המחברים מבקשים להודות חלוקת וקטור נישאים סניף מחלות בעלי חיים משאבים, במיוחד אנדראה פטרסון, ליסה Massoudi, ורנה או &#39;בראיין, וג&#39;ון לידל עבור הטיפול בהם ותחזוקה של עכברים וארנבים. אנו רוצים גם להודות איימי אולמן, תרזה ראסל, ברברה ג&#39;&#39;ונסון על תרומתם כלפי כתב היד הזה. לבסוף, ברצוננו להודות אליסה אקרט במשרד של מנהל שותף של תקשורת ב-CDC להפקת איורים גרפיים וג&#39;ודי Lavelle על בימוי בכל העניינים המשפטיים הקשורים הצילומים של כתב היד הזה.

1. Hemolymph אוסף להכנת שקופיות (סרט 1) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוצא בעדינות פעיל קרציות האכלה של בעל חיים ומניחים מי חמצן 3% מימן אקטואלי במשך 5 דקות ואז באתנול 70% במשך 10 דקות לפני השטח לעקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם עט פאפ צייר עיגול לשקופית מיקרוסקופ silane מצופה למקם את ציטוט במעגל עט פאפ. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שקופיות מצופה silane משמשים דבקות מיטב hemolymph לשקופית מיקרוסקופ. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצג את תקתוק תחת מיקרוסקופ לנתח (1X אובייקטיבי, העינית 10X, הגדלה 3.5x). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דחף בעדינות על dorsum של טיק עם מלקחיים כדי ללכסן את הרגליים של שנתות ו לשתק את ציטוט. </li></ol> הערה: משתק את הקרצייה לא ללחוץ חזק מדי כי זה עלול לשבש את midgut או לנקב את ציטוט ולזהם hemolymph. <ol start="5" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקטוע את רגלו של טיק או רגליים על הדואר משותפת דיסטלי עם נקודת קנס אזמל חד פעמי. כדי לקבוע infectivity דרך hemolymph רק 1 רגל צריך להיות קטוע. עבור אוסף של hemolymph בשקופית הרגליים כמה אפשר לקטוע. </li></ol> הערה: לא לחתוך את הרגל קרוב מדי לגוף, כיוון שהדבר עלול לגרום לזיהום של midgut hemolymph. <ol start="6" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הרגל או הרגליים נחתכות להמשיך בעדינות כדי להפעיל לחץ dorsum של טיק עבור hemolymph להפריש החוצה את הרגליים על גבי השקופית. בעדינות להעביר את ציטוט סביב בשקופית להפיץ hemolymph. </li></ol> 2. הסרת בלוטות הרוק (סרטים 2 &amp; 3) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספר ספוט 25 בריכות μl של בופר פוספט מלוחים (PBS) לשקופית מיקרוסקופ ומניחים לתקתק לאחת הבריכות PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצג את תקתוק תחת מיקרוסקופ לנתח (1X אובייקטיבי, העינית 10X, הגדלה 3.5x). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייצב את תקתוק עם המלקחיים היטה בסדרים על ידי החזקת capitulum בסיס (חלקי הפה) או האחורי של קרציות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את מלקחיים שקצהו דקות לתוך החלק האחורי של טיק טיק ופורסים את זה dorsum לחשוף את האיברים. אם תרצה midgut ניתן להסיר בשלב זה והועברו בריכה טריים של PBS על המיקרוסקופ שקופית או צינור microfuge המכיל PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצא זוג בלוטות הרוק (כמו אשכולות ענבים) הממוקמים בילטרלי לצד רגליו של טיק. אם בלוטות הרוק אינן גלויות לעין בין פסולת טיק טיק להעביר את החלק העיקרי, עדיין המכילה בלוטות הרוק, למאגר חדש של PBS לצמצם את שיבוש והפסד של בלוטות הרוק. </li></ol> הערה: בתחילת ההנקה, בלוטות הרוק קשה יותר לאתר כי הם לא מפותחים כמו בהשוואה בהמשך ההנקה. <ol start="6" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת בלוטות הרוק של הקרצייה עם מלקחיים שקצהו בסדר ומקום בבריכה חדשה של PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינטרנט אלחוטיה בסדר היטה מלקחיים להעביר את בלוטות הרוק לאחר הבריכה נקייה 25 PBS μl, חזור על שלב זה לשטוף 3-4 פעמים נוספות כדי להסיר כל מיקרואורגניזמים חיצוניים ופסולת לתקתק. </li></ol> הערה: לשטוף את אשכולות בלוטות הרוק בעדינות כדי לצמצם את אובדן הפרעה בבלוטות הרוק בודדים. <ol start="8" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את בלוטות לבריכה נקייה של PBS בשקופית מצופה silane או בצינור microfuge המכיל PBS. </li></ol> 3. אוסף רוק (סרט 4) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוצא בעדינות קרציות נקבה בוגרת של ארנב או מארחים אחרים באמצעות מלקחיים שקצהו בסדר גמור לפני שהם טיפה את צבה מלא, כ 5-7 ימים לאחר ההתקשרות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציית לתקתק התפוח כמעט על קצה אחד של המיקרוסקופ שקופית עם נייר דבק. הסרט צריך להיות ממוקם כ ¾ הדרך לכיוון הראש dorsum של קרצייה, עוזב capitulum בסיס של טיק (חלקי הפה) חשוף.