وأيد هذا العمل من قبل OTKA (المجرية صندوق البحث العلمي) D45933 ، T049621 ، تيت (المجرية للعلوم والتكنولوجيا) A4/04 ، Arg-17/2006 والخطيئة ، بولياي ، والزمالات Öveges TÁMOP 4.2.2-08 / 1 / KMR - 2008 - 0004 و4.2.1 / B 09/1/KMR-2010-0001. OTKA 83803. نود أن نشكر Gesztes وليام لتوفير الصوت عبر.

1. إعداد الخلايا cardiomyoblast H9c2 وقد تم الحصول على الفئران cardiomyoblasts H9c2 من ATCC (فيسيل ، ألمانيا) ، وتوسعت في ارتفاع نسبة الجلوكوز (4.5 غرام / لتر) DMEM تحتوي على 10 ٪ مصل بقري جنيني ، 4 مم L - الجلوتامين ، 100 U / البنسلين مل و 100 ميكروغرام الستربتوميسين / مل. مشتق الخلية myoblast H9c2 الخط من قلب الفئران الجنينية ، يتم استخدامه بمثابة نموذج في المختبر لكلا العضلات والهيكل العظمي والقلب 8،9. إعداد 12 لوحة جيدا H9c2 الخلايا : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة مستنبت من طبق بيتري H9c2 من الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا مرتين مع PBS 5 مل وهضم 2-3 مع التربسين 0.05 ٪ مل / EDTA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان طبق بتري لمدة 5 دقائق في الحاضنة 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمنع التربسين مع 10 مل مستنبت DMEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور باستمرار في 1200 دورة في الدقيقة الخلايا لمدة 8 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد إزالة طاف ، والخلايا في 1 مل resuspend مستنبت DMEM والخلايا مع عدد عدادة الكريات به التريبان الأزرق تلطيخ.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البذور 30000 H9c2 الخلايا في DMEM 2 مل لكل بئر في 12 لوحة جيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع لوحة في 37 درجة مئوية حاضنة CO 2 لمدة 24 ساعة. </li></ol> 2. محاكاة نقص التروية / ضخه وكان نقص التروية / ضخه محاكاة في المختبر قبل تنفيذ الحرمان الأوكسجين الجلوكوز (OGD) على الثقافات H9c2 الخلية. تم تنفيذ هذا الإجراء على مسرح المجهر مبائر زايس مع حضانة PeCon نظام الخلية (Erbach ، ألمانيا) السماح للمراقبة من خلال خلايا OGD. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المتوسطة التي تطلع من 12 لوحة جيدا H9c2 الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أضف 3 مل المتوسطة الجلوكوز مجانا لكل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع لوحة في الخلية نظام الحضانة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء غاز النيتروجين لتطهير الأوكسجين من نظام الحضانة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انتظر حتى يصل إلى مستوى الأكسجين 0.5 ٪ ثم بدء تشغيل الموقت. الأكسجين 0.5 ٪ يعني حوالي 3 ملم زئبقي التوتر الجزئي. تخضع الخلايا إلى 150 دقيقة من نقص التروية المحاكاة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نهاية محاكاة نقص التروية ، وإزالة الجلوكوز المتوسط ​​خالية من الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 مل ماصة مستنبت الطبيعي أن الآبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 12 لوحة مكان جيد لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية حاضنة ثاني أكسيد الكربون 2 ، وهذا هو &quot;فترة ضخه&quot;. </li></ol> 3. إعداد الخلايا الجذعية الوسيطة الانقاذ لقد التقطت نخاع العظام من أصل الإنسان في T75 القوارير والمخففة مع متوسطة Dulbecco في التعديل النسر (DMEM) مستنبت تحتوي على 10 ٪ الجنين العجل المصل (FCS) ، و 100 البنسلين يو / مل و 100 الستربتوميسين ميكروغرام / لتر ، 4 ملم لام الجلوتامين و 1 غرام / لتر غلوكوز. وحضنت والقوارير على 37 درجة مئوية في جو كامل من ثاني مرطب 5 2 ٪ لمدة 3 أيام. بعد فترة حضانة المرض والقضاء على BMSCs انضمت إلى السطح من قوارير والعناصر المتبقية من نخاع العظام من خلال برنامج تلفزيوني مع الغسيل. كانت BMSCs تستخدم ما بين 1 و 5 فقرات في التجارب. في الاتساعوأكد tity من الخلايا وجود نسب محددة علامات سطح الخلية مع التدفق الخلوي. وقد تم التحقيق علامات سطح لدم عدد الأسطر المحددة (CD34 ، CD45) ، وعلامات سطح الوسيطة (CD73 ، CD90 ، وCD105 CD166). خلال محاكاة نقص التروية ، وإعداد الانقاذ الخلايا الجذعية الوسيطة للزرع. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يخفف من صبغة الفلورسنت Vybrant فعلت في نسبة 1:200 في مستنبت DMEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح متوسطة من خلايا الانقاذ وإضافة 300 DMEM ميكرولتر مع Vybrant فعلت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان طبق بتري لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية حاضنة 2 CO. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة مستنبت من طبق بيتري من الخلايا الجذعية الوسيطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا مرتين مع PBS 5 مل وهضم 2-3 مع التربسين 0.05 ٪ مل / EDTA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان طبق بتري لمدة 5 دقائق في الحاضنة 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمنع التربسين مع 10 مل مستنبت DMEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور باستمرار في 1200 دورة في الدقيقة الخلايا لمدة 8 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد إزالة سوبrnatant ، resuspend الخلايا في 1 مل مستنبت DMEM والخلايا مع عدد عدادة الكريات به التريبان الأزرق تلطيخ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 30 دقيقة على نهاية ضخه إضافة 20000 الخلايا الجذعية الوسيطة لكل بئر لmyoblasts H9c2 تال للإقفار القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شارك في وضع الثقافة من الخلايا إلى 37 درجة مئوية حاضنة CO 2 لمدة 24 ساعة. </li></ol> 4. التحليل المجهري مع مبائر بعد الإصابة نقص التروية / ضخه المحاكاة ، يتم تحضين الخلايا في مستنبت العادي