فإن الكتاب أود أن أشكر Verlene هنري وهولمز ليندساي للمساعدة في تطوير هذا النموذج. وقد تم تمويل هذا العمل جزئيا من قبل مؤسسة جيمس س. ماكدونيل (# 220020173).

1. خطوط خلية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم استزراع خلايا U87MG دبقي قوارير كبيرة في زراعة الأنسجة مع DMEM - F12 تستكمل مع مصل بقري جنيني من 5 ٪ (FBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم حصاد الخلايا عن طريق غسل القوارير مرتين مع الفوسفات المالحة الدافئة التخزين المؤقت (PBS) وتفرخ لهم عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق مع 10 مل من برنامج تلفزيوني يحتوي على 0.25 ٪ ، والتربسين EDTA 0.05 ٪. حالما يتم رفع الخلايا ، يتم وضعها في أنبوب 50 مل تحتوي على 10 مل من وسائل الإعلام والثقافة ، وطرد (300 X ز لمدة 4 دقائق). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الغسيل ، ومعلق الخلايا بتركيز 10 × 10 6 / مل في وسائل الإعلام والثقافة ، والتي سمحت لتلقيح خلايا 50000 / 5 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتحفظ الخلايا على الثلج حتى الحقن داخل القحف. </li></ol> 2. دليل المسمار داخل القحف انشقاقه يمكن أن يتم هذا الإجراء إلى عدة أيام قبل حقن الخلايا. وقد تم تنفيذ جميع الإجراءات المذكورة هنا تحت ظروف معقمة صارمة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفئران (BALB / ج نو / نو الإناث ؛ 5-6 أسابيع ؛ 18G تقريبا) يتم ترقيم لأغراض تحديد الهوية ، وزنه anesthetised مع حقنة (IP) داخل الصفاق من مزيج من الكيتامين (100 ملغ / كلغ) وزيلازين (5 ملغ / كلغ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ومسحت أسفل الجلد بمحلول اليود ، ويتم إجراء شق صغير (2-3 ملم) على طول الجهة اليمنى من خط الوسط الأمامي وحتى خط interaural. الكشف عن خيوط هذه الاكليلية والسهمي من الجمجمة. يتم وضع bregma عند تقاطع هذه الغرز اثنين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم وضع علامة على إدخال المسمار دليل نقطة عند نقطة 2.5 مم و 1 مم الوحشي الأمامي للbregma. وتقع هذه النقطة مباشرة فوق نواة المذنب 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ومن حفر حفرة ل1 × 1 مم عميقة مع يد معقمة عقد حفر تويست من خلال الجمجمة إلى الجافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وانسحب بعد ذلك المسمار دليل المعقمة التي ستمتد 1.6 مم تحت السطح الجماجم في الجافية في الحفرة مع سائق المسمار حتى الاحمرار مع الجمجمة (الشكل 1A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ذلك يتم وضع مرود معقمة أو دمية المسمار في حفرة بوسط المسمار دليل لإغلاق الفتحة (الشكل 1B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعطى إغلاق الجرح مع لاصق الأنسجة Vetbond (ن بوتيل cyanoacrylate) والفئران داخل الصفاق حقنة من reversine (الحيوانات الصغيرة) (0.1 مل / كغ) وكاربروفين (5 mg/kg/100 ميكرولتر) للوعي. ثم يتم السماح الفئران لاسترداد على حصيرة الاحترار (36 درجة مئوية) والذي يمكن أن يستغرق 20 دقيقة. كثيرا ما يتم رصد الفئران والتي لوحظت خلال هذا الوقت حتى يتم استرداد كامل وعيه. </li></ol> 3. engraftment الخلوية داخل القحف <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم إعداد محقنة معقمة هاميلتون مكبلة من خلال تطبيق حلقة صغيرة من البلاستيك لطرف الإبرة يسمح سوى 2 ملم من إبرة لتوسيع مخرج المسمار دون دليل (1B الشكل). النقطة الأخيرة هي التلقيح لذا 3.5 ملم تحت سطح الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أربعة أيام بعد جراحة دليل المسمار ، ومرة ​​أخرى تخدير الفئران هي على النحو الوارد أعلاه (2.1) ويتم إجراء شق صغير فوق المسمار دليل لإزالة مرود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم ملء الحقنة هاميلتون معقودة مع 5 ميكرولتر من الخلايا تمتزج جيدا مع الحذر بعدم إنشاء أو وضع أي فقاعات هواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تأمين مضخة محقنة لنضح ويتم إدخال الإبرة في دليل المسمار (الشكل 1C). هي التي غرست ثم الخلايا بمعدل 30 ميكرولتر للساعة الواحدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سمح الجهاز الآلي (1D الشكل) لنا لحقن الحيوانات يصل إلى 10 في وقت واحد في معدل تدفق ثابت. ويمكن أيضا أن حقن الخلايا يدويا باستخدام محقنة هاميلتون مكبلة أو بدلا من الحقنة يمكن مقيد اليدين ، في تلميح 200 ميكرولتر ماصة