المؤلفون ممتنون لمختبر أمراض الذكورة التابع لمركز الطب التناسلي ، المستشفى الثالث التابع لجامعة صن يات صن ، لتوفير التسهيلات لهذه الدراسة. لم يشارك أي تمويل في إعداد هذه المقالة.

تمت مراجعة هذه الدراسة والموافقة عليها من قبل لجنة الأخلاقيات الطبية التابعة للمستشفى الثالث التابع لجامعة صن يات صن.
1. إعداد حل العمل
<ol><li>اجمع الكواشف التالية الضرورية لإعداد محلول العمل - محلول ركيزة أورثو تولويدين ، محلول كلوريد الأمونيوم المشبع (NH4Cl) ، محلول 148 مليمول / لتر ملح ثنائي الصوديوم لحمض الإيثيلين ديامينيترايتيك (Na2EDTA) ، ومحلول بيروكسيد الهيدروجين 6٪ (v / v). ضعها على مقعد مختبر بدرجة حرارة الغرفة (RT) مع الأدوات اللازمة ، مثل ماصات النقل (1000 ميكرولتر ، 200 ميكرولتر ، 10 ميكرولتر) ورفوف أنابيب الاختبار. تنبيه: اقرأ ورقة بيانات السلامة (SDS) قبل التعامل مع الكواشف المذكورة أعلاه.</li>
	<li>قم بإعداد زجاجة كاشف بنية غير شفافة لتخزين وحماية محلول العمل المحضر من التعرض للضوء.</li>
	<li>انقل الكواشف إلى زجاجة الكاشف البني غير الشفاف وفقا للنسب المحددة أدناه:<ol><li>استخدم ماصة النقل 200 ميكرولتر واضبط الميزان على 100 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. بعد ذلك ، انقل 100 ميكرولتر من محلول NH4Cl إلى زجاجة الكاشف البني غير الشفاف.</li>
		<li>استبدل طرف الماصة وانقل 100 ميكرولتر من محلول 148 مليمول / لتر Na2EDTA إلى زجاجة الكاشف البني غير الشفاف باستخدام ماصة النقل 200 ميكرولتر المذكورة أعلاه. ثم ، تهب بلطف عن طريق سحب وتجانس الحل تماما.</li>
		<li>استخدم ماصة النقل 1000 ميكرولتر واضبط الميزان على 900 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. بعد ذلك ، انقل 900 ميكرولتر من محلول الركيزة أورثو تولويدين إلى زجاجة الكاشف البني غير الشفاف ، وانفخ برفق عن طريق السحب ، وقم بتجانس المحلول تماما.</li>
		<li>استخدم ماصة النقل 10 ميكرولتر واضبط الميزان على 5 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. بعد ذلك ، انقل 5 ميكرولتر من محلول بيروكسيد الهيدروجين 6٪ (v / v) إلى زجاجة الكاشف البني غير الشفاف.</li>
	</ol></li>
	<li>استخدم ماصة النقل 1000 ميكرولتر واضبط الميزان على 1000 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. استبدل طرف الماصة ، وانفخ برفق عن طريق السحب ، وقم بتجانس المحلول تماما في زجاجة الكاشف البني غير الشفاف.</li>
	<li>قم بتخزين محلول العمل الجاهز للاستخدام في زجاجة الكاشف البني غير الشفاف في RT ، بعيدا عن الضوء. حل العمل تفاعلي لمدة 24 ساعة.</li>
	<li>تتطلب كل عينة من السائل المنوي 900 ميكرولتر من محلول العمل. تأكد من أن كمية محلول العمل المعد كل يوم تتوافق مع عدد العينات التي يتم فحصها يوميا.</li>
</ol>2. تحضير عينة السائل المنوي
<ol><li>قبل جمع عينة السائل المنوي ، تأكد من أن المريض قد امتنع عن القذف لمدة 2 إلى 7 أيام كما هو مطلوب من قبل دليل مختبر منظمة الصحة العالمية (WHO) لفحص ومعالجة السائل المنوي البشري (5 ed.) 8. الاستمناء هو الطريقة المفضلة للحصول على عينات السائل المنوي. لتحسين دقة الفحص ، اطلب من المريض جمع كل السائل المنوي المقذوف.</li>
	<li>قم بتشغيل حامل درجة الحرارة الثابتة وقم بالتسخين حتى 37 درجة مئوية مقدما حتى يمكن أن يستمر التسييل اللاحق لعينة السائل المنوي بسلاسة.</li>
	<li>عند استلام عينة السائل المنوي للمريض ، قم بتسجيل المعلومات التفصيلية بدقة ، بما في ذلك رمز التعريف ، ووقت الجمع ، ومدة الامتناع عن ممارسة الجنس ، وغيرها من المعلومات ذات الصلة ، على الجدار الخارجي للوعاء القائم على البوليمر.</li>
	<li>ضع الوعاء القائم على البوليمر الذي يحتوي على عينة السائل المنوي على حامل درجة حرارة ثابتة مسخن مسبقا إلى 37 درجة مئوية ، وهو أمر مفيد لتسييل السائل المنوي.</li>
	<li>اسحب عينة السائل المنوي إلى ماصة قائمة على البوليمر وراقب حالة التسييل كل 5 دقائق حتى يتم تسييل عينة السائل المنوي بالكامل.</li>
	<li>إذا لم يتم تسييل عينة السائل المنوي بالكامل في غضون 30 دقيقة ، فلا تقم بإجراء الفحص بعد ؛ استمر في الانتظار لمدة 30 دقيقة أخرى. إذا كان السائل المنوي لا يزال غير مسال بالكامل بعد 60 دقيقة ، أضف حجما متساويا من محلول الفوسفات العازل لتخفيف 1: 1 وحركه برفق لتعزيز التسييل.</li>
