Los autores agradecen al Laboratorio de Andrología del Centro de Medicina Reproductiva, el Tercer Hospital Afiliado de la Universidad Sun Yat-sen, por proporcionar las instalaciones para este estudio. En la preparación de este artículo no se utilizó ningún tipo de financiación.

Este estudio ha sido revisado y aprobado por el Comité de Ética Médica del Tercer Hospital Afiliado de la Universidad Sun Yat-sen.
1. Preparación de la solución de trabajo
<ol><li>Reúna los siguientes reactivos esenciales para preparar la solución de trabajo: solución de sustrato de orto-toluidina, solución saturada de cloruro de amonio (NH4Cl), solución de sal disódica de ácido etilendiaminotetraacético (Na2EDTA) de 148 mmol/L y solución de peróxido de hidrógeno al 6% (v/v). Colóquelos en una mesa de laboratorio a temperatura ambiente (RT) junto con las herramientas necesarias, como pipetas de transferencia (1000 μL, 200 μL, 10 μL) y gradillas para tubos de ensayo. PRECAUCIÓN: Lea la hoja de datos de seguridad (FDS) antes de manipular los reactivos mencionados anteriormente.</li>
	<li>Prepare un frasco de reactivo de color marrón opaco para almacenar y proteger la solución de trabajo preparada de la exposición a la luz.</li>
	<li>Transfiera los reactivos al frasco de reactivo marrón opaco según las proporciones especificadas a continuación:<ol><li>Utilice la pipeta de transferencia de 200 μL y ajuste la escala a 100 μL girando la perilla. A continuación, transfiera 100 μl de la solución de NH4Cl al frasco de reactivo marrón opaco.</li>
		<li>Sustituya la punta de la pipeta y transfiera 100 μl de la solución de 148 mmol/L de Na2EDTA al frasco de reactivo marrón opaco utilizando la pipeta de transferencia de 200 μl mencionada anteriormente. Luego, sople suavemente pipeteando y homogeneice completamente la solución.</li>
		<li>Utilice la pipeta de transferencia de 1000 μL y ajuste la escala a 900 μL girando la perilla. A continuación, transfiera 900 μL de la solución de sustrato de orto-toluidina al frasco de reactivo marrón opaco, sople suavemente mediante pipeteo y homogeneice completamente la solución.</li>
		<li>Utilice la pipeta de transferencia de 10 μL y ajuste la escala a 5 μL girando la perilla. A continuación, transfiera 5 μL de la solución de peróxido de hidrógeno al 6% (v/v) a la botella de reactivo marrón opaco.</li>
	</ol></li>
	<li>Utilice la pipeta de transferencia de 1000 μL y ajuste la escala a 1000 μL girando la perilla. Vuelva a colocar la punta de la pipeta, sople suavemente pipeteando y homogeneice completamente la solución en el frasco de reactivo marrón opaco.</li>
	<li>Guarde la solución de trabajo lista para usar en el frasco de reactivo marrón opaco en RT, lejos de la luz. La solución de trabajo es reactiva durante 24 h.</li>
	<li>Cada muestra de semen requiere 900 μL de la solución de trabajo. Asegúrese de que la cantidad de la solución de trabajo preparada cada día corresponda al número de muestras examinadas diariamente.</li>
</ol>2. Preparación de la muestra de semen
<ol><li>Antes de recolectar la muestra de semen, asegúrese de que el paciente se haya abstenido de eyacular durante 2 a 7 días, como lo requiere el manual de laboratorio de la Organización Mundial de la Salud (OMS) para examinar y procesar el semen humano (5ª ed.) 8. La masturbación es el método preferido para obtener muestras de semen. Para mejorar la precisión del examen, indique al paciente que recoja todo el semen eyaculado.</li>
	<li>Encienda el soporte de temperatura constante y caliente hasta 37 °C con antelación para que la licuefacción posterior de la muestra de semen pueda realizarse sin problemas.</li>
	<li>Al recibir la muestra de semen del paciente, registre meticulosamente la información detallada, incluido el código de identificación, el tiempo de recolección, la duración de la abstinencia y otra información pertinente, en la pared exterior del receptáculo a base de polímero.</li>
	<li>Coloque el recipiente a base de polímero que alberga la muestra de semen en el soporte de temperatura constante precalentado a 37 °C, lo que es beneficioso para la licuefacción del semen.</li>
	<li>Extraer la muestra de semen en una pipeta a base de polímeros y observar el estado de licuefacción cada 5 min hasta que la muestra de semen esté completamente licuada.</li>
	<li>Si la muestra de semen no se ha licuado completamente en 30 minutos, no realice el examen todavía; Continúe esperando otros 30 minutos. Si el semen aún no está completamente licuado después de 60 minutos, agregue un volumen igual de solución tampón de fosfato para una dilución 1:1 y agite suavemente para promover la licuefacción.</li>
