فإن الكتاب أود أن أشكر الدكتور زاكاري Z. براون وAlleva جينيفر لتطوير هذه التقنية الأولى من مرحلة التوليف الصلبة وماثيو باركر فلوريدا لاجراء مناقشات مفيدة. ويدعم هذا العمل من قبل وكالة الدفاع للحد من التهديد (وزارة الدفاع، اثناء اجتماع السلطة) (HDTRA1-09-1-0009) وجائزة هورست زمالة يتزل بدعم من سيفالون، وشركة

1. الإعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رد فعل مجموعة المتابعة لتركيب الصلبة مرحلة هي خرطوشة مرشح البولي بروبلين أو مفاعل زجاج متصلة عبر أنابيب البولي بروبلين إلى قارورة مغلقة تصفية تحت فراغ كما هو مبين في الشكل رقم 1. يمكن أن تكون مختلطة في رد فعل من جانب شريط مغناطيسي أو بواسطة فقاعات النيتروجين من خلال المفاعل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويوصى أيضا مشعب الغاز متصلة اسطوانة الأرجون مجهزة أنبوب تجفيف والفوار النفط كما يسمح الواردة وعاء التفاعل في مناخ خامل، ويسمح للإزالة من الكواشف من حاويات مختومة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تنفيذ جميع العمليات في غطاء الدخان ومعدات الحماية الشخصية المناسبة (سلامة النظارات، ومعطف المختبر وقفازات النتريل) هو مطلوب. </li></ol> 2. تحميل أول مكرر الببتيد على الراتنج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن 114 ملغ من HMBA-AM الراتنج (0.88 مليمول / ز التحميل، و 100 μmol) في 8 مل عاء التفاعل وإضافة قضيب تحريك مغناطيسي. سقف أعلى من السفينة البريد مع الحاجز المطاطي وتطهير الأنبوب مع الأرجون مدة لا تقل عن 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في غضون ذلك، تزن 117،3 ملغم من مركب 1 من الشكل (3) (586.63 غ / مول، 2eq) و 59.2 ملغ من 1 - (mesitylene-2-السلفونيل)-3-نيترو-1-،2،4 الترايازول (MSNT، 296.0 ز / مول، 2eq) في أنبوب 15 مليلتر الطرد المركزي يمكن التخلص منها، وتذوب في ثنائي كلورو ميثان 2 مل اللامائية (DCM). إضافة 24 ميكرولتر من methylimidazole-1 (NMI، 80.81 مل / مول، 3eq) إلى حل والمزيج حتى يذوب تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل حل المنشط في وعاء التفاعل عن طريق حقنة والسماح لاثارة بين عشية وضحاها تحت الأرجون (10 ساعة ~). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الحاجز واستنزاف خليط التفاعل. غسل الراتنج مع DCM (5X)، وثنائي ميثيل (DMF) (5X). إجراء &quot;اختبار أحمر الميثيل&quot; وصفها في القسم 10.1 إلى تقييم درجة التحميل الراتنج. إذا كان لا يزال راتنج حمراء خلال الميثيل أحمر اختبار الخطوات ثم ينبغي تكرار 2.2 و 2.3. اللون الأصفر، يدل على اختبار الميثيل أحمر السلبية، هو الذي تفضله.ومع ذلك، قد توج منذ سيتم أي مجموعة الهيدروكسيل المتبقية في الخطوة التالية، نتيجة ايجابية قليلا (ضوء برتقالي اللون الراتنج) تكون مقبولة. </li></ol> 3. Deprotection الأولى من الراتنج مكرر الببتيد في وقت واحد والسد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 مل من DCM إلى وعاء التفاعل ثم يضاف 1 مل بروميد الهيدروجين بنسبة 33٪ في قطرة قطرة حامض الخليك أكثر من 30 ثانية (محتدما يحدث) والسماح لاثارة لمدة 15 دقيقة. يصفى ويغسل الراتنج مع DCM (5X) ثم كرر العملية مرة واحدة أكثر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الراتنج مع DCM (5X) ثم DMF (5X). تحييد الراتنج بواسطة غسل مرتين مع حلا V / V 5٪ من N، N-diisopropylethylamine (DIPEA) في DMF ثم تغسل مع DCM (5X) و DMF (5X) مرة أخرى. إجراء &quot;اختبار الميثيل أحمر&quot; و &quot;الكلورانيل اختبار&quot; التي نوقشت في القسم 10.1 و 10.2. وينبغي أن تكون النتائج سلبية بالنسبة لأحمر الميثيل اختبار وايجابية لاختبار الكلورانيل. </li></ol> 4. اقتران بوك / TBU محمية Functionalized مكرر عاميلا حمض <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة جو خامل إلى الراتنج التي تحتوي على سفينة رد فعل من قبل الغسيل ثلاث مرات مع DCM اللامائية نعلق بعد ذلك الحاجز والخط الأرجون. تطهير وغسل الإناء بإضافة مل 1-2 من DCM اللامائية والسماح بالحركة لمدة 30 ثانية ثم تجفيف السفينة حتى خط الأرجون الفوار يبدأ في الارتفاع. القيام بذلك على الأقل مرة واحدة أكثر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حل من 0.15 متر functionalized مكرر الحمض الأميني (3eq) و 245 ملغ من 1-هيدروكسي azabenzotriazole-7 (هوات، 136.11 غ / مول، 18eq) في 2 مل من 02:01 DCM: DMF في اختبار لهب المجففة أنبوب تحت جو الأرجون. إضافة 47 ميكرولتر من diisopropylcarbodiimide (مدينة دبي للإنترنت، 156.6 مل / مول، 3eq) ويحرك لمدة 90 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 35 DIPEA ميكرولتر (174.19 مل / مول، 2eq) في DMF اللامائية 666 ميكروليتر إلى الراتنج والسماح لاثارة لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل ما قبل المنشط حل حامض مكرر الأمينية إلى السفينة رد فعل عن طريق الحقن، والسماح لاثارة بين عشية وضحاها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استنزاف خليط التفاعل وتغسل مرتين مع DCM اللامائية في حين تحت<html> الأرجون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للترويج لإغلاق ثنائي كيتوبيرازين، إضافة إلى حل M 0،25 من هوات (136.11 جم / مول، 10eq)، ومدينة دبي للإنترنت (156.6 مل / مول، 10eq) في مل 4 من DCM 01:01: DMF، والسماح لاثارة تحت الأرجون لمدة 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الحاجز واستنزاف خليط التفاعل. غسل الراتنج مع DCM (5X) و DMF (5X). اذا شئت، نفذ &quot;اختبار الكلورانيل&quot; التي نوقشت في القسم 10.2. </li></ol> 5. Deprotection من بوك / TBU محمية حمض أميني مكرر Functionalized <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2 مل من محلول حامض trifluororacetic 95:5 (TFA): triisopropylsilane (نصائح) إلى وعاء التفاعل والسماح لها إثارة لمدة 1 ساعة. يصفى ويغسل الراتنج لنحو 30 ثانية مع DCM (5X) ثم كرر العملية مرة أخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الراتنج مع DCM (5X) ثم DMF (5X). تحييد الراتنج بواسطة غسل مرتين مع حلا V / V 5٪ من DIPEA في DMF ثم يغسل DCM (5X) و DMF (5X) مرة أخرى. اذا شئت، نفذ &quot;اختبار الكلورانيل&quot; التي نوقشت في القسم 10.2. </li></ol>جنيه &quot;كرر الخطوات من 6&gt;. 