	<li>بعد التقليب الشامل والتجانس المتسق ، احتفظ بعينة السائل المنوي المسال بالكامل لإجراءات الفحص اللاحقة.</li>
</ol>3. تلطيخ الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز وتحليل عينة السائل المنوي الأصلية
<ol><li>قبل أخذ العينات ، استخدم ماصة قائمة على البوليمر للنفخ بشكل متكرر عن طريق سحب عينة السائل المنوي قيد الفحص وتجانسها تماما.</li>
	<li>استخدم ماصة النقل 200 ميكرولتر واضبط الميزان على 100 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. استبدل طرف الماصة ، ثم انقل 100 ميكرولتر من عينة السائل المنوي إلى أنبوب طرد مركزي.</li>
	<li>استخدم ماصة النقل 1000 ميكرولتر واضبط الميزان على 900 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. استبدل طرف الماصة ، ثم انقل 900 ميكرولتر من محلول العمل المذكور أعلاه إلى أنبوب الطرد المركزي.</li>
	<li>النفخ بشكل متكرر عن طريق سحب المادة المتفاعلة وتجانسها تماما ، والذي يتكون من عينة السائل المنوي ومحلول العمل ، باستخدام ماصة نقل 1000 ميكرولتر.</li>
	<li>ضع أنبوب الطرد المركزي في رف أنبوب اختبار على شاكر ثنائي الأبعاد وعرضه للتحريك المستمر عند 200 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة في RT.</li>
	<li>أثناء انتظار تفاعل التلوين ، قم بتحليل عينة السائل المنوي باستخدام نظام CASA لتحديد تركيز الحيوانات المنوية في عينة السائل المنوي الأصلية في الوعاء القائم على البوليمر.<ol><li>قم بتشغيل مفتاح الطاقة لنظام CASA وانقر نقرا مزدوجا فوق رمز SCA SCOPE لفتح البرنامج التطبيقي.</li>
		<li>قبل أخذ العينات ، قم بالنفخ بشكل متكرر عن طريق سحب عينة السائل المنوي الأصلية وتجانسها تماما مرة أخرى باستخدام ماصة أساسها البوليمر.</li>
		<li>استخدم ماصة النقل 10 ميكرولتر واضبط الميزان على 10 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. استبدل طرف الماصة ، وماصة تصل إلى 10 ميكرولتر من عينة السائل المنوي الأصلية ، وضعها في غرفة عد SCA. انتظر لمدة 60 ثانية حتى تتوقف عينة السائل المنوي عن الانجراف.</li>
		<li>ضع غرفة عد SCA على حامل العينة لنظام CASA واضبط معلومات المريض في مربع حوار البرنامج التطبيقي للتحضير للفحص الرسمي.</li>
		<li>افحص عينة السائل المنوي الأصلية في غرفة عد SCA باستخدام نظام CASA بالنقر فوق الزر "ابدأ " وتسجيل البيانات اللازمة ، مثل تركيز الحيوانات المنوية.</li>
	</ol></li>
</ol>4. مراقبة الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز المنوية
<ol><li>استخدم ماصة النقل 1000 ميكرولتر واضبط الميزان على 1000 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. استبدل طرف الماصة ، ثم قم بالنفخ بشكل متكرر عن طريق سحب المادة المتفاعلة وتجانسها تماما ، والذي يتكون من عينة السائل المنوي ومحلول العمل في أنبوب الطرد المركزي مرة أخرى في نهاية عملية التفاعل لمدة 30 دقيقة.</li>
	<li>استخدم ماصة النقل 10 ميكرولتر واضبط الميزان على 10 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. استبدل طرف الماصة، أي ماصة حتى 10 ميكرولتر من المادة المتفاعلة المذكورة أعلاه، وضعها في غرفة عد المنوية. أخيرا ، قم بتغطية غرفة عد المنوية بغطاء زجاجي مخصص.</li>
	<li>ضع غرفة عد المنوية على المرحلة المجهرية وقم بتشغيل مفتاح الطاقة للمجهر الضوئي باستخدام عدستين 10x. بعد ذلك، انتظر حتى تتوقف عينة المتفاعلات عن الانجراف لمدة 60 ثانية.</li>
	<li>قم بتبديل المحول المجهري إلى العدسة الموضوعية 10x أثناء وقت الانتظار. ثم اضبط مقبض الضبط الخشن ومقبض الضبط الدقيق بالتسلسل. أخيرا ، راقب المنوية والخلايا المستديرة تحت تكبير 10×10.</li>
	<li>قم بتبديل المحول المجهري إلى العدسة الموضوعية 40x بعد تحديد مجال الرؤية المراد تحليله ، ولاحظ المنوية والكريات البيض الإيجابية للبيروكسيديز البني تحت تكبير 10 × 40.</li>
	<li>استخدم نظام العداد الإلكتروني لحساب ما لا يقل عن 200 منوي وعدد كريات الدم البيضاء الإيجابية للبيروكسيديز البني في الحقول المقابلة.</li>
</ol>5. حساب تركيز الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز
<ol><li>احسب تركيز الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز من خلال استخدام الصيغة التالية: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/66211/66211eq01v2.jpg" style="margin: auto;"></li>
</ol>

