XHTW é um WM Keck Foundation Scholar Distinguished Jovens em Pesquisa Médica, e também é suportado pelo NIH / NHLBI concede R01-R01-HL089598 e R01HL091947 e Muscular Dystrophy Association conceder # 69238. RJvO é o destinatário da Fellowship 2008-2010 American Physiological Society Pós-Doutorado em Physiological Genomics. Este trabalho também é suportado, em parte, pela Aliança para a Fondation Leducq CaMKII Sinalização no Coração.

Parte 1: Preparação do campo operatório <ol><li> O campo de operação é desinfetada com 75% de álcool isopropílico. </li><li> Certifique-se a almofada de aquecimento está ligado e na temperatura certa. Um sistema recomendado é uma bomba de água Gaymar circulando ligada a um bloco de terapia que é mantida a 37 ° C ± 1 ° C. É importante para manter a temperatura corporal normal durante a cirurgia, para evitar uma rápida diminuição da freqüência cardíaca. </li><li> Instrumentos cirúrgicos são esterilizados em estufa quente talão antes da cirurgia. Para este procedimento, você vai precisar dos seguintes instrumentos cirúrgicos: uma tesoura sem corte, é claro curvas forceps X 2, multa de 45 ° pinças anguladas X 2, tesoura primavera angulado, afastador peito, e porta-agulha. </li><li> Aplicadores de algodão deve estar na mão em caso de hemorragia. </li></ol> Parte 2: Preparação e intubação de Ratos <ol><li> Os ratos são anestesiados em uma câmara de indução com isoflurano a 2% misturado com 0,5 -1,0 L / min 100% O 2. </li><li> Cortar cabelo são usados ​​para raspar a pele do decote no peito ao nível médio. </li><li> O mouse é colocado em posição supina sobre uma almofada de aquecimento, a fim de manter a temperatura corporal. </li><li> A faixa de borracha é colocada sobre dentes do animal s da frente para estender o pescoço. Utilizando uma pinça curva em uma das mãos, a língua é delicadamente manipulado para o lado. Com a outra mão, a intubação traqueal é realizada utilizando tubos PE 90. O tubo endotraqueal é então ligado a um ventilador Harvard ciclismo volumétricos de roedores em 125-150 respirações / minuto e um volume corrente de 0,1-0,3 ml. Durante o procedimento cirúrgico, a anestesia é mantida em 1,5-2% com isoflurano 0,5-1,0 L / min 100% O 2. Nível correto de anestesia é verificada através da aplicação de pressão sobre o leito ungueal do mouse (tep pinch-reflex). </li><li> O campo cirúrgico é desinfetada com uma solução de betadine seguido pelo álcool 70%. Este procedimento é repetido três vezes. </li><li> Para evitar a contaminação do campo cirúrgico durante a operação, uma cortina estéril é colocado sobre o mouse, deixando apenas o campo de operação exposta. </li><li> Um conjunto de luvas estéreis é utilizada para cada rato individual. </li></ol> Parte 3: A ligadura da aorta transversa <ol><li> Toracotomia parcial para a segunda costela é realizada sob um microscópio cirúrgico eo esterno retraído com afastador peito. </li><li> Ponta fina 45 ° pinças anguladas são usados ​​para separar delicadamente o tecido do timo e gordura do arco aórtico. </li><li> Após a identificação da aorta transversa, um pequeno pedaço de um fio de seda 6.0 é colocado entre as artérias inominada e carótida esquerda (Figura 1). </li><li> Dois nós soltas são amarradas ao redor da aorta transversa e um pequeno pedaço de uma agulha de 27 ½ blunt indicador é colocado paralelamente à aorta transversa. O primeiro nó é rapidamente amarrado contra a agulha, seguido pelo segundo e da agulha prontamente removidos a fim de produzir uma constrição de 0,4 milímetros de diâmetro. Em camundongos do grupo controle, todo o procedimento é idêntico, exceto para a ligadura da aorta. </li><li> O afastador de tórax é removido e os de saída do ventilador pinched off por 2 segundos para re-inflar os pulmões. </li><li> A caixa torácica é fechado com uma sutura prolene 6.0 com um padrão de sutura interrompido. </li><li> A pele é fechada com uma sutura prolene 6.0 com um padrão de sutura contínua. </li></ol> Parte 4: recuperação pós-operatória <ol><li> Para analgesia pós-operatória, o mouse é injetado com buprenorfina (0,1 mg / kg) por via intraperitoneal. Se houver sinais de desidratação após a cirurgia, solução salina estéril é dada por via intraperitoneal. </li><li> A anestesia é gradualmente reduzido para a posição off e do tubo endotraqueal removido quando os sinais de respiração espontânea ocorrer. </li><li> O mouse é movido para a posição prona e permitiu recuperar em uma almofada de aquecimento. </li></ol> Parte 5: Confirmação de ligadura de sucesso da aorta transversa <ol><li> Uma semana após a TAC, o mouse é re-anestesiados para determinar o grau de sobrecarga de pressão induzida por ligadura da aorta transversa. Como descrito acima, a anestesia é mantida em 1,5-2% com isoflurano 0,5-1,0 L / min 100% O 2 e temperatura corporal mantida a 37 ° C ± 1 ° C. </li><li> A 20 MHz Doppler sonda é colocada sobre os lados esquerdo e direito do pescoço em um ângulo de 45 ° para detectar velocidades de fluxo. Um computador baseado em processador de sinal Doppler (Indus Instruments, Houston, TX) foi utilizado para exibir e armazenar sinais de Doppler 5. </li><li> Dependendo do grau de sobrecarga de pressão necessária para o protocolo experimental, os ratos apenas com um carótida direita (RC) / carótida esquerda (LC) relação de fluxo em um determinado intervalo estão incluídos para análise posterior. Por exemplo, um grau moderado de sobrecarga de pressão leva a uma proporção de 5-8, enquanto que um apertado constrição resultando em sobrecarga de pressão leva grave toa proporção de 8-10 (Figura 5.3A). Um animal sham (operado, mas não ligada), no entanto, espera-se ter uma proporção de aproximadamente 1 (Figura 5.3b). </li></ol> 6: Resultados Representante A sobrevivência típica de intervenção cirúrgica após TAC em camundongos selvagens é de cerca de 80-90%. Ligadura cirúrgica bem sucedida da aorta transversa levará a uma relação de velocidade de fluxo Doppler entre direita e esquerda da artéria carótida (RC / LC) de 5-10 (Figura 1). Comparado com o sham-operado camundongos (Figura 2A), ratos com sobrecarga de pressão devem desenvolver hipertrofia cardíaca dentro de 1-2 semanas, e dilatação cardíaca após 6-8 semanas, dependendo da tensão da constrição (Figura 2B). Mortalidade durante o primeiro mês após o TAC é tipicamente baixa (&lt;20%) em camundongos selvagens, apesar de camundongos geneticamente modificados podem apresentar diferentes taxas de sobrevivência 6,7. <img src="/files/ftp_upload/1729/1729fig1tmb.jpg" alt="Figura 1" border="0" /> Figura 1. Confirmação da Ligadura aorta transversa com Doppler medição de velocidade. Representante sinais de velocidade Doppler do direito (RC) e carótida esquerda (LC) artérias seis dias pós-TAC. Essas gravações demonstram uma ligadura de sucesso com uma taxa de fluxo de RC / LC de ~ 6.8. Por favor, <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1729/1729fig1.jpg">clique aqui</a> para ver uma versão ampliada da figura 1. <img src="/files/ftp_upload/1729/1729fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Representante Whole Imagens Coração Após TAC. A B. Sham operados coração de rato tipo selvagem.. Coração de rato tipo selvagem 16 semanas pós-TAC. Cada linha = 1 milímetro.