التي تم قلصت بنسبة 3 ملم لتسمح للطرف إبرة لتتجاوز المسمار دليل بمقدار 2 مم. ثم يجب أن يقوم على حقن بوتيرة مطردة ثابتة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند اكتمال التسريب ، تتم إزالة بعناية المحاقن ويتم استبدال مرود المسمار في الدليل. وأغلقت لاصق الجروح وتعطى الفئران أدوية الانتعاش كما كان من قبل (2.7) ، وسمح لاسترداد على حصيرة الاحتباس الحراري. </li></ol> 4. التحدي العلاجية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أربعة أيام من التلقيح U87MG الخلية ، يتم وزن الفئران وقسمت عشوائيا إلى سيطرة الجماعات والعلاج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ونظرا للسيطرة على المجموعة داخل الصفاق (IP) حقن برنامج تلفزيوني (100 ميكرولتر) ، في حين يتم إعطاء مجموعة العلاج من حقنة IP AMG102 (100 ميكروغرام في 100 ميكرولتر من PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تكرار الحقن كل يوم الثاني على التوالي لمدة 14 يوما ، أي ما مجموعه 6 حقن (الشكل 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد حقن النهائي ، ويتم رصد الفئران اليومية وزنه كل يوم الثاني على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وعندما بدأت الفئران لعرض اختلالات عصبية كبيرة (اضطراب التوازن ، والشلل) ، والجفاف ، أو أكثر من 10 ٪ فقدان الوزن أو المحتضرة ، euthanised أنها إنسانية. ثم سجلت هذه نقطة النهاية إنسانية يوما على المنحنى بقاء كابلان ماير. </li></ol> 5. تقييم الكفاءة العلاجية </p&gt; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم إنشاء منحنى بقاء كابلان ماير باستخدام GraphPad بريزم 4.03 ل Windows ؛ GraphPad برامج ، سان دييغو ، كاليفورنيا الولايات المتحدة الأمريكية ، <a href="http://www.graphpad.com">www.graphpad.com</a> 3. وتميزت الوفيات أو euthanizations ونقطة النهاية وسجل الأحداث ك 1. سجلت الحيوانات التي بقيت على قيد الحياة في نهاية التجربة وغير الأحداث وسجل ك 0. </li></ol> 6. ممثل النتائج : بدأت السيطرة على الحيوانات تظهر علامات الاضطراب العصبي وفقدان الوزن 23 يوما بعد التلقيح الأولي من الخلايا. تأخرت كثيرا في هذه المجموعة AMG102 المعالجة لمدة 35 يوما. في الواقع بعد يوم 35 ، 77 ٪ (ن = 7 / 9) كان الموت الرحيم من السيطرة على المجموعة. منحنى البقاء كابلان ماير يدل بوضوح على زيادة كبيرة في البقاء على قيد الحياة في استجابة لAMG102 العلاج (الشكل 3). بعد يوم 70 ، كان 88 ٪ من الفئران التي تم السيطرة الموت الرحيم (ن = 8 / 9) مقارنة ب 37 ٪ (ن = 3 / 8) من AMG102 المجموعة المعالجة. التحليل النسيجي للأدمغة أكد أن جميع الحيوانات 9 في السيطرة على المجموعة الأورام المتقدمة مقارنة ب 3 من 8 AMG102 الفئران المعالجة (الشكل 4). <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig1.jpg" /> الشكل 1 : صورة (أ) يظهر داخل القحف المسمار دليل المتمركزة في منطقة تقع مباشرة فوق نواة المذنب. ثم يتم وضع الحقنة مكبلة هاميلتون (محملة مسبقا مع الخلايا) داخل المسمار دليل حتى 2 ملم إبرة يمتد إلى أبعد من توجيه ويتم حقن الخلايا 3.5 ملم داخل نواة المذنب. تتم إزالة في وقت لاحق المحاقن واستبداله مرود (B). يمكن للجهاز ضخ التلقائي (C) لضخ ما يصل الى 10 حيوانات في وقت واحد. يظهر هنا خمس حقن في وقت واحد (D). <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig2.jpg" /> الشكل 2 : رسم تخطيطي للبروتوكول الدراسة. تم حقن الخلايا في يوم 0 مع العلاج التي تبدأ يوم 4. تلقى حقنة مراقبة الحيوانات من برنامج تلفزيوني (100 ميكرولتر) الملكية الفكرية في حين أن مجموعة العلاج تلقى حقنة من AMG102 (100 μg/100 ميكرولتر) IP. اعطيت هذه الحقن كل يوم الثاني على التوالي لمدة 10 يوما. وقدمت ما مجموعه 6 الحقن. ثم تم رصد الحيوانات لمدة 70 يوما بحثا عن علامات على الاضطرابات العصبية والجسدية. <img alt="الشكل 3" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig3.jpg" /> الشكل 3 : منحنى كابلان ماير بقاء السيطرة وبمقارنة AMG102 الفئران التي عولجت. تم الحصول على البقاء على قيد الحياة كبيرة بعد العلاج مع AMG102 (ع = 0.005). <img alt="الشكل 4" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig4.jpg" /> الشكل 4 : Microphotographs أقسام الدماغ الاكليلية يتظاهرون تطوير ورم في الحيوانات السيطرة (A) وعدم نمو المخ السرطانية في الحيوانات المعالجة AMG102 (B). شريط المقياس هو 1 ملم.

