الكتاب أود أن أشكر شعبة المحمولة بالنواقل فرع أمراض الثروة الحيوانية، وتحديدا اندريا بيترسون، ليزا المسعودي، اوبراين فيرنا، وجون ليدل لرعايتهم والحفاظ على الفئران والارانب. ونود أيضا أن نشكر ايمي أولمان، تيريزا راسيل، وباربرا جونسون J. لما قدموه من مساهمات لتحقيق هذا المخطوط. أخيرا، نود أن نعترف العيسى إيكرت في مكتب المدير المساعد للاتصالات في مركز السيطرة على الأمراض لإنتاج الرسوم البيانية والرسوم التوضيحية لافيل جودي لتوجيه جميع الجوانب القانونية المرتبطة تصوير هذا المخطوط.

1. جمع الدملمف لإعداد الشرائح (فيلم 1) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة القراد بلطف بنشاط تغذية من حيوان ومكان في 3٪ بيروكسيد الهيدروجين موضعي لمدة 5 دقائق ثم في الايثانول 70٪ لمدة 10 دقائق على سطح تعقيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع القلم حلمة الثدي رسم دائرة على شريحة المجهر المغلفة silane ووضع علامة داخل حلمة الثدي دائرة من ركلة جزاء. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتستخدم الشرائح المغلفة Silane للحصول على أفضل تمسك الدملمف إلى الشريحة المجهر. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عرض القراد تحت المجهر تشريح (1X الهدف، العدسة 10X، التكبير الإصدار 3.5x). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دفع برفق لأسفل على ظهر القراد مع ملقط لتباعد الساقين القراد وجمد القراد. </li></ol> ملاحظة: عندما شل حركة القراد لا تضغط من الصعب جدا لأن هذا قد يعطل المعي المتوسط ​​أو ثقب القراد وتلوث الدملمف. <ol start="5" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بتر ساق القراد أو الساقين في اله مشترك مع القاصي نقطة غرامة مشرط القابل للتصرف. لتحديد العدوى عن طريق اللمف فقط 1 ساقه يحتاج إلى بتر. قد لجمع الدملمف على شريحة يتم بتر ساقيه عدة. </li></ol> ملاحظة: لا قطع الساق قريبة جدا من الجسم، لأن هذا قد يسبب تلوث المعي المتوسط ​​من اللمف. <ol start="6" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن يتم قطع الساق أو الساقين الاستمرار في تطبيق الضغط بلطف على ظهر القراد في لالدملمف لإفراز من ساقيه على الشريحة. تحرك بلطف القراد حول على الشريحة لنشر الدملمف. </li></ol> 2. إزالة الغدة اللعابية (أفلام 2 و 3) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مخزنة بقعة عدة برك 25 ميكرولتر من الفوسفات المالحة (PBS) على شريحة المجهر ووضع علامة في واحدة من برك برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عرض القراد تحت المجهر تشريح (1X الهدف، العدسة 10X، التكبير الإصدار 3.5x). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استقرار القراد مع forcep الرؤوس غرامةق من خلال عقد رؤيس أساس (أجزاء الفم) أو الجزء الخلفي من القراد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج ملقط غرامة يميل إلى الجزء الخلفي من التجزئة وشريحة تصل القراد ما ظهر لكشف الأجهزة. ويمكن إذا رغبت يمكن إزالة المعي المتوسط ​​في هذا الوقت، ونقل إلى مجموعة جديدة من برنامج تلفزيوني على شريحة مجهر أو إلى أنبوب microfuge التي تحتوي على برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العثور على زوج من الغدد اللعابية (مثل عناقيد العنب) الواقعة بجانب ثنائي الساقين من القراد. إذا الغدد اللعابية ليست واضحة بين الركام القراد نقل جزء التجزئة الرئيسية، والتي لا تزال تتضمن الغدد اللعابية، إلى مجموعة جديدة من برنامج تلفزيوني للحد من الفوضى وفقدان الغدد اللعابية. </li></ol> ملاحظة: في وقت سابق في التغذية، والغدد اللعابية هي أصعب لتحديد مكان لأنهم ليسوا كما وضعت مقارنة في وقت لاحق في التغذية. <ol start="6" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الغدد اللعابية من القراد مع ملقط الرؤوس وغرامة مكان في بركة جديدة من برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> واييميل ال غرامة ملقط نقل الغدد اللعابية إلى أخرى نظيفة 25 تجمع PBS ميكرولتر، كرر هذه الخطوة غسيل 3-4 مرات أكثر لإزالة أي الكائنات الحية الدقيقة الخارجي والحطام القراد. </li></ol> ملاحظة: تغسل عناقيد الغدة اللعابية بلطف للحد من الخسائر وتعطل الغدد اللعابية الفردية. <ol start="8" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الغدد في بركة نظيفة من برنامج تلفزيوني على شريحة المغلفة silane أو في أنبوب microfuge التي تحتوي على برنامج تلفزيوني. </li></ol> 3. لعاب جمع (فيلم 4) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة القراد بلطف البالغات من الأرنب أو المضيفة الأخرى باستخدام ملقط الرؤوس غرامة قبل قليل من غلبه النعاس محتقن تماما، 5-7 أيام تقريبا في مرحلة ما بعد المرفق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تلتزم القراد محتقن تقريبا على واحدة من نهاية شريحة المجهر مع لاصق شفاف. يجب وضع الشريط حوالي ثلاث أرباع الطريق حتى ظهر القراد تجاه رأسه، وترك رؤيس القراد في الأساس (أجزاء الفم) عرضة للخطر.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حيث يلتقي الشريط حافة الأمامي من ميكرولتر القراد السطح الظهري 5 الماصة من حل بيلوكاربين 5٪ (في الميثانول). السماح للشريط على ذبالة من بيلوكاربين على القراد وظهر، دون السماح للبيلوكاربين لتأتي في اتصال مع رؤيس أساس القراد و. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تركيب قطعة من الصلصال غير سامة على الشريحة مجهر حوالي بوصة واحدة من فمها القراد و. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط الرؤوس غرامة قطع رأس أنبوب شعري وسحبت 28 إلى القطر المطلوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عرض رؤيس القراد في الأساس تحت المجهر تشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تناسب بلطف الكارح القراد حيز الأنبوب الشعرية سحبت السماح للpalps العلوية الموجودة على السطح الخارجي للأنبوب شعري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضغط على الطرف الآخر من الأنابيب الشعرية في الصلصال لعقد أنبوب شعري في مكان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع علامة شنت الترويل داخل غرفة مظلمة مع ارتفاع نسبة الرطوبة (على سبيل المثال، مربع الستايروفوم بغطاء اصطف مع حلمة الثدي الرطب<html> المناشف إيه). إمالة الشريحة وبالتالي فإن نقاط الكارح إلى أسفل الحاوية، والسماح الجاذبية للمساعدة في جمع اللعاب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحاوية في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترصد عن كثب القراد عاب لأول ساعة، وجمع اللعاب كما هي ولدت عن طريق طرد عليه للخروج من أنابيب شعرية مع لمبة الماصة باستور. بعد الساعة الأولى، تحقق تراكم كل ساعة ما لا يقل عن 4 ساعات. الاستمرار في جمع لعاب كما هي ولدت. </li></ol> ملاحظة: يمكن وقفها اكتساب اللعاب مرة واحدة ويتم جمع ما يكفي من اللعاب لهذه الدراسة التي يتم تنفيذها. <ol start="12" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا القراد لا عاب أو إذا كان المطلوب أكثر اللعاب، ويمكن أن يتسبب في بعض الأحيان اللعاب باستخدام الأنابيب الشعرية لتدليك الكارح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 0.1 أحجام كوكتيل مثبط البروتياز لعاب ومخزن في -80 درجة مئوية لحين الحاجة إليها. </li></ol> 4. ممثل النتائج e_content &quot;&gt; فيلم 1 يوضح كيفية اجراء حورية أولا يتغذى جزئيا الكتفي وبتر الساقين لجمع الدملمف على شريحة المجهر. وحالما يتم بتر الساق أو الساقين ويفرز السائل واضح (الشكل 1A و 1B). وإذا كان المعي المتوسط يتمزق الدملمف يبدو غائما كما هو يخرج من بتر ساقه (ق) (1C شخصية و1D). ويتجلى استخراج الغدد اللعابية بعد حورية تم تغذية لمدة 48 أو 72 ساعة في أفلام 2 و 3. بعد ثقب القراد هناك عادة الكثير من الحطام (تتألف من القصبة الهوائية، مالبيغي الأنابيب والدم والأنسجة الضامة وغيرها)، لمنع فقدان أو اختلال في الغدد اللعابية تحريك علامة على مجموعة جديدة من برنامج تلفزيوني. وتظهر الأرقام 2A 2B حيث توجد الغدد اللعابية بعد أن تم قطع حورية مفتوحة ويوضح الشكل 2C إزالة كتل الغدد اللعابية في بركة من برنامج تلفزيوني. جمع اللعاب من إعداد أولا الإناث البالغات الكتفي أنا<html> ق هو مبين في فيلم (4) والشكل (3). ويلاحظ وجود علامة الترويل في أنبوب شعري في الفيلم 5. هذه الطريقة في جمع اللعاب المستخدمة بيلوكاربين لتحفيز اللعاب ويمكن أن تسفر عن أكثر من 20 ميكرو لتر من اللعاب في القراد البالغات. <img alt="الشكل 1." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig1.jpg" /> الشكل 1. الهياكل إعتبر من حورية الكتفي أولا. فيلم 1. اللبود جمع الدملمف الكتفي. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie1.avi">اضغط هنا لمشاهدة الفيلم</a> . <img alt="الشكل 2." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig2.jpg" /> الشكل 2. غير ملوثة (A &amp; B)، والملوثة (C &amp; D) الدملمف تنزح من مباراة الذهاب في لحورية. فيلم 2. استخراج الغدة اللعابية من I. ساعة الاحتياطي الفيدرالي 48 الكتفي حورية.pload/3894/3894movie2.avi &quot;&gt; اضغط هنا لمشاهدة الفيلم. فيلم 3. استخراج الغدة اللعابية من I. ساعة الاحتياطي الفيدرالي 72 حورية الكتفي. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie3.avi">اضغط هنا لمشاهدة الفيلم</a> . <img alt="الشكل 3." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig3.jpg" /> الشكل 3. اللبود الكتفي الغدد اللعابية حورية. (A &amp; B) أمثلة من الغدد اللعابية في حورية ساعة تغذيها 72، قبل الاستخراج. (ج) إزالة الغدة اللعابية العنقودية. فيلم 4. جمع اللعاب إعداد أولا من الكبار القراد الإناث الكتفي. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie4.avi">اضغط هنا لمشاهدة الفيلم</a> . <img alt="الشكل 4." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig4.jpg" /> الشكل 4. جمع اللعاب من الكبار أولا الإناث تي الكتفيicks. (أ و ب) ضع علامة توضع على شريحة مع الكارح لها في النهاية انسحبت من الأنابيب الشعرية مع نهاية unpulled من الأنابيب الشعرية التي عقدها الصلصال. (C &amp; D) غرفة تحتوي على مرطب الترويل أولا الكبار أنثى القراد الكتفي. فيلم 5. اللبود الكتفي القراد الإناث الترويل في أنبوب شعري. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie5.avi">اضغط هنا لمشاهدة الفيلم</a> .