تحليل السائل المنوي لخلايا الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز

<ol>
	<li>Agarwal, A., Mulgund, A., Hamada, A., Chyatte, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unique+view+on+male+infertility+around+the+globe.">A unique view on male infertility around the globe.</a> Reprod Biol Endocrinol. 13, 37 (2015).</li><li>Sharlip, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practice+policies+for+male+infertility.">Best practice policies for male infertility.</a> Fertil Steril. 77 (5), 873-882 (2002).</li><li>Choy, J. T., Eisenberg, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+infertility+as+a+window+to+health.">Male infertility as a window to health.</a> Fertil Steril. 110 (5), 810-814 (2018).</li><li>Pellati, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genital+tract+infections+and+infertility.">Genital tract infections and infertility.</a> Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 140 (1), 3-11 (2008).</li><li>Rivero, M. J., Kulkarni, N., Thirumavalavan, N., Ramasamy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+and+management+of+male+genital+tract+infections+in+the+setting+of+male+infertility:+an+updated+review.">Evaluation and management of male genital tract infections in the setting of male infertility: an updated review.</a> Curr Opin Urol. 33 (3), 180-186 (2023).</li><li>Long, S., Kenworthy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Round+cells+in+diagnostic+semen+analysis:+A+guide+for+laboratories+and+clinicians.">Round cells in diagnostic semen analysis: A guide for laboratories and clinicians.</a> Br J Biomed Sci. 79, 10129 (2022).</li><li>Johanisson, E., Campana, A., Luthi, R., de Agostini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+'round+cells'+in+semen+analysis:+a+comparative+study.">Evaluation of 'round cells' in semen analysis: a comparative study.</a> Hum Reprod Update. 6 (4), 404-412 (2000).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WHO+Laboratory+Manual+for+the+Examination+and+Processing+of+Human+Semen.+5th+edn.">WHO Laboratory Manual for the Examination and Processing of Human Semen. 5th edn.</a> World Health Organization. , (2010).</li><li>Domes, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+and+effect+of+bacteriospermia+and+elevated+seminal+leukocytes+on+semen+parameters.">The incidence and effect of bacteriospermia and elevated seminal leukocytes on semen parameters.</a> Fertil Steril. 97 (5), 1050-1055 (2012).</li><li>Aziz, N., Agarwal, A., Lewis-Jones, I., Sharma, R. K., Thomas, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+associations+between+specific+sperm+morphological+defects+and+leukocytospermia.">Novel associations between specific sperm morphological defects and leukocytospermia.</a> Fertil Steril. 82 (3), 621-627 (2004).</li><li>Alahmar, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+oxidative+stress+in+male+infertility:+An+updated+review.">Role of oxidative stress in male infertility: An updated review.</a> J Hum Reprod Sci. 12 (1), 4-18 (2019).</li><li>Schlegel, P. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+treatment+of+infertility+in+men:+AUA/ASRM+guideline+Part+I.">Diagnosis and treatment of infertility in men: AUA/ASRM guideline Part I.</a> J Urol. 205 (1), 36-43 (2021).</li><li>Ricci, G., Presani, G., Guaschino, S., Simeone, R., Perticarari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+detection+in+human+semen+using+flow+cytometry.">Leukocyte detection in human semen using flow cytometry.</a> Hum Reprod. 15 (6), 1329-1337 (2000).</li><li>Brunner, R. J., Demeter, J. H., Sindhwani, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+guidelines+for+the+evaluation+and+treatment+of+leukocytospermia+in+male+infertility.">Review of guidelines for the evaluation and treatment of leukocytospermia in male infertility.</a> World J Mens Health. 37 (2), 128-137 (2019).</li><li>Amulic, B., Cazalet, C., Hayes, G. L., Metzler, K. D., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+function:+from+mechanisms+to+disease.">Neutrophil function: from mechanisms to disease.</a> Annu Rev Immunol. 30, 459-489 (2012).</li><li>Khan, A. A., Alsahli, M. A., Rahmani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase+as+an+active+disease+biomarker:+recent+biochemical+and+pathological+perspectives.">Myeloperoxidase as an active disease biomarker: recent biochemical and pathological perspectives.</a> Med Sci (Basel). 6 (2), 33 (2018).</li><li>Khan, A. A., Rahmani, A. H., Aldebasi, Y. H., Aly, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+pathological+studies+on+peroxidases+-an+updated+review).">Biochemical and pathological studies on peroxidases -an updated review).</a> Glob J Health Sci. 6 (5), 87-98 (2014).</li><li>Liu, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase-derived+hypochlorous+acid+promotes+ox-LDL-induced+senescence+of+endothelial+cells+through+a+mechanism+involving+beta-catenin+signaling+in+hyperlipidemia.">Myeloperoxidase-derived hypochlorous acid promotes ox-LDL-induced senescence of endothelial cells through a mechanism involving beta-catenin signaling in hyperlipidemia.</a> Biochem Biophys Res Commun. 467 (4), 859-865 (2015).</li><li>Nicholls, S. J., Hazen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase+and+cardiovascular+disease.">Myeloperoxidase and cardiovascular disease.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (6), 1102-1111 (2005).</li><li>Wolff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biologic+significance+of+white+blood+cells+in+semen.">The biologic significance of white blood cells in semen.</a> Fertil Steril. 63 (6), 1143-1157 (1995).</li><li>Chen, Y., Hashiguchi, N., Yip, L., Junger, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertonic+saline+enhances+neutrophil+elastase+release+through+activation+of+P2+and+A3+receptors.">Hypertonic saline enhances neutrophil elastase release through activation of P2 and A3 receptors.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 290 (4), C1051-C1059 (2006).</li><li>Weiss, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+destruction+by+neutrophils.">Tissue destruction by neutrophils.</a> N Engl J Med. 320 (6), 365-376 (1989).</li></ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

أورثو تولويدين وبيروكسيد الهيدروجين لهما خصائص حساسة للضوء ويمكن أن تتحلل عند تعرضها للضوء. لضمان فعالية كواشف الاختبار ، يوصى بتخزين سائل العمل المحضر في مكان مظلم. 
تظهر عينات السائل المنوي بشكل طبيعي خصائص غير متجانسة. في عملية تحضير عينات السائل المنوي ، يعد الحكم بشكل ...

