بدعم من زمالة دراسات عليا Fazit مؤسسة لSS، والوزارة الاتحادية للتعليم والبحث العلمي (BMBF 01 EO 0803) لKB والمفوضية الأوروبية FP7-المنح PIRG08 GA-2010-276989، NEUREX، ومؤسسة البحوث الألمانية المنح SCHA 1442 / 3-1 لCS الكتاب ليس لديهم مصالح متضاربة المالية.

1. العزلة وتصفيح من الخلايا القشرية المختلطة لا يمكن أن يؤديها مختلطة العزلة الخلية القشرية للثقافات نجمية باستخدام الماوس الجراء P1 إلى P4. من أجل تحقيق كثافة نجمية السليم لا بد من استخدام الماوس القشور 4 الجرو في قارورة T75 الأنسجة الثقافة. لذلك، يتم حساب وحدات التخزين في البروتوكول التالي لإعداد الخلية باستخدام الماوس الجراء 4. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل البدء في إجراء تشريح، prewarm 30 مل من وسائل الإعلام الثقافة نجمية (DMEM، ارتفاع نسبة الجلوكوز + 10٪ للحرارة المعطل الجنين المصل البقري + 1٪ البنسلين / الستربتوميسين، انظر الجدول) إلى 37 ° C. معطف T75 1 قارورة مع 20 مل من بولي-D-يسين (PDL) في تركيز 50 ميكروغرام / مل في الماء لزراعة الخلايا الصف 1 ساعة عند 37 درجة مئوية في الحاضنة 2 CO. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإجراء تشريح، وإعداد جميع الكواشف والمواد الضرورية. سوف تحتاج إلى: مقص جراحي، ملقط غرامة على نحو سلس، ملقط غيض شقة، مناشف ورقية، وحقيبة النفايات، والإيثانول 70٪ لد 2 الأطباق تشريح (3.5 سم القطر) على الجليد مليئة HBSS 2 مل لكل منهما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد بلطف ورذاذ الرأس والرقبة من الفأرة الجرو مع الايثانول 70٪. وضحى الحيوان بقطع الرأس باستخدام المقص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق خط الوسط، لالأمامي الخلفي، جنبا إلى جنب فروة الرأس للكشف عن الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الجمجمة بعناية من الرقبة إلى الأنف. يتم تنفيذ اثنين من تخفيضات إضافية للسماح بالوصول إلى مزيد من الدماغ: ويتكون أول خفض المصابيح الأمامية لحاسة الشم، والآخر أدنى من المخيخ لقطع الجمجمة من قاعدة الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط غيض شقة، وبلطف اللوحات الجمجمة انقلبت إلى الجانب ويتم أخذ الدماغ من وضعها في أول طبق تشريح مليئة HBSS. وضع الطبق مرة أخرى على الجليد ومواصلة حصد جميع العقول 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تنفيذ ما تبقى من إجراء تشريح تحت stereomicroscope. أولا، يتم إزالة المصابيح حاسة الشم والمخيخ باستخدام الغرامةتشريح ملقط (1B الشكل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من أجل استرداد القشور، والاستيلاء على نهاية الخلفي من الدماغ مع ملقط الغرامة، أداء شق خط الوسط بين نصفي الكرة الأرضية، اضافة الى وجود مجموعة ثانية من ملقط لإنشاء بستان وقشر بعيدا هيكل لوحة تشبه القشرة من الدماغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح بعناية السحايا من نصفي الكرة الأرضية القشرة عن طريق سحب الملقط مع غرامة (1D الشكل). هذه الخطوة تجنب تلوث ثقافة نجمية النهائي من قبل خلايا السحائي والخلايا الليفية. نقل الكرة الأرضية القشرة المعدة في طبق الثانية المملوءة HBSS وإعادته إلى الجليد. تواصل مع جميع القشور وفقا لذلك 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وأخيرا، وقطع كل نصف الكرة القشرة إلى قطع صغيرة باستخدام شفرات حادة (حوالي 4 إلى 8 مرات). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت ظروف معقمة، وقطع القشرة نقل إلى واحدة 50 مل أنبوب فالكون وإضافة إلى وحدة تخزين HBSS إجمالي قدره 22.5 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2.5 مل من 2.5٪ المزيج، واحتضان التربسينالأنسجة في حمام مائي عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. مزيج من عرضية تهز كل 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 300 XG لقطع الأنسجة بيليه القشرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة بعناية طاف من الصفق. من أجل تجنب فقدان الأنسجة بيليه قد تحتفظ ميكانيكيا باستخدام الماصة ل. فصل الأنسجة في تعليق خلية واحدة بإضافة 10 مل المتوسطة الطلاء نجمية وpipetting قوية باستخدام ماصة 10 مل من البلاستيك حتى قطع الأنسجة هي فصل واحد في الخلايا (20 إلى 30 مرة). لضبط مستوى الصوت باستخدام 20 مل نجمية المتوسطة الطلاء. يمكنك دليل على تفكك النسيج إلى خلايا القشرة واحدة عن طريق عد باستخدام عدادة الكريات. ينبغي للمرء أن إعداد القشور الماوس 4 الجرو تسفر 10-15 X10 6 خلايا واحدة فصل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح PDL من القارورة الثقافة T75، لوحة للفصل التعليق خلية واحدة واحتضان عند 37 درجة مئوية في الحاضنة 2 CO. </li></ol> 2. الحصول على ENRنجمية الثقافة iched <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير المتوسطة 2 بعد أيام من الطلاء خلايا القشرية المختلطة وجميع 3 أيام بعد ذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 7 إلى 8 أيام، عندما الخلايا النجمية هي الخلايا الدبقية الصغيرة متكدسة وتتراكب الجلوس تعرض على طبقة أو نجمية هي بعيدة بالفعل من طبقة نجمية (الشكل 2)، هز قارورة T75 في 180 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة على شاكر المداري لإزالة الخلايا الدبقية الصغيرة. تجاهل طاف الخلايا الدبقية الصغيرة تحتوي على أو إذا كنت ترغب في دراسة الثقافة والخلايا الدبقية الصغيرة، وتدور عليه و28،29 وحة للثقافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 20 مل الطازجة مستنبت نجمية والاستمرار عن طريق هز قارورة في 240 دورة في الدقيقة لمدة 6 ساعة لإزالة خلايا دبقية قليلة التغصن السلائف (OPC). منذ بعض لن يجد OPCs فصل تماما من طبقة نجمية، تواصل يهز بقوة باليد لمدة 1 دقيقة من أجل منع التلوث OPC. تجاهل طاف أو تدور عليه ولوحة، إذا كنت ترغب في الثقافة يجد OPCs 29. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف conflue المتبقيةNT طبقة نجمية مرتين مع PBS، نضح في برنامج تلفزيوني، إضافة 5 مل التربسين EDTA واحتضان-في الحاضنة 2 CO في 37 ° C. تحقق مفرزة من الخلايا النجمية كل 5 دقائق وإنفاذ مفرزة من الخلايا النجمية من خلال ضرب القارورة ضد راحة يدك (2-3 مرات). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد فصل الخلايا النجمية من القارورة الثقافة، إضافة 5 مل من مستنبت نجمية، وخلايا تدور في 180 XG لمدة 5 دقائق، نضح طاف وإضافة 40 مل الطازجة المتوسطة الطلاء نجمية. ينبغي للمرء أن زراعة الأنسجة قارورة T75 تسفر حول 1x10 6 خلايا بعد الانقسام الخلية الأولى. لوحة الخلايا في اثنين من قوارير الثقافة T75 واحتضان عند 37 درجة مئوية في الحاضنة 2 CO. تغيير المتوسطة كل يوم 2 إلى 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ومطلي 12-14 يوما بعد انقسام الخلايا النجمية الأولى في الخلية المناسبة ساعة 24-48 تركيز قبل تنفيذ التجربة. ينبغي للمرء أن زراعة الأنسجة قارورة T75 تسفر حول 1،5-2 X10 6 خلايا بعد الانقسام الخلية الثانية. </li></ol>