<ol>
	<li>Lal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+implantable+guide-screw+system+for+brain+tumor+studies+in+small+animals.">An implantable guide-screw system for brain tumor studies in small animals.</a> J Neurosurg. 92, 326-333 (2000).</li><li>Jun, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AMG+102,+a+fully+human+anti-hepatocyte+growth+factor/scatter+factor+neutralizing+antibody,+enhances+the+efficacy+of+temozolomide+or+docetaxel+in+U-87+MG+cells+and+xenografts.">AMG 102, a fully human anti-hepatocyte growth factor/scatter factor neutralizing antibody, enhances the efficacy of temozolomide or docetaxel in U-87 MG cells and xenografts.</a> Clin Cancer Res. 13, 6735-6742 (2007).</li><li>Pillay, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plasticity+of+oncogene+addiction:+implications+for+targeted+therapies+directed+to+receptor+tyrosine+kinases.">The plasticity of oncogene addiction: implications for targeted therapies directed to receptor tyrosine kinases.</a> Neoplasia. 11, 448-458 (2009).</li><li>Buchanan, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiosensitization+of+glioma+cells+by+modulation+of+Met+signaling+with+the+hepatocyte+growth+factor+neutralizing+antibody.+AMG102.">Radiosensitization of glioma cells by modulation of Met signaling with the hepatocyte growth factor neutralizing antibody. AMG102.</a> J Cell Mol Med. 15, 1999-2006 (2011).</li><li>Wen, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phase+II+study+evaluating+the+efficacy+and+safety+of+AMG+102+(rilotumumab)+in+patients+with+recurrent+glioblastoma.">A phase II study evaluating the efficacy and safety of AMG 102 (rilotumumab) in patients with recurrent glioblastoma.</a> Neuro Oncol. 13, 437-446 (2011).</li><li>Caretti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+Tumor+Growth+and+Post-Irradiation+Recurrence+in+a+Diffuse+Intrinsic+Pontine+Glioma+Mouse+Model.">Monitoring of Tumor Growth and Post-Irradiation Recurrence in a Diffuse Intrinsic Pontine Glioma Mouse Model.</a> Brain Pathol. 4, 441-451 (2011).</li><li>Jallo, G. I., Volkov, A., Wong, C., Carson, B. S., Penno, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+brainstem+tumor+model:+functional+and+histopathological+characterization.">A novel brainstem tumor model: functional and histopathological characterization.</a> Childs Nerv. Syst. 22, 1519-1525 (2006).</li><li>Johns, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+of+epidermal+growth+factor+receptor-specific+antibodies+against+gliomaxenografts+is+influenced+by+receptor+levels,+activation+status,+and+heterodimerization.">The efficacy of epidermal growth factor receptor-specific antibodies against gliomaxenografts is influenced by receptor levels, activation status, and heterodimerization.</a> Clin Cancer Res. 13, 1911-1925 (2007).</li><li>Scott, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phase+I+clinical+trial+with+monoclonal+antibody+ch806+targeting+transitional+state+and+mutant+epidermal+growth+factor+receptors.">A phase I clinical trial with monoclonal antibody ch806 targeting transitional state and mutant epidermal growth factor receptors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 104, 4071-4076 (2007).</li><li>Niyazi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+options+for+recurrent+malignant+glioma.">Therapeutic options for recurrent malignant glioma.</a> Radiother. Oncol. 98, 1-14 (2011).</li></ol>