4 و 5 على النحو المرغوب فيه لتجميع استهدفت مكرر الببتيد. 7. Functionalizing نهاية Prolidine مكرر الببتيد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن acylated نهاية prolidine من الببتيد مكرر متزايد بشكل مستقل أو معا من خلال ثنائي كيتوبيرازين. أيضا، يمكن ترك هذه الغاية المحمية، والتي سيتم المشقوق الأخيرة، والتي تمنح مجانا حمض أميني. اذا شئت، نفذ &quot;اختبار الكلورانيل&quot; التي نوقشت في القسم 10.2 لتقييم كفاءة توصيل. </li></ol> 8. Deprotection من Fmoc وأسيلة النهاية الرباعية للمكرر الببتيد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يضاف محلول 2mL من تأكسد 20٪ في DMF ويتم خلط رد فعل لمدة 20 دقيقة. يصفى ويغسل الراتنج مع DMF (5X) ثم كرر العملية مرة أخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الراتنج مع DCM (5X) ثم DMF (5X). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حل 0.15 متر من الأحماض الأمينية (3eq) في 2 مل من N-methylpyrrolidone (NMP) مع 114 ملغ 2 - (7-عزة-1H-benzotriazole-1-يل) -1،1،3،3-tetramethyluronium hexafluorophosphate<html> (HATU، 380.2 غرام / مول، 3eq) و 104.5 DIPEA ميكرولتر (174.19 مل / مول، 6eq) وتخلط جيدا. إضافة إلى سفينة رد فعل، والسماح لاثارة لمدة 6 ساعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الراتنج مع DCM (5X) ثم DMF (5X). </li></ol> 9. إزالة المجموعة بوك من الراتنج منضم الأحماض الأمينية وكليف من الراتنج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2 مل من TFA 01:01: DCM حل في وعاء التفاعل والسماح لاثارة لمدة 30 دقيقة. يصفى ويغسل الراتنج مع DCM (5X) ثم كرر العملية مرة واحدة أكثر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل وتجفيف الراتنج لمدة 30 ثانية مع DCM (5X) ثم DMF (5X). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2 مل من محلول DIPEA 10٪ في DMF اللامائية، والسماح لاثارة 24-48 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع خليط التفاعل إلى ما قبل جولة وزنه قارورة أسفل. نقل 30 ميكرولتر من هذا الحل إلى 450 ميكرولتر من THF في قارورة LC-MS وتقديمها للتحليل. غسل الراتنج مع aliquots إضافية من DMF وجمع في قارورة أسفل جولة ثم إزالة المذيب في الخلاء. </li></ol>dflinebreak &quot;&gt; 10. تنقية مكرر الببتيد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل الخام مكرر الببتيد في الحد الأدنى من سلفوكسيد ميثيل (100-250 ميكرولتر) ونقل إلى إدراج قارورة HPLC. يضاف إلى مكان الاوتوماتيكى من نظام HPLC شبه prepitive (هيوليت باكارد 1100 سلسلة) مجهزة الإعدادية إكستيرا MS C18 عمود ميكرون 5 مم 7.8x150 و 100 حلقة حقن ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نفذ عدة عمليات الحقن 50 ميكروليتر من العينة باستخدام برنامج التدرج من الأسيتونيتريل 5-95٪ في الماء مع حمض الفورميك بنسبة 0.1٪ على مدى 30 دقيقة في حين رصد في 274 نانومتر. جمع ذروة منتج في أنبوب الطرد المركزي وزنه قبل التخلص منها وتجميد الجافة باستخدام lyophilizer. وينبغي اتخاذ الحذر مع الجولة الأولى تحولا طفيفا في وقت الذروة مقارنة مع الاحتفاظ LCMS التحليلية ويلاحظ عادة. </li></ol> 11. تقييم طرق <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختبار حمرة الميثيل 7: إزالة ~ 1 ملغ من الراتنج الجافة عن طريق ماصة للتصرف وشطف الى 4 عاء التفاعل مل. إضافة إلى حل من 20 أحمر الميثيل ملغ، 50 N ميكرولتر، N&#39;-diisopropylcarbodiimide (DIC)، و 5 ملغ 4-dimethylaminopyridine (DMAP) في DCM 500 اللامائية ميكرولتر والسماح لاثارة ل5-10 دقيقة. يصفى ويغسل الراتنج مع DCM حتى يصبح عديم اللون الترشيح. إشارة إيجابية هي حبات راتنج المتبقية البرتقالي أو الأحمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكلورانيل اختبار (12): نقل ~ 1 ملغ من الراتنج الجافة إلى قارورة صغيرة من خلال ماصة للتصرف. إضافة 3 قطرات من كل من الكلورانيل 0.8 مم في حل DMF والأسيتالديهيد 2٪ في حل DMF وترك الجلوس في درجة حرارة الغرفة لمدة 5-10 دقائق. إشارة إيجابية هي حبات راتنج تحول أزرق / أرجواني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن تقييم المركبات المنشطة خلال التوليف عن طريق تحويل مبلغ صغير (ميكرولتر 5-10) من الحل تفعيلها لقياس الطيف اللوني الشامل السائل (LC-MS) قارورة تحتوي على 50 ميكرولتر من بيروليدين: تنشيط اختبار الفخ. مزيج من جهة لبضع ثوان (solutiوينبغي أن تصبح في الأصفر) ثم تضعف مع 450 ميكرولتر من رباعي هيدرو الفوران (THF)، ويقدم لLC-MS تحليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحليلية LC-MS: يمكن تقييم المنتج النهائي وسيطة المنشط باستخدام سلسلة HP 1200 LC-MS نظام مجهزة إكستيرا مياه ميكرومتر MS 3.5 C18 4.6 مم × 150 مم وعمود نظام التدرج من الأسيتونيتريل 5-95٪ في الماء مع حمض الفورميك بنسبة 0.1٪ على مدى 30 دقيقة. </li></ol> 12. ممثل النتائج على سبيل المثال كل من النفط الخام (الشكل 4) وتنقيته (الشكل 5) وتقدم آثار LCMS. ومن المتوقع أن غلة تنقيته من حوالي 10٪ باستخدام الأساليب المذكورة أعلاه. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/4112/4112fig1.jpg" /> الشكل 1. مخطط من التجارب ما يصل تعيين لتخليق المرحلة الصلبة. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/4112/4112fig2.jpg" /> الشكل 2.ذات الصلة من جدول التعريفة مكرر الأحماض الأمينية / هضميدات مكرر. <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/4112/4112fig3.jpg" /> الشكل 3. خطة الاصطناعية بشكل عام. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4112/4112fig3large.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض أكبر شخصية</a> . <img alt="رقم 4A" src="/files/ftp_upload/4112/4112fig4a.jpg" /> رقم 4A. HPLC تتبع من الناتج الخام في 274 نانومتر. <img alt="رقم 4B" src="/files/ftp_upload/4112/4112fig4b.jpg" /> رقم 4B. MS الطيف من قمة المنتج الخام. <img alt="رقم 5A" src="/files/ftp_upload/4112/4112fig5a.jpg" /> 5A شخصية. HPLC أثر لتنقية المنتج في 274 نانومتر. <img alt="الرقم 5B" src="/files/ftp_upload/4112/4112fig5b.jpg" /> 5B شخصية. MS الطيف من المنتج منقىتي الذروة.