برز العقم كقضية صحية عامة عالمية تؤثر على حوالي 15٪ من الأزواج في سن الإنجاب. تساهم العوامل الذكورية بحوالي 50٪ من إجمالي حالات ضعف الخصوبة ، ويمكن أن يعزى ما يقرب من 20٪ إلى 30٪ فقط إلى العوامل الذكورية1،2،3. تشكل التهابات الجهاز التناسلي الذكري (MGTIs) أحد الأسباب المهمة للعقم عند الذكور ، حيث تمثل حوالي 15٪ من الحالات 4,5.
معظم الأفراد لديهم كريات الدم البيضاء في السائل المنوي ، والتي تشكل 13 ٪ من الخلايا غير المنوية ، مع نسب تفاضلية هي العدلات 12 ٪ ، الضامة 0.9 ٪ ، والخلايا الليمفاوية 0.1 ٪ 6،7. وفقا لدليل مختبر منظمة الصحة العالمية (WHO) لفحص ومعالجة السائل المنوي البشري (الطبعة الخامسة) ، عادة ما يتم تعريف الكريات البيض على أنه وجود >1 × 106 خلايا / مل كريات الدم البيضاء في السائل المنوي8. يمكن أن تحدث هذه الحالة بسبب العديد من العوامل مثل السموم البيئية ، وتعاطي المخدرات ، ودوالي الخصية ، و MGTIs ، وما إلى ذلك ، وكلها قد تؤدي إلى زيادة غير طبيعية في تركيز الكريات البيض في السائل المنوي9. يمكن أن ترفع الكريات البيض مستويات أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) في السائل المنوي ، مما يتسبب في بيروكسيد الدهون والضرر التأكسدي للبروتين والحمض النووي ، مما يؤدي إلى انخفاض حركة الحيوانات المنوية ، وزيادة التشوهات المورفولوجية للحيوانات المنوية ، وارتفاع مؤشر تجزئة الحمض النووي للحيوانات المنوية ، وضعف وظيفة الحيوانات المنوية القمي ، وحتى الآثار السلبية على نمو الجنين10،11.
حاليا ، يختار أخصائيو الذكورة عادة فحص الخلايا المستديرة في السائل المنوي أو الإيلاستاز في البلازما المنوية عند تحديد التهاب الجهاز التناسلي. ومع ذلك ، غالبا ما يكون من الصعب التمييز بين الخلايا المنوية المتدهورة والخلايا الظهارية في الجهاز التناسلي ، والتي لا تساهم في تقليل الاستخدام العشوائي وغير الضروري للمضادات الحيوية6. طريقة الفحص الأخيرة معقدة نسبيا وتستغرق وقتا طويلا ، مع بطء الإبلاغ عن النتائج ، وهو أمر غير مفيد للتشخيص والعلاج المبكر لأمراض مثل MGTIs. تقترح الجمعية الأمريكية لجراحة المسالك البولية (AUA) مزيدا من التمييز بين كريات الدم البيضاء والخلايا المقطوعة من الجهاز التناسلي عندما يكون تركيز الخلايا المستديرة في تحليل السائل المنوي أكبر من 1 × 106 خلايا / مل12. تستخدم بعض مختبرات أمراض الذكورة قياس التدفق الخلوي13 أو مستضد الكريات البيض (على سبيل المثال ، CD45) الكيمياء المناعية14 لفحص الكريات البيض. في حين أن هذه الأساليب دقيقة ، إلا أنها مكلفة وتستغرق وقتا طويلا ، مما يجعل التنفيذ السريري على نطاق واسع أمرا صعبا ، خاصة في البلدان النامية.
يتم توزيع البيروكسيديز على نطاق واسع في أنواع مختلفة من الخلايا ويلعب دورا حاسما في مقاومة تلف الإجهاد التأكسدي. الميلوبيروكسيديز (MPO) هو عضو في فصيلة البيروكسيديز التي يتم التعبير عنها بشكل عام في الخلايا المناعية. يتم التعبير عنه بشكل كبير في حبيبات العدلاتالمحبة للعدلات 15,16 ويتم التعبير عنه أيضا في الخلايا الليمفاوية17,18 ، وحيدات ، والبلاعم19. يمكن الحصول على تركيز الكريات البيض ، وخاصة العدلات ، في السائل المنوي عن طريق فحص الخلايا المستديرة الإيجابية للبيروكسيديز7،20. لجعل عملية فحص الكريات البيض في السائل المنوي اقتصادية ومريحة وفعالة ، قمنا بإعادة هندسة طريقة الفحص. بمساعدة نظام تحليل السائل المنوي بمساعدة الكمبيوتر (CASA) ، يمكن الحصول على تركيز الكريات البيض في غضون 60 دقيقة. تقلل هذه الطريقة الجديدة من تكاليف فحص المرضى ووقت الانتظار للحصول على النتائج ، وتخفف من عبء العمل على فنيي المختبرات ، وتقصر فترة انتظار تشخيص الطبيب وعلاجه.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6% (v/v) hydrogen peroxide solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Sperm Class Analyzer &#8211; SCA SCOPE&#160;</td>