<ol>
	<li>Nedergaard, M., Ransom, B., Goldman, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+roles+for+astrocytes:+redefining+the+functional+architecture+of+the+brain.">New roles for astrocytes: redefining the functional architecture of the brain.</a> Trends Neurosci. 26, 523-530 (2003).</li><li>Belanger, M., Allaman, I., Magistretti, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+energy+metabolism:+focus+on+astrocyte-neuron+metabolic+cooperation.">Brain energy metabolism: focus on astrocyte-neuron metabolic cooperation.</a> Cell Metab. 14, 724-738 (2011).</li><li>Allen, N. J., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroscience:+Glia+-+more+than+just+brain+glue.">Neuroscience: Glia - more than just brain glue.</a> Nature. 457, 675-677 (2009).</li><li>Ballas, N., Lioy, D. T., Grunseich, C., Mandel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-cell+autonomous+influence+of+MeCP2-deficient+glia+on+neuronal+dendritic+morphology.">Non-cell autonomous influence of MeCP2-deficient glia on neuronal dendritic morphology.</a> Nat. Neurosci. 12, 311-317 (2009).</li><li>Jacobs, S., Nathwani, M., Doering, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fragile+X+astrocytes+induce+developmental+delays+in+dendrite+maturation+and+synaptic+protein+expression.">Fragile X astrocytes induce developmental delays in dendrite maturation and synaptic protein expression.</a> BMC Neurosci. 11, 132 (2010).</li><li>Kaneko, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+neurons+clear+the+path+of+astrocytic+processes+for+their+rapid+migration+in+the+adult+brain.">New neurons clear the path of astrocytic processes for their rapid migration in the adult brain.</a> Neuron. 67, 213-223 (2010).</li><li>Min, R., Nevian, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+signaling+controls+spike+timing-dependent+depression+at+neocortical+synapses.">Astrocyte signaling controls spike timing-dependent depression at neocortical synapses.</a> Nat. Neurosci. , (2012).</li><li>Eroglu, C., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+synaptic+connectivity+by+glia.">Regulation of synaptic connectivity by glia.</a> Nature. 468, 223-231 (2010).</li><li>Sasaki, T., Matsuki, N., Ikegaya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action-potential+modulation+during+axonal+conduction.">Action-potential modulation during axonal conduction.</a> Science. 331, 599-601 (2011).</li><li>Bozoyan, L., Khlghatyan, J., Saghatelyan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+control+the+development+of+the+migration-promoting+vasculature+scaffold+in+the+postnatal+brain+via+VEGF+signaling.">Astrocytes control the development of the migration-promoting vasculature scaffold in the postnatal brain via VEGF signaling.</a> J. Neurosci. 32, 1687-1704 .</li><li>Alvarez, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hedgehog+pathway+promotes+blood-brain+barrier+integrity+and+CNS+immune+quiescence.">The Hedgehog pathway promotes blood-brain barrier integrity and CNS immune quiescence.</a> Science. 334, 1727-1731 (2011).</li><li>Abbott, N. J., Ronnback, L., Hansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-endothelial+interactions+at+the+blood-brain+barrier.">Astrocyte-endothelial interactions at the blood-brain barrier.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 41-53 (2006).</li><li>Tao-Cheng, J. H., Nagy, Z., Brightman, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junctions+of+brain+endothelium+in+vitro+are+enhanced+by+astroglia.">Tight junctions of brain endothelium in vitro are enhanced by astroglia.</a> J. Neurosci. 7, 3293-3299 (1987).</li><li>Gordon, G. R., Choi, H. B., Rungta, R. L., Ellis-Davies, G. C., MacVicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+metabolism+dictates+the+polarity+of+astrocyte+control+over+arterioles.">Brain metabolism dictates the polarity of astrocyte control over arterioles.</a> Nature. 456, 745-749 (2008).</li><li>Silver, J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+beyond+the+glial+scar.">Regeneration beyond the glial scar.</a> Nat. Rev. Neurosci. 5, 146-156 (2004).</li><li>Schachtrup, C., Moan, N. L. e., Passino, M. A., Akassoglou, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+stellate+cells+and+astrocytes:+Stars+of+scar+formation+and+tissue+repair.">Hepatic stellate cells and astrocytes: Stars of scar formation and tissue repair.</a> Cell Cycle. 10, 1764-1771 (2011).</li><li>Schachtrup, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrinogen+triggers+astrocyte+scar+formation+by+promoting+the+availability+of+active+TGF-beta+after+vascular+damage.">Fibrinogen triggers astrocyte scar formation by promoting the availability of active TGF-beta after vascular damage.</a> J. Neurosci. 30, 5843-5854 (2010).</li><li>Bushong, E. A., Martone, M. E., Jones, Y. Z., Ellisman, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protoplasmic+astrocytes+in+CA1+stratum+radiatum+occupy+separate+anatomical+domains.">Protoplasmic astrocytes in CA1 stratum radiatum occupy separate anatomical domains.</a> J. Neurosci. 22, 183-192 (2002).