<ol>
	<li>Atherton, E., Sheppard, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach. , (1989).</li><li>Brown, Z. Z., Alleva, J., Schafmeister, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solid-Phase+Synthesis+of+Functionalized+Bis-Peptides.">Solid-Phase Synthesis of Functionalized Bis-Peptides.</a> Biopolymers. 96, 578-585 (2010).</li><li>Schafmeister, C. E., Brown, Z. Z., Gupta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shape-Programmable+Macromolecules.">Shape-Programmable Macromolecules.</a> Acc. Chem. Res. 41, 1387-1398 (2008).</li><li>Brown, Z. Z., Schafmeister, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Hexa-+and+Pentasubstituted+Diketopiperazines+from+Sterically+Hindered+Amino+Acids.">Synthesis of Hexa- and Pentasubstituted Diketopiperazines from Sterically Hindered Amino Acids.</a> Org. Let. 12, 1436-1439 (2010).</li><li>Nielson, J., Lyngso, L. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+Solid-Phase+Synthesis+of+Balanol+Analogues.">Combinatorial Solid-Phase Synthesis of Balanol Analogues.</a> Tet. Lett. 37, 8439-8442 (1996).</li><li>Blankemeyer-Menge, B., Nimtz, M., Frank, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Efficient+Method+for+Anchoring+Fmoc-Amino+Acids+to+Hydroxyl-Functionalized+Solid+Supports.">An Efficient Method for Anchoring Fmoc-Amino Acids to Hydroxyl-Functionalized Solid Supports.</a> Tet. Lett. 31, 1701-1704 (1990).</li><li>Komba, S., Sasaki, S., Machida, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Colorimetric+Test+for+Detection+of+Hydroxyl+Groups+in+Solid-Phase+Synthesis.">A New Colorimetric Test for Detection of Hydroxyl Groups in Solid-Phase Synthesis.</a> Tet. Lett. 48, 2075-2078 (2007).</li><li>Demner, O., Dijkgraaf, I., Schottelius, M., Wester, H. J., Kessler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+of+Functional+Groups+into+Peptides+via+N-Alkylation.">Introduction of Functional Groups into Peptides via N-Alkylation.</a> Org. Lett. 10, 2015-2018 (2008).</li><li>Plas, S. E. V. a. n. d. e. r., Van Hoeck, E., Lynen, F., Sandra, P., Madder, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+New+SPE+Material+for+EDCs:+Fully+Automated+Synthesis+of+a+Library+of+Tripodal+Receptors+Followed+by+Fast+Screening+by+Affinity+LC.">Toward a New SPE Material for EDCs: Fully Automated Synthesis of a Library of Tripodal Receptors Followed by Fast Screening by Affinity LC.</a> Eur. J. Org. Chem. 11, 1796-1805 (2009).</li><li>Kaiser, E., Colescot, R. L., Bossinger, C. D., Cook, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Color+Test+for+Detection+of+Free+Terminal+Amino+Groups+in+Solid-Phase+Synthesis+of+Peptides.">Color Test for Detection of Free Terminal Amino Groups in Solid-Phase Synthesis of Peptides.</a> Anal. Biochem. 34, 595-598 (1970).</li><li>Chan, W. C., White, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach. , (2000).</li><li>Vojkovsky, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Secondary+Amines+on+Solid-Phase.">Detection of Secondary Amines on Solid-Phase.</a> Peptide Research. 71, 236-237 (1995).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

