이 작품은 Crohn의 및 캐나다의 대장염 재단 (CCFC)과 건강 연구 (CIHR)에 대한 캐나다 연구소에서 BAV에 운영 보조금에 의해 지원되었다. 기가바이트는 CIHR에서 대학원 학생이기로 운영되었습니다. BAV는 장과 간 장애 (아동) 소아 Gastroenterology의 소아 IBD 연구 및 캐나다 연구 의자 재단 위원장과 어린이입니다.

1. Citrobacter rodentium Inoculum와 마우스의 사정 Gavage의 작성 <ol><li> 준비와 Luria Bertani 국물 (LB)를 압력솥. </li><li> 가능한 C.를 얻을 멸균 inoculating 루프 또는 피펫 팁을 사용하여 LB 한천 플레이트로 냉동 글리세롤 주식과 승리의 rodentium. 37 ° C 하룻밤에 품다. inoculating 루프 또는 피펫 팁을 사용하여 LB 플레이트의 식민지로 매 문화 관 멸균 LB의 국물 3 ML의 예방. inoculum의 준비는 무균 기술을 사용하여 수행해야합니다. </li><li> C.를 품다 rodentium 문화 aerobically 37 번 ° C 200 rpm으로 benchtop 부화 흔드는에서 하룻밤. 주사 LB의 국물은 밤새 문화 흐린 후 나타납니다. </li><li> 전구를 사용 밤새 C. 100 μl 각 마우스를 gavage하기 위해 1 ML의 주사기에 부착 된 위 gavage 바늘을 팁 rodentium 문화. 단단히 목 다시 위에 느슨한 피부를 쥐었고하여 부드럽게 안녕하세요, 마우스를,엄지와 손가락. 머리를 고정하고 gavage 바늘의 삽입을 위해 식도를 바르게 색인 손가락으로 동물의 머리를 뒤로 당겨. </li><li> 수직 위치에 마우스를 유지하고 입의 측면을 따라와 혀 위에 gavage 바늘의 전구 팁을 지시. 부드럽게 입의 지붕을 따라 바늘을 통과하고 식도를 내려 향상. 이 절차를 수행하는 동안 느낌이 어떤 저항이있을 경우 gavage 바늘을 제거하고 다시 삽입합니다. </li><li> 천천히 세균 inoculum 100 μl를 삽입하고 부드럽게 gavage 바늘을 제거합니다. 그 케이지에 반환 한 후 마우스의 호흡 속도와 동작을 모니터링 할 수 있습니다. </li></ol> 참고 사항 : <ul><li> 2 단계와 3 단계에서 또한 국물 자체의 어떤 세균 오염이 없다는 것을 보장하기 위해 밤새 배양 할 무균 LB의 국물 3 ML과 무균 기술을 사용하여 매 문화 튜브를 준비합니다. LB의 국물은 밤새 문화 이후에 명확 나타납니다. </li><li&gt;을 부드럽게 박테리아의 동등한 복용량은 4 단계에서 각 마우스에 전달 될 수 있도록 gavage에 주사기를로드하기 전에 매 관 내에서 문화를 선동. </li><li> 이 24 시간 이상 주사 한 경우 숙박 문화는 폐기해야합니다. </li><li> 모든 C. 감염된 동물의 rodentium 감염 및 주택은 바이오 레벨 2 시설에서 수행되어야한다. </li></ul> 2. C.에 Colonic 상피 장벽 투과율 측정 rodentium에 감염된 마우스 <ol><li> 원하는 시점 이후의 감염에 장벽 무결성을 측정합니다. </li><li> 검정의 날, 4 kDa fluorescein의 isothiocyanate (FITC) - dextran 150 μl 각 마우스를 gavage하고 표준 곡선을 준비하는 80 MG ML -1의 농도로 생리 (PBS)를 버퍼 인산에 용해 충분한 준비합니다. </li><li> FITC-dextran의 150 μl와 안녕하세요, 마우스와 gavage. 이 시간에 우리를에서 음식을 철회 할 수 있습니다. </li><li> 후 마우스에게 4 시간을 마취gavaging 및 심장 구멍을 통해 가능한 한 많은 양의 피 (~ 450 μl)로 수집합니다. 응고를 억제하는 microcentrifuge 관 3퍼센트 산 구연산의 덱스 트로 오스의 최종 농도에 혈액을 추가합니다. 쥐를 안락사시켜야하고 박테리아 카운트 (단계 3.1-3.5)에 대한 PBS에서 colonic 조직을 수집하고 조직 고정 용 포르말린, 그리고 궁극적으로 immunofluorescence 얼룩 10 % (단계 4.1-4.8)에 있습니다. </li><li> 4 ° C.에서 원심 분리기에서 12 분 1,000 XG에서 혈액 샘플을 스핀 혈청을 수집하여 PBS의 10분의 1과 1 / 100 희석. 