	<li>Después de una agitación minuciosa y una homogeneización constante, conserve la muestra de semen completamente licuada para los procedimientos de examen posteriores.</li>
</ol>3. Tinción de los leucocitos positivos para peroxidasa y análisis de la muestra de semen original
<ol><li>Antes de la toma de muestras, utilice una pipeta a base de polímeros para soplar repetidamente mediante pipeteo y homogeneizar completamente la muestra de semen que se está examinando.</li>
	<li>Utilice la pipeta de transferencia de 200 μL y ajuste la escala a 100 μL girando la perilla. Vuelva a colocar la punta de la pipeta y, a continuación, transfiera 100 μl de la muestra de semen a un tubo de centrífuga.</li>
	<li>Utilice la pipeta de transferencia de 1000 μL y ajuste la escala a 900 μL girando la perilla. Vuelva a colocar la punta de la pipeta y, a continuación, transfiera 900 μL de la solución de trabajo mencionada anteriormente al tubo de centrífuga.</li>
	<li>Soplar repetidamente mediante pipeteo y homogeneizar completamente el reactivo, que consiste en la muestra de semen y la solución de trabajo, utilizando la pipeta de transferencia de 1000 μL.</li>
	<li>Coloque el tubo de centrífuga en una rejilla de tubos de ensayo sobre un agitador bidimensional y sométalo a agitación continua a 200 rpm durante 30 minutos a RT.</li>
	<li>Mientras espera la reacción de tinción, analice la muestra de semen utilizando el sistema CASA para determinar la concentración de espermatozoides en la muestra de semen original en el receptáculo a base de polímero.<ol><li>Encienda el interruptor de encendido del sistema CASA y haga doble clic en el icono SCA SCOPE para abrir el software de la aplicación.</li>
		<li>Antes de tomar muestras, sople repetidamente mediante pipeteo y vuelva a homogeneizar completamente la muestra de semen original con una pipeta a base de polímeros.</li>
		<li>Utilice la pipeta de transferencia de 10 μL y ajuste la escala a 10 μL girando la perilla. Vuelva a colocar la punta de la pipeta, pipetee hasta 10 μL de la muestra de semen original y colóquela en la cámara de recuento de SCA. Espere 60 s para que la muestra de semen deje de desplazarse.</li>
		<li>Coloque la cámara de recuento SCA en el portamuestras del sistema CASA y coloque la información del paciente en el cuadro de diálogo del software de aplicación para prepararse para el examen formal.</li>
		<li>Examine la muestra de semen original en la cámara de recuento de SCA con el sistema CASA haciendo clic en el botón Inicio y registre los datos necesarios, como la concentración de espermatozoides.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Observación de los leucocitos y espermatozoides positivos a peroxidasa
<ol><li>Utilice la pipeta de transferencia de 1000 μL y ajuste la escala a 1000 μL girando la perilla. Vuelva a colocar la punta de la pipeta, sople repetidamente pipeteando y homogeneice completamente el reactivo, que consiste en una muestra de semen y una solución de trabajo en el tubo de centrífuga nuevamente al final del proceso de reacción de 30 minutos.</li>
	<li>Utilice la pipeta de transferencia de 10 μL y ajuste la escala a 10 μL girando la perilla. Vuelva a colocar la punta de la pipeta, pipetee hasta 10 μL del reactivo mencionado anteriormente y colóquelo en la cámara de recuento de espermatozoides. Por último, cubra la cámara de recuento de espermatozoides con un cubreobjetos de vidrio específico.</li>
	<li>Coloque la cámara de recuento de espermatozoides en la platina microscópica y encienda el interruptor de encendido del microscopio óptico con dos oculares de 10x. A continuación, espere 60 s para que la muestra de reactivo deje de desplazarse.</li>
	<li>Cambie el convertidor microscópico a la lente del objetivo de 10x durante el tiempo de espera. A continuación, ajuste la perilla de ajuste grueso y la perilla de ajuste fino en secuencia. Por último, observe los espermatozoides y las células redondas con un aumento de 10×10.</li>
	<li>Cambie el convertidor microscópico a la lente del objetivo de 40x después de determinar el campo de visión que se va a analizar, y observe los espermatozoides y los leucocitos marrones positivos a peroxidasa con un aumento de 10 × 40.</li>
	<li>Utilice el sistema de contador electrónico para contar al menos 200 espermatozoides y el número de leucocitos marrones positivos para peroxidasa dentro de los campos correspondientes.</li>
</ol>5. Cálculo de la concentración de leucocitos peroxidasa positivos
<ol><li>Calcule la concentración de leucocitos positivos para peroxidasa mediante la siguiente fórmula: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/66211/66211eq01v2.jpg" style="margin: auto;"></li>
</ol>