<ol>
	<li>Rockman, H. A., Ross, R. S., Harris, A. N., Knowlton, K. U., Steinhelper, M. E., Field, L. J., Ross, J., Chein, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy.">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88, 8277-8281 (1991).</li><li>Heineke, J., Molkentin, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cardiac+hypertrophy+by+intracellular+signaling+pathways.">Regulation of cardiac hypertrophy by intracellular signaling pathways.</a> Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 7, 589-600 (2006).</li><li>Hartley, C. J., Reddy, A. K., Madala, S., Michael, L. H., Entman, M. L., Taffett, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doppler+estimation+of+reduced+coronary+flow+reserve+in+mice+with+pressure+overload+cardiac+hypertrophy.">Doppler estimation of reduced coronary flow reserve in mice with pressure overload cardiac hypertrophy.</a> Ultrasound Med. Biol. 34, 892-901 (2008).</li><li>Reddy, A. K., Taffett, G. E., Li, Y. -. H., Lim, S. -. W., Pham, T. T., Pocius, J. S., Entman, M. L., Michael, L. H., Hartley, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doppler+signal+processing+for+use+in+mice:+applications.">Doppler signal processing for use in mice: applications.</a> IEEE Trans. Biomed. Eng. 52, 1771-1783 (2005).</li><li>Li, Y. -. H., Reddy, A. K., Ochoa, L. N., Pham, T. T., Hartley, C. J., Micheal, L. H., Entman, M. L., Taffett, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+age+on+peripheral+vascular+response+to+transverse+aortic+banding+in+mice.">Effect of age on peripheral vascular response to transverse aortic banding in mice.</a> J. Gerontol. 58A, 895-899 (2003).</li><li>Bourajjaj, M., Armand, A. S., Martins, d. a. C. o. s. t. a., Weijts, P. A., Nagel, B. V. a. n. d. e. r., Heeneman, R., Wehrens, S., Windt, X. H. D. e., J, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFATc2+is+a+necessary+mediator+of+calcineurin-dependent+cardiac+hypertrophy+and+heart+failure.">NFATc2 is a necessary mediator of calcineurin-dependent cardiac hypertrophy and heart failure.</a> J. Biol. Chem. 28, 22295-22303 (2008).</li><li>Oort, R. J. v. a. n., Respress, J. L., Li, N., Reynolds, C., Almeida, A. C. D. e., Skapura, D. G., Windt, L. J. D. e., Wehrens, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+development+of+pressure+overload+induced+cardiac+hypertrophy+and+dysfunction+in+an+RyR2-R176Q+knockin+mouse+model.">Accelerated development of pressure overload induced cardiac hypertrophy and dysfunction in an RyR2-R176Q knockin mouse model.</a> Hypertension. 55, (2010).</li><li>Tarnavski, O., McMullen, J. R., Schinke, M., Nie, Q., Kong, S., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cardiac+surgery:+comprehensive+techniques+for+the+generation+of+mouse+models+of+human+diseases+and+their+application+for+genomic+studies.">Mouse cardiac surgery: comprehensive techniques for the generation of mouse models of human diseases and their application for genomic studies.</a> Physiol Genomics. 16, 349-360 (2004).</li></ol>

