Les auteurs remercient le laboratoire d’andrologie du Centre de médecine de la reproduction, le troisième hôpital affilié de l’Université Sun Yat-sen, d’avoir fourni les installations nécessaires à cette étude. Aucun financement n’a été impliqué dans la préparation de cet article.

Cette étude a été examinée et approuvée par le Comité d’éthique médicale du troisième hôpital affilié de l’Université Sun Yat-sen.
1. Préparation de la solution de travail
<ol><li>Rassemblez les réactifs suivants essentiels à la préparation de la solution de travail : solution de substrat d’ortho-toluidine, solution saturée de chlorure d’ammonium (NH4Cl), solution de sel disodique d’acide éthylènediaminetétraacétique à 148 mmol/L (Na2EDTA) et solution de peroxyde d’hydrogène à 6 % (v/v). Placez-les sur une paillasse de laboratoire à température ambiante (RT) avec les outils nécessaires, tels que des pipettes de transfert (1000 μL, 200 μL, 10 μL) et des portoirs de tubes à essai. ATTENTION : Lisez la fiche de données de sécurité (FDS) avant de manipuler les réactifs mentionnés ci-dessus.</li>
	<li>Préparez un flacon de réactif brun opaque pour stocker et protéger la solution de travail préparée de l’exposition à la lumière.</li>
	<li>Transférez les réactifs dans le flacon de réactif brun opaque selon les proportions spécifiées ci-dessous :<ol><li>Utilisez la pipette de transfert de 200 μL et ajustez l’échelle à 100 μL en tournant le bouton. Ensuite, transvasez 100 μL de la solution NH4Cl dans le flacon de réactif brun opaque.</li>
		<li>Remplacez l’embout de la pipette et transférez 100 μL de la solution d’EDTA Na2à 148 mmol/L dans le flacon de réactif brun opaque à l’aide de la pipette de transfert de 200 μL mentionnée ci-dessus. Ensuite, soufflez doucement par pipetage et homogénéisez soigneusement la solution.</li>
		<li>Utilisez la pipette de transfert de 1000 μL et ajustez l’échelle à 900 μL en tournant le bouton. Ensuite, transvasez 900 μL de la solution de substrat d’ortho-toluidine dans le flacon de réactif brun opaque, soufflez doucement par pipetage et homogénéisez soigneusement la solution.</li>
		<li>Utilisez la pipette de transfert de 10 μL et ajustez l’échelle à 5 μL en tournant le bouton. Ensuite, transvasez 5 μL de la solution de peroxyde d’hydrogène à 6 % (v/v) dans le flacon de réactif brun opaque.</li>
	</ol></li>
	<li>Utilisez la pipette de transfert de 1000 μL et ajustez l’échelle à 1000 μL en tournant le bouton. Replacez l’embout de la pipette, soufflez doucement par pipetage et homogénéisez soigneusement la solution dans le flacon de réactif brun opaque.</li>
	<li>Conservez la solution de travail prête à l’emploi dans le flacon de réactif brun opaque à RT, à l’abri de la lumière. La solution de travail est réactive pendant 24 h.</li>
	<li>Chaque échantillon de sperme nécessite 900 μL de la solution de travail. S’assurer que la quantité de solution de travail préparée chaque jour correspond au nombre d’échantillons examinés quotidiennement.</li>
</ol>2. Préparation de l’échantillon de sperme
<ol><li>Avant de prélever l’échantillon de sperme, assurez-vous que le patient s’est abstenu d’éjaculer pendant 2 à 7 jours, comme l’exige le manuel de laboratoire de l’Organisation mondiale de la santé (OMS) pour l’examen et le traitement du sperme humain (5e éd.) 8. La masturbation est la méthode préférée pour obtenir des échantillons de sperme. Pour améliorer la précision de l’examen, demandez au patient de recueillir tout le sperme éjaculé.</li>
	<li>Allumez le support à température constante et chauffez jusqu’à 37 °C à l’avance afin que la liquéfaction ultérieure de l’échantillon de sperme puisse se dérouler sans problème.</li>
	<li>À la réception de l’échantillon de sperme du patient, notez méticuleusement les informations détaillées, y compris le code d’identification, le temps de prélèvement, la durée d’abstinence et d’autres informations pertinentes, sur la paroi extérieure du récipient à base de polymère.</li>
	<li>Placez le récipient à base de polymère contenant l’échantillon de sperme sur le support à température constante préchauffé à 37 °C, ce qui est bénéfique pour la liquéfaction du sperme.</li>
	<li>Prélever l’échantillon de sperme dans une pipette à base de polymère et observer l’état de liquéfaction toutes les 5 minutes jusqu’à ce que l’échantillon de sperme soit complètement liquéfié.</li>
	<li>Si l’échantillon de sperme n’a pas été complètement liquéfié dans les 30 minutes, n’effectuez pas encore l’examen ; Continuez à attendre encore 30 minutes. Si le sperme n’est toujours pas complètement liquéfié après 60 min, ajoutez un volume égal de solution tampon de phosphate pour une dilution de 1 :1 et agitez doucement pour favoriser la liquéfaction.</li>