Análisis de semen para células leucocitarias positivas para peroxidasa

<ol>
	<li>Agarwal, A., Mulgund, A., Hamada, A., Chyatte, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unique+view+on+male+infertility+around+the+globe.">A unique view on male infertility around the globe.</a> Reprod Biol Endocrinol. 13, 37 (2015).</li><li>Sharlip, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practice+policies+for+male+infertility.">Best practice policies for male infertility.</a> Fertil Steril. 77 (5), 873-882 (2002).</li><li>Choy, J. T., Eisenberg, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+infertility+as+a+window+to+health.">Male infertility as a window to health.</a> Fertil Steril. 110 (5), 810-814 (2018).</li><li>Pellati, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genital+tract+infections+and+infertility.">Genital tract infections and infertility.</a> Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 140 (1), 3-11 (2008).</li><li>Rivero, M. J., Kulkarni, N., Thirumavalavan, N., Ramasamy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+and+management+of+male+genital+tract+infections+in+the+setting+of+male+infertility:+an+updated+review.">Evaluation and management of male genital tract infections in the setting of male infertility: an updated review.</a> Curr Opin Urol. 33 (3), 180-186 (2023).</li><li>Long, S., Kenworthy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Round+cells+in+diagnostic+semen+analysis:+A+guide+for+laboratories+and+clinicians.">Round cells in diagnostic semen analysis: A guide for laboratories and clinicians.</a> Br J Biomed Sci. 79, 10129 (2022).</li><li>Johanisson, E., Campana, A., Luthi, R., de Agostini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+'round+cells'+in+semen+analysis:+a+comparative+study.">Evaluation of 'round cells' in semen analysis: a comparative study.</a> Hum Reprod Update. 6 (4), 404-412 (2000).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WHO+Laboratory+Manual+for+the+Examination+and+Processing+of+Human+Semen.+5th+edn.">WHO Laboratory Manual for the Examination and Processing of Human Semen. 5th edn.</a> World Health Organization. , (2010).</li><li>Domes, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+and+effect+of+bacteriospermia+and+elevated+seminal+leukocytes+on+semen+parameters.">The incidence and effect of bacteriospermia and elevated seminal leukocytes on semen parameters.</a> Fertil Steril. 97 (5), 1050-1055 (2012).</li><li>Aziz, N., Agarwal, A., Lewis-Jones, I., Sharma, R. K., Thomas, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+associations+between+specific+sperm+morphological+defects+and+leukocytospermia.">Novel associations between specific sperm morphological defects and leukocytospermia.</a> Fertil Steril. 82 (3), 621-627 (2004).</li><li>Alahmar, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+oxidative+stress+in+male+infertility:+An+updated+review.">Role of oxidative stress in male infertility: An updated review.</a> J Hum Reprod Sci. 12 (1), 4-18 (2019).</li><li>Schlegel, P. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+treatment+of+infertility+in+men:+AUA/ASRM+guideline+Part+I.">Diagnosis and treatment of infertility in men: AUA/ASRM guideline Part I.</a> J Urol. 205 (1), 36-43 (2021).