وأيد هذا العمل من خلال منحة بحثية من شركة أمجين

المسمار داخل القحف دليل الأسلوب المعروضة هنا يمكن إنشاء السريع واستنساخه من داخل الجمجمة وxenografts في أيدي أحد الفنيين المدربين الحيوانية ، وبسهولة جدا تنفيذ هذا الإجراء من دون الحاجة لجهاز المجسم. لدينا أسلوب يجمع بين استخدام المسمار دليل ، لتحديد دقيق لمنطقة الدماغ الأكثر ملاءمة لتطوير ورم في الجسم الحي ، ومضخة حقن الآلي التي تسمح للتلقيح في وقت واحد تصل إلى 10 حيوانات في وقت واحد. والتعزيز الداخلي المسمار دليل تستغرق أقل من 5 دقائق لأداء. ضخ الآلي من الخلايا في 30 ميكرولتر / ساعة يستغرق سوى 10 دقيقة لحجم 5 ميكرولتر. هذا يضمن جرعات دقيقة بمعدل ثابت ، ويقلل من خطر الطرد من الخلية إلى منطقة خارج الجمجمة بسبب زيادة الضغط داخل الجمجمة. لقد قمنا أيضا هذا الإجراء مع 10 مجلدات ميكرولتر ولم يلاحظ أي نمو الورم خارج الجمجمة بسبب ارتداد الخلوية. كما مضخة التسريب الآلي كما يسمح بالحصول على تلقيح الحيوانات عدة في وقت واحد يمكننا ضخ ما يصل الى 60 ساعة في الحيوانات مقارنة المجسم الداخلي الذي يقتصر على الحيوانات ما يقرب من 15 ساعة. الخطوة الأكثر أهمية في هذا الإجراء هو موقع دليل المسمار في الجمجمة حيث يحدد موقفه النهائي من الموقع الجزء الأكبر الورم. إذا كان الدليل هو المسمار المركزي للغاية ، وسوف يتم حقن الخلايا في المنطقة بين نصفي الدماغ two حين إذا تم وضع دليل للقدما بعيدا ، لن يتم حقن الخلايا في الدماغ على الإطلاق. ولهذا من الضروري أن تكون دقيقة قدر الإمكان في تحديد مكان وجود دليل 2.5 مم و 1 مم الوحشي الأمامي للbregma 1. في هذه الدراسة استخدمت لدينا دليل المسمار الصلب ، وعلى الرغم من مسامير دليل البلاستيك وتتوفر أيضا لتلك التي تتطلب دراسات تصوير الدماغ مثل التصوير بالرنين المغناطيسي أو PET 6. حتى لو كلف مضخة التسريب الآلي باهظة بالنسبة لبعض الجماعات ، لا يزال يتم حقن الخلايا يدويا بسرعة أكبر من النهج المجسم. عموما ، يمكن استخدام هذه السريع ، وطريقة دقيقة وقابلة للتكرار لدراسة دبقي ، نخاعي وأورام جذع الدماغ 7. وقد تم تنفيذ هذا الإجراء على أكثر من 500 فئران المختبرات بين بلدينا مع الوفيات الناجمة عن ردود الفعل غير متوقعة مخدر (&lt;1 ٪). وكانت الفئران التي انسحب مع المسمار دليل وغرست في وقت لاحق مع خلايا لم يموتوا أو تعاني من أي مضاعفات عصبية نتيجة لهذا الإجراء. وقد نجا الحيوانات الماضي 100 يوما من دون أي مضاعفات. وعلى الرغم من أننا يفضل استخدام ماوس أصلع ، ماوس المناعية للخطر مع الشعر مثل SCID تكون مجرد مناسبة شريطة أن إزالة الشعر الجمجمة قبل الجراحة للحفاظ على موقع نظيفة ومنع التداخل مع الشعر المسمار الدليل. هناك العديد من العلاجات الجديدة التي يجري تطويرها حاليا لعلاج دبقي 8-10. وأظهرت مؤخرا أننا يمكن تحت الجلد U87MG xenografts دبقي تثبطها المعاملة مع AMG102 3 ؛ الأجسام المضادة الموجهة إلى أنسنة HGF يخضع حاليا لتقييم سريري في دبقي 5. استخدمنا أسلوب تصف هنا لإنشاء الأورام داخل الجمجمة U87MG في أدمغة الفئران عارية. دراستنا تبين بوضوح مدى فائدة الطريقة ويوضح أن كثيرا من AMG102 يثبط نمو xenografts U87MG مثلي. وسوف نواصل استخدام هذا النموذج لتحديد ما يمكن أن تستخدم العلاجات الأخرى في تركيبة مع AMG102 الحصول على تثبيط أكثر فعالية لنمو الورم.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> DMEM/F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 12634010 </td><td></td></tr><tr><td> FCS </td><td> Bovogen </td><td> SFBS </td><td></td></tr><tr><td> التربسين </td><td> Invitrogen </td><td> 15050065 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td> سيغما </td><td> E6758 </td><td></td></tr><tr><td> BALB / ج نو / نو الفئران </td><td> ARC بيرث </td><td></td><td></td></tr><tr><td> المسمار هولدر </td><td> البلاستيك واحد </td><td> SD - 1 </td><td></td></tr><tr><td> حفر هولدر </td><td> البلاستيك واحد </td><td> DH - 1 </td><td></td></tr><tr><td> قطعة من قماش الدريل القطني </td><td> البلاستيك واحد </td><td> D # 60 </td><td></td></tr><tr><td> المسمار دليل (معدن) </td><td> البلاستيك واحد </td><td> C212SG </td><td></td></tr><tr><td> الدمية المسمار (القلم) </td><td> البلاستيك واحد </td><td> C212SD </td><td></td></tr><tr><td> الحقنة هاميلتون (10 ميكرولتر إبرة عزز 26g) </td><td> نعمة شعبة العلوم ديسكفري </td><td> 80075 </td><td></td></tr><tr><td> مضخة التسريب الدكتوراه 22/2000 </td><td> جهاز هارفارد </td><td> 70-2003 </td><td> اختياري </td></tr><tr><td> Vetbond </td><td> 3M </td><td> 1469SB </td><td></td></tr><tr><td> لوحة الحرارية </td><td> جهاز هارفارد </td><td> 340390 </td><td></td></tr></tbody></table>