نهج الاصطناعية الواردة في هذه الوثيقة يوفر طريقة لتجميع functionalized الببتيدات مكرر من مكررا الأمينية اللبنات باستخدام حمض مشترك الببتيد التوليف الصلبة مرحلة التقنيات. التوليف الأحادي من هذه &quot;Pro4&quot; لبنات البناء من غير المشبعة-4-3 هو هيدروكسي برولين تدرجية عالية، وقد أنجزت بنجاح إلى مرحلة هيدانتوين في مليمول 600 (234 ز) جدول (غير منشور). مرة واحدة أحادية هي في متناول اليد، واستخدام التقنيات الصلبة مرحلة يوفر طريقة أسرع للمكرر الببتيد التوليف من منهجيتنا حل في المرحلة الحالية 4 من خلال القضاء على الحاجة الى رد فعل العمل المنبثقة والتنقيات وسيطة. التحدي الرئيسي في تركيب الحالة الصلبة يتم تشخيص التقدم الصناعي وحل المشاكل منذ يتم عزل أي وسيطة. هذا قد يؤدي إلى تطوير اختبارات لونية كثيرة بما فيها تلك التي لتحديد ما إذا كانت حرة الأمينات (كايزر اختبار 10) أو hydrox مجاناويتعرض yls (الميثيل الأحمر اختبار 7) على الراتنج. لسوء الحظ، فإن اختبار كايزر استخداما 10 لا ينطبق عموما في تركيب الصلبة مرحلة لدينا نتيجة لاستخدام الحصري تقريبا من الأمينات الثانوية أو الأمينات تعلق على الكربون الرباعية. خيارات أخرى للتقييم في الراتنج HMBA تشمل الانشقاقات اختبار باستخدام النيوكليوفيل مثل الهيدرازين 11، شق Fmoc كمي ترصدها أشعة فوق البنفسجية / فيس 1،11، ومحاصرة وتحليل مركبات واردة تفعيلها. وثمة مسألة أخرى تجاهلها في تركيب الحالة الصلبة هي طبيعة متكررة من الخطوات الاصطناعية مطلوب من قبل المشغل. مع هذا هو العقل، والكتاب نوصي بشدة استخدام جدول بيانات أو قائمة عند تنفيذ أي دليل الببتيد التوليف الصلبة مرحلة. وصعوبة في استخدام مكرر الببتيدات لتركيب الحالة الصلبة مقارنة مع الأحماض الأمينية α مشتركة تشمل احتمال حدوث الإزدواج أكثر صعوبة بسبب هين الفراغيةdrance، والحاجة إلى إغلاق ثنائي كيتوبيرازين على الراتنج، وdeprotections في وقت واحد (بوك / TBU؛ CBZ / TBU). آخر صعوبة تكمن في تحقيق الافراج عن كمية من راتنج استخدام هذا &quot;الصيد سلامة&quot; طريقة بالمقارنة مع الوسائل التقليدية. مع هذه العوامل في الاعتبار، فمن الممكن جدا أنه لا يمكن تحقيق مزيد من التحسين هذه الطريقة والجهود الحالية تجري في مجموعتنا لتحسين أسلوب المقدمة هنا.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> اسم </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> HMBA آم الراتنج </td><td> NovaBiochem </td><td> 855018 </td><td></td></tr><tr><td> MSNT </td><td> NovaBiochem </td><td> 851011 </td><td></td></tr><tr><td> NMI </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 336092 </td><td> سمية، أكالة </td></tr><tr><td> DCM </td><td> سيغما الدريخ </td><td> <a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=en&amp;N4=D65100%7CSIAL&amp;N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&amp;F=SPEC" target="_blank">D65100</a> </td><td> المسببة للسرطان </td></tr><tr><td> اللامائية DCM </td><td> Acros </td><td> 34846 </td><td> المسببة للسرطان </td></tr><tr><td> 33٪ لبروميد الهيدروجين في حمض الخليك </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 248630 </td><td> السامة، وكورosive، الأدخنة عندما المفتوحة </td></tr><tr><td> DIPEA </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 387649 </td><td> القابلة للاشتعال، والمواد السامة، أكالة </td></tr><tr><td> DMF </td><td> فيشر العلمية </td><td> AC27960 </td><td> القابلة للاشتعال، والمواد السامة </td></tr><tr><td> اللامائية DMF </td><td> Acros </td><td> 34843 </td><td> القابلة للاشتعال، والمواد السامة </td></tr><tr><td> هوات </td><td> GenScript </td><td> C01568 </td><td></td></tr><tr><td> مدينة دبي للإنترنت </td><td> Acros </td><td> BP590 </td><td> القابلة للاشتعال، والمواد السامة، أكالة </td></tr><tr><td> TFA </td><td> سيغما الدريخ </td><td> T6508 </td><td> سمية، أكالة </td></tr><tr><td> نصائح </td><td> Acros </td><td> 21492 </td><td> القابلة للاشتعال، والمواد السامة </td></tr><tr><td> تأكسد </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 104094 </td><td> القابلة للاشتعال، والمواد السامة، أكالة </td></tr><tr><td> HATU </td><td> GenScript </td><td> C01566 </td><tdالسامة&gt; </td></tr><tr><td> NMP </td><td> Acros </td><td> 36438 </td><td> سام </td></tr><tr><td> DMAP </td><td> NovaBiochem </td><td> 851055 </td><td> سام </td></tr><tr><td> الميثيل الأحمر </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 250198 </td><td></td></tr><tr><td> THF </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 401757 </td><td> والسامة القابلة للاشتعال، بيروكسيد تشكيل </td></tr><tr><td> بيروليدين </td><td> سيغما الدريخ </td><td> P73803 </td><td> القابلة للاشتعال، والمواد السامة، أكالة </td></tr><tr><td> ثنائي ميثيل سلفوكسيد </td><td> الصياد </td><td> D1281 </td><td></td></tr><tr><td> السفن SPPS رد الفعل </td><td> نعمة </td><td> 211108 </td><td></td></tr><tr><td> يمكننا تعريف </td><td> اجيلنت </td><td> 1200 سلسلة </td><td></td></tr><tr><td> شبه الإعدادية LC </td><td> هيوليت باكارد </td><td> 1100 سلسلة </td><td></td></tr><tص&gt; <td> Lyophilizer </td><td> Labconco </td><td> 7934027 </td><td></td></tr><tr><td> Rotovapor </td><td> Buchi </td><td> R-210 سلسلة </td><td></td></tr><tr><td> الأرجون </td><td> Airgas </td><td> AR PP300CT </td><td></td></tr></table>