</li><li>Ricci, G., Presani, G., Guaschino, S., Simeone, R., Perticarari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+detection+in+human+semen+using+flow+cytometry.">Leukocyte detection in human semen using flow cytometry.</a> Hum Reprod. 15 (6), 1329-1337 (2000).</li><li>Brunner, R. J., Demeter, J. H., Sindhwani, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+guidelines+for+the+evaluation+and+treatment+of+leukocytospermia+in+male+infertility.">Review of guidelines for the evaluation and treatment of leukocytospermia in male infertility.</a> World J Mens Health. 37 (2), 128-137 (2019).</li><li>Amulic, B., Cazalet, C., Hayes, G. L., Metzler, K. D., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+function:+from+mechanisms+to+disease.">Neutrophil function: from mechanisms to disease.</a> Annu Rev Immunol. 30, 459-489 (2012).</li><li>Khan, A. A., Alsahli, M. A., Rahmani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase+as+an+active+disease+biomarker:+recent+biochemical+and+pathological+perspectives.">Myeloperoxidase as an active disease biomarker: recent biochemical and pathological perspectives.</a> Med Sci (Basel). 6 (2), 33 (2018).</li><li>Khan, A. A., Rahmani, A. H., Aldebasi, Y. H., Aly, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+pathological+studies+on+peroxidases+-an+updated+review).">Biochemical and pathological studies on peroxidases -an updated review).</a> Glob J Health Sci. 6 (5), 87-98 (2014).</li><li>Liu, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase-derived+hypochlorous+acid+promotes+ox-LDL-induced+senescence+of+endothelial+cells+through+a+mechanism+involving+beta-catenin+signaling+in+hyperlipidemia.">Myeloperoxidase-derived hypochlorous acid promotes ox-LDL-induced senescence of endothelial cells through a mechanism involving beta-catenin signaling in hyperlipidemia.</a> Biochem Biophys Res Commun. 467 (4), 859-865 (2015).</li><li>Nicholls, S. J., Hazen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase+and+cardiovascular+disease.">Myeloperoxidase and cardiovascular disease.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (6), 1102-1111 (2005).</li><li>Wolff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biologic+significance+of+white+blood+cells+in+semen.">The biologic significance of white blood cells in semen.</a> Fertil Steril. 63 (6), 1143-1157 (1995).</li><li>Chen, Y., Hashiguchi, N., Yip, L., Junger, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertonic+saline+enhances+neutrophil+elastase+release+through+activation+of+P2+and+A3+receptors.">Hypertonic saline enhances neutrophil elastase release through activation of P2 and A3 receptors.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 290 (4), C1051-C1059 (2006).</li><li>Weiss, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+destruction+by+neutrophils.">Tissue destruction by neutrophils.</a> N Engl J Med. 320 (6), 365-376 (1989).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

La ortotoluidina y el peróxido de hidrógeno tienen propiedades fotosensibles y pueden descomponerse cuando se exponen a la luz. Para garantizar la eficacia de los reactivos de prueba, se recomienda que el fluido de trabajo preparado se almacene en un lugar oscuro. 
Las muestras de semen presentan naturalmente características heterogéneas. En el proceso de preparación de muestras de semen, juzgar correctamente el estado de licuefacción del semen y homogeneizar a fondo las muestras de seme...