لمدة 24 ساعة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 24 ساعة غسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وصمة عار على الخلايا الحية في حل 500 / قتيلا ميكرولتر الصبغة لمدة 30 دقيقة (5 calcein نانومتر و 400 نانومتر إيثيديوم homodimer - 2 - في برنامج تلفزيوني) (5x10 4 خلية / مل). </li></ol> يمكن إجراء تقييم الصور مبائر للخلايا الحية والميتة التي اختارها التشكل ومضان مع برنامج ImageJ (المعاهد الوطنية للصحة ، الولايات المتحدة). في حالة جس الثقافات ، يمكن التمييز بين اللجان الدائمة من خلايا H9c2 بسبب وضع العلامات الخاصة Vybrant هل ​​الخلية. ويمكن تقييم نسبة الخلايا الميتة في 4 مجالات مستقلة عن عرض (الهدف 10X) لكل ثقافة بطريقة عمياء 10. ويمكن أيضا H9c2 cardiomyoblasts مثقف على 42 ملم coverslips الزجاج يتم التحقيق مع مرور الوقت المجهري الفيديو أثناء وبعد نقص التروية / ضخه الاصابة باستخدام نظام حضانة الخلية المجهر متحد البؤر. ويمكن دراسة الخلية الى خلية التفاعلات مثل انصهار الخلية وتشكيل الأنابيب النانوية بين الخلايا مع مرور الوقت. 5. التحليل مع التدفق الخلوي بعد الإصابة نقص التروية / ضخه المحاكاة ، يتم تحضين الخلايا في مستنبت العادي لمدة 24 ساعة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 24 ساعة ، والحصاد وسائل الإعلام الثقافة. من المهم جدا لجمع مستنبت أيضا لأن بعض الخلايا الميتة يمكن أن يكون بمعزل عن الثقافة السطحية طبق خلال 24 ساعة incubaنشوئها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني وهضم مع 0.05 ٪ التربسين - EDTA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمنع التربسين مع مستنبت DMEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور باستمرار الخلايا والمتوسطة الثقافة في 1200 دورة في الدقيقة المقطوع (حوالي 150 200G) لمدة 8 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل طاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعليق على الخلايا الحية في حل 500 / قتيلا ميكرولتر الصبغة لمدة 30 دقيقة (5 calcein نانومتر و 400 نانومتر إيثيديوم homodimer - 2 - في برنامج تلفزيوني) (5x10 4 خلية / مل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الخلايا إلى أنابيب التدفق الخلوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء CellQuest Pro البرمجيات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإعداد لقياس تدفق عداد الكريات ، وإعداد عينات من السيطرة الخلايا الحية والميتة. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة H9c2 الخلايا في كثافة 3x10 4 في 12 لوحات جيدا كما هو موضح في النقطة 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الضوابط خلية حية واحدة مع trypsinisation كما هو موضح في النقطة 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الضوابط الخلية برصاص العلاج مع 10 ميكرومتر H 2 O 2 لمدة 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد trypsinisation ، resuspenد يعيش والضوابط خلية ميتة في 500 ميكروليتر محلول الصبغة العيش / قتلى (5 نانومتر calcein - AM و 400 نانومتر إيثيديوم homodimer - 2 - في برنامج تلفزيوني). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ينبغي تعديل الصك بغية ضبط الخلايا الحية هي ايجابية وcalcein إيثيديوم homodimer سلبية ، في حين أن الخلايا الميتة هي سلبية وcalcein إيثيديوم homodimer إيجابية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن التعبير عن النسبة المئوية لسكان تلك المناطق كما لا يمكن أن يؤديها الحانات في الرسم البياني والتحليل الإحصائي على هذه القيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس مختلف المجموعات التجريبية. </li></ol> 6. ممثل النتائج : وأظهرت النتائج أن لدينا وأضاف الخلايا الجذعية الوسيطة يمكن أن يحسن البقاء على قيد الحياة من خلايا القلب تال للإقفار. وكشفت الصور المجهري مبائر مباشرة من خلية إلى خلية التفاعل ، مثل اتصال الغشاء الجزئي أو نانوتيوب بين الخلايا ، التي تلعب على الارجح دورا هاما في حماية احظ 10. هذه الألياف تمتد عبر مسافات د الخلية عدةوكانت iameters ، وبأقطار ما بين 200 و 500 نانومتر (السهام البيضاء). <img src="/files/ftp_upload/3575/3575fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. تشكيل أنابيب بين الخلايا. وحظ تشكيل الأنابيب الجزيئية (أبيض السهم) بين cardiomyoblasts ديو Vybrant وصفت وصفت Vybrant هل الخلايا الجذعية الوسيطة. وأظهر تحليل التدفق الخلوي للسكان بالبقاء على قيد الحياة وcardiomyoblasts نخرية والخلايا الجذعية الوسيطة. ومن المثير للاهتمام ، لاحظنا أيضا خلية cardiomyoblast الثالثة ، &#39;جرح&#39; السكان الذي يتضمن calcein لكن الوارد أيضا مؤشر على الخلايا الميتة ، إيثيديوم homodimer (الشكل 2). <img src="/files/ftp_upload/3575/3575fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. ممثل الدوت مؤامرة من السكان مختلفة من الخلايا بعد إقفار المحاكاة. تقييم تجارب عدة شوالأربعاء أنه إضافة إلى الخلايا الجذعية الوسيطة cardiomyoblast H9c2 تال للإقفار زيادة كبيرة في نسبة الخلايا الحية مقارنة myoblasts القلب المثقف وحده ، بعد نقص التروية (الشكل 3). <img src="/files/ftp_upload/3575/3575fig3.jpg" alt="الشكل 3" /> الشكل 3. وخفضت بشكل كبير من تأثير العلاج على الخلايا الجذعية cardiomyoblasts تال للإقفار النسبة المئوية للنقص تروية الخلايا الحية بعد مقارنة محاكاة للتحكم (عنصر تحكم نموذج مقابل IR : 90.36 ± 2.60 مقابل 10.52 ± 0.48 *** P&gt; 0.001). والتي زادت بعد إضافة الخلايا الجذعية الوسيطة (IR الأشعة تحت الحمراء + نموذج مقابل BMSC : 10.52 ± 0.48 مقابل 25.21 ± 2.13 ، *** P&gt; 0.001). تمثل البيانات يعني ± SEM. وأجري التحليل الإحصائي للبيانات باستخدام الخروج في اتجاه واحد تحليل التباين مع آخر توكي في المقارنة متعددة مخصصة اختبار.