a simple guide screw method for intracranial xenograft studies in mice

لتطعيم الخلايا السرطانية البشرية في دماغ الفئران كبت المناعة وسيلة أنشئت لدراسة سرطان الدماغ بما في ذلك ورم أرومي دبقي (دبقي) ونخاعي. نهج المجسم على نطاق واسع يسمح فقط للحقن حيوان واحد في وقت واحد ، هو العمل المكثف ويتطلب معدات متخصصة للغاية. وقد وضعت المسمار دليل الأسلوب ، وضعت في البداية من قبل لال وآخرون ، من 1 إلى القضاء على المجسم إجراءات مرهقة. نحن الآن في وصف المسمار دليل تعديل النهج الذي هو سريع وآمنة على نحو استثنائي ؛ وكلاهما الاعتبارات الأخلاقية الحرجة. على وجه الخصوص ، تتضمن إجراء لدينا الآن مضخة التسريب الذي يسمح تصل إلى 10 الحيوانات ليتم حقنه في نفس الوقت مع الخلايا السرطانية. للتدليل على فائدة هذا الإجراء ، أنشأنا خلايا دبقي U87MG كما xenografts داخل القحف في الفئران التي عولجت بعد ذلك مع AMG102 ؛ وهو جسم الإنسان كاملا الموجهة إلى HGF / عامل مبعثر يخضع حاليا لتقييم السريرية 2-5. الحقن المنتظم للAMG102 مطولة بشكل كبير في بقاء جميع الفئران مع xenografts U87MG داخل القحف ، وأسفرت عن عدد من العلاجات كاملة. هذه الدراسة تبين أن المسمار دليل الأسلوب هو غير مكلفة ، والنهج استنساخه للغاية لإنشاء xenografts داخل القحف. وعلاوة على ذلك ، فإنه يوفر نموذجا الفسيولوجية ذات الصلة للتحقق من صحة الرواية الاستراتيجيات العلاجية لعلاج سرطان المخ.

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice at JoVE.com

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

من أجل تقييم نماذج علاجية جديدة لعلاج دبقي ، والنماذج ذات الصلة الفيزيولوجية ضرورية. نحن الاستعانة بهيئة المسمار دليل زرع الداخلي لإنشاء نماذج طعم أجنبي داخل القحف أن أكثر سرعة وأكثر أمانا من النهج المجسم.

