XHTW es un WM Keck Foundation Distinguished Scholar jóvenes en la investigación médica, y también es apoyado por el NIH / NHLBI subvenciones R01-R01 y HL089598 R01HL091947, y Asociación de Distrofia Muscular de subvención # 69238. RJvO es el destinatario de la beca 2008-2010 American Physiological Society postdoctoral en genómica fisiológica. Este trabajo también es apoyado en parte por la Fundación Alianza Leducq de CaMKII en el Corazón de señalización.

Parte 1: Preparación del campo operatorio <ol><li> El campo de operación se desinfecta con un 75% de alcohol isopropílico. </li><li> Asegúrese de que el cojín de la calefacción está encendida y en la temperatura correcta. Un sistema recomendado es un Gaymar bomba de circulación de agua conectados a una plataforma de terapia que se mantiene a 37 ° C ± 1 ° C. Es importante mantener la temperatura corporal normal durante la cirugía para evitar una rápida disminución de la frecuencia cardíaca. </li><li> Los instrumentos quirúrgicos se esterilizan en un esterilizador de calor de cuentas antes de la cirugía. Para este procedimiento, tendrá los siguientes instrumentos quirúrgicos: tijeras de punta roma, por supuesto curva X 2 pinzas, pinzas finas en ángulo de 45 ° X 2, tijeras en ángulo de primavera, retractor en el pecho, y soporte de la aguja. </li><li> Aplicadores de algodón se debe a la mano en caso de hemorragia. </li></ol> Parte 2: Preparación y la intubación de los ratones <ol><li> Los ratones son anestesiados en una cámara de inducción con isoflurano 2% mezclado con 0.5 -1.0 L / min 100% de O 2. </li><li> Cortar el pelo se utilizan para afeitar la piel del escote a la altura del pecho medio. </li><li> El ratón es colocado en posición supina sobre un cojín de la calefacción con el fin de mantener la temperatura corporal. </li><li> Una banda de goma se coloca sobre los dientes delanteros del animal s para extender el cuello. El uso de pinzas curvas en una mano, la lengua es manipulado suavemente a un lado. Con la otra mano, la intubación endotraqueal se realiza con tubería de PE 90. El tubo endotraqueal se conecta a un volumen de Harvard de ciclo en ciclo del ventilador roedores 125-150 respiraciones / minuto y un volumen corriente de 0.1-0.3 ml. Durante la intervención quirúrgica, la anestesia se mantiene en 1,5 a 2% de isoflurano con 0,5 a 1,0 L / min 100% de O 2. Nivel correcto de la anestesia se verifica mediante la aplicación de presión sobre el lecho de la uña del ratón (dedo del pie-una pizca de reflejos). </li><li> El campo quirúrgico se desinfecta con una solución de betadine seguido por 70% de alcohol. Este procedimiento se repite tres veces. </li><li> Para evitar la contaminación del campo quirúrgico durante la operación, un campo estéril se coloca sobre el ratón dejando sólo el campo de operaciones al descubierto. </li><li> Un par de guantes estériles se utiliza para cada ratón individual. </li></ol> Parte 3: La ligadura de la aorta transversa <ol><li> Toracotomía parcial de la segunda costilla se realiza bajo un microscopio quirúrgico y el esternón se retractó de usar un separador en el pecho. </li><li> Punta fina pinza en ángulo de 45 ° se utilizan para separar suavemente el tejido del timo y la grasa del arco aórtico. </li><li> Tras la identificación de la aorta transversa, una pequeña pieza de una sutura de seda 6.0 se coloca entre las arterias carótidas innominada y la izquierda (Figura 1). </li><li> Dos nudos sueltos se atan alrededor de la aorta transversa y una pequeña pieza de un 27 ½ aguja roma de calibre se coloca paralelo a la aorta transversa. El primer nudo es atado rápidamente en contra de la aguja, seguida por la segunda y la aguja se eliminan sin demora con el fin de producir una contracción de 0,4 mm de diámetro. En los ratones control con tratamiento simulado, todo el procedimiento es idéntico, excepto para la