			<td>Microptic S.L.</td>
			<td>1222996; Model type: SCA-SCOPE-H</td>
			<td>Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable centrifugal tube (1.5 mL)</td>
			<td>Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD</td>
			<td>2210009</td>
			<td>Centrifugal tube for Staining process</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable transfer pipette (3 mL)</td>
			<td>Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>20221101</td>
			<td>Polymer-based pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic counter</td>
			<td>None</td>
			<td>None</td>
			<td>A multichannel counter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic scales</td>
			<td>Shanghai Liangping Instrument Co., LTD</td>
			<td>D9008084</td>
			<td>MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Makler counting chamber</td>
			<td>Makler</td>
			<td>MQ30004</td>
			<td>0.01 sq.mm, 10 &#956;m deep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>3G41067201307</td>
			<td>CX31, 10&#215;40</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ortho-toluidine substrate solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips(1 mL)</td>
			<td>Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd</td>
			<td>02923205</td>
			<td>1000 tips/unit, 5 units/case</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips(10 &#181;L)</td>
			<td>Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd</td>
			<td>00323961</td>
			<td>1000 tips/unit, 20 units/case</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips(200 &#181;L)</td>
			<td>Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd</td>
			<td>32822810</td>
			<td>1000 tips/unit, 20 units/case</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCA counting chamber</td>
			<td>Microptic S.L.</td>
			<td>102230608</td>
			<td>10 &#181;m, 2 Chambers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The container for semen sample</td>
			<td>Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>20230701</td>
			<td>Polymer-based receptacle for semen sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostatic table</td>
			<td>Shenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTD</td>
			<td>MQ30004</td>
			<td>MQ-300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette (10 &#181;L)</td>
			<td>Eppendoff</td>
			<td>3121000.015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette (1000 &#181;L)</td>
			<td>Eppendoff</td>
			<td>3121000.12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette (200 &#181;L)</td>
			<td>Eppendoff</td>
			<td>3121000.082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two-dimensional shaker</td>
			<td>DragonLab</td>
			<td>822000010000</td>
			<td>VC5A002205</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the examination of peroxidase-positive leukocytes in semen