	<li>Après une agitation complète et une homogénéisation constante, conservez l’échantillon de sperme entièrement liquéfié pour les procédures d’examen ultérieures.</li>
</ol>3. Coloration des leucocytes positifs à la peroxydase et analyse de l’échantillon de sperme d’origine
<ol><li>Avant l’échantillonnage, utilisez une pipette à base de polymère pour souffler à plusieurs reprises par pipetage et homogénéiser soigneusement l’échantillon de sperme examiné.</li>
	<li>Utilisez la pipette de transfert de 200 μL et ajustez l’échelle à 100 μL en tournant le bouton. Replacez l’embout de la pipette, puis transférez 100 μL de l’échantillon de sperme dans un tube à centrifuger.</li>
	<li>Utilisez la pipette de transfert de 1000 μL et ajustez l’échelle à 900 μL en tournant le bouton. Replacez l’embout de la pipette, puis transférez 900 μL de la solution de travail mentionnée ci-dessus dans le tube à centrifuger.</li>
	<li>Souffler à plusieurs reprises par pipetage et homogénéiser soigneusement le réactif, qui se compose de l’échantillon de sperme et de la solution de travail, à l’aide de la pipette de transfert de 1000 μL.</li>
	<li>Positionnez le tube à centrifuger dans un rack de tubes à essai sur un agitateur bidimensionnel et soumettez-le à une agitation continue à 200 tr/min pendant 30 min à RT.</li>
	<li>En attendant la réaction de coloration, analysez l’échantillon de sperme à l’aide du système CASA pour déterminer la concentration de spermatozoïdes dans l’échantillon de sperme d’origine dans le récipient à base de polymère.<ol><li>Allumez l’interrupteur d’alimentation du système CASA et double-cliquez sur l’icône SCA SCOPE pour ouvrir le logiciel d’application.</li>
		<li>Avant le prélèvement, souffler à plusieurs reprises par pipetage et homogénéiser à nouveau soigneusement l’échantillon de sperme d’origine avec une pipette à base de polymère.</li>
		<li>Utilisez la pipette de transfert de 10 μL et ajustez l’échelle à 10 μL en tournant le bouton. Replacez l’embout de la pipette, pipetez jusqu’à 10 μL de l’échantillon de sperme d’origine et placez-le dans la chambre de comptage SCA. Attendez 60 s pour que l’échantillon de sperme cesse de dériver.</li>
		<li>Positionnez la chambre de comptage SCA sur le porte-échantillon du système CASA et définissez les informations du patient dans la boîte de dialogue du logiciel d’application pour préparer l’examen formel.</li>
		<li>Examinez l’échantillon de sperme d’origine dans la chambre de comptage SCA avec le système CASA en cliquant sur le bouton Démarrer et enregistrez les données nécessaires, telles que la concentration de spermatozoïdes.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Observation des leucocytes et des spermatozoïdes peroxydases positifs
<ol><li>Utilisez la pipette de transfert de 1000 μL et ajustez l’échelle à 1000 μL en tournant le bouton. Replacez l’embout de la pipette, puis soufflez à plusieurs reprises par pipetage et homogénéisez soigneusement le réactif, qui se compose d’un échantillon de sperme et d’une solution de travail dans le tube à centrifuger à la fin du processus de réaction de 30 minutes.</li>
	<li>Utilisez la pipette de transfert de 10 μL et ajustez l’échelle à 10 μL en tournant le bouton. Replacez l’embout de la pipette, pipetez jusqu’à 10 μL du réactif mentionné ci-dessus et placez-le dans la chambre de comptage des spermatozoïdes. Enfin, couvrez la chambre de comptage des spermatozoïdes avec une lamelle en verre dédiée.</li>
	<li>Placez la chambre de comptage des spermatozoïdes sur la platine microscopique et allumez l’interrupteur d’alimentation du microscope optique avec deux oculaires 10x. Ensuite, attendez 60 s pour que l’échantillon de réactif cesse de dériver.</li>
	<li>Basculez le convertisseur microscopique sur l’objectif 10x pendant le temps d’attente. Ajustez ensuite le bouton de réglage grossier et le bouton de réglage fin dans l’ordre. Enfin, observez les spermatozoïdes et les cellules rondes sous un grossissement de 10×10.</li>
	<li>Basculez le convertisseur microscopique sur la lentille de l’objectif 40x après avoir déterminé le champ de vision à analyser, et observez les spermatozoïdes et les leucocytes bruns positifs à la peroxydase sous un grossissement de 10 × 40.</li>
	<li>Utilisez le système de comptage électronique pour compter au moins 200 spermatozoïdes et le nombre de leucocytes bruns positifs à la peroxydase dans les champs correspondants.</li>
</ol>5. Calcul de la concentration de leucocytes peroxydases positifs
<ol><li>Calculez la concentration de leucocytes peroxydases positifs à l’aide de la formule suivante : <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/66211/66211eq01v2.jpg" style="margin: auto;"></li>
</ol>