ligadura de la aorta. </li><li> El retractor se quita el pecho y la salida del ventilador apagado apretado durante 2 segundos para volver a inflar los pulmones. </li><li> La caja torácica se cierra con una sutura de prolene 6.0 con un patrón de sutura interrumpida. </li><li> La piel se cierra con una sutura de prolene 6.0 con un patrón de sutura continua. </li></ol> Parte 4: recuperación post-operatoria <ol><li> Para la analgesia postoperatoria, el ratón se inyecta con buprenorfina (0,1 mg / kg) por vía intraperitoneal. Si hay signos de deshidratación después de la cirugía, se le da una solución salina estéril por vía intraperitoneal. </li><li> La anestesia es rebajarse gradualmente a la posición de apagado y el tubo endotraqueal eliminado cuando los signos de respiración espontánea se producen. </li><li> El ratón se mueve a la posición prona y les permitió recuperarse de una almohadilla eléctrica. </li></ol> Parte 5: Confirmación de la ligadura de éxito de la aorta transversa <ol><li> Una semana después de TAC, el ratón se re-anestesia para determinar el grado de sobrecarga de presión inducida por la ligadura de la aorta transversa. Como se describió anteriormente, la anestesia se mantiene en 1,5 a 2% de isoflurano con 0,5 a 1,0 L / min 100% de O2 y la temperatura corporal se mantuvo a 37 ° C ± 1 ° C. </li><li> A 20 MHz Doppler sonda se coloca en los lados izquierdo y derecho del cuello en un ángulo de 45 ° para detectar velocidades de flujo. Un ordenador basado en procesador de señales Doppler (Indo Instruments, Houston, TX) se utiliza para mostrar y almacenar señales de Doppler. 5 </li><li> Dependiendo del grado de sobrecarga de presión necesario para el protocolo experimental, los ratones sólo con una carótida derecha (RC) / carótida izquierda (LC) la relación de flujo dentro de cierto rango se incluyen para su posterior análisis. Por ejemplo, un moderado grado de sobrecarga de presión lleva a una proporción de 5-8, mientras que una contracción más estrecha que resulta en una sobrecarga de presión severa lleva tOA cociente de 8.10 (Figura 5.3A). Un animal simulado (operado, pero no ligado), sin embargo, se espera que tenga una proporción de ~ 1 (Figura 5.3b). </li></ol> 6: Resultados de Representante La supervivencia típica quirúrgica después de la TAC en ratones de tipo salvaje es alrededor de 80-90%. La ligadura quirúrgica exitosa de la aorta transversa dará lugar a una relación de velocidad Doppler del flujo entre la arteria carótida derecha y la izquierda (RC / LC) de 10.5 (Figura 1). En comparación con el simulacro que funciona con los ratones (Figura 2A), los ratones con sobrecarga de presión se espera que se desarrolle la hipertrofia cardiaca en 1-2 semanas, y la dilatación cardiaca después de 6-8 semanas, dependiendo de la tensión de la contracción (Figura 2B). La mortalidad durante el primer mes después de la TAC es más baja (&lt;20%) en ratones de tipo salvaje, a pesar de ratones modificados genéticamente pueden presentar diferentes tasas de supervivencia 6,7. <img src="/files/ftp_upload/1729/1729fig1tmb.jpg" alt="Figura 1" border="0" /> Figura 1. La confirmación de la ligadura de la aorta transversal con Doppler de medición de velocidad. Representante de las señales de velocidad Doppler de la derecha (CD) y la arteria carótida izquierda (LC) 6 días después de la TAC. Estas grabaciones demuestran una ligadura de éxito con un ratio de flujo de RC / LC de ~ 6.8. Por favor, <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1729/1729fig1.jpg">haga clic aquí</a> para ver una versión ampliada de la figura 1. <img src="/files/ftp_upload/1729/1729fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Imágenes representativas de todo corazón Después de TAC. A, B. Sham-operado del corazón salvaje del ratón tipo.. Corazón salvaje del ratón tipo 16 semanas después de la TAC. Cada línea = 1 mm.