<ol>
	<li>Dimmeler, S., Burchfield, J., Zeiher, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-Based+Therapy+of+Myocardial+Infarction.">Cell-Based Therapy of Myocardial Infarction.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, (2008).</li><li>Kim, S. U., de Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-based+cell+therapy+in+neurological+diseases:+A+review.">Stem cell-based cell therapy in neurological diseases: A review.</a> Journal of Neuroscience Research. 87, 2183-21 (2009).</li><li>Lee, K., Chan, C. K., Patil, N., Goodman, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+therapy+for+bone+regeneration-Bench+to+bedside.">Cell therapy for bone regeneration-Bench to bedside.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part B: Applied Biomaterials. 89, 252-25 (2009).</li><li>Gaipa, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GMP-based+CD133++cells+isolation+maintains+progenitor+angiogenic+properties+and+enhances+standardization+in+cardiovascular+cell+therapy.">GMP-based CD133+ cells isolation maintains progenitor angiogenic properties and enhances standardization in cardiovascular cell therapy.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 14, 1619-1619 (2010).</li><li>Trounson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+perspectives+in+human+stem+cell+therapeutic+research.">New perspectives in human stem cell therapeutic research.</a> BMC medicine. 7, 29-29 (2009).</li><li>Mazhari, R., Hare, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+action+of+mesenchymal+stem+cells+in+cardiac+repair:+potential+influences+on+the+cardiac+stem+cell+niche.">Mechanisms of action of mesenchymal stem cells in cardiac repair: potential influences on the cardiac stem cell niche.</a> Nat Clin Pract Cardiovasc Med. 4, S21-S21 (2007).</li><li>Kimes, B. W., Brandt, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+a+clonal+muscle+cell+line+from+rat+heart.">Properties of a clonal muscle cell line from rat heart.</a> Experimental Cell Research. 98, 367-367 (1976).</li><li>Sardao, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+imaging+of+H9c2+myoblasts+exposed+to+tert-butylhydroperoxide--characterization+of+morphological+features+of+cell+death.">Vital imaging of H9c2 myoblasts exposed to tert-butylhydroperoxide--characterization of morphological features of cell death.</a> BMC Cell Biol. 8, 11-11 (2007).</li><li>Hescheler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological,+biochemical,+and+electrophysiological+characterization+of+a+clonal+cell+(H9c2)+line+from+rat+heart.">Morphological, biochemical, and electrophysiological characterization of a clonal cell (H9c2) line from rat heart.</a> Circulation research. 69, 1476-1476 (1991).</li><li>Cselenyak, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+rescue+cardiomyoblasts+from+cell+death+in+an+in+vitro+ischemia+model+via+direct+cell-to-cell+connections.">Mesenchymal stem cells rescue cardiomyoblasts from cell death in an in vitro ischemia model via direct cell-to-cell connections.</a> BMC Cell Biol. 11, 29-29 (2010).</li><li>Sauvant, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implementation+of+an+in+vitro+model+system+for+investigation+of+reperfusion+damage+after+renal+ischemia.">Implementation of an in vitro model system for investigation of reperfusion damage after renal ischemia.</a> Cell Physiol Biochem. 24, 567-567 (2009).</li><li>Namas, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-Induced+Overexpression+of+BNIP3+is+Not+Dependent+on+Hypoxia-Inducible+Factor+1alpha+in+Mouse+Hepatocytes.">Hypoxia-Induced Overexpression of BNIP3 is Not Dependent on Hypoxia-Inducible Factor 1alpha in Mouse Hepatocytes.</a> Shock. 36, 196-196 (2011).</li><li>Cao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia/Reoxygenation+Up-Regulated+the+Expression+of+Death+Receptor+5+and+Enhanced+Apoptosis+in+Human+Hepatocyte+Line.">Hypoxia/Reoxygenation Up-Regulated the Expression of Death Receptor 5 and Enhanced Apoptosis in Human Hepatocyte Line.</a> Transplantation Proceedings. 38, 2207-2207 (2006).</li><li>Meloni, B. P., Meade, A. J., Kitikomolsuk, D., Knuckey, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+neuronal+cell+death+in+acute+and+delayed+in+vitro+ischemia+(oxygen-glucose+deprivation)+models.">Characterisation of neuronal cell death in acute and delayed in vitro ischemia (oxygen-glucose deprivation) models.</a> Journal of Neuroscience Methods. 195, 67-67 (2011).</li><li>Mimeault, M., Hauke, R., Batra, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells:+a+revolution+in+therapeutics--recent+advances+in+stem+cell+biology+and+their+therapeutic+applications+in+regenerative+medicine+and+cancer+therapies.">Stem cells: a revolution in therapeutics--recent advances in stem cell biology and their therapeutic applications in regenerative medicine and cancer therapies.</a> Clinical Pharmacology &#38; Therapeutics. 82, 252-252 (2007).</li><li>Angoulvant, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell+conditioned+media+attenuates+in+vitro+and+ex+vivo+myocardial+reperfusion+injury.">Mesenchymal stem cell conditioned media attenuates in vitro and ex vivo myocardial reperfusion injury.</a> J Heart Lung Transplant. 30, 95-95 (2010).</li><li>Lim, Y. J., Zheng, S., Zuo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+Preconditions+Purkinje+Cells+against+Cell+Death+under+In+Vitro+Simulated+Ischemia/Reperfusion+Conditions.">Morphine Preconditions Purkinje Cells against Cell Death under In Vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Conditions.</a> Anesthesiology. 100, 562-562 (2004).</li><li>Guo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen-receptor-mediated+protection+of+cerebral+endothelial+cell+viability+and+mitochondrial+function+after+ischemic+insult+in+vitro.">Estrogen-receptor-mediated protection of cerebral endothelial cell viability and mitochondrial function after ischemic insult in vitro.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 30, 545-545 (2010).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