برغي دليل بسيط أسلوب للدراسات طعم أجنبي داخل الجمجمة في الفئران

The grafting of human tumor cells into the brain of immunosuppressed mice is an established method for the study of brain cancers including glioblastoma ...

a-simple-guide-screw-method-for-intracranial-xenograft-studies-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

22.9K Views.  Monash Institute of Medical Research. من أجل تقييم نماذج علاجية جديدة لعلاج دبقي ، والنماذج ذات الصلة الفيزيولوجية ضرورية. نحن الاستعانة بهيئة المسمار دليل زرع الداخلي لإنشاء نماذج طعم أجنبي داخل القحف أن أكثر سرعة وأكثر أمانا من النهج المجسم.

Video: A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

Epidural Intracranial Pressure Measurement in Rats Using a Fiber-optic Pressure Transducer

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and cardiac arrest. This elevation may result in further neurological injury, in the form of transtentorial herniation1,2,3,4, midbrain compression, neurological deficit or increased cerebral infarct2,4. Current therapies are often inadequate to control elevated ICP in the clinical setting5,6,7 . Thus there is a need for accurate methods of ICP measurement in animal models to further our understanding of the basic mechanisms and to develop new treatments for elevated ICP.
In both the clinical and experimental setting ICP cannot be estimated without direct measurement. Several methods of ICP catheter insertion currently exist. Of these the intraventricular catheter has become the clinical 'gold standard' of ICP measurement in humans8. This method involves the partial removal of skull and the instrumentation of the catheter through brain tissue. Consequently, intraventricular catheters have an infection rate of 6-11%9. For this reason, subdural and epidural cannulations have become the preferred methods in animal models of ischemic injury. 
Various ICP measurement techniques have been adapted for animal models, and of these, fluid-filled telemetry catheters10 and solid state catheters are the most frequently used11,12,13,14,15. The fluid-filled systems are prone to developing air bubbles in the line, resulting in false ICP readings. Solid state probes avoid this problem (Figure 1). An additional problem is fitting catheters under the skull or into the ventricles without causing any brain injury that might alter the experimental outcomes. Therefore, we have developed a method that places an ICP catheter contiguous with the epidural space, but avoids the need to insert it between skull and brain. 
An optic fibre pressure catheter (420LP, SAMBA Sensors, Sweden) was used to measure ICP at the epidural location because the location of the pressure sensor (at the very tip of the catheter) was found to produce a high fidelity ICP signal in this model. There are other manufacturers of similar optic fibre technologies13 that may be used with our methodology. Alternative solid state catheters, which have the pressure sensor located at the side of the catheter tip, would not be appropriate for this model as the signal would be dampened by the presence of the monitoring screw. 
Here, we present a relatively simple and accurate method to measure ICP. This method can be used across a wide range of ICP related animal models.

A novel technique to record the pressures within the skull is described. The minimally invasive method uses a fibre-optic pressure sensing system to accurately measure intracranial pressure (ICP) in anaesthetized rats without causing significant brain trauma. The technique may be used in a wide range of experimental models.

فوق الجافية قياس الضغط داخل الجمجمة في الفئران باستخدام محول ضغط الألياف الضوئية

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and ...

A Simple Method of Mouse Lung Intubation

A simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or expensive animal. One of the reasons that this is not done more routinely is that it is relatively difficult, despite there being several published studies that describe ways to achieve it. In this paper we demonstrate a procedure that eliminates one of the major hurdles associated with this intubation, that of visualizing the trachea during the entire time of intubation. The approach uses a 0.5 mm fiberoptic light source that serves as an introducer to direct the intubation cannula into the mouse trachea. We show that it is possible to use this procedure to measure lung mechanics in individual mice over a time course of at least several weeks. The technique can be set up with relatively little expense and expertise, and it can be routinely accomplished with relatively little training. This should make it possible for any laboratory to routinely carry out this intubation, thereby allowing longitudinal studies in individual mice, thereby minimizing the number of mice needed and increasing the statistical power by using each mouse as its own control.

This paper describes a striaghforward and efficient method of intubating mice for pulmonary function measurements or pulmonary instillation, that allows the mice to recover and be studied at later times. The procedure involves an inexpensive fiberoptic light source that directly illuminates the trachea.

طريقة بسيطة لتركيب الانبوبة الرئة ماوس

A  simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would  have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or  ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for personalized medicine after stratification, explaining the current interest in developing a reproducible and low-cost xenotransplant model for this disease. The chick chorioallantoic membrane is a natural immunodeficient host capable of sustaining grafted tissues and cells without species-specific restrictions. In addition, it is easily accessed, manipulated and imaged using optical and fluorescence stereomicroscopy. Histology further allows detailed analysis of heterotypic cellular interactions.
This protocol describes in detail the in ovo grafting of the chorioallantoic membrane with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines (Saos-2 and SW1353). The chick survival rates are up to 75%. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior. For localized grafting of single cell suspensions, ECM gel provides significant advantages over inert containment materials. The Ki67 proliferation index is related to the distance of the cells from the surface of the CAM and the duration of application on the CAM, the latter determining a time frame for the addition of therapeutic products.