<ol>
	<li>Rockman, H. A., Ross, R. S., Harris, A. N., Knowlton, K. U., Steinhelper, M. E., Field, L. J., Ross, J., Chein, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy.">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88, 8277-8281 (1991).</li><li>Heineke, J., Molkentin, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cardiac+hypertrophy+by+intracellular+signaling+pathways.">Regulation of cardiac hypertrophy by intracellular signaling pathways.</a> Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 7, 589-600 (2006).</li><li>Hartley, C. J., Reddy, A. K., Madala, S., Michael, L. H., Entman, M. L., Taffett, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doppler+estimation+of+reduced+coronary+flow+reserve+in+mice+with+pressure+overload+cardiac+hypertrophy.">Doppler estimation of reduced coronary flow reserve in mice with pressure overload cardiac hypertrophy.</a> Ultrasound Med. Biol. 34, 892-901 (2008).</li><li>Reddy, A. K., Taffett, G. E., Li, Y. -. H., Lim, S. -. W., Pham, T. T., Pocius, J. S., Entman, M. L., Michael, L. H., Hartley, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doppler+signal+processing+for+use+in+mice:+applications.">Doppler signal processing for use in mice: applications.</a> IEEE Trans. Biomed. Eng. 52, 1771-1783 (2005).</li><li>Li, Y. -. H., Reddy, A. K., Ochoa, L. N., Pham, T. T., Hartley, C. J., Micheal, L. H., Entman, M. L., Taffett, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+age+on+peripheral+vascular+response+to+transverse+aortic+banding+in+mice.">Effect of age on peripheral vascular response to transverse aortic banding in mice.</a> J. Gerontol. 58A, 895-899 (2003).</li><li>Bourajjaj, M., Armand, A. S., Martins, d. a. C. o. s. t. a., Weijts, P. A., Nagel, B. V. a. n. d. e. r., Heeneman, R., Wehrens, S., Windt, X. H. D. e., J, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFATc2+is+a+necessary+mediator+of+calcineurin-dependent+cardiac+hypertrophy+and+heart+failure.">NFATc2 is a necessary mediator of calcineurin-dependent cardiac hypertrophy and heart failure.</a> J. Biol. Chem. 28, 22295-22303 (2008).</li><li>Oort, R. J. v. a. n., Respress, J. L., Li, N., Reynolds, C., Almeida, A. C. D. e., Skapura, D. G., Windt, L. J. D. e., Wehrens, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+development+of+pressure+overload+induced+cardiac+hypertrophy+and+dysfunction+in+an+RyR2-R176Q+knockin+mouse+model.">Accelerated development of pressure overload induced cardiac hypertrophy and dysfunction in an RyR2-R176Q knockin mouse model.</a> Hypertension. 55, (2010).</li><li>Tarnavski, O., McMullen, J. R., Schinke, M., Nie, Q., Kong, S., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cardiac+surgery:+comprehensive+techniques+for+the+generation+of+mouse+models+of+human+diseases+and+their+application+for+genomic+studies.">Mouse cardiac surgery: comprehensive techniques for the generation of mouse models of human diseases and their application for genomic studies.</a> Physiol Genomics. 16, 349-360 (2004).</li></ol>