Analyse du sperme pour les cellules leucocytaires positives à la peroxydase

<ol>
	<li>Agarwal, A., Mulgund, A., Hamada, A., Chyatte, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unique+view+on+male+infertility+around+the+globe.">A unique view on male infertility around the globe.</a> Reprod Biol Endocrinol. 13, 37 (2015).</li><li>Sharlip, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practice+policies+for+male+infertility.">Best practice policies for male infertility.</a> Fertil Steril. 77 (5), 873-882 (2002).</li><li>Choy, J. T., Eisenberg, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+infertility+as+a+window+to+health.">Male infertility as a window to health.</a> Fertil Steril. 110 (5), 810-814 (2018).</li><li>Pellati, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genital+tract+infections+and+infertility.">Genital tract infections and infertility.</a> Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 140 (1), 3-11 (2008).</li><li>Rivero, M. J., Kulkarni, N., Thirumavalavan, N., Ramasamy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+and+management+of+male+genital+tract+infections+in+the+setting+of+male+infertility:+an+updated+review.">Evaluation and management of male genital tract infections in the setting of male infertility: an updated review.</a> Curr Opin Urol. 33 (3), 180-186 (2023).</li><li>Long, S., Kenworthy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Round+cells+in+diagnostic+semen+analysis:+A+guide+for+laboratories+and+clinicians.">Round cells in diagnostic semen analysis: A guide for laboratories and clinicians.</a> Br J Biomed Sci. 79, 10129 (2022).</li><li>Johanisson, E., Campana, A., Luthi, R., de Agostini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+'round+cells'+in+semen+analysis:+a+comparative+study.">Evaluation of 'round cells' in semen analysis: a comparative study.</a> Hum Reprod Update. 6 (4), 404-412 (2000).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WHO+Laboratory+Manual+for+the+Examination+and+Processing+of+Human+Semen.+5th+edn.">WHO Laboratory Manual for the Examination and Processing of Human Semen. 5th edn.</a> World Health Organization. , (2010).</li><li>Domes, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+and+effect+of+bacteriospermia+and+elevated+seminal+leukocytes+on+semen+parameters.">The incidence and effect of bacteriospermia and elevated seminal leukocytes on semen parameters.</a> Fertil Steril. 97 (5), 1050-1055 (2012).</li><li>Aziz, N., Agarwal, A., Lewis-Jones, I., Sharma, R. K., Thomas, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+associations+between+specific+sperm+morphological+defects+and+leukocytospermia.">Novel associations between specific sperm morphological defects and leukocytospermia.</a> Fertil Steril. 82 (3), 621-627 (2004).</li><li>Alahmar, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+oxidative+stress+in+male+infertility:+An+updated+review.">Role of oxidative stress in male infertility: An updated review.</a> J Hum Reprod Sci. 12 (1), 4-18 (2019).</li><li>Schlegel, P. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+treatment+of+infertility+in+men:+AUA/ASRM+guideline+Part+I.">Diagnosis and treatment of infertility in men: AUA/ASRM guideline Part I.</a> J Urol. 205 (1), 36-43 (2021).</li><li>Ricci, G., Presani, G., Guaschino, S., Simeone, R., Perticarari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+detection+in+human+semen+using+flow+cytometry.">Leukocyte detection in human semen using flow cytometry.</a> Hum Reprod. 15 (6), 1329-1337 (2000).</li><li>Brunner, R. J., Demeter, J. H., Sindhwani, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+guidelines+for+the+evaluation+and+treatment+of+leukocytospermia+in+male+infertility.">Review of guidelines for the evaluation and treatment of leukocytospermia in male infertility.</a> World J Mens Health. 37 (2), 128-137 (2019).</li><li>Amulic, B., Cazalet, C., Hayes, G. L., Metzler, K. D., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+function:+from+mechanisms+to+disease.">Neutrophil function: from mechanisms to disease.</a> Annu Rev Immunol. 30, 459-489 (2012).</li><li>Khan, A. A., Alsahli, M. A., Rahmani, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase+as+an+active+disease+biomarker:+recent+biochemical+and+pathological+perspectives.">Myeloperoxidase as an active disease biomarker: recent biochemical and pathological perspectives.</a> Med Sci (Basel). 6 (2), 33 (2018).</li><li>Khan, A. A., Rahmani, A. H., Aldebasi, Y. H., Aly, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+pathological+studies+on+peroxidases+-an+updated+review).">Biochemical and pathological studies on peroxidases -an updated review).</a> Glob J Health Sci. 6 (5), 87-98 (2014).</li><li>Liu, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase-derived+hypochlorous+acid+promotes+ox-LDL-induced+senescence+of+endothelial+cells+through+a+mechanism+involving+beta-catenin+signaling+in+hyperlipidemia.">Myeloperoxidase-derived hypochlorous acid promotes ox-LDL-induced senescence of endothelial cells through a mechanism involving beta-catenin signaling in hyperlipidemia.</a> Biochem Biophys Res Commun. 467 (4), 859-865 (2015).</li><li>Nicholls, S. J., Hazen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase+and+cardiovascular+disease.">Myeloperoxidase and cardiovascular disease.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (6), 1102-1111 (2005).</li><li>Wolff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biologic+significance+of+white+blood+cells+in+semen.">The biologic significance of white blood cells in semen.</a> Fertil Steril. 63 (6), 1143-1157 (1995).</li><li>Chen, Y., Hashiguchi, N., Yip, L., Junger, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertonic+saline+enhances+neutrophil+elastase+release+through+activation+of+P2+and+A3+receptors.">Hypertonic saline enhances neutrophil elastase release through activation of P2 and A3 receptors.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 290 (4), C1051-C1059 (2006).</li><li>Weiss, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+destruction+by+neutrophils.">Tissue destruction by neutrophils.</a> N Engl J Med. 320 (6), 365-376 (1989).</li></ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