البروتوكول هو أظهر في النهج المختبر لقضية أكثر تعقيدا بكثير من العلاج بالخلايا الجذعية في عضلة القلب احتشاء ، مع مزايا وعيوب كل نموذج من هذا القبيل. من الواضح أنه لا يمكن تعكس المعقدة (المناعية مثلا) الأحداث التي تجري خلال احتشاء عضلة القلب ، وبعد ولكن يمكن التركيز عل...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> calcein - AM </td><td> المسابر الجزيئية </td><td> L3224 ، C3099 </td><td> <a href="http://www.invitrogen.com">http://www.invitrogen.com</a> </td></tr><tr><td> إيثيديوم homodimer - 2 </td><td> المسابر الجزيئية </td><td> L3224 ، E3599 </td><td> <a href="http://www.invitrogen.com">http://www.invitrogen.com</a> </td></tr><tr><td> هل Vybrant </td><td> المسابر الجزيئية </td><td> V22887 </td><td> <a href="http://www.invitrogen.com">http://www.invitrogen.com</a> </td></tr></tbody></table> الجدول 1. الكواشف. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم المعدات </td><td> شركة </td><td> تعليق (اختياري) </td></tr><tr><td> PeCon نظام حضانة للخلية المجاهر زايس </td><td> PeCon محدودة </td><td> <a href="http://www.pecon.biz/">www.pecon.biz/</a> </td></tr></tbody></table> الجدول 2. تجهيزات.