يمكن أن تؤدي زيادة عدد الكريات البيض إلى انخفاض حركة المنوية ، وزيادة التشوهات المورفولوجية للحيوانات المنوية ، وارتفاع مؤشر تجزئة الحمض النووي للحيوانات المنوية ، وضعف وظيفة الجسم القمي للحيوانات المنوية ، وحتى التأثير على التطور الجنيني. وهو مرض ذكوري شائع في الممارسة السريرية وأحد الأسباب المهمة للعقم عند الذكور. عند تحديد ما إذا كان التهاب الجهاز التناسلي الذكري موجودا ، غالبا ما يختار أخصائيو الذكورة فحص الخلايا المستديرة أو إيلاستاز البلازما المنوية في السائل المنوي كأساس تشخيصي سريري. ومع ذلك ، فإن فحص الخلايا المستديرة يتأثر بسهولة بالخلايا المنوية المولدة للحيوانات المنوية والخلايا الظهارية في الجهاز التناسلي ، والتي لا تساهم في الحد من الاستخدام العشوائي وغير الضروري للمضادات الحيوية. في الوقت نفسه ، فإن عملية الكشف عن الإيلاستاز معقدة نسبيا ، وتستغرق وقتا طويلا ، وبطيئة في الإبلاغ عن النتائج ، وهو أمر غير مفيد للتشخيص المبكر وعلاج أمراض مثل التهابات الجهاز التناسلي الذكري (MGTIs). لقد طبقنا بشكل مبتكر فحص الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز في السائل المنوي بمساعدة نظام تحليل السائل المنوي بمساعدة الكمبيوتر (CASA) كمعيار تشخيصي ل leukocytospermia ، وحل هذه المشاكل بنجاح. يتطلب هذا الفحص فقط إضافة سائل التشغيل المكون من أربعة كواشف إلى العينة ، ويمكن التحكم في إجمالي وقت التفاعل في درجة حرارة الغرفة في غضون 20-30 دقيقة. مع اللطاخة اللاحقة والفحص المجهري ، يمكن الحصول على تركيز الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز في السائل المنوي في غضون 60 دقيقة ، والتي يمكن استخدامها لتشخيص ما إذا كان التهاب الجهاز التناسلي الذكري موجودا.