L’ortho-toluidine et le peroxyde d’hydrogène ont des propriétés photosensibles et peuvent se décomposer lorsqu’ils sont exposés à la lumière. Pour garantir l’efficacité des réactifs de test, il est recommandé de stocker le fluide de travail préparé dans un endroit sombre. 
Les échantillons de sperme présentent naturellement des caractéristiques hétérogènes. Dans le processus de préparation des échantillons de sperme, il est crucial d’évaluer correctement l’éta...

L’infertilité est devenue un problème de santé publique mondial qui touche environ 15 % des couples en âge de procréer. Les facteurs masculins sont dus à environ 50 % des cas totaux d’hypofertilité, et près de 20 % à 30 % peuvent être attribués uniquement aux facteurs masculins 1,2,3. Les infections de l’appareil génital masculin constituent l’une des causes importantes d’infertilité masculine, représentant environ 15 % des cas 4,5.
La plupart des individus ont des leucocytes dans leur sperme, qui constituent 13 % des cellules non spermatozoïdes, avec des proportions différentielles de 12 % pour les neutrophiles, de 0,9 % pour les macrophages et de 0,1 % pour les lymphocytes6,7. Selon le manuel de laboratoire de l’Organisation mondiale de la santé (OMS) pour l’examen et le traitement du sperme humain (5e éd.), la leucocytospermie est généralement définie comme la présence de leucocytes >1 ×10 6 cellules/mL dans le sperme8. Cette condition peut être causée par de nombreux facteurs tels que les toxines environnementales, la toxicomanie, les varicocèles, les MGTI, etc., tous susceptibles d’entraîner une augmentation anormale de la concentration de leucocytes dans le sperme9. Les leucocytes peuvent élever les niveaux d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) dans le sperme, provoquant une peroxydation lipidique et des dommages oxydatifs aux protéines et à l’ADN, ce qui entraîne une diminution de la motilité des spermatozoïdes, une augmentation des anomalies morphologiques des spermatozoïdes, un indice de fragmentation élevé de l’ADN des spermatozoïdes, une altération de la fonction acrosomique des spermatozoïdes et même des impacts négatifs sur le développement embryonnaire10,11.
Actuellement, les andrologues choisissent généralement d’examiner les cellules rondes du sperme ou de l’élastase dans le plasma séminal lors de l’identification de l’inflammation des voies génitales. Cependant, il est souvent difficile de distinguer les cellules spermatogènes desquamées et les cellules épithéliales de l’appareil reproducteur, qui ne contribuent pas à réduire l’utilisation aveugle et inutile d’antibiotiques6. Cette dernière méthode d’examen est relativement compliquée et prend beaucoup de temps, avec des résultats lents, ce qui n’est pas bénéfique pour le diagnostic précoce et le traitement de maladies telles que les MGTI. L’American Urological Association (AUA) suggère qu’une différenciation plus poussée entre les leucocytes et les cellules desquamées de l’appareil génital devrait être effectuée lorsque la concentration de cellules rondes dans l’analyse du sperme est supérieure à 1 × 106 cellules/mL12. Certains laboratoires d’andrologie utilisent la cytométrie en flux13 ou l’immunocytochimie de l’antigène leucocytaire (par exemple, CD45)14 pour examiner les leucocytes. Bien que ces méthodes soient précises, elles sont coûteuses et prennent beaucoup de temps, ce qui rend difficile la mise en œuvre clinique à grande échelle, en particulier dans les pays en développement.