TAC, que imita a la estenosis aórtica humana, es un método común para inducir la hipertrofia e insuficiencia cardiaca en ratones. Sitios alternativos para la constricción de la aorta incluyen la aorta ascendente y abdominal. Constricción de la aorta ascendente proporciona una sobrecarga extrema y más rápido en el ventrículo izquierdo (VI). Por el contrario, la constricción de la aorta abdominal deja intacta una porción más grande de la circulación como medio de compensación posible. 8 Por lo tant...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Gaymar T/pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>Model TP-500</td>
<td>Circulating water pump</td>
</tr>
<tr>
<td>Temp. therapy pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>60-3414</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot bead sterilizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>18000-45</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blunt scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5980</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Angled spring scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5668</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chest retractor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>17002-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Course curved forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5138</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dumont fine 45&deg; angled forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11253-25</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>12565-14</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Electric shaver</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>General Electric</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For shaving mouse fur</td>
</tr>
<tr>
<td>PE 90 tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>427420</td>
<td>For intubation</td>
</tr>
<tr>
<td>MiniVent (ventilator)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>Type 845</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>19-027132</td>
<td>May be purchased at medical supply store</td>
</tr>
<tr>
<td>Sterile gloves</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mckesson</td>
<td>20-1565</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stereo microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Unico</td>
<td>ZM186</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-0 silk suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>18020-60</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>27 &frac12; gauge needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>305109</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-0 prolene suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mckesson</td>
<td>3286</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Buprenorphine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Institutional Animal Facility</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

transverse aortic constriction in mice

Constricción de la aorta transversal (TAC) en el ratón es un modelo experimental de uso común para la presión inducida por sobrecarga de la hipertrofia cardíaca y la insuficiencia cardiaca.<sup&gt; 1</sup&gt; TAC inicialmente conduce a la hipertrofia compensada del corazón, que a menudo se asocia con un aumento temporal de la contractilidad cardíaca. Con el tiempo, sin embargo, la respuesta a la sobrecarga hemodinámica crónica se convierte en mala adaptación, lo que resulta en la dilatación cardíaca y la insuficiencia cardiaca.<sup&gt; 2</sup&gt; El modelo murino TAC fue validado por primera vez por Rockman<em&gt; Et al</em&gt;.<sup&gt; 1</sup&gt;, Y desde entonces ha sido ampliamente utilizado como una herramienta valiosa para imitar humanos las enfermedades cardiovasculares y dilucidar los procesos fundamentales de señalización implicadas en la respuesta hipertrófica y el desarrollo de insuficiencia cardíaca. En comparación con otros modelos experimentales de insuficiencia cardíaca, como la oclusión completa de la arteria descendente anterior (LAD) arteria coronaria, TAC proporciona un modelo más reproducible de la hipertrofia cardíaca y un curso de tiempo más gradual en el desarrollo de insuficiencia cardíaca. Aquí se describe un procedimiento paso a paso para realizar cirugía TAC en ratones. Para determinar el nivel de sobrecarga de presión producida por la ligadura de la aorta, una alta frecuencia de sonda Doppler se utiliza para medir la relación entre las velocidades del flujo sanguíneo en las arterias carótidas derecha e izquierda.<sup&gt; 3, 4</sup&gt; Con las tasas de supervivencia quirúrgica del 80-90%, aórtica transversal de bandas es una técnica eficaz para inducir la hipertrofia ventricular izquierda e insuficiencia cardiaca en ratones.

Watch this Scientific Journal Video about Transverse Aortic Constriction in Mice at JoVE.com

Transverse Aortic Constriction in Mice

Constricción de la aorta transversal (TAC) en el ratón es un modelo de uso experimental para estudiar mecanismos que subyacen a la hipertrofia cardíaca y el desarrollo de insuficiencia cardíaca. Aquí se describen los procedimientos para contraer la aorta para crear un grado de reproducibilidad de la hipertrofia cardiaca en ratones.

Constricción de la aorta transversa en ratones

Transverse aortic constriction (TAC) in the mouse is a commonly used experimental model for pressure overload-induced cardiac hypertrophy and heart ...

Research

JoVE Journal

Biology

66.3K vistas.  Baylor College of Medicine (BCM). Constricción de la aorta transversal (TAC) en el ratón es un modelo de uso experimental para estudiar mecanismos que subyacen a la hipertrofia cardíaca y el desarrollo de insuficiencia cardíaca. Aquí se describen los procedimientos para contraer la aorta para crear un grado de reproducibilidad de la hipertrofia cardiaca en ratones.