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שם הסרט פוגש את הקצה הקדמי של μl pipet הגב קרציות 5 פני פתרון pilocarpine 5% (ב מתנול). אפשר סרט על הפתיל pilocarpine על טיק של dorsum, מבלי לאפשר pilocarpine לבוא במגע עם capitulum בסיס של טיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר פיסת חומר רעיל דוגמנות לשקופית מיקרוסקופ כ 1 ס&quot;מ בין איברי הפה של שנתות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במלקחי שקצהו בסדר לנתק את קצה צינור נימי משך 28 לקוטר הרצוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צפה capitulum בסיס של טיק תחת מיקרוסקופ לנתח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להתאים hypostome של תקתוק לתוך צינור נימי משך המאפשר palps לסתי להתגורר בצד החיצוני של צינור נימי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על הקצה השני של צינור נימי לתוך חימר דוגמנות להחזיק צינור נימי במקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את תקתוק ריר מותקן בתוך חדר חשוך עם לחות גבוהה (למשל, התיבה עפעפיים קלקר מצופה פאפ רטוב<html> אה מגבות). הטה את השקופית כך את הנקודות hypostome אל החלק התחתון של המיכל, המאפשר כוח הכבידה כדי לסייע אוסף הרוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את המיכל בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקוב מקרוב אחר קרציות ריר עבור השעה הראשונה, לאסוף את הרוק כפי שהוא מופק על ידי גירוש זה של צינורות נימי עם נורת pipet פסטר. לאחר השעה הראשונה, בדוק הצטברות כל שעה במשך 4 שעות לפחות. ממשיכים לאסוף את הרוק כפי שהוא נוצר. </li></ol> הערה: רכישה הרוק ניתן לעצור פעם אחת הרוק מספיק נאסף למחקר מתבצע. <ol start="12" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם קרציות אינן ריר או רוק יותר נדרש, הפרשת ריר יכול לעיתים להיגרם על ידי שימוש בצינור נימי לעסות hypostome. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 0.1 כרכים של קוקטייל מעכבי פרוטאז לרוק וחנות ב -80 ° C עד הצורך. </li></ol> 4. נציג תוצאות e_content &quot;&gt; סרט 1 מדגים איך להחזיק הנימפה ניזון באופן חלקי א scapularis ו לקטוע את רגליו כדי לאסוף hemolymph לשקופית מיקרוסקופ. לאחר הרגל או הרגליים קטוע נוזל צלול מופרש (איור 1A ו-1B). אם midgut מקרע hemolymph נראה מעונן כפי שהוא יוצא של הרגל הקטועה (ים) (1 ג הדמות 1D). החילוץ של בלוטות הרוק לאחר הנימפה כבר להאכיל במשך 48 או 72 שעות באה לידי ביטוי בסרטים 2 ו -3. אחרי טיק הוא ניקב יש בדרך כלל הרבה פסולת (המורכב קנה הנשימה, malpighian tubules, דם, רקמת חיבור וכו &#39;), כדי למנוע אובדן או שיבוש של בלוטות הרוק להעביר את ציטוט למאגר חדש של PBS. דמויות 2a ו-2B הצג שבו בלוטות הרוק הממוקמות אחרי הנימפה נחתך פתוח ודמות 2C מראה הסיר אשכולות בלוטות הרוק בבריכה של PBS. אוסף הרוק להגדיר מ א נקבות בוגרות scapularis אני<html> זה שמוצג בסרט 4 ואיור 3. לתקתק ריר לתוך צינור נימי הוא נצפה בסרט 5. שיטה זו של איסוף הרוק משמש pilocarpine לעודד את הפרשת הרוק ואת יכולה להניב מעל 20 μl של רוק לכל קרצייה נקבה בוגרת. <img alt="באיור 1." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig1.jpg" /> באיור 1. מבנים שכותרתו של נימפה scapularis א. 1. סרט קרצית אוסף scapularis hemolymph. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie1.avi">לחץ כאן כדי לצפות בסרט</a> . <img alt="איור 2." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig2.jpg" /> איור 2. מזוהמת (A &amp; B) מזוהמים (C &amp; D) hemolymph מקרין מהרגל של נימפה. 2. הסרט מיצוי בלוטת הרוק מ 48 שעות הפד א scapularis נימפה.pload/3894/3894movie2.avi &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בסרט. סרט 3. בלוטת הרוק החילוץ מ 72 שעות הפד א נימפה scapularis. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie3.avi">לחץ כאן כדי לצפות בסרט</a> . <img alt="איור 3." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig3.jpg" /> איור 3. קרצית בלוטות הרוק scapularis הבובה ומשכה. (A &amp; B) דוגמאות של בלוטות הרוק 72 שעות הפד נימפה, לפני מיצוי. (ג) הוסר אשכול בלוטות הרוק. סרט 4. אוסף הרוק להגדיר מ י למבוגרים קרצייה נקבה scapularis. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie4.avi">לחץ כאן כדי לצפות בסרט</a> . <img alt="באיור 4." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig4.jpg" /> איור 4. הרוק אוסף של מבוגר ממני לא נשים scapularisicks. (A &amp; B) סמן רכוב על שקופית עם hypostome שלה בסופו של דבר משך את צינור נימי עם תום unpulled של צינור נימי בידי פלסטלינה. (C &amp; D) תא Humidified המכיל הבוגרת א ריר קרציות נשים scapularis. סרט 5. קרצית קרציה נקבה scapularis ריר לתוך צינור נימי. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie5.avi">לחץ כאן כדי לצפות בסרט</a> .