La infertilidad se ha convertido en un problema de salud pública mundial que afecta aproximadamente al 15% de las parejas en edad reproductiva. Los factores masculinos son aportados por alrededor del 50% del total de los casos de subfertilidad, y entre el 20% y el 30% pueden atribuirse únicamente a factores masculinos 1,2,3. Las infecciones del tracto genital masculino (ITMG) constituyen una de las causas significativas de infertilidad masculina, representando alrededor del 15% de los casos 4,5.
La mayoría de los individuos tienen leucocitos en su semen, constituyendo el 13% de las células no espermatozoides, siendo las proporciones diferenciales neutrófilos 12%, macrófagos 0,9% y linfocitos 0,1%6,7. De acuerdo con el manual de laboratorio de la Organización Mundial de la Salud (OMS) para el examen y procesamiento del semen humano (5ª ed.), la leucocitopsia suele definirse como la presencia de >1 × 106 células/ml de leucocitos en el semen8. Esta afección puede ser causada por numerosos factores, como toxinas ambientales, abuso de sustancias, varicoceles, MGTI, etc., todos los cuales pueden conducir a un aumento anormal de la concentración de leucocitos en el semen9. Los leucocitos pueden elevar los niveles de especies reactivas de oxígeno (ROS) en el semen, causando peroxidación lipídica y daño oxidativo a las proteínas y al ADN, lo que resulta en una disminución de la motilidad de los espermatozoides, un aumento de las anomalías morfológicas de los espermatozoides, un índice elevado de fragmentación del ADN de los espermatozoides, un deterioro de la función del acrossoma de los espermatozoides e incluso impactos negativos en el desarrollo embrionario10,11.
En la actualidad, los andrólogos suelen optar por examinar las células redondas del semen o la elastasa del plasma seminal al identificar la inflamación del tracto genital. Sin embargo, a menudo es difícil distinguir las células espermatogénicas desprendidas y las células epiteliales del tracto reproductivo, que no contribuyen a reducir el uso indiscriminado e innecesario de antibióticos6. Este último método de examen es relativamente complicado y requiere mucho tiempo, con un informe lento de los resultados, lo que no es beneficioso para el diagnóstico y tratamiento tempranos de enfermedades como las MGTI. La Asociación Americana de Urología (AUA, por sus siglas en inglés) sugiere una mayor diferenciación entre los leucocitos y las células desprendidas del tracto genital cuando la concentración de células redondas en el análisis de semen es superior a 1 × 106 células/mL12. Algunos laboratorios de andrología utilizan la citometría de flujo13 o la inmunocitoquímica del antígeno leucocitario (por ejemplo, CD45)14 para examinar los leucocitos. Si bien estos métodos son precisos, son costosos y requieren mucho tiempo, lo que dificulta la implementación clínica a gran escala, especialmente en los países en desarrollo.
La peroxidasa está ampliamente distribuida en varios tipos de células y desempeña un papel crucial en la resistencia al daño por estrés oxidativo. La mieloperoxidasa (MPO) es un miembro de la subfamilia de las peroxidasas que generalmente se expresa en las células inmunitarias. Se expresa más en los gránulos azurófilosde los neutrófilos 15,16 y también se expresa en linfocitos17,18, monocitos y macrófagos19. La concentración de leucocitos, especialmente neutrófilos, en el semen puede obtenerse mediante el examen de células redondas que son peroxidasas positivas 7,20. Para que el proceso de examen de leucocitos en semen sea económico, conveniente y eficiente, rediseñamos el método de examen. Con la ayuda del sistema de análisis de semen asistido por ordenador (CASA), se puede obtener la concentración de leucocitos en 60 minutos. Este nuevo método reduce los costos de examen de los pacientes y el tiempo de espera para obtener los resultados, alivia la carga de trabajo de los técnicos de laboratorio y acorta el período de espera del diagnóstico y tratamiento del médico.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6% (v/v) hydrogen peroxide solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Sperm Class Analyzer &#8211; SCA SCOPE&#160;</td>
			<td>Microptic S.L.</td>
			<td>1222996; Model type: SCA-SCOPE-H</td>
			<td>Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable centrifugal tube (1.5 mL)</td>
			<td>Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD</td>
			<td>2210009</td>
			<td>Centrifugal tube for Staining process</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable transfer pipette (3 mL)</td>
			<td>Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>20221101</td>
			<td>Polymer-based pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic counter</td>
			<td>None</td>
			<td>None</td>
			<td>A multichannel counter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic scales</td>
			<td>Shanghai Liangping Instrument Co., LTD</td>
			<td>D9008084</td>
			<td>MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Makler counting chamber</td>
			<td>Makler</td>
			<td>MQ30004</td>
			<td>0.01 sq.mm, 10 &#956;m deep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>3G41067201307</td>
			<td>CX31, 10&#215;40</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ortho-toluidine substrate solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips(1 mL)</td>
			<td>Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd</td>
			<td>02923205</td>
			<td>1000 tips/unit, 5 units/case</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips(10 &#181;L)</td>
			<td>Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd</td>
			<td>00323961</td>
			<td>1000 tips/unit, 20 units/case</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips(200 &#181;L)</td>
			<td>Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd</td>
			<td>32822810</td>
			<td>1000 tips/unit, 20 units/case</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCA counting chamber</td>
			<td>Microptic S.L.</td>
			<td>102230608</td>
			<td>10 &#181;m, 2 Chambers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The container for semen sample</td>
			<td>Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>20230701</td>
			<td>Polymer-based receptacle for semen sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostatic table</td>
			<td>Shenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTD</td>
			<td>MQ30004</td>
			<td>MQ-300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette (10 &#181;L)</td>
			<td>Eppendoff</td>
			<td>3121000.015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette (1000 &#181;L)</td>
			<td>Eppendoff</td>
			<td>3121000.12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette (200 &#181;L)</td>
			<td>Eppendoff</td>
			<td>3121000.082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two-dimensional shaker</td>
			<td>DragonLab</td>
			<td>822000010000</td>
			<td>VC5A002205</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the examination of peroxidase-positive leukocytes in semen

