Yazarlar, Sun Yat-sen Üniversitesi'nin Üçüncü Bağlı Hastanesi olan Üreme Tıbbı Merkezi Androloji Laboratuvarı'na bu çalışma için olanaklar sağladığı için minnettardır. Bu makalenin hazırlanmasında herhangi bir fon bulunmamıştır.

Bu çalışma, Sun Yat-sen Üniversitesi Üçüncü Bağlı Hastanesi Tıbbi Etik Kurulu tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.
1. Çalışma çözümünün hazırlanması
<ol><li>Çalışma çözeltisini hazırlamak için gerekli olan aşağıdaki reaktifleri toplayın - orto-toluidin substrat çözeltisi, doymuş amonyum klorür (NH4Cl) çözeltisi, 148 mmol/L etilendiamintetraasetik asit disodyum tuzu (Na2EDTA) çözeltisi ve %6 (h/h) hidrojen peroksit çözeltisi. Bunları, transfer pipetleri (1000 μL, 200 μL, 10 μL) ve test tüpü rafları gibi gerekli aletlerle birlikte oda sıcaklığında (RT) bir laboratuvar tezgahına yerleştirin. DİKKAT: Yukarıda belirtilen reaktifleri kullanmadan önce güvenlik bilgi formunu (SDS) okuyun.</li>
	<li>Hazırlanan çalışma solüsyonunu ışığa maruz kalmaktan korumak ve saklamak için opak kahverengi bir reaktif şişesi hazırlayın.</li>
	<li>Reaktifleri aşağıda belirtilen oranlara göre opak kahverengi reaktif şişesine aktarın:<ol><li>200 μL transfer pipetini kullanın ve düğmeyi çevirerek ölçeği 100 μL'ye ayarlayın. Ardından, 100 μLNH4Cl çözeltisini opak kahverengi reaktif şişesine aktarın.</li>
		<li>Pipet ucunu değiştirin ve yukarıda belirtilen 200 μL transfer pipetini kullanarak 148 mmol/L Na2EDTA çözeltisinin 100 μL'sini opak kahverengi reaktif şişesine aktarın. Ardından, pipetleme ile hafifçe üfleyin ve çözeltiyi iyice homojenize edin.</li>
		<li>1000 μL transfer pipetini kullanın ve düğmeyi çevirerek ölçeği 900 μL'ye ayarlayın. Ardından, 900 μL orto-toluidin substrat solüsyonunu opak kahverengi reaktif şişesine aktarın, pipetleyerek hafifçe üfleyin ve solüsyonu iyice homojenize edin.</li>
		<li>10 μL'lik transfer pipetini kullanın ve düğmeyi çevirerek ölçeği 5 μL'ye ayarlayın. Ardından, %6 (h/h) hidrojen peroksit çözeltisinin 5 μL'sini opak kahverengi reaktif şişesine aktarın.</li>
	</ol></li>
	<li>1000 μL transfer pipetini kullanın ve düğmeyi çevirerek ölçeği 1000 μL'ye ayarlayın. Pipet ucunu değiştirin, pipetle hafifçe üfleyin ve opak kahverengi reaktif şişesindeki çözeltiyi iyice homojenize edin.</li>
	<li>Kullanıma hazır çalışma solüsyonunu RT'deki opak kahverengi reaktif şişesinde ışıktan uzakta saklayın. Çalışma çözümü 24 saat boyunca reaktiftir.</li>
	<li>Her semen örneği 900 μL çalışma çözeltisi gerektirir. Her gün hazırlanan çalışma solüsyonunun miktarının günlük olarak incelenen numune sayısına karşılık geldiğinden emin olun.</li>
</ol>2. Semen örneğinin hazırlanması
<ol><li>Semen örneğini almadan önce, Dünya Sağlık Örgütü'nün (WHO) insan sperminin incelenmesi ve işlenmesi için laboratuvar kılavuzunun gerektirdiği şekilde hastanın 2 ila 7 gün boyunca boşalmadan kaçındığından emin olun (5. baskı). 8. Mastürbasyon, meni örnekleri elde etmek için tercih edilen yöntemdir. Muayenenin doğruluğunu artırmak için, hastaya boşalmış tüm menileri toplamasını söyleyin.</li>
	<li>Sabit sıcaklık standını açın ve meni numunesinin sonraki sıvılaşmasının sorunsuz bir şekilde ilerleyebilmesi için önceden 37 °C'ye kadar ısıtın.</li>
	<li>Hastanın meni örneğini aldıktan sonra, polimer bazlı kabın dış duvarına kimlik kodu, toplama süresi, yoksunluk süresi ve diğer ilgili bilgiler dahil olmak üzere ayrıntılı bilgileri titizlikle kaydedin.</li>
	<li>Semen örneğini barındıran polimer bazlı kabı, meni sıvılaşması için faydalı olan 37 °C'ye ısıtılmış sabit sıcaklık standına yerleştirin.</li>
	<li>Semen örneğini polimer bazlı bir pipete çekin ve semen örneği tamamen sıvılaşana kadar her 5 dakikada bir sıvılaşma durumunu gözlemleyin.</li>
	<li>Semen örneği 30 dakika içinde tamamen sıvılaştırılmadıysa, muayeneyi henüz yapmayın; 30 dakika daha beklemeye devam edin. Meni 60 dakika sonra hala tam olarak sıvılaştırılmamışsa, 1:1 seyreltme için eşit hacimde fosfat tampon çözeltisi ekleyin ve sıvılaşmayı teşvik etmek için hafifçe çalkalayın.</li>