<ol>
	<li>Quach, K. A., Boctor, F. N., Elston, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What's+eating+you?+Hyalomma+ticks.">What's eating you? Hyalomma ticks.</a> Cutis. 87, 165-167 (2011).</li><li>Graham, J., Stockley, K., Goldman, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick-borne+illnesses:+a+CME+update.">Tick-borne illnesses: a CME update.</a> Pediatr. Emerg. Care. 27, 141-147 (2011).</li><li>Nuttall, P. A., Paesen, G. C., Lawrie, C. H., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector-host+interactions+in+disease+transmission.">Vector-host interactions in disease transmission.</a> J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 2, 381-386 (2000).</li><li>Estrada-Pena, A., Jongejan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ticks+feeding+on+humans:+a+review+of+records+on+human-biting+Ixodoidea+with+special+reference+to+pathogen+transmission.">Ticks feeding on humans: a review of records on human-biting Ixodoidea with special reference to pathogen transmission.</a> Exp. Appl. Acarol. 23, 685-715 (1999).</li><li>Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen-tick-host+interactions:+Borrelia+burgdorferi+and+TBE+virus.">Pathogen-tick-host interactions: Borrelia burgdorferi and TBE virus.</a> Zentralbl Bakteriol. 289, 492-505 (1999).</li><li>Jones, L. D., Hodgson, E., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+virus+transmission+by+tick+salivary+glands.">Enhancement of virus transmission by tick salivary glands.</a> J. Gen. Virol. 70, 1895-1898 (1989).</li><li>Labuda, M., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick-borne+viruses.">Tick-borne viruses.</a> Parasitol. 129, 221-245 (2004).</li><li>Socolovschi, C., Mediannikov, O., Raoult, D., Parola, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+tick-borne+bacterial+diseases+in+Europe.">Update on tick-borne bacterial diseases in Europe.</a> Parasite. 16, 259-273 (2009).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Interactions+that+Enable+Movement+of+the+Lyme+Disease+Agent+from+the+Tick+Gut+into+the+Hemolymph.">Molecular Interactions that Enable Movement of the Lyme Disease Agent from the Tick Gut into the Hemolymph.</a> PLoS Pathog. 7, e1002079 (2011).</li><li>Piesman, J., Schneider, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+in+Lyme+disease+spirochetes+during+transmission+by+nymphal+ticks.">Dynamic changes in Lyme disease spirochetes during transmission by nymphal ticks.</a> Exp. Appl. Acarol. 28, 141-145 (2002).</li><li>Brossard, M., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick+immunobiology.">Tick immunobiology.</a> Parasitol. , S161-S176 (2004).</li><li>Machackova, M., Obornik, M., Kopecky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+salivary+gland+extract+from+Ixodes+ricinus+ticks+on+the+proliferation+of+Borrelia+burgdorferi+sensu+stricto+in+vivo.">Effect of salivary gland extract from Ixodes ricinus ticks on the proliferation of Borrelia burgdorferi sensu stricto in vivo.</a> Folia Parasitol. 53, 153-158 (2006).</li><li>Nuttall, P. A., Labuda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick-host+interactions:+saliva-activated+transmission.">Tick-host interactions: saliva-activated transmission.</a> Parasitol. 129, 177-189 (2004).</li><li>Anguita, J., Hedrick, M. N., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+Borrelia+burgdorferi+in+the+tick+and+the+mammalian+host.">Adaptation of Borrelia burgdorferi in the tick and the mammalian host.</a> FEMS Microbiol. Rev. 27, 493-504 (2003).</li><li>Hovius, J. W., van Dam, A. P., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick-host-pathogen+interactions+in+Lyme+borreliosis.">Tick-host-pathogen interactions in Lyme borreliosis.</a> Trends Parasitol. 23, 434-438 (2007).</li><li>Dunham-Ems, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+reveals+a+biphasic+mode+of+dissemination+of+Borrelia+burgdorferi+within+ticks.">Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks.</a> Journal Clin. Invest. 119, 3652-3665 (2009).</li><li>Ribeiro, J. M., Mather, T. N., Piesman, J., Spielman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissemination+and+salivary+delivery+of+Lyme+disease+spirochetes+in+vector+ticks+(Acari:+Ixodidae).">Dissemination and salivary delivery of Lyme disease spirochetes in vector ticks (Acari: Ixodidae).</a> J. Med. Entomol. 24, 201-205 (1987).</li><li>Piesman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+of+Lyme+disease+spirochetes+(Borrelia+burgdorferi.">Transmission of Lyme disease spirochetes (Borrelia burgdorferi.</a> Exp. Appl. Acarol. 7, 71-80 (1989).</li><li>De Silva, A. M., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+migration+of+Borrelia+burgdorferi+in+Ixodes+ticks+during+blood+feeding.">Growth and migration of Borrelia burgdorferi in Ixodes ticks during blood feeding.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 53, 397-404 (1995).</li><li>Horka, H., Cerna-Kyckova, K., Skallova, A., Kopecky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick+saliva+affects+both+proliferation+and+distribution+of+Borrelia+burgdorferi+spirochetes+in+mouse+organs+and+increases+transmission+of+spirochetes+to+ticks.">Tick saliva affects both proliferation and distribution of Borrelia burgdorferi spirochetes in mouse organs and increases transmission of spirochetes to ticks.</a> Int. J. Med. Microbiol. 299, 373-380 (2009).</li><li>Brossard, M., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunology+of+interactions+between+ticks+and+hosts.">Immunology of interactions between ticks and hosts.</a> Med. Vet. Entomol. 11, 270-276 (1997).</li><li>Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick+modulation+of+host+immunity:+an+important+factor+in+pathogen+transmission.">Tick modulation of host immunity: an important factor in pathogen transmission.</a> Int. J. Parasitol. 29 (99), 851-859 (1999).</li><li>Binnington, K. C., Kemp, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+tick+salivary+glands+in+feeding+and+disease+transmission.">Role of tick salivary glands in feeding and disease transmission.</a> Adv. Parasitol. 18, 315-339 (1980).</li><li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+neutrophil+function+by+two+tick+salivary+proteins.">Inhibition of neutrophil function by two tick salivary proteins.</a> Infect. Immun. 77, 2320-2329 (2009).</li><li>Montgomery, R. R., Lusitani, D., De Boisfleury Chevance, A., Malawista, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick+saliva+reduces+adherence+and+area+of+human+neutrophils.">Tick saliva reduces adherence and area of human neutrophils.</a> Infect. Immun. 72, 2989-2994 (2004).</li><li>Lima, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+infectivity+of+the+Lyme+disease+spirochete+Borrelia+burgdorferi+derived+from+Ixodes+scapularis+salivary+glands+and+midgut.">Differential infectivity of the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi derived from Ixodes scapularis salivary glands and midgut.</a> J. Med. Entomol. 42, 506-510 (2005).</li><li>Severinova, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-inoculation+of+Borrelia+afzelii+with+tick+salivary+gland+extract+influences+distribution+of+immunocompetent+cells+in+the+skin+and+lymph+nodes+of+mice.">Co-inoculation of Borrelia afzelii with tick salivary gland extract influences distribution of immunocompetent cells in the skin and lymph nodes of mice.</a> Folia Microbiol. 50, 457-463 (2005).</li><li>Labuda, M., Jones, L. D., Williams, T., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+tick-borne+encephalitis+virus+transmission+by+tick+salivary+gland+extracts.">Enhancement of tick-borne encephalitis virus transmission by tick salivary gland extracts.</a> Med. Vet. Entomol. 7, 193-196 (1993).</li><li>Kariu, T., Coleman, A. S., Anderson, J. F., Pal, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+Rapid+Transfer+and+Localization+of+Lyme+Disease+Pathogens+Within+the+Tick+Gut.">Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut.</a> J. Vis. Exp. (48), e2544 (2011).</li><li>Edwards, K. T., Goddard, J., Varela-Stokes, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examination+of+the+internal+morphology+of+the+Ixodid+tick+Amblyomma+maculatum+koch,+(Acari:Ixodidae);+a+"How-to"+pictorial+dissection+guide.">Examination of the internal morphology of the Ixodid tick Amblyomma maculatum koch, (Acari:Ixodidae); a "How-to" pictorial dissection guide.</a> Midsouth Entomologist. 2, 28-39 (2009).</li><li>Ledin, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Borreliacidal+activity+of+saliva+of+the+tick+Amblyomma+americanum.">Borreliacidal activity of saliva of the tick Amblyomma americanum.</a> Med. Vet. Entomol. 19, 90-95 (2005).</li><li>Ribeiro, J. M., Zeidner, N. S., Ledin, K., Dolan, M. C., Mather, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+much+pilocarpine+contaminates+pilocarpine-induced+tick+saliva?.">How much pilocarpine contaminates pilocarpine-induced tick saliva?.</a> Med. Vet. Entomol. 18, 20-24 (2004).</li><li>Barker, R. W., Burris, E., Sauer, J. R., Hair, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Composition+of+tick+oral+secretions+obtained+by+three+different+collection+methods.">Composition of tick oral secretions obtained by three different collection methods.</a> J. Med. Entomol. 10, 198-201 (1973).</li><li>Burgdorfer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemolymph+test.+A+technique+for+detection+of+rickettsiae+in+ticks.">Hemolymph test. A technique for detection of rickettsiae in ticks.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 19, 1010-1014 (1970).</li></ol>