stem cell transplantation in an in vitro simulated ischemia/reperfusion model

بروتوكولات زرع الخلايا الجذعية تجد طريقها إلى الممارسة السريرية 1،2،3. الحصول على أفضل النتائج ، مما يجعل من البروتوكولات أكثر قوة ، وإيجاد مصادر جديدة للخلايا زرع هي محور الأبحاث الحديثة 4،5. التحقيق في فعالية العلاج بالخلايا ليست مهمة سهلة وهناك حاجة إلى أدوات جديدة للتحقيق في الآليات التي تشارك في عملية المعالجة 6. صممنا على بروتوكول التجريبي لنقص التروية / ضخه من أجل السماح للمراقبة الاتصالات الخلوية وآليات التحت خلوية حتى أثناء نقص التروية / ضخه الاصابة وبعد زرع الخلايا الجذعية ، وتقييم مدى فعالية العلاج بالخلايا. ووضعت الخلايا cardiomyoblast H9c2 على لوحات ثقافة الخلية 7،8. وكان نقص التروية محاكاة مع 150 دقيقة في المتوسط ​​الجلوكوز الحرة مع مستوى الاوكسجين أقل من 0.5 ٪. ثم ، أعيد إحياء وسائل الاعلام العادية ومستويات الأكسجين إلى محاكاة ضخه. بعد الحرمان من الأوكسجين الجلوكوز ،تم علاج الخلايا التالفة مع زرع النخاع العظمي المسمى حقوق الإنسان مستمد الخلايا الجذعية الوسيطة عن طريق إضافتها إلى الثقافة. ويفضل الخلايا الجذعية الوسيطة في التجارب السريرية لأنها متاحة بسهولة مع الحد الأدنى من الجراحة ، يمكن أن تتوسع بسهولة وذاتي. بعد 24 ساعة من زراعة المشتركة ، تم صبغ الخلايا مع calcein وإيثيديوم homodimer إلى التفريق بين الخلايا الحية والميتة. يسمح لنا هذا الإعداد للتحقيق في الاتصالات بين الخلايا باستخدام المجهر الفلورسنت مبائر ولقياس معدل البقاء على قيد الحياة من خلايا تال للإقفار بواسطة التدفق الخلوي. وأظهر الفحص المجهري مبائر التفاعلات بين السكان الخلية اثنين من الممثلين والانصهار وتشكيل خلية من الأنابيب النانومترية بين الخلايا. وكشف تحليل التدفق الخلوي 3 مجموعات من الخلايا التالفة والتي يمكن رسم على رسم بياني وتحليلها إحصائيا. ويمكن تحقيق هذه التجمعات السكانية بشكل منفصل والاستنتاجات التي يمكن استخلاصها من هذه البيانات على فعالية محاكاةالعلاجية النهج.