solid phase synthesis of a functionalized bis-peptide using "safety catch" methodology

في عام 1962، نشرت RB ميريفيلد الإجراء الأول باستخدام الصلبة مرحلة التوليف الببتيد كطريق رواية لتجميع بكفاءة الببتيدات. هذه التقنية اثبتت بسرعة من المفيد أكثر من سلفه الحل التدريجي لها في كل من الوقت والعمل. التحسينات المتعلقة بطبيعة دعم قوي، وجماعات حماية العاملين وطرق توصيل يعملون على مدار العقود الخمسة الماضية وزادت فقط على فائدة نظام ميريفيلد الأصلي. اليوم، رائدة في استخدام حماية بوك على أساس وقاعدة / النيوكليوفيل استراتيجية الراتنج شطورة أو Fmoc القائم على حماية والحمضية استراتيجية الراتنج شطورة، من قبل شيبارد RC، هي الأكثر شيوعا لتركيب الببتيدات 1. مستوحاة من استراتيجية متينة ميريفيلد لدعمها، وضعنا بوك / ثالثي بوتيل استراتيجية تركيب الصلبة مرحلة لتجميع functionalized الببتيدات مكرر 2، الذي يوصف هنا. استخدام تركيب الحالة الصلبة مقارنة تيس حل مراحل منهجية ليست مفيدة فقط في كل من الوقت والعمل كما وصفها ميريفيلد 1، ولكنه يسمح أيضا سهولة أكبر في تركيب مكرر الببتيد المكتبات. توليف أن نظهر هنا يشتمل على مرحلة الانقسام النهائي الذي يستخدم على مرحلتين &quot;سلامة قبض على&quot; آلية لاطلاق سراح functionalized مكرر الببتيد من راتنج بواسطة تشكيل ثنائي كيتوبيرازين. مكرر الببتيدات الجامدة، وسبيرو، سلم oligomers من مكرر الأحماض الأمينية التي تكون قادرة على وضع وظيفة بطريقة يمكن التنبؤ بها وdesignable، التي تسيطر عليها نوع والفراغية وحدات أحادى، والربط بين كل مونومر. كل حمض أميني مكرر هو محض النمطية، سقالة دوري الذي يحتوي على اثنين من الأحماض الأمينية (حمض الكربوكسيلية مع α-أمين) 3،4. مختبر لدينا حاليا بالتحقيق إمكانات وظيفية مكرر الببتيدات عبر مجموعة واسعة من المجالات بما في ذلك التفاعلات الحفز البروتينات والبروتين، ونanomaterials.

Watch this Scientific Journal Video about Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology at JoVE.com

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using &quot;Safety Catch&quot; Methodology

يوصف كفاءة الببتيد التوليف الصلبة مرحلة من ترايمر مكرر الببتيد functionalized الاستفادة من وجود &quot;سلامة قبض على&quot; إجراء شق من الراتنج HMBA.