אין לנו מה למסור.

אוסף של hemolymph לתקתק, בלוטות הרוק, ורוק חשוב במחקר של שידור-Tick נישאים הפתוגן, שכיחות ההפצה, התפשטות, והתמדה לתקתק וגם מארח 6,11-13,20,23,29. ישנן מספר דרכים לנתח לתקתק 30,31. עם זאת, כאשר איסוף בלוטות הרוק חיוני לנתח לתקתק כמו שצריך אז בלוטות הרוק לא נקרע או אבד שרידים ש...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> מי חמצן </td><td> דיג </td><td> H312-500 </td></tr><tr><td> אתנול </td><td> Acros </td><td> 61509-5000 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> בוסטון Bioproducts </td><td> BM-2205 </td></tr><tr><td> דומון פיין מלקחיים (3C) </td><td> דיג </td><td> NC9906085 </td></tr><tr><td> Silane מיקרוסקופ שקופיות שטופלו </td><td> Bioworld </td><td> 42763007-1 </td></tr><tr><td> פאפ עט </td><td> Bioworld </td><td> 21750008-1 </td></tr><tr><td> סופר פרוסט בתוספת שקופיות מיקרוסקופ </td><td> דיג </td><td> 12-550-18 </td></tr><tr><td> Pilocarpine </td><td> סיגמא </td><td> P6503-5G </td></tr><tr><td> מעכבי פרוטאז קוקטייל </td><td> סיגמא </td><td> P2714 </td></tr><tr><td> # 11 הפנויה אזמל </td><td> נוצה </td><td> 2975 # 11 </td></tr><tr><td> מודלים רעילים חימר </td><td&gt; פישר </td><td> S17307 </td></tr><tr><td> נימי צינורות </td><td> המרדף המדעי זכוכית, Inc </td><td> 40A502 </td></tr></tbody></table>