Watch this Scientific Journal Video about Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model at JoVE.com

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

نحن لشرح كيفية انشاء<em&gt; في المختبر</em&gt; نقص التروية / ضخه النموذجية وكيفية تقييم تأثير العلاج بالخلايا الجذعية على خلايا القلب تال للإقفار.

زرع الخلايا الجذعية في في المختبر مقلد نقص التروية / إعادة إشباع الخلايا النموذجي

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

stem-cell-transplantation-an-vitro-simulated-ischemiareperfusion

Research

JoVE Journal

Medicine

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

14.0K Views.  Semmelweis University. نحن لشرح كيفية انشاء في المختبر نقص التروية / ضخه النموذجية وكيفية تقييم تأثير العلاج بالخلايا الجذعية على خلايا القلب تال للإقفار.

Video: Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus. For example, in utero transplantation (IUT) of hematopoietic stem cells has been used to successfully treat patients with severe combined immunodeficiency.1,2 In several other conditions, however, IUT has been attempted without success.3 Given these mixed results, the availability of an efficient non-human model to study the biological sequelae of stem cell transplantation and gene therapy is critical to advance this field. We and others have used the mouse model of IUT to study factors affecting successful engraftment of in utero transplanted hematopoietic stem cells in both wild-type mice4-7 and those with genetic diseases.8,9 The fetal environment also offers considerable advantages for the success of in utero gene therapy. For example, the delivery of adenoviral10, adeno-associated viral10, retroviral11, and lentiviral vectors12,13 into the fetus has resulted in the transduction of multiple organs distant from the site of injection with long-term gene expression. in utero gene therapy may therefore be considered as a possible treatment strategy for single gene disorders such as muscular dystrophy or cystic fibrosis. Another potential advantage of IUT is the ability to induce immune tolerance to a specific antigen. As seen in mice with hemophilia, the introduction of Factor IX early in development results in tolerance to this protein.14 
In addition to its use in investigating potential human therapies, the mouse model of IUT can be a powerful tool to study basic questions in developmental and stem cell biology. For example, one can deliver various small molecules to induce or inhibit specific gene expression at defined gestational stages and manipulate developmental pathways. The impact of these alterations can be assessed at various timepoints after the initial transplantation. Furthermore, one can transplant pluripotent or lineage specific progenitor cells into the fetal environment to study stem cell differentiation in a non-irradiated and unperturbed host environment.
The mouse model of IUT has already provided numerous insights within the fields of immunology, and developmental and stem cell biology. In this video-based protocol, we describe a step-by-step approach to performing IUT in mouse fetuses and outline the critical steps and potential pitfalls of this technique.

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The mouse model of in utero transplantation is a versatile tool that can be used to study the potential clinical applications of stem cell transplantation and gene therapy in the fetus. In this protocol, we present a general approach to performing this technique

نموذج الفأر من في الرحم زراعة

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules that regulate HSCs. In these transplant model systems, the function of HSCs is determined by the ability of these cells to engraft and reconstitute lethally irradiated recipient mice. Commonly, the donor cell contribution/engraftment is measured by antibodies to donor- specific cell surface proteins using flow cytometry. However, this method heavily depends on the specificity and the ability of the cell surface marker to differentiate donor-derived cells from recipient-originated cells, which may not be available for all mouse strains. Considering the various backgrounds of genetically modified mouse strains in the market, this cell surface/ flow cytometry-based method has significant limitations especially in mouse strains that lack well-defined surface markers to separate donor cells from congenic recipient cells. Here, we reported a PCR-based technique to determine donor cell engraftment/contribution in transplant recipient mice. We transplanted male donor bone marrow HSCs to lethally irradiated congenic female mice. Peripheral blood samples were collected at different time points post transplantation. Bone marrow samples were obtained at the end of the experiments. Genomic DNA was isolated and the Y chromosome specific gene, Zfy1, was amplified using quantitative Real time PCR. The engraftment of male donor-derived cells in the female recipient mice was calculated against standard curve with known percentage of male vs. female DNAs. Bcl2 was used as a reference gene to normalize the total DNA amount. Our data suggested that this approach reliably determines donor cell engraftment and provides a useful, yet simple method in measuring hematopoietic cell reconstitution in murine bone marrow transplantation models. Our method can be routinely performed in most laboratories because no costly equipment such as flow cytometry is required.