<ol>
	<li>Quach, K. A., Boctor, F. N., Elston, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What's+eating+you?+Hyalomma+ticks.">What's eating you? Hyalomma ticks.</a> Cutis. 87, 165-167 (2011).</li><li>Graham, J., Stockley, K., Goldman, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick-borne+illnesses:+a+CME+update.">Tick-borne illnesses: a CME update.</a> Pediatr. Emerg. Care. 27, 141-147 (2011).</li><li>Nuttall, P. A., Paesen, G. C., Lawrie, C. H., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector-host+interactions+in+disease+transmission.">Vector-host interactions in disease transmission.</a> J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 2, 381-386 (2000).</li><li>Estrada-Pena, A., Jongejan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ticks+feeding+on+humans:+a+review+of+records+on+human-biting+Ixodoidea+with+special+reference+to+pathogen+transmission.">Ticks feeding on humans: a review of records on human-biting Ixodoidea with special reference to pathogen transmission.</a> Exp. Appl. Acarol. 23, 685-715 (1999).</li><li>Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen-tick-host+interactions:+Borrelia+burgdorferi+and+TBE+virus.">Pathogen-tick-host interactions: Borrelia burgdorferi and TBE virus.</a> Zentralbl Bakteriol. 289, 492-505 (1999).</li><li>Jones, L. D., Hodgson, E., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+virus+transmission+by+tick+salivary+glands.">Enhancement of virus transmission by tick salivary glands.</a> J. Gen. Virol. 70, 1895-1898 (1989).</li><li>Labuda, M., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick-borne+viruses.">Tick-borne viruses.</a> Parasitol. 129, 221-245 (2004).</li><li>Socolovschi, C., Mediannikov, O., Raoult, D., Parola, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+tick-borne+bacterial+diseases+in+Europe.">Update on tick-borne bacterial diseases in Europe.</a> Parasite. 16, 259-273 (2009).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Interactions+that+Enable+Movement+of+the+Lyme+Disease+Agent+from+the+Tick+Gut+into+the+Hemolymph.">Molecular Interactions that Enable Movement of the Lyme Disease Agent from the Tick Gut into the Hemolymph.</a> PLoS Pathog. 7, e1002079 (2011).</li><li>Piesman, J., Schneider, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+in+Lyme+disease+spirochetes+during+transmission+by+nymphal+ticks.">Dynamic changes in Lyme disease spirochetes during transmission by nymphal ticks.</a> Exp. Appl. Acarol. 28, 141-145 (2002).</li><li>Brossard, M., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick+immunobiology.">Tick immunobiology.</a> Parasitol. , S161-S176 (2004).</li><li>Machackova, M., Obornik, M., Kopecky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+salivary+gland+extract+from+Ixodes+ricinus+ticks+on+the+proliferation+of+Borrelia+burgdorferi+sensu+stricto+in+vivo.">Effect of salivary gland extract from Ixodes ricinus ticks on the proliferation of Borrelia burgdorferi sensu stricto in vivo.</a> Folia Parasitol. 53, 153-158 (2006).</li><li>Nuttall, P. A., Labuda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick-host+interactions:+saliva-activated+transmission.">Tick-host interactions: saliva-activated transmission.</a> Parasitol. 129, 177-189 (2004).</li><li>Anguita, J., Hedrick, M. N., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+Borrelia+burgdorferi+in+the+tick+and+the+mammalian+host.">Adaptation of Borrelia burgdorferi in the tick and the mammalian host.</a> FEMS Microbiol. Rev. 27, 493-504 (2003).</li><li>Hovius, J. W., van Dam, A. P., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick-host-pathogen+interactions+in+Lyme+borreliosis.">Tick-host-pathogen interactions in Lyme borreliosis.</a> Trends Parasitol. 23, 434-438 (2007).</li><li>Dunham-Ems, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+reveals+a+biphasic+mode+of+dissemination+of+Borrelia+burgdorferi+within+ticks.">Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks.</a> Journal Clin. Invest. 119, 3652-3665 (2009).</li><li>Ribeiro, J. M., Mather, T. N., Piesman, J., Spielman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissemination+and+salivary+delivery+of+Lyme+disease+spirochetes+in+vector+ticks+(Acari:+Ixodidae).">Dissemination and salivary delivery of Lyme disease spirochetes in vector ticks (Acari: Ixodidae).</a> J. Med. Entomol. 24, 201-205 (1987).</li><li>Piesman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+of+Lyme+disease+spirochetes+(Borrelia+burgdorferi.">Transmission of Lyme disease spirochetes (Borrelia burgdorferi.</a> Exp. Appl. Acarol. 7, 71-80 (1989).</li><li>De Silva, A. M., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+migration+of+Borrelia+burgdorferi+in+Ixodes+ticks+during+blood+feeding.">Growth and migration of Borrelia burgdorferi in Ixodes ticks during blood feeding.