La peroxydase est largement distribuée dans divers types de cellules et joue un rôle crucial dans la résistance aux dommages causés par le stress oxydatif. La myéloperoxydase (MPO) est un membre de la sous-famille des peroxydases qui est généralement exprimée dans les cellules immunitaires. Il est le plus fortement exprimé dans les granules azurophiles des neutrophiles15,16 et est également exprimé dans les lymphocytes17,18, les monocytes et les macrophages19. La concentration de leucocytes, en particulier de neutrophiles, dans le sperme peut être obtenue en examinant des cellules rondes qui sont peroxydases positives 7,20. Pour rendre le processus d’examen des leucocytes dans le sperme économique, pratique et efficace, nous avons repensé la méthode d’examen. À l’aide du système d’analyse de sperme assistée par ordinateur (CASA), la concentration de leucocytes peut être obtenue en 60 minutes. Cette nouvelle méthode permet de réduire les coûts d’examen des patients et le temps d’attente pour l’obtention des résultats, d’alléger la charge de travail des techniciens de laboratoire et de raccourcir la période d’attente du médecin pour le diagnostic et le traitement.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6% (v/v) hydrogen peroxide solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Sperm Class Analyzer &#8211; SCA SCOPE&#160;</td>
			<td>Microptic S.L.</td>
			<td>1222996; Model type: SCA-SCOPE-H</td>
			<td>Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable centrifugal tube (1.5 mL)</td>
			<td>Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD</td>
			<td>2210009</td>
			<td>Centrifugal tube for Staining process</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable transfer pipette (3 mL)</td>
			<td>Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>20221101</td>
			<td>Polymer-based pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic counter</td>
			<td>None</td>
			<td>None</td>
			<td>A multichannel counter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic scales</td>
			<td>Shanghai Liangping Instrument Co., LTD</td>
			<td>D9008084</td>
			<td>MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Makler counting chamber</td>
			<td>Makler</td>
			<td>MQ30004</td>
			<td>0.01 sq.mm, 10 &#956;m deep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>3G41067201307</td>
			<td>CX31, 10&#215;40</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ortho-toluidine substrate solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips(1 mL)</td>
			<td>Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd</td>
			<td>02923205</td>
			<td>1000 tips/unit, 5 units/case</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips(10 &#181;L)</td>
			<td>Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd</td>
			<td>00323961</td>
			<td>1000 tips/unit, 20 units/case</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips(200 &#181;L)</td>
			<td>Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd</td>
			<td>32822810</td>
			<td>1000 tips/unit, 20 units/case</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solution</td>
			<td>ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD</td>
			<td>20230301</td>
			<td>Agentia A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCA counting chamber</td>
			<td>Microptic S.L.</td>
			<td>102230608</td>
			<td>10 &#181;m, 2 Chambers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The container for semen sample</td>
			<td>Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>20230701</td>
			<td>Polymer-based receptacle for semen sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostatic table</td>
			<td>Shenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTD</td>
			<td>MQ30004</td>
			<td>MQ-300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette (10 &#181;L)</td>
			<td>Eppendoff</td>
			<td>3121000.015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette (1000 &#181;L)</td>
			<td>Eppendoff</td>
			<td>3121000.12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette (200 &#181;L)</td>
			<td>Eppendoff</td>
			<td>3121000.082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
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the examination of peroxidase-positive leukocytes in semen