</li><li>Ogata, K., Kosaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+quantitative+analysis+of+astrocytes+in+the+mouse+hippocampus.">Structural and quantitative analysis of astrocytes in the mouse hippocampus.</a> Neuroscience. 113, 221-233 (2002).</li><li>Dabir, D. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+glutamate+transport+in+a+mouse+model+of+tau+pathology+in+astrocytes.">Impaired glutamate transport in a mouse model of tau pathology in astrocytes.</a> J. Neuroscience. 26, 644-654 (2006).</li><li>Wisniewski, H. M., Wegiel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+relationships+between+astrocytes+and+classical+plaque+components.">Spatial relationships between astrocytes and classical plaque components.</a> Neurobiol. Aging. 12, 593-600 (1991).</li><li>Shin, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+mutant+huntingtin+in+glial+cells+contributes+to+neuronal+excitotoxicity.">Expression of mutant huntingtin in glial cells contributes to neuronal excitotoxicity.</a> J. Cell Biol. 171, 1001-1012 (2005).</li><li>Wakabayashi, K., Hayashi, S., Yoshimoto, M., Kudo, H., Takahashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NACP/alpha-synuclein-positive+filamentous+inclusions+in+astrocytes+and+oligodendrocytes+of+Parkinson's+disease+brains.">NACP/alpha-synuclein-positive filamentous inclusions in astrocytes and oligodendrocytes of Parkinson's disease brains.</a> Acta Neuropathol. 99, 14-20 (2000).</li><li>Lioy, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+glia+in+the+progression+of+Rett's+syndrome.">A role for glia in the progression of Rett's syndrome.</a> Nature. 475, 497-500 (2011).</li><li>Quinlan, R. A., Brenner, M., Goldman, J. E., Messing, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFAP+and+its+role+in+Alexander+disease.">GFAP and its role in Alexander disease.</a> Exp. Cell Res. 313, 2077-2087 (2007).</li><li>Beck, K., Schachtrup, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+damage+in+the+central+nervous+system:+a+multifaceted+role+for+vascular-derived+TGF-beta.">Vascular damage in the central nervous system: a multifaceted role for vascular-derived TGF-beta.</a> Cell Tissue Res. 347, 187-201 (2012).</li><li>McCarthy, K. D., de Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+separate+astroglial+and+oligodendroglial+cell+cultures+from+rat+cerebral+tissue.">Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue.</a> J. Cell Biol. 85, 890-902 (1980).</li><li>Siao, C. J., Tsirka, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+plasminogen+activator+mediates+microglial+activation+via+its+finger+domain+through+annexin+II.">Tissue plasminogen activator mediates microglial activation via its finger domain through annexin II.</a> J. Neurosci. 22, 3352-3358 (2002).</li><li>Armstrong, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+immature+oligodendrocyte+lineage+cells.">Isolation and characterization of immature oligodendrocyte lineage cells.</a> Methods. 16, 282-292 (1998).</li><li>Cahoy, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transcriptome+database+for+astrocytes,+neurons,+and+oligodendrocytes:+a+new+resource+for+understanding+brain+development+and+function.">A transcriptome database for astrocytes, neurons, and oligodendrocytes: a new resource for understanding brain development and function.</a> J. Neurosci. 28, 264-278 (2008).</li><li>Anthony, T. E., Heintz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+folate+metabolic+enzyme+ALDH1L1+is+restricted+to+the+midline+of+the+early+CNS,+suggesting+a+role+in+human+neural+tube+defects.">The folate metabolic enzyme ALDH1L1 is restricted to the midline of the early CNS, suggesting a role in human neural tube defects.</a> J. Comp. Neurol. 500, 368-383 (2007).</li><li>Skoff, R. P., Knapp, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Division+of+astroblasts+and+oligodendroblasts+in+postnatal+rodent+brain:+evidence+for+separate+astrocyte+and+oligodendrocyte+lineages.">Division of astroblasts and oligodendroblasts in postnatal rodent brain: evidence for separate astrocyte and oligodendrocyte lineages.</a> Glia. 4, 165-174 (1991).</li><li>Molofsky, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+and+disease:+a+neurodevelopmental+perspective.">Astrocytes and disease: a neurodevelopmental perspective.</a> Genes Dev. 26, 891-907 (2012).</li><li>Zhang, Y., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+heterogeneity:+an+underappreciated+topic+in+neurobiology.">Astrocyte heterogeneity: an underappreciated topic in neurobiology.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 20, 588-594 (2010).</li><li>Foo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+method+for+the+purification+and+culture+of+rodent+astrocytes.">Development of a method for the purification and culture of rodent astrocytes.</a> Neuron. 71, 799-811 (2011).</li><li>Jungblut, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+living+primary+astroglial+cells+using+the+new+GLAST-specific+monoclonal+antibody+ACSA-1.">Isolation and characterization of living primary astroglial cells using the new GLAST-specific monoclonal antibody ACSA-1.</a> Glia. 60, 894-907 (2012).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