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 53, 397-404 (1995).</li><li>Horka, H., Cerna-Kyckova, K., Skallova, A., Kopecky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick+saliva+affects+both+proliferation+and+distribution+of+Borrelia+burgdorferi+spirochetes+in+mouse+organs+and+increases+transmission+of+spirochetes+to+ticks.">Tick saliva affects both proliferation and distribution of Borrelia burgdorferi spirochetes in mouse organs and increases transmission of spirochetes to ticks.</a> Int. J. Med. Microbiol. 299, 373-380 (2009).</li><li>Brossard, M., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunology+of+interactions+between+ticks+and+hosts.">Immunology of interactions between ticks and hosts.</a> Med. Vet. Entomol. 11, 270-276 (1997).</li><li>Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick+modulation+of+host+immunity:+an+important+factor+in+pathogen+transmission.">Tick modulation of host immunity: an important factor in pathogen transmission.</a> Int. J. Parasitol. 29 (99), 851-859 (1999).</li><li>Binnington, K. C., Kemp, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+tick+salivary+glands+in+feeding+and+disease+transmission.">Role of tick salivary glands in feeding and disease transmission.</a> Adv. Parasitol. 18, 315-339 (1980).</li><li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+neutrophil+function+by+two+tick+salivary+proteins.">Inhibition of neutrophil function by two tick salivary proteins.</a> Infect. Immun. 77, 2320-2329 (2009).</li><li>Montgomery, R. R., Lusitani, D., De Boisfleury Chevance, A., Malawista, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick+saliva+reduces+adherence+and+area+of+human+neutrophils.">Tick saliva reduces adherence and area of human neutrophils.</a> Infect. Immun. 72, 2989-2994 (2004).</li><li>Lima, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+infectivity+of+the+Lyme+disease+spirochete+Borrelia+burgdorferi+derived+from+Ixodes+scapularis+salivary+glands+and+midgut.">Differential infectivity of the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi derived from Ixodes scapularis salivary glands and midgut.</a> J. Med. Entomol. 42, 506-510 (2005).</li><li>Severinova, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-inoculation+of+Borrelia+afzelii+with+tick+salivary+gland+extract+influences+distribution+of+immunocompetent+cells+in+the+skin+and+lymph+nodes+of+mice.">Co-inoculation of Borrelia afzelii with tick salivary gland extract influences distribution of immunocompetent cells in the skin and lymph nodes of mice.</a> Folia Microbiol. 50, 457-463 (2005).</li><li>Labuda, M., Jones, L. D., Williams, T., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+tick-borne+encephalitis+virus+transmission+by+tick+salivary+gland+extracts.">Enhancement of tick-borne encephalitis virus transmission by tick salivary gland extracts.</a> Med. Vet. Entomol. 7, 193-196 (1993).</li><li>Kariu, T., Coleman, A. S., Anderson, J. F., Pal, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+Rapid+Transfer+and+Localization+of+Lyme+Disease+Pathogens+Within+the+Tick+Gut.">Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut.</a> J. Vis. Exp. (48), e2544 (2011).</li><li>Edwards, K. T., Goddard, J., Varela-Stokes, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examination+of+the+internal+morphology+of+the+Ixodid+tick+Amblyomma+maculatum+koch,+(Acari:Ixodidae);+a+"How-to"+pictorial+dissection+guide.">Examination of the internal morphology of the Ixodid tick Amblyomma maculatum koch, (Acari:Ixodidae); a "How-to" pictorial dissection guide.</a> Midsouth Entomologist. 2, 28-39 (2009).</li><li>Ledin, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Borreliacidal+activity+of+saliva+of+the+tick+Amblyomma+americanum.">Borreliacidal activity of saliva of the tick Amblyomma americanum.</a> Med. Vet. Entomol. 19, 90-95 (2005).</li><li>Ribeiro, J. M., Zeidner, N. S., Ledin, K., Dolan, M. C., Mather, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+much+pilocarpine+contaminates+pilocarpine-induced+tick+saliva?.">How much pilocarpine contaminates pilocarpine-induced tick saliva?.</a> Med. Vet. Entomol. 18, 20-24 (2004).</li><li>Barker, R. W., Burris, E., Sauer, J. R., Hair, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Composition+of+tick+oral+secretions+obtained+by+three+different+collection+methods.">Composition of tick oral secretions obtained by three different collection methods.</a> J. Med. Entomol. 10, 198-201 (1973).</li><li>Burgdorfer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemolymph+test.+A+technique+for+detection+of+rickettsiae+in+ticks.">Hemolymph test. A technique for detection of rickettsiae in ticks.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 19, 1010-1014 (1970).</li></ol>