La leucocitospermia puede conducir a una disminución de la motilidad de los espermatozoides, un aumento de las anomalías morfológicas de los espermatozoides, un índice elevado de fragmentación del ADN de los espermatozoides, un deterioro de la función del acrosomia de los espermatozoides e incluso afectar el desarrollo embrionario. Es una enfermedad andrológica común en la práctica clínica y una de las causas importantes de infertilidad masculina. Al determinar si existe inflamación del tracto reproductor masculino, los andrólogos a menudo optan por examinar las células redondas o la elastasa plasmática seminal en el semen como base diagnóstica clínica. Sin embargo, el examen de las células redondas es fácilmente influenciado por las células espermatogénicas desprendidas y las células epiteliales del tracto reproductivo, que no contribuyen a reducir el uso indiscriminado e innecesario de antibióticos. Al mismo tiempo, el proceso de detección de la elastasa es relativamente complicado, requiere mucho tiempo y tarda en informar los resultados, lo que no es beneficioso para el diagnóstico y tratamiento tempranos de enfermedades como las infecciones del tracto genital masculino (MGTI). Hemos aplicado de forma innovadora el examen de leucocitos positivos a peroxidasa en semen asistido por un sistema de análisis de semen asistido por ordenador (CASA) como criterio diagnóstico de leucocitospermia, resolviendo con éxito estos problemas. Este examen solo requiere la adición del fluido operativo que consta de cuatro reactivos en la muestra, y el tiempo total de reacción a temperatura ambiente se puede controlar en 20-30 minutos. Con el frotis posterior y el examen microscópico, se puede obtener la concentración de leucocitos positivos para peroxidasa en el semen en un total de 60 min, lo que puede utilizarse para diagnosticar si existía la inflamación del tracto reproductor masculino.