وتستند هذه الطريقة المذكورة هنا على إعداد ثقافة نجمية من أدمغة القوارض حديثي الولادة، وصفت في الأصل من قبل مكارثي وVellis دي في عام 1980 27. طريقة معدلة من العزلة وثقافة الخلايا النجمية القشرية من الدماغ إلى ما بعد الولادة P1 الماوس P4 المقدمة هنا هو سريع، والمحاصيل ال?...

الخلايا النجمية هي نوع من الخلايا وفيرة جدا في الجهاز العصبي المركزي (CNS). نسبة الخلايا النجمية لالخلايا العصبية هو 01:03 في القشرة من الفئران والجرذان، في حين هناك 1.4 الخلايا النجمية في الخلايا العصبية في القشرة الإنسان 1. وقد زاد الاهتمام في وظيفة الخلايا النجمية بشكل كبير في السنوات الأخيرة. إحدى الوظائف الرئيسية للالنجمية هو دورها في توفير الدعم الهيكلي والتمثيل الغذائي للخلايا العصبية 2،3. الأدوار المكتشفة حديثا عن الخلايا النجمية تغطي طيف واسع من الوظائف. وتشمل هذه الهجرة من توجيه محاور عصبية النامية وneuroblasts معينة خلال التنمية 4-6، وظائف في انتقال متشابك، المشبك القوة ومعالجة المعلومات من قبل الدوائر العصبية 7-9، في أدوار حاجز الدم في الدماغ (BBB) ​​تشكيل (10) وسلامة 11-13 وتنظيم ال 14 لهجة الدماغية. ميزة أخرى كبيرة من الخلايا النجمية هو استجابتها للإصابة. تحت astrocyt الحالات المرضيةأصبح وفاق رد الفعل وupregulate مزيد من التعبير عن البروتين المتوسطة الدبقية خيوط لييفي الحمضية (GFAP) والمثبطة البروتينات خارج الخلية المصفوفة (ECM) 15،16. الخلايا النجمية على رد الفعل ترسيم موقع الإصابة من الأنسجة السليمة من خلال تشكيل ندبة الدبقية، التي تتكون بشكل رئيسي من البروتينات نجمية ECM يفرز من عائلة كبريتات شوندروتن (CSPG) بروتيوغليكان، العوامل الرئيسية التي تحول دون تجدد المحاور بعد إصابة الجهاز العصبي المركزي 15-17. الخلايا النجمية تنشأ من الخلايا الشعاعية (RG) الدبقية خلال مرحلة التطور الجنيني في وقت متأخر بعد الولادة والحياة في وقت مبكر. بعد تحديد نجمية حدث والسلائف نجمية الهجرة إلى مواقعها النهائية، حيث تبدأ عملية التمايز النهائي. في الجسم الحي، ويبدو أن الخلايا النجمية تكون ناضجة ثلاثة إلى أربعة أسابيع بعد الولادة كما أشارت إلى ذلك التشكل على 18،19 نموذجية. جزء من السكان من الخلايا النجمية RG تحويلها إلى منطقة subventricular (نوع B الخلايا). Bأوراسكوم تليكوم القابضة، والخلايا B RG نوع وظيفة ونجمية مثل الخلايا الجذعية العصبية (NSCs) خلال التنمية وفي البالغين، على التوالي. مثل RG، الخلايا النجمية والخلايا B نوع أيضا تعبر عن نقل الغلوتامات نجمية محددة (GLAST) والدماغ الدهون ملزم البروتين (BLBP)، وGFAP، مشيرا إلى أن هذه العلامات لا يمكن أن تستخدم حصرا لتسمية الخلايا النجمية على وجه التحديد الكبار. وعلى النقيض من الخلايا النجمية متني الكبار، التي لا تفرق في RG صحية والدماغ والخلايا B نوع المعرض الجذعية المحتملة الخلية مثل القدرة على تجديد الذات. وقد تورط dysregulation من الخلايا النجمية في العديد من الأمراض، بما في ذلك مرض الزهايمر 20،21، مرض هنتنغتون 22، مرض باركنسون 23، متلازمة ريت 24 و المرض الإسكندر 25. وعلاوة على ذلك، الخلايا النجمية الرد على جميع الإهانات من CNS، مما يؤدي إلى تنشيط الخلايا النجمية ونجمي تشكيل ندبة الدبقية 16،26. ندبة الدبقية التي تشكل نجمي التالية TR الدماغويعتقد أوما أو اصابات الحبل الشوكي لتكون حاجزا منع تجديد الخلايا العصبية الوزراء 15. وقد تم تطوير طرق موثوقة لعزل السكان والحفاظ على تنقية الخلايا ضرورية لفهمنا للجهاز العصبي. العمل الرائد من قبل مكارثي وتمكن المحققون دي Vellis حتى الآن لإعداد الثقافات نقية تقريبا من الخلايا النجمية من الأنسجة الفئران حديثي الولادة 27. وقد تعلمت الكثير عن علم الأحياء نجمية باستخدام هذا الأسلوب، الذي يقدم هنا في شكل معدل قليلا لعزل الخلايا النجمية الماوس القشرية. استكمال الدراسات المجراة في، الخلايا النجمية وكذلك المتوسطة مكيفة تم الحصول عليها باستخدام وصفها في الثقافة المختبر، هي أدوات قيمة للحصول على مزيد من نظرة ثاقبة وظائف نجمية.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم العمل الحل </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تركيز النهائي </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> وسائل الإعلام الثقافة نجمية </td></tr><tr><td> DMEM، ارتفاع نسبة الجلوكوز </td><td> الحياة تكنولوجيز </td><td> 31966-021 </td><td></td></tr><tr><td> FBS، للحرارة المعطل </td><td> الحياة تكنولوجيز </td><td> 10082-147 </td><td> تركيز النهائي: 10٪ </td></tr><tr><td> البنسلين الستربتوميسين </td><td> الحياة تكنولوجيز </td><td> 15140-122 </td><td> تركيز النهائي: 1٪ </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> حل لحفر أنسجة المخestion </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> الحياة تكنولوجيز </td><td> 14170-088 </td><td></td></tr><tr><td> 2.5٪ التربسين </td><td> الحياة تكنولوجيز </td><td> 15090-046 </td><td> تركيز النهائي: 0.25٪ </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> آخر </td></tr><tr><td> 70٪ (المجلد / المجلد) الإيثانول </td><td> روث </td><td> 9065،2 </td><td></td></tr><tr><td> بولي يسين-D- </td><td> ميليبور </td><td> A-003-E </td><td> 50 ميكروغرام / مل </td></tr><tr><td> ماء </td><td> PAA </td><td> S15-012 </td><td> خلية ثقافة الصف </td></tr><tr><td> PBS </td><td> PAA </td><td> H15-002 </td><td> خلية ثقافة الصف </td></tr><tr><td> حاول 0.05٪psin-EDTA </td><td> الحياة تكنولوجيز </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> 0،45 ميكرون تصفية العقيمة </td><td> سارتوريوس </td><td> 16555 </td><td></td></tr><tr><td> طبق بتري 3،5 سم </td><td> BD الصقر </td><td> 353001 </td><td></td></tr><tr><td> 15 مل أنبوب فالكون </td><td> BD الصقر </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 50 مل فالكون الأنبوب </td><td> BD الصقر </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> 75 سم زراعة الأنسجة قارورة 2 </td><td> BD الصقر </td><td> 353136 </td><td></td></tr><tr><td> ملقط، ودفع غرامة </td><td> دومون </td><td> 2-1032؛ 2-1033 </td><td> # 3C؛ # 5 </td></tr><tr><td> ملقط، تلميح شقة </td><td> KLS مارتن </td><td> 12-120-11 </td><td></td></tr><tr><td> 13 سم مقص جراحي </td><td> Aesculap </td><td> BC-140-R </td><td></td></tr><tr><td> Stereomicroscope </td><td> لايكا </td><td></td><td> MZ7.5 </td></tr><tr><td> Stereomicroscope + كاميرا </td><td> لايكا </td><td></td><td> MZ16F؛ DFC320 </td></tr><tr><td> المجهر + كاميرا </td><td> زايس؛ كانون </td><td></td><td> بريمو فير؛ POWERSHOT A650 IS </td></tr><tr><td> نبذ </td><td> إيبندورف </td><td> 5805000.017 </td><td> Centrifuge5804R </td></tr><tr><td> شاكر المداري </td><td> الحرارية العلمية </td><td> SHKE 4450-1CE </td><td> MaxQ 4450 </td></tr><tr><td> ماء الحمام </td><td> Julabo </td><td></td><td> SW20؛ 37 ° C </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of mouse cortical astrocytes