	<li>Kapsamlı çalkalama ve tutarlı homojenizasyondan sonra, sonraki inceleme prosedürleri için tamamen sıvılaştırılmış semen örneğini saklayın.</li>
</ol>3. Peroksidaz pozitif lökositlerin boyanması ve orijinal semen örneğinin analiz edilmesi
<ol><li>Numune almadan önce, pipetleme ile tekrar tekrar üflemek için polimer bazlı bir pipet kullanın ve incelenen semen örneğini iyice homojenize edin.</li>
	<li>200 μL transfer pipetini kullanın ve düğmeyi çevirerek ölçeği 100 μL'ye ayarlayın. Pipet ucunu değiştirin ve ardından 100 μL semen örneğini bir santrifüj tüpüne aktarın.</li>
	<li>1000 μL transfer pipetini kullanın ve düğmeyi çevirerek ölçeği 900 μL'ye ayarlayın. Pipet ucunu değiştirin, ardından yukarıda belirtilen çalışma solüsyonunun 900 μL'sini santrifüj tüpüne aktarın.</li>
	<li>Pipetleme ile tekrar tekrar üfleyin ve 1000 μL transfer pipeti kullanarak semen numunesi ve çalışma solüsyonundan oluşan reaktanı iyice homojenize edin.</li>
	<li>Santrifüj tüpünü iki boyutlu bir çalkalayıcı üzerinde bir test tüpü rafına yerleştirin ve RT'de 30 dakika boyunca 200 rpm'de sürekli çalkalamaya maruz bırakın.</li>
	<li>Boyama reaksiyonunu beklerken, polimer bazlı kaptaki orijinal semen örneğindeki spermatozoa konsantrasyonunu belirlemek için CASA sistemini kullanarak semen örneğini analiz edin.<ol><li>CASA sisteminin güç anahtarını açın ve uygulama yazılımını açmak için SCA SCOPE simgesine çift tıklayın.</li>
		<li>Numune almadan önce, pipetleme ile tekrar tekrar üfleyin ve orijinal semen numunesini polimer bazlı bir pipetle tekrar iyice homojenize edin.</li>
		<li>10 μL transfer pipetini kullanın ve düğmeyi çevirerek ölçeği 10 μL'ye ayarlayın. Pipet ucunu değiştirin, orijinal semen örneğinden 10 μL'ye kadar pipetleyin ve SCA sayım odasına yerleştirin. Semen örneğinin sürüklenmesinin durması için 60 saniye bekleyin.</li>
		<li>SCA sayım odasını CASA sisteminin numune tutucusuna yerleştirin ve resmi muayeneye hazırlanmak için uygulama yazılımının iletişim kutusunda hastanın bilgilerini ayarlayın.</li>
		<li>Başlat düğmesine tıklayarak SCA sayım odasındaki orijinal semen örneğini CASA sistemi ile inceleyin ve spermatozoa konsantrasyonu gibi gerekli verileri kaydedin.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Peroksidaz pozitif lökositlerin ve spermatozoaların gözlenmesi
<ol><li>1000 μL transfer pipetini kullanın ve düğmeyi çevirerek ölçeği 1000 μL'ye ayarlayın. Pipet ucunu değiştirin, ardından pipetleme ile tekrar tekrar üfleyin ve 30 dakikalık reaksiyon işleminin sonunda santrifüj tüpünde semen numunesi ve çalışma solüsyonundan oluşan reaktanı iyice homojenize edin.</li>
	<li>10 μL transfer pipetini kullanın ve düğmeyi çevirerek ölçeği 10 μL'ye ayarlayın. Pipet ucunu değiştirin, yukarıda belirtilen reaktandan 10 μL'ye kadar pipetleyin ve sperm sayma odasına yerleştirin. Son olarak, sperm sayma odasını özel bir cam lamel ile örtün.</li>
	<li>Sperm sayma odasını mikroskobik sahneye yerleştirin ve iki adet 10x göz merceği ile optik mikroskobun güç anahtarını açın. Ardından, reaktan numunesinin sürüklenmeyi durdurması için 60 saniye bekleyin.</li>
	<li>Bekleme süresi boyunca mikroskobik dönüştürücüyü 10x objektif merceğe geçirin. Ardından kaba ayar düğmesini ve ince ayar düğmesini sırayla ayarlayın. Son olarak, spermatozoa ve yuvarlak hücreleri 10×10 büyütme altında gözlemleyin.</li>
	<li>Analiz edilecek görüş alanını belirledikten sonra mikroskobik dönüştürücüyü 40x objektif merceğe geçirin ve spermatozoa ve kahverengi peroksidaz pozitif lökositleri 10 × 40 büyütme altında gözlemleyin.</li>
	<li>İlgili alanlarda en az 200 spermatozoa ve kahverengi peroksidaz pozitif lökosit sayısını saymak için elektronik sayaç sistemini kullanın.</li>
</ol>5. Peroksidaz pozitif lökosit konsantrasyonunun hesaplanması
<ol><li>Aşağıdaki formülü kullanarak peroksidaz pozitif lökositlerin konsantrasyonunu hesaplayın: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/66211/66211eq01v2.jpg" style="margin: auto;"></li>
</ol>