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The in ovo chorioallantoic membrane (CAM) is grafted with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior.

ال<em&gt; في البيضة</em&gt; CAM-مقايسة باعتبارها Xenograftmodel عن الورم اللحمي

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

الحقن الشريان السباتي لوأضافا الدوائية وتحليل Taxanes في الفئران

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

A Simple Critical-sized Femoral Defect Model in Mice

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all limb bone fractures fail to heal completely due to the extent of the trauma, disease, or age of the patient. Our ability to improve bone regenerative strategies is critically dependent on the ability to mimic serious bone trauma in test animals, but the generation and stabilization of large bone lesions is technically challenging. In most cases, serious long bone trauma is mimicked experimentally by establishing a defect that will not naturally heal. This is achieved by complete removal of a bone segment that is larger than 1.5 times the diameter of the bone cross-section. The bone is then stabilized with a metal implant to maintain proper orientation of the fracture edges and allow for mobility. 
Due to their small size and the fragility of their long bones, establishment of such lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. As such, long bone defect models are confined to rats and larger animals. Nevertheless, mice afford significant research advantages in that they can be genetically modified and bred as immune-compromised strains that do not reject human cells and tissue.
Herein, we demonstrate a technique that facilitates the generation of a segmental defect in mouse femora using standard laboratory and veterinary equipment. With practice, fabrication of the fixation device and surgical implantation is feasible for the majority of trained veterinarians and animal research personnel. Using example data, we also provide methodologies for the quantitative analysis of bone healing for the model.

Animal models are frequently employed to mimic serious bone injury in biomedical research. Due to their small size, establishment of stabilized bone lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. Herein, we describe a simple method for establishing and analyzing experimental femoral defects in mice.

بسيطة الحرجة الحجم فخذي عيب النموذجي في الفئران

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all ...

Utilizing an Orally Dissolving Strip for Pharmacological and Toxicological Studies: A Simple and Humane Alternative to Oral Gavage for Animals

Prior to testing novel therapeutics in humans, short and long term preclinical (i.e., animal), repetitive pharmacological and toxicological testing is required. In most cases, the preferred route of administration is via oral delivery. At the present time, oral delivery is mostly accomplished using an oral gavage procedure, in part, because it can achieve consistent and precise dosing in the animal model. Although this method is well established it does have complications that can result in a high rate of animal attrition. To this end, the procedure introduced here describes an alternative to the oral gavage method in which the desired drug is incorporated into a tastant, orally dissolving strip (ODS) that can simply be presented to the test animal where it is then rapidly taken up with minimal manipulation of the test subject. Herein, we demonstrate that preclinical, oral drug delivery using the ODS method represents a safe, convenient, and humane alternative to oral gavage.

The following protocol describes a novel method for chronic oral drug administration using an orally dissolving strip (ODS) in lieu of the more commonly used oral gavage method. We demonstrate that preclinical, oral drug delivery using the ODS method represents a safe, convenient, and humane alternative to oral gavage.

استخدام نظام شفويا الذوبان قطاع الدراسات الدوائية والسمية: بديل بسيط وإنساني إلى الفم بالتزقيم للحيوانات

Prior to testing novel therapeutics in humans, short and long term preclinical (i.e., animal), repetitive pharmacological and toxicological testing is ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity is a commonly used model to study both acute lung injury and fibrosis, and multiple methods have been developed for administering bleomycin (and other toxic agents) into the lungs. However, many of these approaches, such as transtracheal instillation, have inherent drawbacks, including the need for strong anesthetics and survival surgery. This paper reports a quick, reproducible method of intratracheal intubation that involves mild inhaled anesthesia, visualization of the trachea, and the use of a surrogate spirometer to confirm exposure. As a proof of concept, 8-12 week old C57BL/6 mice were administered either 2.0 U/kg of bleomycin or an equivalent volume of PBS, and both damage and fibrotic endpoints were measured post-exposure. This procedure allows researchers to treat a large cohort of mice in a relatively short period with little expense and minimal post-procedure care.

This article presents a rapid and simple method for administering bleomycin directly into the mouse trachea via intubation. Key advantages of this method are that it is highly reproducible, easy to master, and does not require specialized equipment or lengthy recovery times.