الخلايا النجمية هي نوع من الخلايا وفرة في أدمغة الثدييات، ولكن لا يزال هناك الكثير الذي يمكن تعلمه عن خصائصها الجزيئية والوظيفية. في أنظمة نجمية المختبر زراعة الخلايا يمكن استخدامها في دراسة الوظائف البيولوجية لهذه الخلايا الدبقية بالتفصيل. هذا البروتوكول الفيديو يوضح كيفية الحصول على الخلايا النجمية نقية من العزلة والثقافة من الخلايا القشرية مختلطة من الجراء الماوس. وتستند هذه الطريقة على عدم وجود الخلايا العصبية قابلة للحياة وفصل oligodendrocytes قد، والخلايا النجمية الخلايا الدبقية الصغيرة، والثلاثة الرئيسية من السكان الخلية الدبقية في الجهاز العصبي المركزي، في الثقافة. صور ممثل خلال الأيام الأولى للثقافة إثبات وجود السكان الخلية المختلطة وبيان timepoint، عندما تصبح الخلايا النجمية متكدسة ويجب أن يتم فصل الخلايا الدبقية الصغيرة من و oligodendrocytes. وعلاوة على ذلك، علينا أن نبرهن النقاء ومورفولوجيا الخلايا النجمية من نجمي مثقف باستخدام stainings immunocytochemical لراسخة ووصف علامات نجمية حديثا. ويمكن هذا النظام الثقافة استخدامها بسهولة للحصول على الخلايا النجمية الماوس نقية والمتوسطة نجمية مكيفة لدراسة مختلف جوانب البيولوجيا نجمية.

على العزلة من مخ الفأر كاملة (الشكل 1A)، والمخيخ المصابيح حاسة الشم لا بد من إزالة (1B الشكل). ومقشر والقشور من الفأرة جذع الدماغ (الشكل 1C) والسحايا من القشرة الفردية (1D الشكل &#39;) تتم إزالة بعناية (الشكل 1E). السحايا واضحة من قبل...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes at JoVE.com

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

وقد تم الاعتراف الخلايا النجمية لتكون خلايا تنوعا المشاركة في العمليات البيولوجية الأساسية التي لا غنى عنها لنمو الدماغ الطبيعي وظيفة، ووسط إصلاح الجهاز العصبي. هنا نقدم إجراء سريع للحصول على الثقافات نقية نجمية الماوس لدراسة علم الأحياء من هذه الفئة الرئيسية من خلايا الجهاز العصبي المركزي.

العزلة وثقافة الخلايا النجمية الماوس القشرية

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

isolation-and-culture-of-mouse-cortical-astrocytes

Research

JoVE Journal

Neuroscience

90.6K Views.  University of Freiburg. وقد تم الاعتراف الخلايا النجمية لتكون خلايا تنوعا المشاركة في العمليات البيولوجية الأساسية التي لا غنى عنها لنمو الدماغ الطبيعي وظيفة، ووسط إصلاح الجهاز العصبي. هنا نقدم إجراء سريع للحصول على الثقافات نقية نجمية الماوس لدراسة علم الأحياء من هذه الفئة الرئيسية...