La leucocytospermie peut entraîner une diminution de la motilité des spermatozoïdes, une augmentation des anomalies morphologiques des spermatozoïdes, une augmentation de l’indice de fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes, une altération de la fonction acrosomique des spermatozoïdes et même une altération du développement embryonnaire. Il s’agit d’une maladie andrologique courante dans la pratique clinique et l’une des causes importantes de l’infertilité masculine. Pour déterminer s’il existe une inflammation de l’appareil reproducteur masculin, les andrologues choisissent souvent d’examiner des cellules rondes ou de l’élastase plasmatique séminale dans le sperme comme base de diagnostic clinique. Cependant, l’examen des cellules rondes est facilement influencé par les cellules spermatogènes desquamées et les cellules épithéliales de l’appareil reproducteur, qui ne contribuent pas à réduire l’utilisation aveugle et inutile d’antibiotiques. Dans le même temps, le processus de détection de l’élastase est relativement compliqué, prend du temps et lent, ce qui n’est pas bénéfique pour le diagnostic précoce et le traitement de maladies telles que les infections de l’appareil génital masculin (MGTI). Nous avons appliqué de manière innovante l’examen des leucocytes peroxydases positifs dans le sperme assisté par un système d’analyse de sperme assisté par ordinateur (CASA) comme critère de diagnostic de la leucocytospermie, résolvant avec succès ces problèmes. Cet examen ne nécessite que l’ajout du fluide de fonctionnement composé de quatre réactifs dans l’échantillon, et le temps de réaction total à température ambiante peut être contrôlé en 20 à 30 minutes. Avec le frottis et l’examen microscopique qui s’ensuivent, la concentration de leucocytes positifs à la peroxydase dans le sperme peut être obtenue en 60 minutes au total, ce qui peut être utilisé pour diagnostiquer si l’inflammation de l’appareil reproducteur masculin existait.

Infertility has emerged as a global public health issue affecting approximately 15% of couples in their reproductive age. Male factors are contributed by around 50% of total subfertility cases, and nearly 20% to 30% can be attributed solely to male factors1,2,3. Male genital tract infections (MGTIs) constitute one of the significant causes of male infertility, accounting for about 15% of cases4,5.
Most individuals have leukocytes in their semen, constituting 13% of non-spermatozoan cells, with differential proportions being neutrophils 12%, macrophages 0.9%, and lymphocytes 0.1%6,7. According to the World Health Organization (WHO) laboratory manual for the examination and processing of human semen (5th ed.), leukocytospermia is usually defined as the presence of &#62;1 &#215; 106 cells/mL leucocytes in semen8. This condition can be caused by numerous factors such as environmental toxins, substance abuse, varicoceles, MGTIs, etc., all potentially leading to an abnormal increase in leukocyte concentration in semen9. Leukocytes can elevate reactive oxygen species (ROS) levels in semen, causing lipid peroxidation and oxidative damage to protein and DNA, which results in decreased spermatozoa motility, increased spermatozoa morphological abnormalities, elevated spermatozoa DNA fragmentation index, impairment of the spermatozoa acrosome function, and even negative impacts on embryo development10,11.
Currently, andrologists commonly choose to examine round cells in semen or elastase in seminal plasma when identifying genital tract inflammation. However, it&#39;s often challenging to distinguish sloughed spermatogenic cells and reproductive tract epithelial cells, which do not contribute to reducing the indiscriminate and unnecessary use of antibiotics6. The latter examination method is relatively complicated and time-consuming, with slow result reporting, which is not beneficial for early diagnosis and treatment of diseases such as MGTIs. The American Urological Association (AUA) suggests further differentiation between leukocytes and sloughed cells from the genital tract should be made when the round cell concentration in semen analysis is greater than 1 &#215; 106 cells/mL12. Some andrology labs utilize flow cytometry13 or leukocyte antigen (e.g., CD45) immunocytochemistry14 to examine leukocytes. While these methods are precise, they are expensive and time-consuming, making large-scale clinical implementation difficult, especially in developing countries.
Peroxidase is widely distributed in various types of cells and plays a crucial role in the resistance to oxidative stress damage. Myeloperoxidase (MPO) is a member of the peroxidase subfamily that is generally expressed in immune cells. It is most highly expressed in neutrophils&#39; azurophilic granules15,16 and is also expressed in lymphocytes17,18, monocytes, and macrophages19. The concentration of leukocytes, especially neutrophils, in semen can be obtained by examining round cells that are peroxidase-positive7,20. To make the examination process of leukocytes in semen economical, convenient, and efficient, we reengineered the examination method. Assisted by the computer-assisted semen analysis (CASA) system, the concentration of leukocytes can be obtained within 60 min. This new method reduces the patients&#39; examination costs and waiting time for obtaining results, alleviates the workload of lab technicians, and shortens the doctor&#39;s diagnosis and treatment waiting period.