saliva, salivary gland, and hemolymph collection from ixodes scapularis ticks

קרציות נמצאות ברחבי העולם ליסר בני האדם עם קרצייה שמקורן מחלות רבות. קרציות הן וקטורים של פתוגנים הגורמים מחלת ליים וקרציות נישאים חום ההתקפי (Borrelia spp.), Rocky Mountain חום מנוקד (Rickettsia rickettsii), ehrlichiosis (Ehrlichia chaffeensis וא &#39;שוה), anaplasmosis (Anaplasma phagocytophilum), דלקת קרום המוח (קרציות וירוס דלקת המוח נישאים), babesiosis (Babesia spp.), קדחת קרציות קולורדו (Coltivirus), ו tularemia (Francisella tularensis) 1-8. כדי להיות מועבר כראוי לתוך המארח אלה גורמים מזהמים דיפרנציאלי לווסת את ביטוי הגנים, אינטראקציה עם חלבונים שנתות, ולהעביר דרך קרציות 3,9-13. כך, למשל, סוכן מחלת ליים, Borrelia burgdorferi, מתאים את עצמו דרך ביטוי גנים ההפרש לשלבים חג ורעב של מחזור enzootic של טיק 14,15. יתר על כן, כמו קרצייה קרצית צורכתbloodmeal Borrelia לשכפל לעבור מ midgut אל hemocoel, הם נוסעים בלוטות הרוק, והם מועברים אל המחשב המארח עם הרוק גורשו 9,16-19. כמו קרציה הזנות מארח בדרך כלל מגיב בתגובה חיסונית חזקה עוצר דמום ובסיסיות 11,13,20-22. למרות תגובות אלה המארחות, י scapularis יכול להאכיל במשך כמה ימים, כי הרוק מכיל לתקתק חלבונים המערכת החיסונית, סוכני ממס, תרופות נגד קרישת דם, ו fibrinolysins כדי לסייע לתקתק האכלה 3,11,20,21,23. את פעילות המערכת החיסונית שבידי רוק לתקתק או תמצית בלוטת הרוק (SGE) להקל, העברת התרבות, והפצה של טיק שמקורן פתוגנים רבים 3,20,24-27. כדי להמשיך להבין כיצד לתקתק נישאים גורמים מזהמים גורמים למחלות חשוב לנתח באופן פעיל האכלה קרציות ולאסוף רוק לתקתק. זה פרוטוקול וידאו מדגים טכניקות הנתיחה עבוראוסף של hemolymph והסרת בלוטות הרוק של פעיל להאכיל א נימפות scapularis לאחר 48 ו - 72 שעות מיקום העכבר הודעה. כמו כן, אנו מראים אוסף הרוק מן הנקבה הבוגרת הראשונה scapularis לתקתק.

Watch this Scientific Journal Video about Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks at JoVE.com

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

אוסף של hemolymph לתקתק נגוע, בלוטות הרוק, ורוק חשוב ללמוד איך לתקתק נישאים פתוגנים לגרום למחלה. בפרוטוקול זה אנו מדגימים כיצד לאסוף את בלוטות הרוק hemolymph ו מ האכלה<em&gt; קרצית scapularis</em&gt; נימפות. כמו כן, אנו מראים אוסף הרוק הנשי מ<em&gt; א scapularis</em&gt; מבוגרים.

רוק, בלוטות הרוק, וכן אוסף Hemolymph מ קרציות קרצית Scapularis

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

saliva-salivary-gland-hemolymph-collection-from-ixodes-scapularis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

29.2K Views.  Centers for Disease Control and Prevention. אוסף של hemolymph לתקתק נגוע, בלוטות הרוק, ורוק חשוב ללמוד איך לתקתק נישאים פתוגנים לגרום למחלה. בפרוטוקול זה אנו מדגימים כיצד לאסוף את בלוטות הרוק hemolymph ו מ האכלה קרצית scapularis נימפות. כמו כן, אנו מראים אוסף הרוק הנשי מ א scapularis מבוגרים.