Infertility has emerged as a global public health issue affecting approximately 15% of couples in their reproductive age. Male factors are contributed by around 50% of total subfertility cases, and nearly 20% to 30% can be attributed solely to male factors1,2,3. Male genital tract infections (MGTIs) constitute one of the significant causes of male infertility, accounting for about 15% of cases4,5.
Most individuals have leukocytes in their semen, constituting 13% of non-spermatozoan cells, with differential proportions being neutrophils 12%, macrophages 0.9%, and lymphocytes 0.1%6,7. According to the World Health Organization (WHO) laboratory manual for the examination and processing of human semen (5th ed.), leukocytospermia is usually defined as the presence of &#62;1 &#215; 106 cells/mL leucocytes in semen8. This condition can be caused by numerous factors such as environmental toxins, substance abuse, varicoceles, MGTIs, etc., all potentially leading to an abnormal increase in leukocyte concentration in semen9. Leukocytes can elevate reactive oxygen species (ROS) levels in semen, causing lipid peroxidation and oxidative damage to protein and DNA, which results in decreased spermatozoa motility, increased spermatozoa morphological abnormalities, elevated spermatozoa DNA fragmentation index, impairment of the spermatozoa acrosome function, and even negative impacts on embryo development10,11.
Currently, andrologists commonly choose to examine round cells in semen or elastase in seminal plasma when identifying genital tract inflammation. However, it&#39;s often challenging to distinguish sloughed spermatogenic cells and reproductive tract epithelial cells, which do not contribute to reducing the indiscriminate and unnecessary use of antibiotics6. The latter examination method is relatively complicated and time-consuming, with slow result reporting, which is not beneficial for early diagnosis and treatment of diseases such as MGTIs. The American Urological Association (AUA) suggests further differentiation between leukocytes and sloughed cells from the genital tract should be made when the round cell concentration in semen analysis is greater than 1 &#215; 106 cells/mL12. Some andrology labs utilize flow cytometry13 or leukocyte antigen (e.g., CD45) immunocytochemistry14 to examine leukocytes. While these methods are precise, they are expensive and time-consuming, making large-scale clinical implementation difficult, especially in developing countries.
Peroxidase is widely distributed in various types of cells and plays a crucial role in the resistance to oxidative stress damage. Myeloperoxidase (MPO) is a member of the peroxidase subfamily that is generally expressed in immune cells. It is most highly expressed in neutrophils&#39; azurophilic granules15,16 and is also expressed in lymphocytes17,18, monocytes, and macrophages19. The concentration of leukocytes, especially neutrophils, in semen can be obtained by examining round cells that are peroxidase-positive7,20. To make the examination process of leukocytes in semen economical, convenient, and efficient, we reengineered the examination method. Assisted by the computer-assisted semen analysis (CASA) system, the concentration of leukocytes can be obtained within 60 min. This new method reduces the patients&#39; examination costs and waiting time for obtaining results, alleviates the workload of lab technicians, and shortens the doctor&#39;s diagnosis and treatment waiting period.