Peroksidaz Pozitif Lökosit Hücreleri için Semen Analizi

<ol>
	<li>Agarwal, A., Mulgund, A., Hamada, A., Chyatte, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unique+view+on+male+infertility+around+the+globe.">A unique view on male infertility around the globe.</a> Reprod Biol Endocrinol. 13, 37 (2015).</li><li>Sharlip, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practice+policies+for+male+infertility.">Best practice policies for male infertility.</a> Fertil Steril. 77 (5), 873-882 (2002).</li><li>Choy, J. T., Eisenberg, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+infertility+as+a+window+to+health.">Male infertility as a window to health.</a> Fertil Steril. 110 (5), 810-814 (2018).</li><li>Pellati, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genital+tract+infections+and+infertility.">Genital tract infections and infertility.</a> Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 140 (1), 3-11 (2008).</li><li>Rivero, M. J., Kulkarni, N., Thirumavalavan, N., Ramasamy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+and+management+of+male+genital+tract+infections+in+the+setting+of+male+infertility:+an+updated+review.">Evaluation and management of male genital tract infections in the setting of male infertility: an updated review.</a> Curr Opin Urol. 33 (3), 180-186 (2023).</li><li>Long, S., Kenworthy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Round+cells+in+diagnostic+semen+analysis:+A+guide+for+laboratories+and+clinicians.">Round cells in diagnostic semen analysis: A guide for laboratories and clinicians.</a> Br J Biomed Sci. 79, 10129 (2022).</li><li>Johanisson, E., Campana, A., Luthi, R., de Agostini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+'round+cells'+in+semen+analysis:+a+comparative+study.">Evaluation of 'round cells' in semen analysis: a comparative study.</a> Hum Reprod Update. 6 (4), 404-412 (2000).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WHO+Laboratory+Manual+for+the+Examination+and+Processing+of+Human+Semen.+5th+edn.">WHO Laboratory Manual for the Examination and Processing of Human Semen. 5th edn.</a> World Health Organization. , (2010).</li><li>Domes, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+and+effect+of+bacteriospermia+and+elevated+seminal+leukocytes+on+semen+parameters.">The incidence and effect of bacteriospermia and elevated seminal leukocytes on semen parameters.</a> Fertil Steril. 97 (5), 1050-1055 (2012).</li><li>Aziz, N., Agarwal, A., Lewis-Jones, I., Sharma, R. K., Thomas, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+associations+between+specific+sperm+morphological+defects+and+leukocytospermia.">Novel associations between specific sperm morphological defects and leukocytospermia.</a> Fertil Steril. 82 (3), 621-627 (2004).</li><li>Alahmar, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+oxidative+stress+in+male+infertility:+An+updated+review.">Role of oxidative stress in male infertility: An updated review.</a> J Hum Reprod Sci. 12 (1), 4-18 (2019).</li><li>Schlegel, P. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+treatment+of+infertility+in+men:+AUA/ASRM+guideline+Part+I.">Diagnosis and treatment of infertility in men: AUA/ASRM guideline Part I.</a> J Urol. 205 (1), 36-43 (2021).</li><li>Ricci, G., Presani, G., Guaschino, S., Simeone, R., Perticarari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+detection+in+human+semen+using+flow+cytometry.">Leukocyte detection in human semen using flow cytometry.</a> Hum Reprod. 15 (6), 1329-1337 (2000).</li><li>Brunner, R. J., Demeter, J. H., Sindhwani, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+guidelines+for+the+evaluation+and+treatment+of+leukocytospermia+in+male+infertility.">Review of guidelines for the evaluation and treatment of leukocytospermia in male infertility.</a> World J Mens Health. 37 (2), 128-137 (2019).</li><li>Amulic, B., Cazalet, C., Hayes, G. L., Metzler, K. D., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+function:+from+mechanisms+to+disease.">Neutrophil function: from mechanisms to disease.</a> Annu Rev Immunol. 30, 459-489 (2012).</li><li>Khan, A. A., Alsahli, M. A., Rahmani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase+as+an+active+disease+biomarker:+recent+biochemical+and+pathological+perspectives.">Myeloperoxidase as an active disease biomarker: recent biochemical and pathological perspectives.</a> Med Sci (Basel). 6 (2), 33 (2018).</li><li>Khan, A. A., Rahmani, A. H., Aldebasi, Y. H., Aly, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+pathological+studies+on+peroxidases+-an+updated+review).">Biochemical and pathological studies on peroxidases -an updated review).</a> Glob J Health Sci. 6 (5), 87-98 (2014).</li><li>Liu, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase-derived+hypochlorous+acid+promotes+ox-LDL-induced+senescence+of+endothelial+cells+through+a+mechanism+involving+beta-catenin+signaling+in+hyperlipidemia.">Myeloperoxidase-derived hypochlorous acid promotes ox-LDL-induced senescence of endothelial cells through a mechanism involving beta-catenin signaling in hyperlipidemia.</a> Biochem Biophys Res Commun. 467 (4), 859-865 (2015).</li><li>Nicholls, S. J., Hazen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase+and+cardiovascular+disease.">Myeloperoxidase and cardiovascular disease.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (6), 1102-1111 (2005).</li><li>Wolff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biologic+significance+of+white+blood+cells+in+semen.">The biologic significance of white blood cells in semen.</a> Fertil Steril. 63 (6), 1143-1157 (1995).</li><li>Chen, Y., Hashiguchi, N., Yip, L., Junger, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertonic+saline+enhances+neutrophil+elastase+release+through+activation+of+P2+and+A3+receptors.">Hypertonic saline enhances neutrophil elastase release through activation of P2 and A3 receptors.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 290 (4), C1051-C1059 (2006).</li><li>Weiss, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+destruction+by+neutrophils.">Tissue destruction by neutrophils.</a> N Engl J Med. 320 (6), 365-376 (1989).</li></ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Orto-toluidin ve hidrojen peroksit ışığa duyarlı özelliklere sahiptir ve ışığa maruz kaldığında ayrışabilir. Test reaktiflerinin etkinliğini sağlamak için, hazırlanan çalışma sıvısının karanlık bir yerde saklanması önerilir. 
Semen örnekleri doğal olarak heterojen özellikler sergiler. Semen örneklerinin hazırlanması sürecinde, spermin sıvılaşma durumunun doğru bir şekilde değerlendirilmesi ve her örneklemeden önce semen örneklerinin iyice homojenle?...

