed in the mouse and other animal models. This protocol uses human thoracic PVAT samples collected from patients undergoing coronary artery bypass graft surgery. Adipose tissue from the ascending aorta was collected and used for explantation of the stromal vascular fraction. We previously confirmed the presence of adipose progenitor cells in human PVAT with the capacity to differentiate into lipid-containing adipocytes. In this study, we further analyzed the differentiation potential of cells from the stromal vascular fraction, presumably containing multi-potent progenitor cells. We compared PVAT-derived cells to human bone marrow MSC for differentiation into adipogenic, osteogenic, and chondrogenic lineages. Following 14 days of differentiation, specific stains were utilized to detect lipid accumulation in adipocytes (Oil red O), calcific deposits in osteogenic cells (Alizarin Red), or glycosaminoglycans and collagen in chondrogenic cells (Masson&#8217;s Trichrome). While bone marrow MSC efficiently differentiated into all three lineages, PVAT-derived cells had adipogenic and chondrogenic potential, but lacked robust osteogenic potential.

The goal of this protocol is to test the ability of progenitor cells derived from human perivascular adipose tissue to differentiate into multiple cell lineages. Differentiation was compared to mesenchymal stem cells derived from human bone marrow, which is known to differentiate into adipocyte, osteocyte, and chondrocyte lineages.

قدرة التمايز للخلايا الدهنية ارتشاح الابهري البشرية السلف

Adipose tissue is a rich source of multi-potent mesenchymal stem cells (MSC) capable of differentiating into osteogenic, adipogenic, and chondrogenic ...

Induction of Right Ventricular Failure by Pulmonary Artery Constriction and Evaluation of Right Ventricular Function in Mice

The mechanism of right ventricular failure (RVF) requires clarification due to the uniqueness, high morbidity, high mortality, and refractory nature of RVF. Previous rat models imitating RVF progression have been described. Compared with rats, mice are more accessible, economical, and widely used in animal experiments. We developed a pulmonary artery constriction (PAC) approach which is comprised of banding the pulmonary trunk in mice to induce right ventricular (RV) hypertrophy. A special surgical latch needle was designed that allows for easier separation of the aorta and the pulmonary trunk. In our experiments, the use of this fabricated latch needle reduced the risk of arteriorrhexis and improved the surgical success rate to 90%. We used different padding needle diameters to precisely create quantitative constriction, which can induce different degrees of RV hypertrophy. We quantified the degree of constriction by evaluating the blood flow velocity of the PA, which was measured by noninvasive transthoracic echocardiography. RV function was precisely evaluated by right heart catheterization at 8 weeks after surgery. The surgical instruments made inhouse were composed of common materials using a simple process that is easy to master. Therefore, the PAC approach described here is easy to imitate using instruments made in the lab and can be widely used in other labs. This study presents a modified PAC approach that has a higher success rate than other models and an 8-week postsurgery survival rate of 97.8%. This PAC approach provides a useful technique for studying the mechanism of RVF and will enable an increased understanding of RVF.

Here, we provide a useful approach for studying the mechanism of right ventricular failure. A more convenient and efficient approach to pulmonary artery constriction is established using surgical instruments made inhouse. In addition, methods to evaluate the quality of this approach by echocardiography and catheterization are provided.

تحريض الفشل البطيني الأيمن عن طريق انقباض الشريان الرئوي وتقييم وظيفة البطين الأيمن في الفئران

The mechanism of right ventricular failure (RVF) requires clarification due to the uniqueness, high morbidity, high mortality, and refractory nature of ...

Transverse Fracture of the Mouse Femur with Stabilizing Pin

Fracture repair is an essential function of the skeleton that cannot be reliably modeled in vitro. A mouse injury model is an efficient approach to test whether a gene, gene product or drug influences bone repair because murine bones recapitulate the stages observed during human fracture healing. When a mouse or human breaks a bone, an inflammatory response is initiated, and the periosteum, a stem cell niche surrounding the bone itself, is activated and expands. Cells residing in the periosteum then differentiate to form a vascularized soft callus. The transition from the soft callus to a hard callus occurs as the recruited skeletal progenitor cells differentiate into mineralizing cells, and the bridging of the fractured ends results in the bone union. The mineralized callus then undergoes remodeling to restore the original shape and structure of the healed bone. Fracture healing has been studied in mice using various injury models. Still, the best way to recapitulate this entire biological process is to break through the cross-section of a long bone that encompasses both cortices. This protocol describes how a stabilized, transverse femur fracture can be safely performed to assess healing in adult mice. A surgical protocol including detailed harvesting and imaging techniques to characterize the different stages of fracture healing is also provided.

This protocol describes a method to perform fractures on adult mice and monitor the healing process.

كسر عرضي لعظم عظم الفخذ مع دبوس التثبيت

Fracture repair is an essential function of the skeleton that cannot be reliably modeled in vitro. A mouse injury model is an efficient approach to test ...