Infertility has emerged as a global public health issue affecting approximately 15% of couples in their reproductive age. Male factors are contributed by around 50% of total subfertility cases, and nearly 20% to 30% can be attributed solely to male factors1,2,3. Male genital tract infections (MGTIs) constitute one of the significant causes of male infertility, accounting for about 15% of cases4,5.
Most individuals have leukocytes in their semen, constituting 13% of non-spermatozoan cells, with differential proportions being neutrophils 12%, macrophages 0.9%, and lymphocytes 0.1%6,7. According to the World Health Organization (WHO) laboratory manual for the examination and processing of human semen (5th ed.), leukocytospermia is usually defined as the presence of &#62;1 &#215; 106 cells/mL leucocytes in semen8. This condition can be caused by numerous factors such as environmental toxins, substance abuse, varicoceles, MGTIs, etc., all potentially leading to an abnormal increase in leukocyte concentration in semen9. Leukocytes can elevate reactive oxygen species (ROS) levels in semen, causing lipid peroxidation and oxidative damage to protein and DNA, which results in decreased spermatozoa motility, increased spermatozoa morphological abnormalities, elevated spermatozoa DNA fragmentation index, impairment of the spermatozoa acrosome function, and even negative impacts on embryo development10,11.
Currently, andrologists commonly choose to examine round cells in semen or elastase in seminal plasma when identifying genital tract inflammation. However, it&#39;s often challenging to distinguish sloughed spermatogenic cells and reproductive tract epithelial cells, which do not contribute to reducing the indiscriminate and unnecessary use of antibiotics6. The latter examination method is relatively complicated and time-consuming, with slow result reporting, which is not beneficial for early diagnosis and treatment of diseases such as MGTIs. The American Urological Association (AUA) suggests further differentiation between leukocytes and sloughed cells from the genital tract should be made when the round cell concentration in semen analysis is greater than 1 &#215; 106 cells/mL12. Some andrology labs utilize flow cytometry13 or leukocyte antigen (e.g., CD45) immunocytochemistry14 to examine leukocytes. While these methods are precise, they are expensive and time-consuming, making large-scale clinical implementation difficult, especially in developing countries.
Peroxidase is widely distributed in various types of cells and plays a crucial role in the resistance to oxidative stress damage. Myeloperoxidase (MPO) is a member of the peroxidase subfamily that is generally expressed in immune cells. It is most highly expressed in neutrophils&#39; azurophilic granules15,16 and is also expressed in lymphocytes17,18, monocytes, and macrophages19. The concentration of leukocytes, especially neutrophils, in semen can be obtained by examining round cells that are peroxidase-positive7,20. To make the examination process of leukocytes in semen economical, convenient, and efficient, we reengineered the examination method. Assisted by the computer-assisted semen analysis (CASA) system, the concentration of leukocytes can be obtained within 60 min. This new method reduces the patients&#39; examination costs and waiting time for obtaining results, alleviates the workload of lab technicians, and shortens the doctor&#39;s diagnosis and treatment waiting period.

تسليط الضوء على المؤلف: طريقة بسيطة وفعالة من حيث التكلفة لتحليل الكريات البيض في السائل المنوي 

فحص الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز في السائل المنوي

Male reproductive medicine is my primary research focus, and our protocol primarily addresses the issues of speed and cost in analyzing peroxidase-positive leukocytes in semen. Semen is inherently heterogeneous, which greatly affects the stability of semen analysis results. Therefore, it is essential to ensure that semen is liquified and thoroughly mixed before examination.Our protocol combines manual and automatic methods to calculate the concentration of leukocytes by utilizing sperm concentration, which saves time and is more cost-effective compared to the ready counting leukocytes.