Kısırlık, üreme çağındaki çiftlerin yaklaşık %15'ini etkileyen küresel bir halk sağlığı sorunu olarak ortaya çıkmıştır. Erkek faktörleri, toplam subfertilite vakalarının yaklaşık% 50'sinden etkilenir ve yaklaşık% 20 ila% 30'u yalnızca erkek faktörlerine atfedilebilir 1,2,3. Erkek genital sistem enfeksiyonları (MGTI'ler), erkek infertilitesinin önemli nedenlerinden birini oluşturur ve vakaların yaklaşık %15'ini oluşturur 4,5.
Çoğu bireyin menisinde spermatozoan olmayan hücrelerin %13'ünü oluşturan lökositler bulunur, diferansiyel oranlar nötrofiller %12, makrofajlar %0,9 ve lenfositler %0,1'dir6,7. İnsan sperminin incelenmesi ve işlenmesi için Dünya Sağlık Örgütü (WHO) laboratuvar kılavuzuna göre (5. baskı), lökositospermi genellikle menide >1 × 106 hücre / mL lökosit varlığı olarak tanımlanır8. Bu durum, çevresel toksinler, madde bağımlılığı, varikoseller, MGTI'ler vb. gibi çok sayıda faktörden kaynaklanabilir ve bunların tümü potansiyel olarak semen9'daki lökosit konsantrasyonunda anormal bir artışa yol açabilir. Lökositler, menideki reaktif oksijen türleri (ROS) seviyelerini yükseltebilir, lipid peroksidasyonuna ve protein ve DNA'da oksidatif hasara neden olabilir, bu da spermatozoa motilitesinin azalmasına, spermatozoa morfolojik anormalliklerinin artmasına, spermatozoa DNA fragmantasyon indeksinin yükselmesine, spermatozoa akrozom fonksiyonunun bozulmasına ve hatta embriyo gelişimi üzerinde olumsuz etkilere neden olabilir10,11.
Şu anda, androloglar genital sistem iltihabını tanımlarken genellikle menideki yuvarlak hücreleri veya seminal plazmadaki elastazı incelemeyi tercih etmektedirler. Bununla birlikte, ayrım gözetmeyen ve gereksiz antibiyotik kullanımının azaltılmasına katkıda bulunmayan soyulmuş spermatojenik hücreleri ve üreme sistemi epitel hücrelerini ayırt etmek genellikle zordur6. İkinci muayene yöntemi, MGTI'ler gibi hastalıkların erken tanı ve tedavisi için faydalı olmayan, yavaş sonuç raporlaması ile nispeten karmaşık ve zaman alıcıdır. Amerikan Üroloji Derneği (AUA), semen analizindeki yuvarlak hücre konsantrasyonu 1 × 106 hücre / mL12'den büyük olduğunda, lökositler ve genital sistemden dökülmüş hücreler arasında daha fazla ayrım yapılması gerektiğini önermektedir. Bazı androloji laboratuvarları, lökositleri incelemek için akış sitometrisi13 veya lökosit antijeni (örneğin, CD45) immünositokimyası14'ü kullanır. Bu yöntemler kesin olmakla birlikte, pahalı ve zaman alıcıdır, bu da özellikle gelişmekte olan ülkelerde büyük ölçekli klinik uygulamayı zorlaştırır.
Peroksidaz, çeşitli hücre tiplerinde yaygın olarak bulunur ve oksidatif stres hasarına karşı dirençte çok önemli bir rol oynar. Miyeloperoksidaz (MPO), genellikle bağışıklık hücrelerinde eksprese edilen peroksidaz alt ailesinin bir üyesidir. En yüksek oranda nötrofillerin azurofilik granüllerinde15,16 eksprese edilir ve ayrıca lenfositlerde17,18, monositlerde ve makrofajlarda19 eksprese edilir. Semende lökositlerin, özellikle nötrofillerin konsantrasyonu, peroksidaz pozitif olan yuvarlak hücrelerin incelenmesiyle elde edilebilir 7,20. Semendeki lökositlerin inceleme sürecini ekonomik, kullanışlı ve verimli hale getirmek için inceleme yöntemini yeniden tasarladık. Bilgisayar destekli semen analizi (CASA) sistemi tarafından desteklenen lökosit konsantrasyonu 60 dakika içinde elde edilebilir. Bu yeni yöntem, hastaların muayene masraflarını ve sonuç almak için bekleme süresini azaltmakta, laboratuvar teknisyenlerinin iş yükünü hafifletmekte, doktorun tanı ve tedavi bekleme süresini kısaltmaktadır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6% (v/v) hydrogen peroxide solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Sperm Class Analyzer &#8211; SCA SCOPE&#160;</td>