A Modified Technique for Transverse Aortic Constriction in Mice

Transverse aortic constriction (TAC) is a frequently used surgery in research regarding heart failure and cardiac hypertrophy based on the formation of pressure overload in mouse models. The main challenge of this procedure is to clearly visualize the transverse aortic arch and precisely band the target vessel. Classical approaches perform a partial thoracotomy to expose the transverse aortic arch. However, it is an open-chest model that causes a rather large surgical trauma and requires a ventilator during the surgery. To prevent unnecessary trauma and simplify the operating procedure, the aortic arch is approached via the proximal proportion of the sternum, reaching and binding the target vessel using a small self-made retractor that contains a snare. This procedure can be conducted without entering the pleura cavity and does not need a ventilator or microsurgical operation, which leaves the mice with physiological breathing patterns, simplifies the procedure, and significantly reduces operation time. Due to the less invasive approach and less operation time, mice can undergo fewer stress reactions and recover rapidly.

The present protocol describes a modified and simplified technique with a minimally invasive transverse aortic constriction (TAC) procedure using a self-made retractor. This procedure can be conducted without a ventilator or microscope and introduces pressure overload, eventually leading to cardiac hypertrophy or heart failure.

تقنية معدلة لتضيق الأبهر المستعرض في الفئران

Transverse aortic constriction (TAC) is a frequently used surgery in research regarding heart failure and cardiac hypertrophy based on the formation of ...

A Calcium Phosphate-Induced Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening cardiovascular disease that occurs worldwide and is characterized by irreversible dilation of the abdominal aorta. Currently, several chemically induced murine AAA models are used, each simulating a different aspect of the pathogenesis of AAA. The calcium phosphate-induced AAA model is a rapid and cost-effective model compared to the angiotensin II- and elastase-induced AAA models. The application of CaPO4 crystals to the mouse aorta results in elastic fiber degradation, loss of smooth muscle cells, inflammation, and calcium deposition associated with aortic dilation. This article introduces a standard protocol for the CaPO4-induced AAA model. The protocol includes material preparation, the surgical application of the CaPO4&#160;to the adventitia of the infrarenal abdominal aorta, the harvesting of aortas to visualize aortic aneurysms, and histological analyses in mice.

This protocol describes a calcium phosphate-induced abdominal aortic aneurysm (AAA) mouse model to study the pathological features and molecular mechanisms of AAAs.

نموذج تمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني للفأر الناجم عن فوسفات الكالسيوم

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening cardiovascular disease that occurs worldwide and is characterized by irreversible dilation of the ...

Establishing a Diaphyseal Femur Fracture Model in Mice

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age and overall health status of the patient, failures can occur, leading to delayed union or nonunion. Due to the increasing number of fractures resulting from high-energy trauma and aging, the development of innovative therapeutic strategies to improve bone repair based on the combination of skeletal/mesenchymal stem/stromal cells and biomimetic biomaterials is urgently needed. To this end, the use of reliable animal models is fundamental to better understanding the key cellular and molecular mechanisms that determine the healing outcomes. Of all the models, the mouse is the preferred research model because it offers a wide variety of transgenic strains and reagents for experimental analysis. However, the establishment of fractures in mice may be technically challenging due to their small size. Therefore, this article aims to demonstrate the procedures for the surgical establishment of a diaphyseal femur fracture in mice, which is stabilized with an intramedullary wire and resembles the most common bone repair process, through cartilaginous callus formation.

This protocol describes a surgical procedure for the establishment of a diaphyseal fracture in the femur of mice, which is stabilized with an intramedullary wire, for fracture healing studies.

إنشاء نموذج كسر عظم الفخذ الحجابي في الفئران

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age ...

طرق محسنة لتصوير أوراق الذرة الأولية

Improved Methods for Preparing Transverse Sections and Unrolled Whole Mounts of Maize Leaf Primordia for Fluorescence and Confocal Imaging

In maize (Zea mays) and other grasses (Poaceae), the leaf primordia are deeply ensheathed and rolled within the leaf whorl, making it difficult to study early leaf development. Here, we describe methods for preparing transverse sections and unrolled whole mounts of maize leaf primordia for fluorescence and confocal imaging. The first method uses a wire stripper to remove the upper portions of older leaves, exposing the tip of the leaf primordium and allowing its measurement for more accurate transverse section sampling. The second method uses clear, double-sided nano tape to unroll and mount whole-leaf primordia for imaging. We show the utility of the two methods in visualizing and analyzing fluorescent protein reporters in maize. These methods provide a solution to the challenges presented by the distinctive morphology of maize leaf primordia and will be useful for visualizing and quantifying leaf anatomical and developmental traits in maize and other grass species.

تسليط الضوء على المؤلف: طرق محسنة لإعداد المقاطع المستعرضة وحوامل كاملة غير ملفوفة من أوراق الذرة الأولية للتصوير الفلوري والبؤري  

Maize leaf primordia are deeply ensheathed and rolled, making them difficult to study. Here, we present methods for preparing transverse sections and unrolled whole mounts of maize leaf primordia for fluorescence and confocal imaging.

طرق محسنة لإعداد المقاطع المستعرضة وحوامل كاملة غير ملفوفة من أوراق الذرة الأولية للتصوير الفلوري والبؤري

In maize (Zea mays) and other grasses (Poaceae), the leaf primordia are deeply ensheathed and rolled within the leaf whorl, making it difficult to study ...