الصلبة التجميعي المرحلة من الببتيد البس Functionalized استخدام &quot;سلامة الصيد&quot; منهجية

In 1962, R.B. Merrifield published the first procedure using solid-phase peptide synthesis as a novel route to efficiently synthesize peptides. This ...

solid-phase-synthesis-functionalized-bis-peptide-using-safety-catch

Research

JoVE Journal

Biology

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

24.4K Views.  Temple University. يوصف كفاءة الببتيد التوليف الصلبة مرحلة من ترايمر مكرر الببتيد functionalized الاستفادة من وجود "سلامة قبض على" إجراء شق من الراتنج HMBA.

Video: Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

Optimization of the Ugi Reaction Using Parallel Synthesis and Automated Liquid Handling

The optimization of a Ugi reaction involving the mixing of furfurylamine, benzaldehyde, boc-glycine and t-butylisocyanide is described. Triplicate runs of 48 parallel experiments are reported, varying concentration, solvent and the excess of some of the reagents. The isolation of the product was achieved by a simple filtration and wash procedure. The highest yield obtained was 66% from 0.4 M methanol with 1.2 eq. of imine. This is significantly above the 49% yield obtained from the initial reaction under equimolar concentration at 0.4 M in methanol. Methanol solutions with reagent concentrations of 0.4M or 0.2M gave superior yields while all solvent systems at 0.07M performed poorly. At 0.2M, methanol and ethanol/methanol (60/40) mixtures were statistically equally good while THF/methanol (60/40) was poor and acetonitrile/methanol (60/40) was intermediate. Good reproducibility of the precipitate yields was obtained in these replicate experiments, allowing for subtle interaction effects to be positively identified.

The Ugi reaction has proved to be a convenient way to quickly create diverse libraries of compounds. It involves the reaction of an amine, an aldehyde, a carboxylic acid and an isonitrile typically in methanol at room temperature. In this video, we utilize a 48-slot Mettler-Toledo MiniBlock equipped with filtration tubes and a Mettler-Toledo MiniMapper automated liquid handler was used to deliver the reagents and solvent. The parameters of interest were the concentration, the solvent composition and the excess of some of the reagents.

الأمثل للتفاعل UGI طريق تجميع ومعالجة وبالتوازي السائل الآلي

The optimization of a Ugi reaction involving the mixing of furfurylamine, benzaldehyde, boc-glycine and t-butylisocyanide is described.  Triplicate runs ...

Synthesis and Calibration of Phosphorescent Nanoprobes for Oxygen Imaging in Biological Systems

Oxygen measurement by phosphorescence quenching [1, 2] consists of the following steps: 1) the probe is delivered into the medium of interest (e.g. blood or interstitial fluid); 2) the object is illuminated with light of appropriate wavelength in order to excite the probe into its triplet state; 3) the emitted phosphorescence is collected, and its time course is analyzed to yield the phosphorescence lifetime, which is converted into the oxygen concentration (or partial pressure, pO2). The probe must not interact with the biological environment and in some cases to be 4) excreted from the medium upon the measurement completion. Each of these steps imposes requirements on the molecular design of the phosphorescent probes, which constitute the only invasive component of the measurement protocol. Here we review the design of dendritic phosphorescent nanosensors for oxygen measurements in biological systems. The probes consist of Pt or Pd porphyrin-based polyarylglycine (AG) dendrimers, modified peripherally with polyethylene glycol (PEG's) residues. For effective two-photon excitation, termini of the dendrimers may be modified with two-photon antenna chromophores, which capture the excitation energy and channel it to the triplet cores of the probes via intramolecular FRET (F&ouml;rster Resonance Energy Transfer). We describe the key photophysical properties of the probes and present detailed calibration protocols.

We present principles of oxygen measurements by phosphorescence quenching and review design of porphyrin-based dendritic nanosensors for oxygen imaging in biological systems.

التوليف ومعايرة Nanoprobes الفسفورية للتصوير الأوكسجين في النظم البيولوجية

Oxygen measurement by phosphorescence quenching [1, 2] consists of the following steps: 1) the probe is delivered into the medium of interest (e.g. blood ...

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Reduction of food intake without malnutrition or starvation is known to increase lifespan and delay the onset of various age-related diseases in a wide range of species, including mammals. It also causes a decrease in body weight and fertility, as well as lower levels of plasma glucose, insulin, and IGF-1 in these animals. This treatment is often referred to as dietary restriction (DR) or caloric restriction (CR). The nematode Caenorhabditis elegans has emerged as an important model organism for studying the biology of aging. Both environmental and genetic manipulations have been used to model DR and have shown to extend lifespan in C. elegans. However, many of the reported DR studies in C. elegans were done by propagating animals in liquid media, while most of the genetic studies in the aging field were done on the standard solid agar in petri plates. Here we present a DR protocol using standard solid NGM agar-based plate with killed bacteria.

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Here we present a protocol for performing solid plate-based dietary restriction in C. elegans with killed bacteria.

اللوحة الصلبة المستندة إلى تقييد الغذائية في انواع معينة ايليجانس</em

Reduction of food intake without malnutrition or starvation is known to increase lifespan and delay the onset of various age-related diseases in a wide ...

Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting

To ensure the quality of animal models used in biomedical research we have developed a number of diagnostic testing strategies and methods to determine if animals have been exposed to adventitious infectious agents (viruses, mycoplasma, and other fastidious microorganisms). Infections of immunocompetent animals are generally transient, yet serum antibody responses to infection often can be detected within days to weeks and persist throughout the life of the host. Serology is the primary diagnostic methodology by which laboratory animals are monitored. Historically the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) has been the main screening method for serosurveillance. The ELISA is performed as a singleplex, in which one microbial antigen-antibody reaction is measured per well. In comparison the MFIA is performed as a multiplexed assay. Since the microspheres come in 100 distinct color sets, as many as 100 different assays can be performed simultaneously in a single microplate well. This innovation decreases the amount of serum, reagents and disposables required for routine testing while increasing the amount of information obtained from a single test well. In addition, we are able to incorporate multiple internal control beads to verify sample and system suitability and thereby assure the accuracy of results. These include tissue control and IgG anti-test serum species immunoglobulin (&alpha;Ig) coated bead sets to evaluate sample suitability. As in the ELISA and IFA, the tissue control detects non-specific binding of serum immunoglobulin. The &alpha;Ig control (Serum control) confirms that serum has been added and contains a sufficient immunoglobulin concentration while the IgG control bead (System Suitability control), coated with serum species immunoglobulin, demonstrates that the labeled reagents and Luminex reader are functioning properly.

Using Luminex Corporation&#x2019;s xMAP microsphere technology, we have developed the Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay (MFIA) for serosurveillance of various laboratory animal species. The MFIA is a suspension microarray where antigen, tissue control or immunoglobulins are covalently linked to color-coded polystyrene microspheres. The MFIA testing method as well as various troubleshooting topics is addressed.

اختبار المقايسة المناعية المضاعفة فلوروميتريك المنهجية واستكشاف الأخطاء وإصلاحها

To ensure the quality of animal models used in biomedical research we have developed a number of diagnostic testing strategies and methods to determine if ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein labeled, this method can be implemented for the investigation of protein-protein interactions. It is based on one hand on the recognition of the tagged protein by cobalt coated magnetic beads and on the other hand on the interaction between the tagged protein and a second specific protein that is labeled. First, the labeled and tagged proteins are mixed and incubated at room temperature. The magnetic beads, that recognize the tag, are added and the bound fraction of labeled protein is separated from the unbound fraction using magnets. The amount of labeled protein that is captured can be determined in an indirect way by measuring the signal of the labeled protein remained in the unbound fraction. The described liquid phase affinity assay is extremely useful when conformational conversion sensitive proteins are assayed. The development and application of the assay is demonstrated for the interaction between poliovirus and poliovirus recognizing nanobodies1. Since poliovirus is sensitive to conformational conversion2 when attached to a solid surface (unpublished results), the use of ELISA is limited and a liquid phase based system should therefore be preferred. An example of a liquid phase based system often used in polioresearch3,4 is the micro protein A-immunoprecipitation test5. Even though this test has proven its applicability, it requires an Fc-structure, which is absent in the nanobodies6,7. However, as another opportunity, these interesting and stable single-domain antibodies8 can be easily engineered with different tags. The widely used (His)6-tag shows affinity for bivalent ions such as nickel or cobalt, which can on their turn be easily coated on magnetic beads. We therefore developed this simple quantitative affinity capture assay based on cobalt coated magnetic beads. Poliovirus was labeled with 35S to enable unhindered interaction with the nanobodies and to make a quantitative detection feasible. The method is easy to perform and can be established with a low cost, which is further supported by the possibility of effectively regenerating the magnetic beads.

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. It is a reliable technique based on the interaction between magnetic beads and tagged proteins (e.g. nanobodies) on one hand and the affinity between the tagged protein and a second, labeled protein (e.g. poliovirus) on the other.

تقارب المرحلة السائلة الفحص التقاطها باستخدام الخرز المغناطيسي لدراسة البروتين البروتين التفاعل: المثال فيروس شلل الأطفال، Nanobody

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

Introduction to Solid Supported Membrane Based Electrophysiology

The electrophysiological method we present is based on a solid supported membrane (SSM) composed of an octadecanethiol layer chemisorbed on a gold coated sensor chip and a phosphatidylcholine monolayer on top. This assembly is mounted into a cuvette system containing the reference electrode, a chlorinated silver wire.
After adsorption of membrane fragments or proteoliposomes containing the membrane protein of interest, a fast solution exchange is used to induce the transport activity of the membrane protein. In the single solution exchange protocol two solutions, one non-activating and one activating solution, are needed. The flow is controlled by pressurized air and a valve and tubing system within a faraday cage.
The kinetics of the electrogenic transport activity is obtained via capacitive coupling between the SSM and the proteoliposomes or membrane fragments. The method, therefore, yields only transient currents. The peak current represents the stationary transport activity. The time dependent transporter currents can be reconstructed by circuit analysis.
This method is especially suited for prokaryotic transporters or eukaryotic transporters from intracellular membranes, which cannot be investigated by patch clamp or voltage clamp methods.

Here we present an electrophysiological method based on solid supported membranes with focus on its applications for the characterization of electrogenic membrane transporters.

مقدمة إلى صلب غشاء المعتمدة واستنادا الكهربية

The electrophysiological method we present is based on a solid supported membrane (SSM) composed of an octadecanethiol layer chemisorbed on a gold coated ...