ليس لدينا ما يكشف.

جمع الدملمف القراد، الغدد اللعابية، واللعاب مهم في دراسة ينقلها القراد انتقال مسببات المرض وانتشاره، ونشر، والانتشار، والمثابرة في التجزئة على حد سواء والمضيف 6،11-13،20،23،29. هناك عدة طرق لتشريح وضع علامة 30،31. ومع ذلك، عندما جمع الغدد اللعابية من الأهمية ب?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> ماء الأوكسجين </td><td> الصياد </td><td> H312-500 </td></tr><tr><td> الإيثانول </td><td> Acros </td><td> 61509-5000 </td></tr><tr><td> برنامج تلفزيوني </td><td> المنتجات الاحيائية بوسطن </td><td> BM-2205 </td></tr><tr><td> دومون الجميلة ملقط (3C) </td><td> الصياد </td><td> NC9906085 </td></tr><tr><td> Silane شرائح المجهر المعالجة </td><td> Bioworld </td><td> 42763007-1 </td></tr><tr><td> حلمة الثدي القلم </td><td> Bioworld </td><td> 21750008-1 </td></tr><tr><td> سوبر الصقيع بالإضافة إلى شرائح المجهر </td><td> الصياد </td><td> 12-550-18 </td></tr><tr><td> بيلوكاربين </td><td> سيغما </td><td> P6503-5G </td></tr><tr><td> البروتيني المانع كوكتيل </td><td> سيغما </td><td> P2714 </td></tr><tr><td> # 11 القابل للتصرف مشرط </td><td> ريشة </td><td> 2975 # 11 </td></tr><tr><td> غير سام النمذجة طين </td><td&gt; فيشر </td><td> S17307 </td></tr><tr><td> الشعرية أنابيب </td><td> مطاردة العلمية زجاج، وشركة </td><td> 40A502 </td></tr></tbody></table>

saliva, salivary gland, and hemolymph collection from ixodes scapularis ticks

تم العثور على القراد في جميع أنحاء العالم وتصيب البشر الذين يعانون من أمراض التي تنتقل بواسطة القراد كثيرة. القراد هي الناقلة لمسببات الأمراض التي تسبب مرض لايم والتي ينقلها القراد الحمى الراجعة (البورلية SPP).، الجبال الصخرية المبقعة (الريكتسية الريكتسية)، ehrlichiosis (الإيرليخية chaffeensis الخيلية وهاء)، anaplasmosis (Anaplasma phagocytophilum)، والتهاب الدماغ (القراد التي تنتقل عن طريق فيروس التهاب الدماغ)، البابيزيا (البابسية النيابة.)، كولورادو حمى القراد (Coltivirus)، وحمى الأرانب (الفرنسيسيلة التولارية) 1-8. إلى أن تنتقل بشكل صحيح في استضافة هذه العوامل المعدية تنظيم تفاضلي التعبير الجيني، والتفاعل مع البروتينات القراد، والهجرة من خلال وضع علامة 3،9-13. على سبيل المثال، وكيل مرض لايم، البورلية burgdorferi، يتكيف من خلال التعبير الجيني الفارق الى مراحل وليمة ومجاعة من دورة القراد في متوطن بالحيوانات 14،15. وعلاوة على ذلك، باعتباره علامة اللبود يستهلكbloodmeal البورلية تكرار والهجرة من المعى المتوسط ​​في الجوف الدموي الأمامي، حيث يسافرون إلى الغدد اللعابية وتنتقل إلى المضيف مع لعاب طرد 9،16-19. كما وضع علامة يغذي المضيف يستجيب عادة مع استجابة مناعية قوية مرقئ والفطرية 11،13،20-22. على الرغم من هذه الردود المضيفة، I. ويمكن تغذية الكتفي لعدة أيام بسبب لعاب القرادة يحتوي على البروتينات التي هي المناعية، وكلاء التحللي، مضادات التخثر، وfibrinolysins للمساعدة في تغذية 3،11،20،21،23 القراد. الأنشطة المناعية التي تمتلكها لعاب القراد أو مستخلص الغدة اللعابية (SGE) تسهيل انتقال والانتشار، ونشر مسببات الأمراض التي تنتقل بواسطة القراد العديد من 3،20،24-27. لمزيد من فهم الكيفية التي تنتقل بواسطة القراد العوامل المعدية تسبب المرض لا بد من تشريح بنشاط تغذية القراد وجمع لعاب القراد. هذا الفيديو يشرح تقنيات بروتوكول للتشريحجمع الدملمف وإزالة الغدد اللعابية من تغذية بنشاط أولا الحوريات الكتفي بعد 48 و 72 فأر آخر التنسيب ساعات. علينا أن نبرهن أيضا جمع اللعاب من I. البالغات الكتفي القراد.

Watch this Scientific Journal Video about Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks at JoVE.com

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

جمع الدملمف القراد المصابة، والغدد اللعابية، واللعاب مهم لدراسة كيفية ينقلها القراد مسببات الأمراض تسبب المرض. في هذا البروتوكول نحن لشرح كيفية جمع الدملمف والغدد اللعابية من تغذية<em&gt; اللبود الكتفي</em&gt; الحوريات. علينا أن نبرهن أيضا جمع اللعاب من الإناث<em&gt; أولا الكتفي</em&gt; الكبار.

اللعاب، الغدد اللعابية، وجمع اللمف الدموي من القراد اللبود الكتفي

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

saliva-salivary-gland-hemolymph-collection-from-ixodes-scapularis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

29.2K Views.  Centers for Disease Control and Prevention. جمع الدملمف القراد المصابة، والغدد اللعابية، واللعاب مهم لدراسة كيفية ينقلها القراد مسببات الأمراض تسبب المرض. في هذا البروتوكول نحن لشرح كيفية جمع الدملمف والغدد اللعابية من تغذية اللبود الكتفي الحوريات. علينا أن نبرهن أيضا جمع اللعاب من الإناث أ?...