			<td>Microptic S.L.</td>
			<td>1222996; Model type: SCA-SCOPE-H</td>
			<td>Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable centrifugal tube (1.5 mL)</td>
			<td>Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD</td>
			<td>2210009</td>
			<td>Centrifugal tube for Staining process</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable transfer pipette (3 mL)</td>
			<td>Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>20221101</td>
			<td>Polymer-based pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic counter</td>
			<td>None</td>
			<td>None</td>
			<td>A multichannel counter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic scales</td>
			<td>Shanghai Liangping Instrument Co., LTD</td>
			<td>D9008084</td>
			<td>MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Makler counting chamber</td>
			<td>Makler</td>
			<td>MQ30004</td>
			<td>0.01 sq.mm, 10 &#956;m deep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>3G41067201307</td>
			<td>CX31, 10&#215;40</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ortho-toluidine substrate solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips(1 mL)</td>
			<td>Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd</td>
			<td>02923205</td>
			<td>1000 tips/unit, 5 units/case</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips(10 &#181;L)</td>
			<td>Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd</td>
			<td>00323961</td>
			<td>1000 tips/unit, 20 units/case</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips(200 &#181;L)</td>
			<td>Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd</td>
			<td>32822810</td>
			<td>1000 tips/unit, 20 units/case</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCA counting chamber</td>
			<td>Microptic S.L.</td>
			<td>102230608</td>
			<td>10 &#181;m, 2 Chambers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The container for semen sample</td>
			<td>Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>20230701</td>
			<td>Polymer-based receptacle for semen sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostatic table</td>
			<td>Shenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTD</td>
			<td>MQ30004</td>
			<td>MQ-300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette (10 &#181;L)</td>
			<td>Eppendoff</td>
			<td>3121000.015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette (1000 &#181;L)</td>
			<td>Eppendoff</td>
			<td>3121000.12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette (200 &#181;L)</td>
			<td>Eppendoff</td>
			<td>3121000.082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two-dimensional shaker</td>
			<td>DragonLab</td>
			<td>822000010000</td>
			<td>VC5A002205</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the examination of peroxidase-positive leukocytes in semen