Video: Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

RNA Interference in Ticks

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites of wild and domestic animals and humans, and are considered to be second worldwide to mosquitoes as vectors of human diseases1 and the most important vectors affecting cattle industry worldwide2. Ticks are classified in the subclass Acari, order Parasitiformes, suborder Ixodida and are distributed worldwide from Arctic to tropical regions3. Despite efforts to control tick infestations, these ectoparasites remain a serious problem for human and animal health4,5.
RNA interference (RNAi)6 is a nucleic acid-based reverse genetic approach that involves disruption of gene expression in order to determine gene function or its effect on a metabolic pathway. Small interfering RNAs (siRNAs) are the effector molecules of the RNAi pathway that is initiated by double-stranded RNA (dsRNA) and results in a potent sequence-specific degradation of cytoplasmic mRNAs containing the same sequence as the dsRNA trigger7-9. Post-transcriptional gene silencing mechanisms initiated by dsRNA have been discovered in all eukaryotes studied thus far, and RNAi has been rapidly developed in a variety of organisms as a tool for functional genomics studies and other applications10.
RNAi has become the most widely used gene-silencing technique in ticks and other organisms where alternative approaches for genetic manipulation are not available or are unreliable5,11. The genetic characterization of ticks has been limited until the recent application of RNAi12,13. In the short time that RNAi has been available, it has proved to be a valuable tool for studying tick gene function, the characterization of the tick-pathogen interface and the screening and characterization of tick protective antigens14. Herein, a method for RNAi through injection of dsRNA into unfed ticks is described. It is likely that the knowledge gained from this experimental approach will contribute markedly to the understanding of basic biological systems and the development of vaccines to control tick infestations and prevent transmission of tick-borne pathogens15-19.

A method for RNA interference (RNAi) by injection of dsRNA into unfed ticks is described. RNAi is the most widely used gene-silencing technique in ticks where the use of other methods of genetic manipulation has been limited.

RNA התערבות קרציות

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites of wild and domestic animals and humans, and are considered to be second worldwide to mosquitoes as vectors ...

Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries, and Embryos of Vector Mosquitoes

Mosquitoes are vectors for a diverse set of pathogens including arboviruses, protozoan parasites and nematodes. Investigation of transcripts and gene regulators that are expressed in tissues in which the mosquito host and pathogen interact, and in organs involved in reproduction are of great interest for strategies to reduce mosquito-borne disease transmission and disrupt egg development. A number of tools have been employed to study and validate the temporal and tissue-specific regulation of gene expression. Here, we describe protocols that have been developed to obtain spatial information, which enhances our understanding of where specific genes are expressed and their products accumulate. The protocol described has been used to validate expression and determine accumulation patterns of transcripts in tissues related to mosquito-borne pathogen transmission, such as female salivary glands, as well as subcellular compartments of ovaries and embryos, which relate to mosquito reproduction and development. 
 The following procedures represent an optimized methodology that improves the efficiency of various steps in the protocol without loss of target-specific hybridization signals. Guidelines for RNA probe preparation, dissection of soft tissues and the general procedure for fixation and hybridization are described in Part A, while steps specific for the collection, fixation, pre-hybridization and hybridization of mosquito embryos are detailed in Part B.

Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries, and Embryos of Vector Mosquitoes

Temporal and spatial gene expression analyses have a crucial role in functional genomics. Whole-mount hybridization in situ is useful for determining the localization of transcripts within tissues and subcellular compartments. Here we outline a hybridization in situ protocol with modifications for specific target tissues in mosquitoes.

הכלאה<em&gt; באתרו</em&gt; של בלוטות הרוק, השחלות, ועוברים של וקטור יתושים

Mosquitoes are vectors for a diverse set of pathogens including arboviruses, protozoan parasites and nematodes.  Investigation of transcripts and gene ...

Feeding of Ticks on Animals for Transmission and Xenodiagnosis in Lyme Disease Research

Transmission of the etiologic agent of Lyme disease, Borrelia burgdorferi, occurs by the attachment and blood feeding of Ixodes species ticks on mammalian hosts. In nature, this zoonotic bacterial pathogen may use a variety of reservoir hosts, but the white-footed mouse (Peromyscus leucopus) is the primary reservoir for larval and nymphal ticks in North America. Humans are incidental hosts most frequently infected with B. burgdorferi by the bite of ticks in the nymphal stage. B. burgdorferi adapts to its hosts throughout the enzootic cycle, so the ability to explore the functions of these spirochetes and their effects on mammalian hosts requires the use of tick feeding. In addition, the technique of xenodiagnosis (using the natural vector for detection and recovery of an infectious agent) has been useful in studies of cryptic infection. In order to obtain nymphal ticks that harbor B. burgdorferi, ticks are fed live spirochetes in culture through capillary tubes. Two animal models, mice and nonhuman primates, are most commonly used for Lyme disease studies involving tick feeding. We demonstrate the methods by which these ticks can be fed upon, and recovered from animals for either infection or xenodiagnosis.

Lyme disease is the most commonly-reported vector-borne disease in North America. The causative agent, Borrelia burgdorferi is a spirochete bacterium transmitted by Ixodid ticks. Transmission and detection of infection in animal models is optimized by the use of tick feeding, which we describe here.

האכלה של קרציות בבעלי חיים להילוכים וXenodiagnosis במחקר מחלת ליים

Transmission of the etiologic agent of Lyme disease, Borrelia burgdorferi, occurs by the  attachment and blood feeding of Ixodes species ticks on ...

Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

Ixodes scapularis, the vector of Lyme disease, is one of the most important disease vectors in the eastern and Midwestern United States. This species is a three host tick that requires a blood meal from a vertebrate host for each development stage, and the adult females require a blood meal for reproduction. Larval ticks attach to their host for 3 - 5 days for feeding and drop off the host when fully engorged. This dependency on several different hosts and the lengthy attachment time for engorgement complicates tick rearing in the laboratory setting. However, to understand tick biology and tick-pathogen interactions, the production of healthy, laboratory-reared ticks is essential. Here, we demonstrate a simple, cost-effective protocol for immature tick feeding on mice. We modified the existing protocols for decreased stress on mice and increased tick feeding success and survival by using disposable cages without mesh bottoms to avoid contact of ticks with water contaminated with mice urine and feces.

Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

The production of healthy laboratory-reared ticks is essential to studies on tick biology, and tick-pathogen interactions. Here we demonstrate a simple protocol for immature tick feeding that is cost-effective and less stressful to mice.

Rearing<em&gt; Scapularis קרצית,</em&gt; את הטיק השחור רגליים: האכלת שלבי Immature על עכברים

Ixodes scapularis, the vector of Lyme disease, is one of the most important disease vectors in the eastern and Midwestern United States. This species is a ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced saliva production. Similarly, saliva production is severely compromised in patients receiving radiation treatment for head and neck cancers. Rodent models, developed to mimic these clinical conditions, facilitate an understanding of the disease pathogenesis and allow for the development of new therapeutic strategies. Therefore, the ability to accurately, reproducibly, and repeatedly measure salivary gland function in animal models is critical. Building on procedures previously described in the literature, a method was developed that meets these criteria and was used to evaluate salivary gland function in mice. An additional advantage of this new method is that it is easily mastered, and has little inter-operator variation. Salivary gland function is evaluated as the amount (weight or volume) or rate (mL/min) of saliva produced in response to pilocarpine stimulation. The collected saliva is a good source for the analyses of protein content, immunoglobulin concentrations, and other biomolecules.

Salivary gland hypofunction is a frequent consequence of autoimmune disease and radiation therapy. Reproducible evaluation of salivary gland function in mouse models of these diseases is a technical challenge. Here, a simple method for accurate and reproducible measurement of saliva production in mice is described.

שיטת המדידה של תפקוד בלוטת הרוק בעכברים

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Preparation of Murine Submandibular Salivary Gland for Upright Intravital Microscopy

The submandibular salivary gland (SMG) is one of the three major salivary glands, and is of interest for many different fields of biological research, including cell biology, oncology, dentistry, and immunology. The SMG is an exocrine gland comprised of secretory epithelial cells, myofibroblasts, endothelial cells, nerves, and extracellular matrix. Dynamic cellular processes in the rat and mouse SMG have previously been imaged, mostly using inverted multi-photon microscope systems. Here, we describe a straightforward protocol for the surgical preparation and stabilization of the murine SMG in anesthetized mice for in vivo imaging with upright multi-photon microscope systems. We present representative intravital image sets of endogenous and adoptively transferred fluorescent cells, including the labeling of blood vessels or salivary ducts and second harmonic generation to visualize fibrillar collagen. In sum, our protocol allows for surgical preparation of mouse salivary glands in upright microscopy systems, which are commonly used for intravital imaging in the field of immunology.

We describe a protocol to surgically expose and stabilize the murine submandibular salivary gland for intravital imaging using upright intravital microscopy. This protocol is easily adaptable to other exocrine glands of the head and neck region of mice and other small rodents.

הכנה של בלוטת הרוק Submandibular מאתר מיקרוסקופ Intravital זקופה

The submandibular salivary gland (SMG) is one of the three major salivary glands, and is of interest for many different fields of biological research, ...

Isolation of Salivary Epithelial Cells from Human Salivary Glands for In Vitro Growth as Salispheres or Monolayers

The salivary glands are a site of significant interest for researchers interested in multiple aspects of human disease. One goal of researchers is to restore function of glands damaged by radiation therapies or due to pathologies associated with Sj&#246;gren's syndrome. A second goal of researchers is to define the mechanisms by which viruses replicate within glandular tissue where they can then gain access to salivary fluids important for horizontal transmission. These goals highlight the need for a robust and accessible in vitro salivary gland model that can be utilized by researchers interested in the above mentioned as well as related research areas. Here we discuss a simple protocol to isolate epithelial cells from human salivary glands and propagate them in vitro. Our protocol can be further optimized to meet the needs of individual studies. Briefly, salivary tissue is mechanically and enzymatically separated to isolate single cells or small clusters of cells. Selection for epithelial cells occurs by plating onto a basement membrane matrix in the presence of media optimized to promote epithelial cell growth. These resulting cultures can be maintained as three-dimensional clusters, termed "salispheres", or grown as a monolayer on treated plastic tissue culture dishes. This protocol results in the outgrowth of a heterogenous population of mainly epithelial cells that can be propagated for 5-8 passages (15-20 population doublings) before undergoing cellular senescence.

We present a method for isolating and cultivating primary human salivary gland-derived epithelial cells. These cells exhibit gene expression patterns consistent with them being of salivary epithelial origin and can be grown as salispheres on basement membrane matrices derived from Engelbreth-Holm-Swarm tumor cells or as monolayers on treated culture dishes.

בידוד של תאים אפיתל הרוק מן הרוק בלוטות האדם עבור צמיחה מחוץ לתחום כמו סאליספירות או Monolayers

The salivary glands are a site of significant interest for researchers interested in multiple aspects of human disease. One goal of researchers is to ...