Determining donor cell engraftment presents a challenge in mouse bone marrow transplant models that lack well-defined phenotypical markers. We described a methodology to quantify male donor cell engraftment in female transplant recipient mice. This method can be used in all mouse strains for the study of HSC functions.

باستخدام الكمي في الوقت الحقيقي PCR لتحديد الجهات المانحة Engraftment خلية في التنافسية نموذج الفئران زرع نخاع العظم

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

نقص التروية-ضخه نموذج من إصابة الكلى الحاد والتليف آخر الاصابات في الفئران

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can be used both to investigate the biological responses to injury and to test potential therapies. Contusion or compression injury delivered to the surgically exposed spinal cord are the most widely used models of the pathology. In this report the experimental contusion is performed by using the Infinite Horizon (IH) Impactor device, which allows the creation of a reproducible injury animal model through definition of specific injury parameters. Stem cell transplantation is commonly considered a potentially useful strategy for curing this debilitating condition. Numerous studies have evaluated the effects of transplanting a variety of stem cells. Here we demonstrate an adapted method for spinal cord injury followed by tail vein injection of cells in CD1 mice. In short, we provide procedures for: i) cell labeling with a vital tracer, ii) pre-operative care of mice, iii) execution of a contusive spinal cord injury, and iv) intravenous administration of post mortem neural precursors. This contusion model can be utilized to evaluate the efficacy and safety of stem cell transplantation in a regenerative medicine approach.

Spinal cord injury is a traumatic condition that causes severe morbidity and high mortality. In this work we describe in detail a contusion model of spinal cord injury in mice followed by a transplantation of neural stem cells.

العصبية زرع الخلايا الجذعية في التجريبية Contusive نموذج من إصابة الحبل الشوكي

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

Ischemia-Reperfusion (IR) injury is known to contribute significantly to the morbidity and mortality associated with ischemic strokes. Ischemic cerebrovascular accidents account for 80% of all strokes. A common cause of IR injury is the rapid inflow of fluids following an acute/chronic occlusion of blood, nutrients, oxygen to the tissue triggering the formation of free radicals.
Ischemic stroke is followed by blood-brain barrier (BBB) dysfunction and vasogenic brain edema. Structurally, tight junctions (TJs) between the endothelial cells play an important role in maintaining the integrity of the blood-brain barrier (BBB). IR injury is an early secondary injury leading to a non-specific, inflammatory response. Oxidative and metabolic stress following inflammation triggers secondary brain damage including BBB permeability and disruption of tight junction (TJ) integrity.
Our protocol presents an in vitro example of oxygen-glucose deprivation and reoxygenation (OGD-R) on rat brain endothelial cell TJ integrity and stress fiber formation. Currently, several experimental in vivo models are used to study the effects of IR injury; however they have several limitations, such as the technical challenges in performing surgeries, gene dependent molecular influences and difficulty in studying mechanistic relationships. However, in vitro models may aid in overcoming many of those limitations. The presented protocol can be used to study the various molecular mechanisms and mechanistic relationships to provide potential therapeutic strategies. However, the results of in vitro studies may differ from standard in vivo studies and should be interpreted with caution.

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

Ischemia-Reperfusion (IR) injury is associated with a high rate of morbidity and mortality. The goal of the in vitro model of oxygen-glucose deprivation and reoxygenation (OGD-R) described here is to assess the effects of ischemia reperfusion injury on a variety of cells, particularly in blood-brain barrier (BBB) endothelial cells.

الأوكسجين الجلوكوز الحرمان وعودة التأكسج باعتبارها<em&gt; في المختبر</em&gt; الإسكيمية-ضخه من الإصابات نموذج لدراسة الدم في الدماغ الحاجز الجنسي لدى الرجال

Ischemia-Reperfusion (IR) injury is known to contribute significantly to the morbidity and mortality associated with ischemic strokes. Ischemic ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor initiation, metastasis and resistance to radio- and chemotherapy. Here we describe a specific methodology for culturing primary human pancreatic CSCs as tumor spheres in anchorage-independent conditions. Cells are grown in serum-free, non-adherent conditions in order to enrich for CSCs while their more differentiated progenies do not survive and proliferate during the initial phase following seeding of single cells. This assay can be used to estimate the percentage of CSCs present in a population of tumor cells. Both size (which can range from 35 to 250 micrometers) and number of tumor spheres formed represents CSC activity harbored in either bulk populations of cultured cancer cells or freshly harvested and digested tumors 1,2. Using this assay, we recently found that metformin selectively ablates pancreatic CSCs; a finding that was subsequently further corroborated by demonstrating diminished expression of pluripotency-associated genes/surface markers and reduced in vivo tumorigenicity of metformin-treated cells. As the final step for preclinical development we treated mice bearing established tumors with metformin and found significantly prolonged survival. Clinical studies testing the use of metformin in patients with PDAC are currently underway (e.g., NCT01210911, NCT01167738, and NCT01488552). Mechanistically, we found that metformin induces a fatal energy crisis in CSCs by enhancing reactive oxygen species (ROS) production and reducing mitochondrial transmembrane potential. In contrast, non-CSCs were not eliminated by metformin treatment, but rather underwent reversible cell cycle arrest. Therefore, our study serves as a successful example for the potential of in vitro sphere formation as a screening tool to identify compounds that potentially target CSCs, but this technique will require further in vitro and in vivo validation to eliminate false discoveries.