Lökositospermi, spermatozoa motilitesinin azalmasına, spermatozoa morfolojik anormalliklerinin artmasına, spermatozoa DNA fragmantasyon indeksinin yükselmesine, spermatozoa akrozom fonksiyonunun bozulmasına ve hatta embriyonik gelişimin etkilenmesine neden olabilir. Klinik pratikte sık görülen bir androlojik hastalıktır ve erkek infertilitesinin önemli nedenlerinden biridir. Erkek üreme sistemi iltihabının var olup olmadığını belirlerken, androloglar genellikle klinik tanı temeli olarak menideki yuvarlak hücreleri veya seminal plazma elastazını incelemeyi seçerler. Bununla birlikte, yuvarlak hücrelerin incelenmesi, ayrım gözetmeyen ve gereksiz antibiyotik kullanımının azaltılmasına katkıda bulunmayan soyulmuş spermatojenik hücreler ve üreme sistemi epitel hücrelerinden kolayca etkilenir. Aynı zamanda, elastazın tespit süreci nispeten karmaşık, zaman alıcı ve sonuçların raporlanmasında yavaştır, bu da erkek genital sistem enfeksiyonları (MGTI'ler) gibi hastalıkların erken tanı ve tedavisi için faydalı değildir. Lökositospermi için bir tanı kriteri olarak bilgisayar destekli semen analizi (CASA) sistemi destekli semende peroksidaz pozitif lökositlerin incelenmesini yenilikçi bir şekilde uyguladık ve bu sorunları başarıyla çözdük. Bu inceleme sadece numuneye dört reaktiften oluşan çalışma sıvısının eklenmesini gerektirir ve oda sıcaklığında toplam reaksiyon süresi 20-30 dakika içinde kontrol edilebilir. Daha sonraki smear ve mikroskobik inceleme ile, menideki peroksidaz pozitif lökosit konsantrasyonu toplam 60 dakika içinde elde edilebilir ve bu da erkek üreme sistemi iltihabının var olup olmadığını teşhis etmek için kullanılabilir.