Video: Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

RNA Interference in Ticks

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites of wild and domestic animals and humans, and are considered to be second worldwide to mosquitoes as vectors of human diseases1 and the most important vectors affecting cattle industry worldwide2. Ticks are classified in the subclass Acari, order Parasitiformes, suborder Ixodida and are distributed worldwide from Arctic to tropical regions3. Despite efforts to control tick infestations, these ectoparasites remain a serious problem for human and animal health4,5.
RNA interference (RNAi)6 is a nucleic acid-based reverse genetic approach that involves disruption of gene expression in order to determine gene function or its effect on a metabolic pathway. Small interfering RNAs (siRNAs) are the effector molecules of the RNAi pathway that is initiated by double-stranded RNA (dsRNA) and results in a potent sequence-specific degradation of cytoplasmic mRNAs containing the same sequence as the dsRNA trigger7-9. Post-transcriptional gene silencing mechanisms initiated by dsRNA have been discovered in all eukaryotes studied thus far, and RNAi has been rapidly developed in a variety of organisms as a tool for functional genomics studies and other applications10.
RNAi has become the most widely used gene-silencing technique in ticks and other organisms where alternative approaches for genetic manipulation are not available or are unreliable5,11. The genetic characterization of ticks has been limited until the recent application of RNAi12,13. In the short time that RNAi has been available, it has proved to be a valuable tool for studying tick gene function, the characterization of the tick-pathogen interface and the screening and characterization of tick protective antigens14. Herein, a method for RNAi through injection of dsRNA into unfed ticks is described. It is likely that the knowledge gained from this experimental approach will contribute markedly to the understanding of basic biological systems and the development of vaccines to control tick infestations and prevent transmission of tick-borne pathogens15-19.

A method for RNA interference (RNAi) by injection of dsRNA into unfed ticks is described. RNAi is the most widely used gene-silencing technique in ticks where the use of other methods of genetic manipulation has been limited.

التدخل في الحمض النووي الريبي القراد

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites of wild and domestic animals and humans, and are considered to be second worldwide to mosquitoes as vectors ...

Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries, and Embryos of Vector Mosquitoes

Mosquitoes are vectors for a diverse set of pathogens including arboviruses, protozoan parasites and nematodes. Investigation of transcripts and gene regulators that are expressed in tissues in which the mosquito host and pathogen interact, and in organs involved in reproduction are of great interest for strategies to reduce mosquito-borne disease transmission and disrupt egg development. A number of tools have been employed to study and validate the temporal and tissue-specific regulation of gene expression. Here, we describe protocols that have been developed to obtain spatial information, which enhances our understanding of where specific genes are expressed and their products accumulate. The protocol described has been used to validate expression and determine accumulation patterns of transcripts in tissues related to mosquito-borne pathogen transmission, such as female salivary glands, as well as subcellular compartments of ovaries and embryos, which relate to mosquito reproduction and development. 
 The following procedures represent an optimized methodology that improves the efficiency of various steps in the protocol without loss of target-specific hybridization signals. Guidelines for RNA probe preparation, dissection of soft tissues and the general procedure for fixation and hybridization are described in Part A, while steps specific for the collection, fixation, pre-hybridization and hybridization of mosquito embryos are detailed in Part B.

Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries, and Embryos of Vector Mosquitoes

Temporal and spatial gene expression analyses have a crucial role in functional genomics. Whole-mount hybridization in situ is useful for determining the localization of transcripts within tissues and subcellular compartments. Here we outline a hybridization in situ protocol with modifications for specific target tissues in mosquitoes.

تهجين<em&gt; في الموقع</em&gt; من الغدد اللعابية والمبيض والأجنة من البعوض الحامل للمرض

Mosquitoes are vectors for a diverse set of pathogens including arboviruses, protozoan parasites and nematodes.  Investigation of transcripts and gene ...

Feeding of Ticks on Animals for Transmission and Xenodiagnosis in Lyme Disease Research

Transmission of the etiologic agent of Lyme disease, Borrelia burgdorferi, occurs by the attachment and blood feeding of Ixodes species ticks on mammalian hosts. In nature, this zoonotic bacterial pathogen may use a variety of reservoir hosts, but the white-footed mouse (Peromyscus leucopus) is the primary reservoir for larval and nymphal ticks in North America. Humans are incidental hosts most frequently infected with B. burgdorferi by the bite of ticks in the nymphal stage. B. burgdorferi adapts to its hosts throughout the enzootic cycle, so the ability to explore the functions of these spirochetes and their effects on mammalian hosts requires the use of tick feeding. In addition, the technique of xenodiagnosis (using the natural vector for detection and recovery of an infectious agent) has been useful in studies of cryptic infection. In order to obtain nymphal ticks that harbor B. burgdorferi, ticks are fed live spirochetes in culture through capillary tubes. Two animal models, mice and nonhuman primates, are most commonly used for Lyme disease studies involving tick feeding. We demonstrate the methods by which these ticks can be fed upon, and recovered from animals for either infection or xenodiagnosis.

Lyme disease is the most commonly-reported vector-borne disease in North America. The causative agent, Borrelia burgdorferi is a spirochete bacterium transmitted by Ixodid ticks. Transmission and detection of infection in animal models is optimized by the use of tick feeding, which we describe here.

Transmission of the etiologic agent of Lyme disease, Borrelia burgdorferi, occurs by the  attachment and blood feeding of Ixodes species ticks on ...

Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

Ixodes scapularis, the vector of Lyme disease, is one of the most important disease vectors in the eastern and Midwestern United States. This species is a three host tick that requires a blood meal from a vertebrate host for each development stage, and the adult females require a blood meal for reproduction. Larval ticks attach to their host for 3 - 5 days for feeding and drop off the host when fully engorged. This dependency on several different hosts and the lengthy attachment time for engorgement complicates tick rearing in the laboratory setting. However, to understand tick biology and tick-pathogen interactions, the production of healthy, laboratory-reared ticks is essential. Here, we demonstrate a simple, cost-effective protocol for immature tick feeding on mice. We modified the existing protocols for decreased stress on mice and increased tick feeding success and survival by using disposable cages without mesh bottoms to avoid contact of ticks with water contaminated with mice urine and feces.

Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

The production of healthy laboratory-reared ticks is essential to studies on tick biology, and tick-pathogen interactions. Here we demonstrate a simple protocol for immature tick feeding that is cost-effective and less stressful to mice.

تربية<em&gt; اللبود الكتفي،</em&gt; القراد الأسود أرجل: تغذية مراحل غير ناضجة على الفئران

Ixodes scapularis, the vector of Lyme disease, is one of the most important disease vectors in the eastern and Midwestern United States. This species is a ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced saliva production. Similarly, saliva production is severely compromised in patients receiving radiation treatment for head and neck cancers. Rodent models, developed to mimic these clinical conditions, facilitate an understanding of the disease pathogenesis and allow for the development of new therapeutic strategies. Therefore, the ability to accurately, reproducibly, and repeatedly measure salivary gland function in animal models is critical. Building on procedures previously described in the literature, a method was developed that meets these criteria and was used to evaluate salivary gland function in mice. An additional advantage of this new method is that it is easily mastered, and has little inter-operator variation. Salivary gland function is evaluated as the amount (weight or volume) or rate (mL/min) of saliva produced in response to pilocarpine stimulation. The collected saliva is a good source for the analyses of protein content, immunoglobulin concentrations, and other biomolecules.

Salivary gland hypofunction is a frequent consequence of autoimmune disease and radiation therapy. Reproducible evaluation of salivary gland function in mouse models of these diseases is a technical challenge. Here, a simple method for accurate and reproducible measurement of saliva production in mice is described.

طريقة لقياس وظيفة الغدة اللعابية في الفئران

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Preparation of Murine Submandibular Salivary Gland for Upright Intravital Microscopy

The submandibular salivary gland (SMG) is one of the three major salivary glands, and is of interest for many different fields of biological research, including cell biology, oncology, dentistry, and immunology. The SMG is an exocrine gland comprised of secretory epithelial cells, myofibroblasts, endothelial cells, nerves, and extracellular matrix. Dynamic cellular processes in the rat and mouse SMG have previously been imaged, mostly using inverted multi-photon microscope systems. Here, we describe a straightforward protocol for the surgical preparation and stabilization of the murine SMG in anesthetized mice for in vivo imaging with upright multi-photon microscope systems. We present representative intravital image sets of endogenous and adoptively transferred fluorescent cells, including the labeling of blood vessels or salivary ducts and second harmonic generation to visualize fibrillar collagen. In sum, our protocol allows for surgical preparation of mouse salivary glands in upright microscopy systems, which are commonly used for intravital imaging in the field of immunology.

We describe a protocol to surgically expose and stabilize the murine submandibular salivary gland for intravital imaging using upright intravital microscopy. This protocol is easily adaptable to other exocrine glands of the head and neck region of mice and other small rodents.

إعداد موريني الغدة اللعابية اللهاة تستقيم مجهرية إينترافيتال

The submandibular salivary gland (SMG) is one of the three major salivary glands, and is of interest for many different fields of biological research, ...

Isolation of Salivary Epithelial Cells from Human Salivary Glands for In Vitro Growth as Salispheres or Monolayers

The salivary glands are a site of significant interest for researchers interested in multiple aspects of human disease. One goal of researchers is to restore function of glands damaged by radiation therapies or due to pathologies associated with Sj&#246;gren's syndrome. A second goal of researchers is to define the mechanisms by which viruses replicate within glandular tissue where they can then gain access to salivary fluids important for horizontal transmission. These goals highlight the need for a robust and accessible in vitro salivary gland model that can be utilized by researchers interested in the above mentioned as well as related research areas. Here we discuss a simple protocol to isolate epithelial cells from human salivary glands and propagate them in vitro. Our protocol can be further optimized to meet the needs of individual studies. Briefly, salivary tissue is mechanically and enzymatically separated to isolate single cells or small clusters of cells. Selection for epithelial cells occurs by plating onto a basement membrane matrix in the presence of media optimized to promote epithelial cell growth. These resulting cultures can be maintained as three-dimensional clusters, termed "salispheres", or grown as a monolayer on treated plastic tissue culture dishes. This protocol results in the outgrowth of a heterogenous population of mainly epithelial cells that can be propagated for 5-8 passages (15-20 population doublings) before undergoing cellular senescence.

We present a method for isolating and cultivating primary human salivary gland-derived epithelial cells. These cells exhibit gene expression patterns consistent with them being of salivary epithelial origin and can be grown as salispheres on basement membrane matrices derived from Engelbreth-Holm-Swarm tumor cells or as monolayers on treated culture dishes.

عزل الخلايا الظهارية اللعابية من الغدد اللعابية البشرية للنمو في المختبر كما ساليسفيرس أو الطبقات الأحادية

The salivary glands are a site of significant interest for researchers interested in multiple aspects of human disease. One goal of researchers is to ...