Pancreatic cancer stem cells (CSCs) can be expanded in vitro using the anchorage-independent sphere culture technique, which represents a powerful tool to study CSC biology and can serve as the first step to develop novel CSC-targeting therapies. Here the methodology for expanding, analyzing and targeting of pancreatic CSCs is provided.

دراسة سرطان البنكرياس الجذعية خصائص الخلايا لتطوير استراتيجيات علاجية جديدة

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

نموذج الفئران من المعوية الإسكيمية-ضخه إصابة

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients with impeded blood flow or with large wounds might be prolonged. Cell-based therapies have appeared as a new technique for the treatment of diabetic ulcers, and cell-sheet engineering has improved the efficacy of cell transplantation. A number of reports have suggested that adipose-derived stem cells (ASCs), a type of mesenchymal stromal cell (MSC), exhibit therapeutic potential due to their relative abundance in adipose tissue and their accessibility for collection when compared to MSCs from other tissues. Therefore, ASCs appear to be a good source of stem cells for therapeutic use. In this study, ASC sheets from the epididymal adipose fat of normal Lewis rats were successfully created using temperature-responsive culture dishes and normal culture medium containing ascorbic acid. The ASC sheets were transplanted into Zucker diabetic fatty (ZDF) rats, a rat model of type 2 diabetes and obesity, that exhibit diminished wound healing. A wound was created on the posterior cranial surface, ASC sheets were transplanted into the wound, and a bilayer artificial skin was used to cover the sheets. ZDF rats that received ASC sheets had better wound healing than ZDF rats without the transplantation of ASC sheets. This approach was limited because ASC sheets are sensitive to dry conditions, requiring the maintenance of a moist wound environment. Therefore, artificial skin was used to cover the ASC sheet to prevent drying. The allogenic transplantation of ASC sheets in combination with artificial skin might also be applicable to other intractable ulcers or burns, such as those observed with peripheral arterial disease and collagen disease, and might be administered to patients who are undernourished or are using steroids. Thus, this treatment might be the first step towards improving the therapeutic options for diabetic wound healing.

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Adipose-derived stem cells (ASCs) are easily isolated and harvested from the fat of normal rats. ASC sheets can be created using cell-sheet engineering and can be transplanted into Zucker diabetic fatty rats exhibiting full-thickness skin defects with exposed bone and then covered with a bilayer of artificial skin.

إنشاء وزرع للخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية (ASC) ورقة في نموذج التئام السكري

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse model is useful for investigating the pathophysiology of cerebral ischemia-reperfusion and determining potential therapeutic strategies for patients with stroke. Variations in the anatomy of the circle of Willis of C57BL/6 mice affects their infarct volume after cerebral-ischemia-induced injury. Studies have indicated that distal MCA occlusion (MCAO) can overcome this problem and result in a stable infarct size. In this study, we establish a two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion through the interruption of the blood flow to the right MCA. We distally ligate the right MCA and right common carotid artery (CCA) and restore blood flow after a certain period of ischemia. This ischemia-reperfusion injury induces an infarct of stable size and a behavioral deficit. Peripheral immune cells infiltrate the ischemic brain within the 24 h infiltration period. Additionally, the neuronal loss in the cortical area is less for a longer reperfusion duration. Therefore, this two-vessel occlusion model is suitable for investigating the immune response and neuronal recovery during the reperfusion period after cerebral ischemia.

A mouse model of cerebral ischemia-reperfusion is established to investigate the pathophysiology of stroke. We distally ligate the right middle cerebral artery and right common carotid artery and restore blood flow after 10 or 40 min of ischemia.

انسداد السفينتين الماوس النموذجي لضخه الاسكيمية الدماغي

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

نموذج الفئران قبل السريرية لدراسة نقص التروية-ضخ الاصابه في جراحه المجهرية الترميمية

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...