Infertility has emerged as a global public health issue affecting approximately 15% of couples in their reproductive age. Male factors are contributed by around 50% of total subfertility cases, and nearly 20% to 30% can be attributed solely to male factors1,2,3. Male genital tract infections (MGTIs) constitute one of the significant causes of male infertility, accounting for about 15% of cases4,5.
Most individuals have leukocytes in their semen, constituting 13% of non-spermatozoan cells, with differential proportions being neutrophils 12%, macrophages 0.9%, and lymphocytes 0.1%6,7. According to the World Health Organization (WHO) laboratory manual for the examination and processing of human semen (5th ed.), leukocytospermia is usually defined as the presence of &#62;1 &#215; 106 cells/mL leucocytes in semen8. This condition can be caused by numerous factors such as environmental toxins, substance abuse, varicoceles, MGTIs, etc., all potentially leading to an abnormal increase in leukocyte concentration in semen9. Leukocytes can elevate reactive oxygen species (ROS) levels in semen, causing lipid peroxidation and oxidative damage to protein and DNA, which results in decreased spermatozoa motility, increased spermatozoa morphological abnormalities, elevated spermatozoa DNA fragmentation index, impairment of the spermatozoa acrosome function, and even negative impacts on embryo development10,11.
Currently, andrologists commonly choose to examine round cells in semen or elastase in seminal plasma when identifying genital tract inflammation. However, it&#39;s often challenging to distinguish sloughed spermatogenic cells and reproductive tract epithelial cells, which do not contribute to reducing the indiscriminate and unnecessary use of antibiotics6. The latter examination method is relatively complicated and time-consuming, with slow result reporting, which is not beneficial for early diagnosis and treatment of diseases such as MGTIs. The American Urological Association (AUA) suggests further differentiation between leukocytes and sloughed cells from the genital tract should be made when the round cell concentration in semen analysis is greater than 1 &#215; 106 cells/mL12. Some andrology labs utilize flow cytometry13 or leukocyte antigen (e.g., CD45) immunocytochemistry14 to examine leukocytes. While these methods are precise, they are expensive and time-consuming, making large-scale clinical implementation difficult, especially in developing countries.
Peroxidase is widely distributed in various types of cells and plays a crucial role in the resistance to oxidative stress damage. Myeloperoxidase (MPO) is a member of the peroxidase subfamily that is generally expressed in immune cells. It is most highly expressed in neutrophils&#39; azurophilic granules15,16 and is also expressed in lymphocytes17,18, monocytes, and macrophages19. The concentration of leukocytes, especially neutrophils, in semen can be obtained by examining round cells that are peroxidase-positive7,20. To make the examination process of leukocytes in semen economical, convenient, and efficient, we reengineered the examination method. Assisted by the computer-assisted semen analysis (CASA) system, the concentration of leukocytes can be obtained within 60 min. This new method reduces the patients&#39; examination costs and waiting time for obtaining results, alleviates the workload of lab technicians, and shortens the doctor&#39;s diagnosis and treatment waiting period.

