للبدء ، قم بتسييل عينات السائل المنوي البشري التي تم جمعها وتجانسها تماما باستخدام ماصة باستور. ثم انقل 100 ميكرولتر من عينة السائل المنوي إلى أنبوب طرد مركزي. إلى هذا الأنبوب ، أضف 900 ميكرولتر من محلول التلطيخ.
امزج المتفاعل بشكل متكرر عن طريق سحب المادة المتفاعلة وتجانسها تماما. ضع الأنبوب على شاكر ثنائي الأبعاد للتحريك المستمر عند 200 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. أثناء انتظار تفاعل التلوين ، تابع تحليل تركيز المنوية باستخدام نظام CASA.
بعد تشغيل النظام ، انقر نقرا مزدوجا فوق رمز SCAscope لفتح البرنامج التطبيقي. بعد ذلك ، امزج عينة السائل المنوي جيدا عن طريق السحب ، وانقل ما يصل إلى 10 ميكرولتر من العينة في غرفة عد SCA. انتظر لمدة 60 ثانية حتى تتوقف عينة السائل المنوي عن الانجراف.
بعد ذلك ، ضع غرفة عد SCA على حامل العينة لنظام CASA. في البرنامج التطبيقي ، أدخل معلومات المريض في مربع الحوار. انقر فوق زر البدء لتسجيل تركيز الحيوانات المنوية في السائل المنوي.
ثم أوقف الخفق عند اكتمال تفاعل التلوين لمدة 30 دقيقة. قبل التحليل ، قم بخلط محتويات أنبوب الطرد المركزي عن طريق الماصة. انقل ما يصل إلى 10 ميكرولترات من المادة المتفاعلة إلى غرفة عد المنوية وقم بتغطيتها بغطاء زجاجي مخصص.
ضع غرفة عد المنوية على المرحلة المجهرية وقم بتشغيل المجهر الضوئي. بعد ذلك، انتظر لمدة 60 ثانية حتى تتوقف عينة المتفاعلات عن الانجراف. تحت عدسة موضوعية بمعدل 10 أضعاف ، اضبط المسار ومقابض الضبط الدقيقة لتحديد مجال الرؤية.
ثم قم بالتبديل إلى عدسة موضوعية 40x ولاحظ الكريات البيض الإيجابية للحيوانات المنوية والبيروكسيداز. استخدم نظام العداد الإلكتروني لحساب ما لا يقل عن 200 منوي وعدد كريات الدم البيضاء الإيجابية للبيروكسيديز باللون البني. باستخدام هذه التقنية ، تم تلطيخ الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز في عينة السائل المنوي.
أظهرت الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز لونا بنيا يتناقض مع الخلايا المستديرة العادية غير الملوثة.