افضل طريقة لرابيد تنبيب القصبة الهوائية في الفئران

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. It has become important to measure a person's activities in daily life, and not just measure their capacity for activity in the structured environment of a clinic or laboratory. A wearable sensor that is now enabling measurement of daily movement is the accelerometer. Accelerometers are commercially-available devices resembling large wrist watches that can be worn throughout the day. Data from accelerometers can quantify how the limbs are engaged to perform activities in peoples' homes and communities. This report describes a methodology to collect accelerometry data and turn it into clinically-relevant information. First, data are collected by having the participant wear two accelerometers (one on each wrist) for 24 h or longer. The accelerometry data are then downloaded and processed to produce four different variables that describe key aspects of upper limb activity in daily life: hours of use, use ratio, magnitude ratio, and the bilateral magnitude. Density plots can be constructed that visually represent the data from the 24 h wearing period. The variables and their resultant density plots are highly consistent in neurologically-intact, community-dwelling adults. This striking consistency makes them a useful tool for determining if upper limb daily performance is different from normal. This methodology is appropriate for research studies investigating upper limb dysfunction and interventions designed to improve upper limb performance in daily life in people with stroke and other patient populations. Because of its relative simplicity, it may not be long before it is also incorporated in clinical neurorehabilitation practice.

This protocol describes a method to quantify upper limb performance in daily life using wrist-worn accelerometers.

A طريقة لقياس أداء الطرف العلوي في الحياة اليومية عن طريق التسارع

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Observational Study Protocol for Repeated Clinical Examination and Critical Care Ultrasonography Within the Simple Intensive Care Studies

Longitudinal evaluations of critically ill patients by combinations of clinical examination, biochemical analysis and critical care ultrasonography (CCUS) may detect adverse events of interventions such as fluid overload at an early stage. The Simple Intensive Care Studies (SICS) is a research line that focuses on the prognostic and diagnostic value of combinations of clinical variables.
The SICS-I specifically focused on the use of clinical variables obtained within 24 h of acute admission for prediction of cardiac output (CO) and mortality. Its sequel, SICS-II, focuses on repeated evaluations during ICU admission. The first clinical examination by trained researchers is performed within 3 h after admission consisting of physical examination and educated guessing. The second clinical examination is performed within 24 h after admission and includes physical examination and educated guessing, biochemical analysis and CCUS assessments of heart, lungs, inferior vena cava (IVC) and kidney. This evaluation is repeated at days 3 and 5 after admission. CCUS images are validated by an independent expert, and all data is registered in an online secured database. Follow-up at 90 days includes registration of complications and survival status according to patient&#39;s medical charts and the municipal person registry. The primary focus of SICS-II is the association between venous congestion and organ dysfunction.
The purpose of publishing this protocol is to provide details on the structure and methods of this on-going prospective observational cohort study allowing answering multiple research questions. The design of the data collection of combined clinical examination and CCUS assessments in critically ill patients are explicated. The SICS-II is open for other centers to participate and is open for other research questions that can be answered with our data.

Structured protocols are necessary to provide answers on research questions in critically ill patients. The Simple Intensive Care Studies (SICS) provides an infrastructure for repeated measurements in critically ill patients including clinical examination, biochemical analysis and ultrasonography. SICS projects have specific focus but the structure is flexible to other investigations.

بروتوكول الدراسة الرصدية للفحص السريري المتكرر والحرجة العناية بالموجات فوق الصوتية داخل الدراسات بسيطة من العناية المركزة

Longitudinal evaluations of critically ill patients by combinations of clinical examination, biochemical analysis and critical care ultrasonography (CCUS) ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as cholangiocytes, myofibroblasts, progenitors and inflammatory cells also indicate chronic liver damage, tissue remodeling and disease progression. In this protocol, we describe a simple high-throughput approach for calculating changes in the cellular composition of the liver that are associated with injury, chronic disease and cancer. We show how information extracted from two-dimensional (2D) tissue sections can be used to quantify and calibrate hepatocyte nuclear ploidy within a sample and enable the user to locate specific ploidy subsets within the liver in situ. Our method requires access to fixed/frozen liver material, basic immunocytochemistry reagents and any standard high-content imaging platform. It serves as a powerful alternative to standard flow cytometry techniques, which require disruption of freshly collected tissue, loss of spatial information and potential disaggregation bias.

We present a robust, cost-effective, and flexible method for measuring changes in hepatocyte number and nuclear ploidy within fixed/cryopreserved tissue samples that does not require flow cytometry. Our approach provides a powerful sample-wide signature of liver cytology ideal for tracking the progression of liver injury and disease.

طريقة عالية الإنتاجية في الموقع لتقدير البليدي النووي الكبدي في الفئران

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...