Synthesis of Wavelength-shifting DNA Hybridization Probes by Using Photostable Cyanine Dyes

In this protocol, we demonstrate a method for the synthesis of 2&#39;-alkyne modified deoxyribonucleic acid (DNA) strands by automated solid phase synthesis using standard phosphoramidite chemistry. Oligonucleotides are post-synthetically labeled by two new photostable cyanine dyes using copper-catalyzed click-chemistry. The synthesis of both donor and acceptor dye is described and is performed in three consecutive steps. With the DNA as the surrounding architecture, these two dyes undergo an energy transfer when they are brought into close proximity by hybridization. Therefore, annealing of two single stranded DNA strands is visualized by a change of fluorescence color. This color change is characterized by fluorescence spectroscopy but can also be directly observed by using a handheld ultraviolet (UV) lamp. The concept of a dual fluorescence color readout makes these oligonucleotide probes excellent tools for molecular imaging especially when the described photostable dyes are used. Thereby, photobleaching of the imaging probes is prevented, and biological processes can be observed in real time for a longer time period.

Photostable cyanine dyes are attached to oligonucleotides to monitor hybridization by energy transfer.

تجميع لتحويل الطول الموجي تهجين الحمض النووي تحقيقات باستخدام صامد Cyanine الأصباغ

In this protocol, we demonstrate a method for the synthesis of 2&#39;-alkyne modified deoxyribonucleic acid (DNA) strands by automated solid phase ...

Dry Root Rot Disease Assays in Chickpea: a Detailed Methodology

Dry root rot (DRR) disease is an emerging biotic stress threat to chickpea cultivation around the world. It is caused by a soil-borne fungal pathogen, Rhizoctonia bataticola. In the literature, comprehensive and detailed step-by-step protocols on disease assays are sparse. This article provides complete details on the steps involved in setting up a blotting paper technique for quickly screening genotypes for resistance to DRR. The blotting paper technique is easy and less expensive. Another method, based on the sick pot approach, is a mimic of natural infection and can be applied to study the interacting components&#8212;plant, pathogen, and environment&#8212;involved in the disease triangle.
Moreover, in nature, DRR occurs mostly in rainfed chickpea cultivation areas, where soil moisture recedes as crop growth advances. Drought stress is known to predispose chickpea plants to DRR disease. Pathomorphological and molecular understanding of plant-pathogen interaction under drought stress can pave the way for the identification of elite DRR-resistant varieties from the chickpea germplasm pool. This article provides a stepwise methodology for the preparation of a sick pot and subsequent disease assay. Overall, the information presented herein will help researchers prepare R. bataticola fungal inoculum, maintain this pathogen, set up the blotting paper technique, prepare sick culture and sick pot, and assess pathogen infection in chickpea plants.

This study presents methodologies to study the pathomorphological and molecular mechanisms underlying chickpea&#8211;Rhizoctonia bataticola interaction. The blotting paper method is useful to rapidly study chickpea genotype responses, while the sick pot-based method can be used to simultaneously impose drought and R. bataticola infection and screen for tolerant genotypes.

التعفن الجاف تعفن التعفن في الحمص: منهجية مفصلة

Dry root rot (DRR) disease is an emerging biotic stress threat to chickpea cultivation around the world. It is caused by a soil-borne fungal pathogen, ...

Functionalized Spirocyclic Heterocycle Synthesis and Cytotoxicity Assay

Spirocyclic heterocycles have recently been reported in literature to be potential drugs for cancer therapy. The synthesis of these novel orthogonal ring systems is challenging. An efficient methodology to synthesize these compounds was recently published that described the solid phase synthesis in four steps rather than the previously reported five steps. The advantage of this shorter synthesis is the elimination of the use of toxic reagents. Low-loading Regenerating Michael (REM) linker-based resin was found to be crucial in the synthesis as high-loading versions prevented the addition of reagents containing bulky phenyl and aromatic side chains. The colorimetric 3-(4&#8242;,5&#8242;-dimethylthiazol-2&#8242;-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay was used to examine the cytotoxicity of micromolar concentrations of these novel spirocyclic molecules in vitro. MTT is readily available commercially and produces relatively fast, reliable results, making this assay ideal for these spirocyclic heterocycles. Orthogonal ring structures as well as furfurylamine (a precursor in the synthesis method containing a similar 5-member ring motif) were tested.

Here, we describe a bioassay using 3-(4&#8242;,5&#8242;-dimethylthiazol-2&#8242;-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) to test previously synthesized spirocyclic oximes.

توليف الدورة الحلقية غير المتجانسة الوظيفية وفحص السمية الخلوية

Spirocyclic heterocycles have recently been reported in literature to be potential drugs for cancer therapy. The synthesis of these novel orthogonal ring ...

Isolation and Analysis of Traceable and Functionalized Extracellular Vesicles from the Plasma and Solid Tissues

Circulating and tissue-resident extracellular vesicles (EVs) represent promising targets as novel theranostic biomarkers, and they emerge as important players in the maintenance of organismal homeostasis and the progression of a wide spectrum of diseases. While the current research focuses on the characterization of endogenous exosomes with the endosomal origin, microvesicles blebbing from the plasma membrane have gained increasing attention in health and sickness, which are featured by an abundance of surface molecules recapitulating the membrane signature of parent cells. Here, a reproducible procedure is presented based on differential centrifugation for extracting and characterizing EVs from the plasma and solid tissues, such as the bone. The protocol further describes subsequent profiling of surface antigens and protein cargos of EVs, which are thus traceable for their derivations and identified with components related to potential function. This method will be useful for correlative, functional, and mechanistic analysis of EVs in biological, physiological, and pathological studies.

The present protocol describes a method to extract extracellular vesicles from the peripheral blood and solid tissues with subsequent profiling of surface antigens and protein cargos.

عزل وتحليل الحويصلات خارج الخلية التي يمكن تتبعها والوظيفية من البلازما والأنسجة الصلبة

Circulating and tissue-resident extracellular vesicles (EVs) represent promising targets as novel theranostic biomarkers, and they emerge as important ...