TAC, que imita estenose aórtica humana, é um método comum para induzir hipertrofia cardíaca e insuficiência cardíaca em camundongos. Locais alternativos para a constrição da aorta incluem a aorta ascendente e abdominal. Ascendente constrição aórtica fornece uma sobrecarga extrema e mais rápida sobre o ventrículo esquerdo (LV). Em contraste, a constrição da aorta abdominal deixa intacta uma porção maior da circulação como meio de compensação possível. 8 Portanto, TAC é muitas vezes o mod...

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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Gaymar T/pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>Model TP-500</td>
<td>Circulating water pump</td>
</tr>
<tr>
<td>Temp. therapy pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>60-3414</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot bead sterilizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>18000-45</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blunt scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5980</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Angled spring scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5668</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chest retractor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>17002-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Course curved forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5138</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dumont fine 45&deg; angled forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11253-25</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>12565-14</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Electric shaver</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>General Electric</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For shaving mouse fur</td>
</tr>
<tr>
<td>PE 90 tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>427420</td>
<td>For intubation</td>
</tr>
<tr>
<td>MiniVent (ventilator)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>Type 845</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>19-027132</td>
<td>May be purchased at medical supply store</td>
</tr>
<tr>
<td>Sterile gloves</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mckesson</td>
<td>20-1565</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stereo microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Unico</td>
<td>ZM186</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-0 silk suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>18020-60</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>27 &frac12; gauge needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>305109</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-0 prolene suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mckesson</td>
<td>3286</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Buprenorphine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Institutional Animal Facility</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

transverse aortic constriction in mice

Constrição aórtica transversal (TAC) no rato é um modelo experimental comumente usado para a pressão de sobrecarga induzida hipertrofia cardíaca e insuficiência cardíaca.<sup&gt; 1</sup&gt; TAC inicialmente leva a hipertrofia compensada do coração, que muitas vezes está associada a um aumento temporário da contratilidade cardíaca. Ao longo do tempo, no entanto, a resposta à sobrecarga hemodinâmica crônica torna-se maladaptive, resultando em dilatação cardíaca e insuficiência cardíaca.<sup&gt; 2</sup&gt; O modelo murino TAC foi validado por Rockman<em&gt; Et al</em&gt;.<sup&gt; 1</sup&gt;, E desde então tem sido amplamente utilizado como uma ferramenta valiosa para imitar humanos doenças cardiovasculares e elucidar fundamentais processos de sinalização envolvidos na resposta hipertrófica cardíaca e desenvolvimento de insuficiência cardíaca. Quando comparado a outros modelos experimentais de insuficiência cardíaca, tais como oclusão completa da descendente anterior esquerda (DAE) da artéria coronária, TAC fornece um modelo mais reprodutível de hipertrofia cardíaca e um curso de tempo mais gradual no desenvolvimento de insuficiência cardíaca. Aqui, descrevemos um procedimento passo-a-passo para realizar TAC cirúrgica em camundongos. Para determinar o nível de sobrecarga de pressão produzida pela ligadura da aorta, uma sonda de alta freqüência Doppler é usado para medir a relação entre velocidades de fluxo sanguíneo nas artérias carótidas direita e esquerda.<sup&gt; 3, 4</sup&gt; Com as taxas de sobrevivência cirúrgica de 80-90%, aórtico transverso bandagem é uma técnica eficaz de induzir a hipertrofia ventricular esquerda e insuficiência cardíaca em camundongos.

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Transverse Aortic Constriction in Mice

Constrição aórtica transversal (TAC) no rato é um modelo experimental comumente usado para estudar os mecanismos subjacentes a hipertrofia cardíaca eo desenvolvimento de insuficiência cardíaca. Aqui, descrevemos os procedimentos a constrição da aorta para criar um grau reprodutível de hipertrofia cardíaca em camundongos.

Constrição aórtica transversais em ratos

Transverse aortic constriction (TAC) in the mouse is a commonly used experimental model for pressure overload-induced cardiac hypertrophy and heart ...

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66.3K visualizações.  Baylor College of Medicine (BCM). Constrição aórtica transversal (TAC) no rato é um modelo experimental comumente usado para estudar os mecanismos subjacentes a hipertrofia cardíaca eo desenvolvimento de insuficiência cardíaca. Aqui, descrevemos os procedimentos a constrição da aorta para criar um grau reprodutível de hipertrofia cardíaca em camundongos.