Pleins feux sur l’auteur : Une méthode simple et rentable pour l’analyse des leucocytes dans le sperme 

L’examen des leucocytes peroxydases positifs dans le sperme

Male reproductive medicine is my primary research focus, and our protocol primarily addresses the issues of speed and cost in analyzing peroxidase-positive leukocytes in semen. Semen is inherently heterogeneous, which greatly affects the stability of semen analysis results. Therefore, it is essential to ensure that semen is liquified and thoroughly mixed before examination.Our protocol combines manual and automatic methods to calculate the concentration of leukocytes by utilizing sperm concentration, which saves time and is more cost-effective compared to the ready counting leukocytes.

Lors de la mise en œuvre de la procédure susmentionnée, le réactif dans le tube à centrifuger présente fréquemment un aspect subtranslucide et opalescent (Figure 1). La détection d’une couleur manifestement brune révèle une dégranulation potentielle des leucocytes, ce qui peut entraîner une coloration liquide. Par conséquent, le processus de coloration pourrait échouer, ce qui rendrait nécessaire soit une nouvelle coloration, soit le prélèvement d’un nouvel échantillon ...

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Cet article présente un protocole économique et efficace pour l’examen des leucocytes peroxydases positifs dans le sperme. À l’aide d’un système d’analyse de sperme assisté par ordinateur (CASA), la concentration de leucocytes positifs à la peroxydase dans le sperme peut être obtenue en 60 minutes au total, ce qui améliore efficacement l’efficacité du laboratoire d’andrologie et des andrologues.

Leukocytospermia can lead to decreased spermatozoa motility, increased spermatozoa morphological abnormalities, elevated spermatozoa DNA fragmentation ...

La médecine de la reproduction masculine est mon principal objectif de recherche, et notre protocole aborde principalement les questions de rapidité et de coût dans l’analyse des leucocytes positifs à la peroxydase dans le sperme. Le sperme est intrinsèquement hétérogène, ce qui affecte grandement la stabilité des résultats d’analyse du sperme. Par conséquent, il est essentiel de s’assurer que le sperme est liquéfié et bien mélangé avant l’examen.Notre protocole combine des méthodes manuelles et automatiques pour calculer la concentration de leucocytes en utilisant la concentration de spermatozoïdes, ce qui permet de gagner du temps et est plus rentable par rapport aux leucocytes prêts à compter.

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JoVE Journal

Medicine

The Examination of Peroxidase-Positive Leukocytes in Semen

2.8K vues.  The Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University. La médecine de la reproduction masculine est mon principal objectif de recherche, et notre protocole aborde principalement les questions de rapidité et de coût dans l’analyse des leucocytes positifs à la peroxydase dans le sperme. Le sperme est intrinsèquement hétérogène, ce qui affecte grandement la stabilité des résultats d’analyse du sperme. Par conséquent, il est essentiel de s’assurer que le sperme est liquéfié et bien mélangé avant l’examen.Notre protocole ...