Video: Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and synapse formation and function. An advantage of culturing these neurons is that they readily polarize, forming distinctive axons and dendrites, on a two dimensional substrate at very low densities. This property has made them extremely useful for determining many aspects of neuronal development. Furthermore, by providing glial conditioning for these neurons they will continue to develop, forming functional synaptic connections and surviving for several months in culture. In this protocol we outline a technique to dissect, culture and transfect embryonic mouse hippocampal and cortical neurons. Transfection is accomplished by electroporating DNA into the neurons before plating via nucleofection. This protocol has the advantage of expressing fluorescently-tagged fusion proteins early in development (~4-8hrs after plating) to study the dynamics and function of proteins during polarization, axon outgrowth and branching. We have also discovered that this single transfection before plating maintains fluorescently-tagged fusion protein expression at levels appropriate for imaging throughout the lifetime of the neuron (&gt; 2 months in culture). Thus, this methodology is useful for studying protein localization and function throughout CNS development with little or no disruption of neuronal function.

This protocol outlines the steps required to dissect, transfect via electroporation and culture mouse hippocampal and cortical neurons. Short-term cultures may be used for studies of axon outgrowth and guidance, while long-term cultures can be used for studies of synaptogenesis and dendritic spine analysis.

Nucleofection والثقافة الأولية من الخلايا العصبية الجنينية الماوس الحصين والقشرية

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. Neuroepithelial cells of the neural tube that express Nkx6.1 are the unique precursor cells for spinal motoneurons1. Though postmitotic motoneurons move towards their final position and organize themselves into columns along the spinal tract2,3. More than 90% of all these differentiated and positioned motoneurons express the transcription factors Islet 1/2. They innervate the muscles of the limbs as well as those of the body and the inner organs. Among others, motoneurons typically express the high affinity receptors for brain derived neurotrophic factor (BDNF) and Neurotrophin-3 (NT-3), the tropomyosin-related kinase B and C (TrkB, TrkC). They do not express the tropomyosin-related kinase A (TrkA)4. Beside the two high affinity receptors, motoneurons do express the low affinity neurotrophin receptor p75NTR. The p75NTR can bind all neurotrophins with similar but lower affinity to all neurotrophins than the high affinity receptors would bind the mature neurotrophins. Within the embryonic spinal cord, the p75NTR is exclusively expressed by the spinal motoneurons5. This has been used to develop motoneuron isolation techniques to purify the cells from the vast majority of surrounding cells6. Isolating motoneurons with the help of specific antibodies (panning) against the extracellular domains of p75NTR has turned out to be an expensive method as the amount of antibody used for a single experiment is high due to the size of the plate used for panning. A much more economical alternative is the use of lectin. Lectin has been shown to specifically bind to p75NTR as well7. The following method describes an alternative technique using wheat germ agglutinin for a preplating procedure instead of the p75NTR antibody. The lectin is an extremely inexpensive alternative to the p75NTR antibody and the purification grades using lectin are comparable to that of the p75NTR antibody. Motoneurons from the embryonic spinal cord can be isolated by this method, survive and grow out neurites.

An alternative way of isolating mouse embryonic motoneurons from the spinal cord is described. The method takes into account the fact that lectin can bind to the low affinity nerve growth factor receptor p75NTR. This lectin-based preplating allows a purification similar to that with a specific antibody against the p75NTR.

Lectin القائم على عزل وثقافة حركية مماثلة الجنينية الماوس

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Bilaminar Co-culture of Primary Rat Cortical Neurons and Glia

This video will guide you through the process of culturing rat cortical neurons in the presence of a glial feeder layer, a system known as a bilaminar or co-culture model. This system is suitable for a variety of experimental needs requiring either a glass or plastic growth substrate and can also be used for culture of other types of neurons.
Rat cortical neurons obtained from the late embryonic stage (E17) are plated on glass coverslips or tissue culture dishes facing a feeder layer of glia grown on dishes or plastic coverslips (known as Thermanox), respectively. The choice between the two configurations depends on the specific experimental technique used, which may require, or not, that neurons are grown on glass (e.g. calcium imaging versus Western blot). The glial feeder layer, an astroglia-enriched secondary culture of mixed glia, is separately prepared from the cortices of newborn rat pups (P2-4) prior to the neuronal dissection.
A major advantage of this culture system as compared to a culture of neurons only is the support of neuronal growth, survival, and differentiation provided by trophic factors secreted from the glial feeder layer, which more accurately resembles the brain environment in vivo. Furthermore, the co-culture can be used to study neuronal-glial interactions1.
At the same time, glia contamination in the neuronal layer is prevented by different means (low density culture, addition of mitotic inhibitors, lack of serum and use of optimized culture medium) leading to a virtually pure neuronal layer, comparable to other established methods1-3. Neurons can be easily separated from the glial layer at any time during culture and used for different experimental applications ranging from electrophysiology4, cellular and molecular biology5-8, biochemistry5, imaging and microscopy4,6,7,9,10. The primary neurons extend axons and dendrites to form functional synapses11, a process which is not observed in neuronal cell lines, although some cell lines do extend processes.
A detailed protocol of culturing rat hippocampal neurons using this co-culture system has been described previously4,12,13. Here we detail a modified protocol suited for cortical neurons. As approximately 20x106 cells are recovered from each rat embryo, this method is particularly useful for experiments requiring large numbers of neurons (but not concerned about a highly homogenous neuronal population). The preparation of neurons and glia needs to be planned in a time-specific manner. We will provide the step-by-step protocol for culturing rat cortical neurons as well as culturing glial cells to support the neurons.

Here we provide a protocol for culturing rat cortical neurons in the presence of a glial feeder layer. The cultured neurons establish polarity and create synapses, and can be separated from the glia for use in various applications, such as electrophysiology, calcium imaging, cell survival assays, immunocytochemistry, and RNA/DNA/protein isolation.

ثنائي الصفائح المشارك ثقافة الجرذ الخلايا العصبية الابتدائية القشرية والدبقية

This video will guide you through the process of culturing rat cortical neurons in the presence of a glial feeder layer, a system known as a bilaminar or ...

Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice

Primary cultures of rat and murine hippocampal neurons are widely used to reveal cellular mechanisms in neurobiology. By isolating and growing individual neurons, researchers are able to analyze properties related to cellular trafficking, cellular structure and individual protein localization using a variety of biochemical techniques. Results from such experiments are critical for testing theories addressing the neural basis of memory and learning. However, unambiguous results from these forms of experiments are predicated on the ability to grow neuronal cultures with minimum contamination by other brain cell types. In this protocol, we use specific media designed for neuron growth and careful dissection of embryonic hippocampal tissue to optimize growth of healthy neurons while minimizing contaminating cell types (i.e. astrocytes). Embryonic mouse hippocampal tissue can be more difficult to isolate than similar rodent tissue due to the size of the sample for dissection. We show detailed dissection techniques of hippocampus from embryonic day 19 (E19) mouse pups. Once hippocampal tissue is isolated, gentle dissociation of neuronal cells is achieved with a dilute concentration of trypsin and mechanical disruption designed to separate cells from connective tissue while providing minimum damage to individual cells. A detailed description of how to prepare pipettes to be used in the disruption is included. Optimal plating densities are provided for immuno-fluorescence protocols to maximize successful cell culture. The protocol provides a fast (approximately 2 hr) and efficient technique for the culture of neuronal cells from mouse hippocampal tissue.

We provide a protocol for the culture of highly purified hippocampal neurons from prenatal mouse brains without the use of a feeder glial cell layer.

العزلة والثقافة من الخلايا العصبية قرن آمون من الفئران قبل الولادة

Primary cultures of rat and murine hippocampal neurons are widely used to reveal cellular mechanisms in neurobiology. By isolating and growing individual ...

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple stimuli and complex chemical molecules contained in foods. In human, individual fungiform papillae contain from zero to as many as 20 taste buds. There is no established protocol for culturing human taste cells, although the ability to maintain taste papillae cells in culture for multiple cell cycles would be of considerable utility for characterizing the molecular, regenerative, and functional properties of these unique sensory cells. Earlier studies of taste cells have been done using freshly isolated cells in primary culture, explant cultures from rodents, or semi-intact taste buds in tissue slices1,2,3,4. Although each of these preparations has advantages, the development of long-term cultures would have provided significant benefits, particularly for studies of taste cell proliferation and differentiation. Several groups, including ours, have been interested in the development and establishment of taste cell culture models. Most attempts to culture taste cells have reported limited viability, with cells typically not lasting beyond 3-5 d5,6,7,8. We recently reported on a successful method for the extended culture of rodent taste cells9. We here report for the first time the establishment of an in vitro culture system for isolated human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability. Cells displayed many molecular and physiological features characteristic of mature taste cells. Gustducin and phospholipase C &beta;2, (PLC-&beta;2) mRNA were detected in many cells by reverse transcriptase-polymerase chain reaction and confirmed by sequencing. Immunocytochemistry analysis demonstrated the presence of gustducin and PLC-&beta;2 expression in cultured taste cells. Cultured human fungiform cells also exhibited increases in intracellular calcium in response to appropriate concentrations of several taste stimuli indicating that taste receptors and at least some of the signalling pathways were present. These results sufficient indicate that taste cells from adult humans can be generated and maintained for at least eight passages. Many of the cells retain physiological and biochemical characteristics of acutely isolated cells from the adult taste epithelium to support their use as a model taste system. This system will enable further studies of the processes involved in proliferation, differentiation and function of mammalian taste receptor cells in an in vitro preparation.
Human fungiform taste papillae used for establishing human fungiform cell culture were donated for research following proper informed consent under research protocols that were reviewed and approved by the IRB committee. The protocol (#0934) was approved by Schulman Associates Institutional Review Board Inc., Cincinnati, OH. Written protocol below is based on published parameters reported by Ozdener et al. 201110.

We aimed to develop a reproducible protocol for isolating and maintaining long-term cultures of human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability.

العزلة والثقافة من خلايا الإنسان حليمات كمئية طعم

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease pathogenesis and their utility for preclinical drug development. In order to design a better model system for these applications, phenotypically wild-type cortical astrocytes and neural stem cells (NSC) from conditional, genetically engineered mice (GEM) that harbor various combinations of floxed oncogenic alleles were harvested and grown in culture. Genetic recombination was induced in vitro using adenoviral Cre-mediated recombination, resulting in expression of mutated oncogenes and deletion of tumor suppressor genes. The phenotypic consequences of these mutations were defined by measuring proliferation, transformation, and drug response in vitro. Orthotopic allograft models, whereby transformed cells are stereotactically injected into the brains of immune-competent, syngeneic littermates, were developed to define the role of oncogenic mutations and cell type on tumorigenesis in vivo. Unlike most established human glioblastoma cell line xenografts, injection of transformed GEM-derived cortical astrocytes into the brains of immune-competent littermates produced astrocytomas, including the most aggressive subtype, glioblastoma, that recapitulated the histopathological hallmarks of human astrocytomas, including diffuse invasion of normal brain parenchyma. Bioluminescence imaging of orthotopic allografts from transformed astrocytes engineered to express luciferase was utilized to monitor in vivo tumor growth over time. Thus, astrocytoma models using astrocytes and NSC harvested from GEM with conditional oncogenic alleles provide an integrated system to study the genetics and cell biology of astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo and may be useful in preclinical drug development for these devastating diseases.

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Phenotypically wild-type astrocytes and neural stem cells harvested from mice engineered with floxed, conditional oncogenic alleles and transformed via viral Cre-mediated recombination can be used to model astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo by orthotopic injection of transformed cells into brains of syngeneic, immune-competent littermates.

النمذجة الخلايا النجمية إمراض<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em&gt; استخدام القشرية النجمية أو الخلايا الجذعية العصبية من الشرطي، الفئران المهندسة وراثيا

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease ...