Yazar Spotlight: Semende Lökosit Analizi için Basit ve Uygun Maliyetli Bir Yöntem 

Semende Peroksidaz Pozitif Lökositlerin İncelenmesi

Male reproductive medicine is my primary research focus, and our protocol primarily addresses the issues of speed and cost in analyzing peroxidase-positive leukocytes in semen. Semen is inherently heterogeneous, which greatly affects the stability of semen analysis results. Therefore, it is essential to ensure that semen is liquified and thoroughly mixed before examination.Our protocol combines manual and automatic methods to calculate the concentration of leukocytes by utilizing sperm concentration, which saves time and is more cost-effective compared to the ready counting leukocytes.

Yukarıda belirtilen prosedürün uygulanmasının ardından, santrifüj tüpündeki reaktan sıklıkla yarı saydam, yanardöner bir görünüm gösterir (Şekil 1). Açıkça kahverengi bir rengin tespit edilmesi, lökositlerin potansiyel degranülasyonunu ortaya çıkarır ve bu da sıvı lekelenmesine neden olabilir. Sonuç olarak, boyama işlemi başarısız olabilir ve bu da yeniden test etmek için yeniden boyamayı veya yeni bir semen örneği toplamayı gerekli kılar<sup class="xre...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple and Cost-Effective Method for Leukocyte Analysis in Semen at JoVE.com

Bu makale, menide peroksidaz pozitif lökositlerin incelenmesi için ekonomik ve etkili bir protokol sunmaktadır. Bilgisayar destekli semen analizi (CASA) sisteminin yardımıyla, spermdeki peroksidaz pozitif lökosit konsantrasyonu toplam 60 dakika içinde elde edilebilir ve bu da androloji laboratuvarının ve andrologların verimliliğini etkili bir şekilde artırır.

Leukocytospermia can lead to decreased spermatozoa motility, increased spermatozoa morphological abnormalities, elevated spermatozoa DNA fragmentation ...

Erkek üreme tıbbı benim birincil araştırma odağımdır ve protokolümüz öncelikle menide peroksidaz pozitif lökositlerin analizinde hız ve maliyet konularını ele almaktadır. Semen doğası gereği heterojendir ve bu da semen analizi sonuçlarının stabilitesini büyük ölçüde etkiler. Bu nedenle, muayeneden önce meninin sıvılaştırıldığından ve iyice karıştırıldığından emin olmak önemlidir.Protokolümüz, sperm konsantrasyonunu kullanarak lökosit konsantrasyonunu hesaplamak için manuel ve otomatik yöntemleri birleştirir, bu da zamandan tasarruf sağlar ve hazır sayım lökositlerine kıyasla daha uygun maliyetlidir.

the-examination-of-peroxidase-positive-leukocytes-in-semen

Research

JoVE Journal

Medicine

The Examination of Peroxidase-Positive Leukocytes in Semen

2.8K Görüntüleme.  The Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University. Erkek üreme tıbbı benim birincil araştırma odağımdır ve protokolümüz öncelikle menide peroksidaz pozitif lökositlerin analizinde hız ve maliyet konularını ele almaktadır. Semen doğası gereği heterojendir ve bu da semen analizi sonuçlarının stabilitesini büyük ölçüde etkiler. Bu nedenle, muayeneden önce meninin sıvılaştırıldığından ve iyice karıştırıldığından emin olmak önemlidir.Protokolümüz, sperm konsantrasyonunu kullanarak lökosit konsa...