عند تنفيذ الإجراء المذكور أعلاه ، يظهر المتفاعل في أنبوب الطرد المركزي في كثير من الأحيان مظهرا شبه شفاف وبراق (الشكل 1). الكشف عن اللون البني الواضح يكشف عن احتمال تحلل كريات الدم البيضاء ، مما قد يؤدي إلى تلطيخ السائل. وبالتالي ، يمكن أن تفشل عملية التلوين ، مما يجعل من الض?...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple and Cost-Effective Method for Leukocyte Analysis in Semen at JoVE.com

تقدم هذه الورقة بروتوكولا اقتصاديا وفعالا لفحص الكريات البيض الإيجابية للبيروكسيديز في السائل المنوي. بمساعدة نظام تحليل السائل المنوي بمساعدة الكمبيوتر (CASA) ، يمكن الحصول على تركيز الكريات البيض الإيجابية للبيروكسيديز في السائل المنوي في غضون 60 دقيقة ، مما يحسن بشكل فعال كفاءة مختبر أمراض الذكورة وأخصائيي أمراض الذكورة.

Leukocytospermia can lead to decreased spermatozoa motility, increased spermatozoa morphological abnormalities, elevated spermatozoa DNA fragmentation ...

الطب التناسلي الذكري هو تركيزي البحثي الأساسي ، ويعالج بروتوكولنا في المقام الأول قضايا السرعة والتكلفة في تحليل الكريات البيض الإيجابية للبيروكسيديز في السائل المنوي. السائل المنوي غير متجانس بطبيعته ، مما يؤثر بشكل كبير على استقرار نتائج تحليل السائل المنوي. لذلك ، من الضروري التأكد من تسييل السائل المنوي وخلطه جيدا قبل الفحص.يجمع بروتوكولنا بين الطرق اليدوية والتلقائية لحساب تركيز كريات الدم البيضاء من خلال استخدام تركيز المنوية ، مما يوفر الوقت وأكثر فعالية من حيث التكلفة مقارنة بالكريات البيض الجاهزة للعد.

the-examination-of-peroxidase-positive-leukocytes-in-semen

Research

JoVE Journal

Medicine

The Examination of Peroxidase-Positive Leukocytes in Semen

2.9K Views.  The Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University. الطب التناسلي الذكري هو تركيزي البحثي الأساسي ، ويعالج بروتوكولنا في المقام الأول قضايا السرعة والتكلفة في تحليل الكريات البيض الإيجابية للبيروكسيديز في السائل المنوي. السائل المنوي غير متجانس بطبيعته ، مما يؤثر بشكل كبير على استقرار نتائج تحليل السائل المنوي. لذلك ، من ?...

Video: تسليط الضوء على المؤلف: طريقة بسيطة وفعالة من حيث التكلفة لتحليل الكريات البيض في السائل المنوي 

Leukocytospermia can lead to decreased spermatozoa motility, increased spermatozoa morphological abnormalities, elevated spermatozoa DNA fragmentation index, impairment of the spermatozoa acrosome function, and even affected embryonic development. It is a common andrological disease in clinical practice and one of the important causes of male infertility. When determining whether male reproductive tract inflammation exists, andrologists often choose to examine round cells or seminal plasma elastase in the semen as a clinical diagnostic basis. However, the examination of round cells is easily influenced by sloughed spermatogenic cells and reproductive tract epithelial cells, which do not contribute to reducing the indiscriminate and unnecessary use of antibiotics. At the same time, the detection process of elastase is relatively complicated, time-consuming, and slow in reporting results, which is not beneficial for early diagnosis and treatment of diseases such as male genital tract infections (MGTIs). We have innovatively applied the examination of peroxidase-positive leukocytes in semen assisted by a computer-assisted semen analysis (CASA) system as a diagnostic criterion for leukocytospermia, successfully solving these problems. This examination only requires the addition of the operating fluid consisting of four reagents into the specimen, and the total reaction time at room temperature can be controlled within 20-30 min. With the subsequent smear and microscopic examination, the concentration of peroxidase-positive leukocytes in semen can be obtained within a total of 60 min, which can be used to diagnose whether the inflammation of the male reproductive tract existed.

This paper presents an economical and efficient protocol for examining peroxidase-positive leukocytes in semen. With the assistance of a computer-assisted semen analysis (CASA) system, the concentration of peroxidase-positive leukocytes in semen can be obtained within a total of 60 min, effectively improving the efficiency of andrology laboratory and andrologists.