Sex Differences in Mouse Hippocampal Astrocytes after In-Vitro Ischemia

Astrogliosis following hypoxia/ischemia (HI)-related brain injury plays a role in increased morbidity and mortality in neonates. Recent clinical studies indicate that the severity of brain injury appear to be sex dependent, and that the male neonates are more susceptible to the effects of HI-related brain injury, resulting in more severe neurological outcomes as compared to females with comparable brain injuries. The development of reliable methods to isolate and maintain highly enriched populations of sexed hippocampal astrocytes is essential to understand the cellular basis of sex differences in the pathological consequences of neonatal HI. In this study, we describe a method for creating sex specific hippocampal astrocyte cultures that are subjected to a model of in-vitro ischemia, oxygen-glucose deprivation, followed by reoxygenation. Subsequent reactive astrogliosis was examined by immunostaining for the Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) and S100B. This method provides a useful tool to study the role of male and female hippocampal astrocytes following neonatal HI, separately.

Sex Differences in Mouse Hippocampal Astrocytes after In-Vitro Ischemia

Astrocytes are one of the most important key players in the central nervous system (CNS). Here, we are reporting a practical method of sexed hippocampal astrocyte culture protocol in order to study the mechanisms underlying the astrocyte function in male and female neonate pups after in-vitro ischemia.

الفروق بين الجنسين في ماوس الحصين النجمية بعد<em&gt; في المختبر</em&gt; نقص التروية

Astrogliosis following hypoxia/ischemia (HI)-related brain injury plays a role in increased morbidity and mortality in neonates. Recent clinical studies ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation into three types of cells: neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. Identifying aNSC-derived regions and characterizing the aNSC properties are critical for the potential use of aNSCs and for the elucidation of their role in neural regeneration. The subcallosal zone (SCZ), located between white matter and the hippocampus, has recently been reported to contain aNSCs and continuously give rise to neuroblasts. A low percentage of aNSCs from the SCZ is differentiated into neurons; most cells are differentiated into glial cells, such as oligodendrocytes and astrocytes. These cells are suggested to have a therapeutic potential for traumatic cortical injury. This protocol describes in detail the process to generate SCZ-aNSCs from an adult mouse brain. A brain matrix with intervals of 1 mm is used to obtain the SCZ-containing coronal slices and to precisely dissect the SCZ from the whole brain. The SCZ sections are initially subjected to a neurosphere culture. A well-developed culture system allows for the verification of their characteristics and can increase research on NSCs. A neurosphere culture system provides a useful tool for determining proliferation and collecting the genuine NSCs. A monolayer culture is also an in vitro system to assay proliferation and differentiation. Significantly, this culture system provides a more homogenous environment for NSCs than the neurosphere culture system. Thus, using a discrete brain region, these culture systems will be helpful for expanding our knowledge about aNSCs and their applications for therapeutic uses.

Establishing culture systems for the expansion of adult neural stem cells (aNSCs) allows for the examination and application of aNSCs for therapy. The subcallosal zone (SCZ) has recently been recognized as a novel neuroblast-forming region in adult mice. Here, methods for the isolation, expansion, and differentiation of SCZ-aNSCs are described.

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية البالغة العصبية من المنطقة تحت الثفني ماوس

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells into Cortical Interneuron Precursors

GABAergic cortical interneurons are a heterogeneous population of cells that play critical roles in regulating the output of excitatory pyramidal neurons as well as synchronizing the outputs of pyramidal neuron ensembles. Deficits in interneuron function have been implicated in a variety of neuropsychiatric disorders, including schizophrenia, autism, and epilepsy. The derivation of cortical interneurons from embryonic stem cells not only allows for the study of their development and function, but provides insight into the molecular mechanisms underlying the pathogenesis of cortical interneuron-related disorders. Interneurons also have the remarkable capacity to survive, migrate, and integrate into host cortical circuitry post-transplantation, making them ideal candidates for use in cell-based therapies. Here, we present a scalable, highly efficient, modified embryoid body-to-monolayer method for the derivation of Nkx2.1-expressing interneuron progenitors and their progeny from mouse embryonic stem cells (mESCs). Using a Nkx2.1::mCherry:Lhx6::GFP dual reporter mESC line, Nkx2.1 progenitors or their Lhx6-expressing post-mitotic progeny can be isolated via fluorescence-activated cell sorting (FACS) and subsequently used in a number of downstream applications. We also provide methods to enrich for parvalbumin (PV) or somatostatin (SST) interneuron subgroups, which may be helpful for studying aspects of fate determination or for use in therapeutic applications that would benefit from interneuron subgroup-enriched transplantations.

This protocol describes a method for generating cortical interneuron progenitors and post-mitotic interneuron precursors from mouse embryonic stem cells using a modified embryoid body-to-monolayer method. These progenitors/precursors can be used in vitro or fluorescently sorted and transplanted into neonatal neocortex for studying fate determination, or used in therapeutic applications.

تمايز الخلايا الجذعية الجنينية الماوس في السلائف إينتيرنيورون القشرية

GABAergic cortical interneurons are a heterogeneous population of cells that play critical roles in regulating the output of excitatory pyramidal neurons ...

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and expansion of NSCs provide a suitable source of cells for neuroscientists to study the function of neurons and glial cells along with their interactions. There are several reported techniques for the isolation of neural stem cells from adult or embryo mammalian brains. During the microsurgical operation to isolate NSCs from different regions of the embryonic CNS, it is very important to reduce the damage to the brain cells to obtain the highest ratio of live and expandable stem cells. A possible technique for stress reduction during isolation of these cells from the mouse embryo brain is the reduction of surgical time. Here, we demonstrate a developed technique for rapid isolation of these cells from the E13 mouse embryo ganglionic eminence. Surgical procedures include harvesting E13 mouse embryos from the uterus, cutting the frontal fontanelle of the embryo with a bent needle tip, extracting the brain from the skull, microdissection of the isolated brain to harvest the ganglionic eminence, dissociation of the harvested tissue in NSC medium to gain a single cell suspension, and finally plating cells in suspension culture to generate neurospheres.

Here, we introduce a novel microsurgical technique for the isolation of neural stem cells from the E13 mouse embryo ganglionic eminence.