يستهدف هذا البروتوكول مشكلة إمدادات الأعضاء المحدودة من خلال تسهيل تقييم استراتيجيات تكييف القلب المختلفة للسماح باستخدام القلوب المتبرع بها بعد الوفاة في الدورة الدموية. وضع الحيوان على وسادة التدفئة تعيين إلى متوسطة. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع في فأر بالغ تخدير، أدخل مسبار درجة حرارة المستقيم.
قم بتوصيل مستشعر أكسدة نبض عبر الجلد بمخلب خلفي، وغطي الجرذ بلوحة ماصة للحفاظ على درجة حرارة الجسم. جعل شق الجلد خط الوسط من ثلاثة إلى أربعة سنتيمترات في الرقبة، واستخدام مقص منحنى تلميح حادة لتشريح حاد الأنسجة تحت الجلد، لفضح العضلات sternohyoid الحق. باستخدام ملقط غير تراوية، تحرك العضلات بشكلٍ ثُمائي حتى يتم تحديد الشريان السباتي والحق في الوريد الوداجي والعصب المبهم.
استخدم المقص لفصل العصب المبهم بعناية عن الشريان السباتي. حقن 2000 وحدة دولية لكل كيلوغرام من الهيبارين في الوريد الوداجي الأيمن ، مع الضغط على موقع الحقن بعد سحب الإبرة لتجنب تسرب الدم. استخدام ملقط منحني لتمرير اثنين من خياطة الحرير 5-0 حول الشريان السباتي.
نعلق بحزم خياطة لocclude الشريان السباتي في الجانب متفوقة من الشريان المكشوفة، والحفاظ على خياطة القريب غير مربوطة، ووضع الفئران تحت مجهر ستيريو. ثم استخدم مقص الجراحة المجهرية لعمل شق من ملليمتر واحد بعناية فوق الجدار الأمامي للشريان السباتي ، وأدخل قسطرة في الوريد مغلقة مقاس 22 بوصة واحدة نحو القوس الأبهري. إن استخدام أدوات التكبير والصغري ينصح بشدة بهذه الخطوات.
يمكن تحقيق حقل نظيف عن طريق توتّر الغرز القريب لتجنب النزيف. التبرع القلبي ضروري لتجميع جهاز القلب البليجيا السابق. لبدء بروتوكول DCD ، قم أولاً بتخلص الحيوان ، ثم استخدام ملقط البعوض لتضييق القصبة الهوائية ، بدءًا من المرحلة الهينية.
ابدأ في عد الـ WIT الوظيفي عندما ينخفض ضغط الدم الانقباضي الذروة إلى أقل من 30 ملليمترًا من الزئبق أو يظهر الرجفان البطيني أو الرجفان البطيني، أيهما يأتي أولاً. في نهاية WIT، قم بإجراء عملية شد البطن الوسيطة، مع الحفاظ على الصدر مفتوح مع مُناسِّر Alm إذا لزم الأمر. افصل القلب عن الأوردة الرئوية والهياكل الصدرية الأخرى لإكمال استئصال الحفّال.
غمر القلب على الفور في محلول كريبس البارد للجليد لنقل سريع إلى نظام vivo السابق. استخدام خياطة الحرير 2-0 لإصلاح بإحكام الشريان الأورطي لجهاز Langendorff، ومن ثم فتح stopcock. الآن فتح تماما تدفق إلى cannula، وبدء إعادة ضخ الأولية ووقت الاستقرار.
قم بتدوير القلب بحيث تواجه الأذين مستشعر الضغط، وتشريح الأوردة الرئوية لتوسيع فتحة الأذينية البطينية اليسرى إذا لزم الأمر. بعد ذلك، أدخل بالون اللاتكس متصلاً بمستشعر الضغط، مع التأكد من أن البالون في وضع كامل داخل البطين. املأ البالون ببطء بالملوحة المالحة حتى يصل الضغط الانبساطي إلى 15 ملليمتراً من الزئبق.
أدخل قطب سرعة في الوجه الأمامي للقلب دون ثقب الأوعية التاجية. مرة واحدة لوحظ الضرب العفوي، تعيين سرعة إلى 300 نبضة في الدقيقة الواحدة. بعد 10 دقائق من الاستقرار، بدء تسجيل قياس الضغط داخل البطين المستمر لبدء مرحلة إعادة التأهيل والتقييم.
بعد ساعة واحدة، قم بإزالة القلب من جهاز Langendorff واستخدم شفرة فولاذية عالية الكربون مباشرة لإزالة الأذين. مع البطين الأيمن التي تواجه أسفل، وقطع واحد إلى اثنين ملليمتر سميكة شرائح البطين. قم باستئصال البطين الأيمن من الشريحة الثالثة من الأنسجة، وتجميد البطين الأيسر للتحاليل البيوكيميائية المصب.
غمر الأجزاء المتبقية في حديثا أعد 5٪ TTC الحل في برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقائق في 37 درجة مئوية. في صباح اليوم التالي، غسل العينات مرتين في برنامج تلفزيوني جديد وغمر العينات في برنامج تلفزيوني جديد للتصوير. الأنسجة القابلة للحياة سوف تظهر بلون الطوب الأحمر.
بعد التخبيب ، ينخفض ضغط الدم بسرعة في نمط يمكن التنبؤ به والوقت المتوقع حتى الموت هو أقل من خمس دقائق. هنا، يتم عرض متوسط الضغط مقابل منحنيات الوقت في بداية إعادة التأهيل بعد صفر و10 و 15 دقيقة من WIT. وستتحسن وظيفة العقد مع مرور الوقت، وسيسمح استخدام فترات قصيرة من نظام النقل والوظائف بالرجوع إلى الوضع الطبيعي، ولن يمكن الكشف عن الضرر المورفولوجي.
استخدام عامل تكييف إضافة مع القلب وplegia في مرحلة الاستقرار أظهرت أن الضرر الناجم عن 15 دقيقة من WIT في هذا النموذج قابلة للتشكيل من قبل وكلاء cardioprotective. تسمح هذه التقنية بالتحكم الكامل في جميع المتغيرات ذات الصلة واختبار التدخل الدوائي وغير الدوائي ويمكن استنساخها في نماذج أكبر، مما يسهل الترجمة السريرية.