Autor destacado: Un método simple y rentable para el análisis de leucocitos en semen 

Examen de leucocitos positivos para peroxidasa en el semen

Al implementar el procedimiento antes mencionado, el reactivo en el tubo de centrífuga con frecuencia manifiesta una apariencia subtranslúcida y opalescente (Figura 1). La detección de un color marrón evidente revela una posible degranulación de los leucocitos, lo que puede dar lugar a la tinción de líquidos. En consecuencia, el proceso de tinción podría fallar, lo que haría necesario volver a teñir o recolectar una nueva muestra de semen para volver a analizar21...

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En este trabajo se presenta un protocolo económico y eficaz para examinar los leucocitos positivos para peroxidasa en el semen. Con la ayuda de un sistema de análisis de semen asistido por computadora (CASA), la concentración de leucocitos positivos para peroxidasa en el semen se puede obtener en un total de 60 minutos, mejorando efectivamente la eficiencia del laboratorio de andrología y los andrólogos.

Leukocytospermia can lead to decreased spermatozoa motility, increased spermatozoa morphological abnormalities, elevated spermatozoa DNA fragmentation ...

La medicina reproductiva masculina es mi principal foco de investigación, y nuestro protocolo aborda principalmente los problemas de velocidad y costo en el análisis de leucocitos positivos para peroxidasa en el semen. El semen es inherentemente heterogéneo, lo que afecta en gran medida a la estabilidad de los resultados del análisis de semen. Por lo tanto, es esencial asegurarse de que el semen esté licuado y bien mezclado antes del examen.Nuestro protocolo combina métodos manuales y automáticos para calcular la concentración de leucocitos utilizando la concentración de espermatozoides, lo que ahorra tiempo y es más rentable en comparación con el recuento listo de leucocitos.

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Medicine

The Examination of Peroxidase-Positive Leukocytes in Semen

3.1K vistas.  The Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University. La medicina reproductiva masculina es mi principal foco de investigación, y nuestro protocolo aborda principalmente los problemas de velocidad y costo en el análisis de leucocitos positivos para peroxidasa en el semen. El semen es inherentemente heterogéneo, lo que afecta en gran medida a la estabilidad de los resultados del análisis de semen. Por lo tanto, es esencial asegurarse de que el semen esté licuado y bien mezclado antes del examen.Nuestro protocolo combina métodos manua...

Video: Autor destacado: Un método simple y rentable para el análisis de leucocitos en semen 

Leukocytospermia can lead to decreased spermatozoa motility, increased spermatozoa morphological abnormalities, elevated spermatozoa DNA fragmentation index, impairment of the spermatozoa acrosome function, and even affected embryonic development. It is a common andrological disease in clinical practice and one of the important causes of male infertility. When determining whether male reproductive tract inflammation exists, andrologists often choose to examine round cells or seminal plasma elastase in the semen as a clinical diagnostic basis. However, the examination of round cells is easily influenced by sloughed spermatogenic cells and reproductive tract epithelial cells, which do not contribute to reducing the indiscriminate and unnecessary use of antibiotics. At the same time, the detection process of elastase is relatively complicated, time-consuming, and slow in reporting results, which is not beneficial for early diagnosis and treatment of diseases such as male genital tract infections (MGTIs). We have innovatively applied the examination of peroxidase-positive leukocytes in semen assisted by a computer-assisted semen analysis (CASA) system as a diagnostic criterion for leukocytospermia, successfully solving these problems. This examination only requires the addition of the operating fluid consisting of four reagents into the specimen, and the total reaction time at room temperature can be controlled within 20-30 min. With the subsequent smear and microscopic examination, the concentration of peroxidase-positive leukocytes in semen can be obtained within a total of 60 min, which can be used to diagnose whether the inflammation of the male reproductive tract existed.

This paper presents an economical and efficient protocol for examining peroxidase-positive leukocytes in semen. With the assistance of a computer-assisted semen analysis (CASA) system, the concentration of peroxidase-positive leukocytes in semen can be obtained within a total of 60 min, effectively improving the efficiency of andrology laboratory and andrologists.