Purification of High Yield Extracellular Vesicle Preparations Away from Virus

One of the major hurdles in the field of extracellular vesicle (EV) research today is the ability to achieve purified EV preparations in a viral infection setting. The presented method is meant to isolate EVs away from virions (i.e., HIV-1), allowing for a higher efficiency and yield compared to conventional ultracentrifugation methods. Our protocol contains three steps: EV precipitation, density gradient separation, and particle capture. Downstream assays (i.e., Western blot, and PCR) can be run directly following particle capture. This method is advantageous over other isolation methods (i.e., ultracentrifugation) as it allows for the use of minimal starting volumes. Furthermore, it is more user friendly than alternative EV isolation methods requiring multiple ultracentrifugation steps. However, the presented method is limited in its scope of functional EV assays as it is difficult to elute intact EVs from our particles. Furthermore, this method is tailored towards a strictly research-based setting and would not be commercially viable.

This protocol isolates extracellular vesicles (EVs) away from virions with high efficiency and yield by incorporating EV precipitation, density gradient ultracentrifugation, and particle capture to allow for a streamlined workflow and a reduction of starting volume requirements, resulting in reproducible preparations for use in all EV research.

טיהור של תשואה גבוהה לחילוץ ההכנות הרחק וירוס

One of the major hurdles in the field of extracellular vesicle (EV) research today is the ability to achieve purified EV preparations in a viral infection ...

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight loss, depreciation of the animals&#39; leather and also can act as a vector of several pathogens. Due to the exorbitant costs to control these parasites, damage to the environment caused by the inappropriate use of chemical acaricides, and the increased resistance against traditional parasiticides, alternative control of ticks, by the use of entomopathogenic fungi, for example, has been considered an interesting approach. Nevertheless, few studies have demonstrated how the tick&#39;s immune system acts to fight these entomopathogens. Therefore, this protocol demonstrates two methods used for entomopathogen inoculation into engorged females and two techniques used for hemolymph collection and hemocytes harvesting. Inoculation of pathogens at the leg insertion in the tick female&#39;s body allows evaluation of females biologic parameters unlike the inoculation between the scutum and capitulum, which frequently damages Gen&#233;&#39;s organ. Dorsal hemolymph collection yielded a higher volume recovery than collection through the legs. Some limitations of tick hemolymph collection and processing include i) high rates of hemocytes&#39; disruption, ii) hemolymph contamination with disrupted midgut, and iii) low hemolymph volume recovery. When hemolymph is collected through the leg cutting, the hemolymph takes time to accumulate at the leg opening, favoring the clotting process. In addition, fewer hemocytes are obtained in the collection through the leg compared to the dorsal collection, even though the first method is considered easier to be performed. Understanding the immune response in ticks mediated by entomopathogenic agents helps to unveil their pathogenesis and develop new targets for tick control. The inoculation processes described here require very low technological resources and can be used not only to expose ticks to pathogenic microorganisms. Similarly, the collection of tick hemolymph may represent the first step for many physiological studies.

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

Analysis of tick hemolymph represents an important source of information on how some pathogens cause disease and how ticks immunologically respond to this infection. The present study demonstrates how to inoculate fungal propagules and collect hemolymph from Rhipicephalus microplus engorged females.

בגילוי המוליל אוסף והחיסונים של מטרהיזיפיאוס לתוך ריפיקו מיקרופלוס קרציות לקראת לימודי חסרי חוליות פתולוגיה

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight ...

הדמיה חיה בזמן אמת של התחדשות בלוטה תת-לסתית של עכבר

Interrogating Cell-Cell Interactions in the Salivary Gland via Ex Vivo Live Cell Imaging

Salivary gland regeneration is a complex process involving intricate interactions among various cell types. Recent studies have shed light on the pivotal role played by macrophages in driving the regenerative response. However, our understanding of this critical role has primarily relied on static views obtained from fixed tissue biopsies. To overcome this limitation and gain insights into these interactions in real time, this study outlines a comprehensive protocol for culturing salivary gland tissue ex vivo and capturing live images of cell migration.
The protocol involves several key steps: First, mouse submandibular salivary gland tissue is carefully sliced using a vibratome and then cultured at an air-liquid interface. These slices can be intentionally injured, for instance, through exposure to radiation, to induce cellular damage and trigger the regenerative response. To track specific cells of interest, they can be endogenously labeled, such as by utilizing salivary gland tissue collected from genetically modified mice where a particular protein is marked with green fluorescent protein (GFP). Alternatively, fluorescently-conjugated antibodies can be employed to stain cells expressing specific cell surface markers of interest. Once prepared, the salivary gland slices are subjected to live imaging using a high-content confocal imaging system over a duration of 12 h, with images captured at 15 min intervals. The resulting images are then compiled to create a movie, which can subsequently be analyzed to extract valuable cell behavior parameters. This innovative method provides researchers with a powerful tool to investigate and better understand macrophage interactions within the salivary gland following injury, thereby advancing our knowledge of the regenerative processes at play in this dynamic biological context.

מחבר זרקור: חקר אינטראקציות מקרופאג'-אפיתל בין תאים בהתחדשות בלוטת הרוק לאחר פציעה 

Immunofluorescent imaging is constrained by the ability to observe complex, time-dependent biological processes in just a single snapshot in time. This study outlines a live-imaging approach conducted on precision-cut mouse submandibular gland slices. This approach allows for the real-time observation of cell-cell interactions during homeostasis and the processes of regeneration and repair.

חקירת אינטראקציות תאים-תאים בבלוטת הרוק באמצעות Ex Vivo Live Cell Imaging

Salivary gland regeneration is a complex process involving intricate interactions among various cell types. Recent studies have shed light on the pivotal ...