Purification of High Yield Extracellular Vesicle Preparations Away from Virus

One of the major hurdles in the field of extracellular vesicle (EV) research today is the ability to achieve purified EV preparations in a viral infection setting. The presented method is meant to isolate EVs away from virions (i.e., HIV-1), allowing for a higher efficiency and yield compared to conventional ultracentrifugation methods. Our protocol contains three steps: EV precipitation, density gradient separation, and particle capture. Downstream assays (i.e., Western blot, and PCR) can be run directly following particle capture. This method is advantageous over other isolation methods (i.e., ultracentrifugation) as it allows for the use of minimal starting volumes. Furthermore, it is more user friendly than alternative EV isolation methods requiring multiple ultracentrifugation steps. However, the presented method is limited in its scope of functional EV assays as it is difficult to elute intact EVs from our particles. Furthermore, this method is tailored towards a strictly research-based setting and would not be commercially viable.

This protocol isolates extracellular vesicles (EVs) away from virions with high efficiency and yield by incorporating EV precipitation, density gradient ultracentrifugation, and particle capture to allow for a streamlined workflow and a reduction of starting volume requirements, resulting in reproducible preparations for use in all EV research.

تنقية عالية الغلة الاستعدادات الحويصلة خارج الخلية بعيدا عن الفيروس

One of the major hurdles in the field of extracellular vesicle (EV) research today is the ability to achieve purified EV preparations in a viral infection ...

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight loss, depreciation of the animals&#39; leather and also can act as a vector of several pathogens. Due to the exorbitant costs to control these parasites, damage to the environment caused by the inappropriate use of chemical acaricides, and the increased resistance against traditional parasiticides, alternative control of ticks, by the use of entomopathogenic fungi, for example, has been considered an interesting approach. Nevertheless, few studies have demonstrated how the tick&#39;s immune system acts to fight these entomopathogens. Therefore, this protocol demonstrates two methods used for entomopathogen inoculation into engorged females and two techniques used for hemolymph collection and hemocytes harvesting. Inoculation of pathogens at the leg insertion in the tick female&#39;s body allows evaluation of females biologic parameters unlike the inoculation between the scutum and capitulum, which frequently damages Gen&#233;&#39;s organ. Dorsal hemolymph collection yielded a higher volume recovery than collection through the legs. Some limitations of tick hemolymph collection and processing include i) high rates of hemocytes&#39; disruption, ii) hemolymph contamination with disrupted midgut, and iii) low hemolymph volume recovery. When hemolymph is collected through the leg cutting, the hemolymph takes time to accumulate at the leg opening, favoring the clotting process. In addition, fewer hemocytes are obtained in the collection through the leg compared to the dorsal collection, even though the first method is considered easier to be performed. Understanding the immune response in ticks mediated by entomopathogenic agents helps to unveil their pathogenesis and develop new targets for tick control. The inoculation processes described here require very low technological resources and can be used not only to expose ticks to pathogenic microorganisms. Similarly, the collection of tick hemolymph may represent the first step for many physiological studies.

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

Analysis of tick hemolymph represents an important source of information on how some pathogens cause disease and how ticks immunologically respond to this infection. The present study demonstrates how to inoculate fungal propagules and collect hemolymph from Rhipicephalus microplus engorged females.

الكشف عن مجموعه Hemolymph والتلقيح من المسام البدائية ميتارهيميوم في القراد Microplus Rhipicppus نحو دراسات علم الامراض لافقاريات

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight ...

التصوير المباشر في الوقت الحقيقي لتجديد الغدة تحت الفك السفلي للفأر

Interrogating Cell-Cell Interactions in the Salivary Gland via Ex Vivo Live Cell Imaging

Salivary gland regeneration is a complex process involving intricate interactions among various cell types. Recent studies have shed light on the pivotal role played by macrophages in driving the regenerative response. However, our understanding of this critical role has primarily relied on static views obtained from fixed tissue biopsies. To overcome this limitation and gain insights into these interactions in real time, this study outlines a comprehensive protocol for culturing salivary gland tissue ex vivo and capturing live images of cell migration.
The protocol involves several key steps: First, mouse submandibular salivary gland tissue is carefully sliced using a vibratome and then cultured at an air-liquid interface. These slices can be intentionally injured, for instance, through exposure to radiation, to induce cellular damage and trigger the regenerative response. To track specific cells of interest, they can be endogenously labeled, such as by utilizing salivary gland tissue collected from genetically modified mice where a particular protein is marked with green fluorescent protein (GFP). Alternatively, fluorescently-conjugated antibodies can be employed to stain cells expressing specific cell surface markers of interest. Once prepared, the salivary gland slices are subjected to live imaging using a high-content confocal imaging system over a duration of 12 h, with images captured at 15 min intervals. The resulting images are then compiled to create a movie, which can subsequently be analyzed to extract valuable cell behavior parameters. This innovative method provides researchers with a powerful tool to investigate and better understand macrophage interactions within the salivary gland following injury, thereby advancing our knowledge of the regenerative processes at play in this dynamic biological context.

تسليط الضوء على المؤلف: دراسة تفاعلات الخلايا الظهارية البلاعم في تجديد الغدة اللعابية بعد الإصابة 

Immunofluorescent imaging is constrained by the ability to observe complex, time-dependent biological processes in just a single snapshot in time. This study outlines a live-imaging approach conducted on precision-cut mouse submandibular gland slices. This approach allows for the real-time observation of cell-cell interactions during homeostasis and the processes of regeneration and repair.

استجواب تفاعلات الخلايا الخلوية في الغدة اللعابية عبر تصوير الخلايا الحية خارج الجسم الحي

Salivary gland regeneration is a complex process involving intricate interactions among various cell types. Recent studies have shed light on the pivotal ...