복제에 96 잘 판에이 두 dilutions 각 샘플 100 μl를 추가합니다. </li><li> 표준 곡선을 준비하려면 원래의 80 MG ML -1 FITC-dextran은 다음과 농도에 PBS에서 쥐를 gavage하는 데 사용 희석 : 800, 400, 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 0 μg / ML . 세중의에 96 잘 판에 각 농도 100 μl를 추가합니다. </li><li> 여기 WAV에서 fluorometer를 사용하여 각 샘플의 형광을 수량화485 나노 미터와 535 nm의 방출 파장의 elength. </li><li> 표준 곡선을 음모하여 원시 데이터를 분석합니다. 입력 각 샘플에 FITC-dextran의 농도를 결정하기 위해 표준 곡선에 의해 생성되는 라인의 방정식에 각 샘플에 대한 원시 데이터입니다. </li></ol> 참고 사항 : <ul><li> 4 단계 이후로, 얼음에 혈액 샘플을 유지하고 빛에 노출을 최소화합니다. </li><li> 심각한 조직 손상이이 시점 이후에 발생로 시점에서, 또는 그 이전에 상피 장벽 무결성을 측정 할 경우 7 일 이후 감염 최적입니다. 심각한 피해가 발생하기 전에 장벽 무결성을 측정하면 C. 동안 투자율의 최대 차이를 확인할 수 있습니다 마우스 변종 사이의 rodentium 감염. </li><li> 감염되지 않은 컨트롤 마우스도 상피 장벽의 무결성에 대한 테스트되어 있는지 확인합니다. </li></ul> 3. C.의 조직에서 세균 하중 측정 rodentium에 감염된 마우스 <ol><li> 한 ML 멸균 PBS를 추가ND은 원형에 구슬 autoclaved 금속은 무균 기술을 사용하여 두 ML의 원심 분리기 튜브를 버린. 각 동물로부터 수집 된 개인 조직은 별도의 PBS 튜브에 배치됩니다. 조직의 추가하기 전에 튜브를 무게. </li><li> 마우스에서이게 맹장과 결장을 제거합니다. 콜론에서이게 맹장을 분리하고 집게를 사용하여 luminal 내용을 밀어. PBS 관에 내용을 추가합니다. 10% 포르말린 고정의 말초 콜론과이게 맹장에서 0.5 cm 섹션을 분리 한 후 길이 방향으로 나머지 콜론과이게 맹장을 잘라 튜브에 조직을 배치하기 전에 멸균 PBS로 씻어. </li><li> 조직과 PBS 튜브를 무게 그리고 30 Hz에서 6 분을 위해 구슬 때리는를 사용하여 샘​​플을 균질화. </li><li> 무균 기술 사용 96 잘 플레이트에 잘 당 180 μl 멸균 PBS를 추가합니다. 각 행의 첫 번째도 각 균질 샘플의 20 μl를 추가합니다. 잘 섞어서 순차적으로 (먼저 10 -1에서 dilutions를 얻기 위해 잘 각 이전에서 20 μl를 추가 희석10 -6까지) 붙인다. 그리드와 사각형 바닥 LB 플레이트에 세중의 각 샘플에서 각 희석의 플레이트 10 μl. 37 박 품다 ° C. </li><li> 그리고 평균 식민지 성형 단위 (CFU), 3 카운트를 계산하고, 각 샘플이 계산 된에 희석를 기록합니다. 원래 1 ML 샘플의 20 μl이 사용 된 것처럼, 50으로 평균 CFU를 곱하며, 샘플 CFU / ML의 결과로 계산 된에 희석 요인에 의해. 마지막으로, CFU / g를 결정하는 조직 무게로 나눕니다. </li></ol> 4. 조직 학적 평가와 감염된 장 조직의 Immunofluorescence 착색 <ol><li> 단계 3.2에서와 같이 조직을 수집합니다. 포르말린 하룻밤에 저장 조직은 다음 70 % 에탄올로 씻는다. 파라핀에 조직을 추가하고 착색 5 μm 섹션을 잘라. 조직 학적 평가에 대한 hematoxylin &amp; eosin으로 청바지와 immunofluorescence 얼룩을위한 다음 단계로 진행합니다. </li><li> 이전 착색에 조직을 deparaffinize하려면, 장소에 슬라이드65 10 분에 대한 ° C 물 목욕에 coplin의 착색 병 등을 넣어. 다음, 2 분마다 네 개의 세차에 대한 크실렌의 장소 슬라이드. 95 % 에탄올, 75 % 에탄올과 DH 2 0 : 슬라이드가 다음 하나 5 분 다음 각 세척에 이어 100 % 에탄올에 두 개의 5 분 세차와 rehydrated해야합니다. 이러한 세차는 유해한 증기에 노출을 피하기 위해 퓸 배출 후드에서 수행해야합니다. </li><li> 30 분의 증기선에 미리 예열 나트륨 구연산 버퍼 한 후 이곳의 coplin 병의 장소 슬라이드 한 다음 30 분에 앉아 보자. 이 과정은 단백질 잠재적 인 antigenic 사이트를 검색 포르말린 고정에 의해 형성된 간 링크를시킵니다. </li><li> 5 분 세 번 PBS azide로 씻으십시오. 드라이 슬라이드와 조직에 지역화 착색의 시약을 유지, 소수성 장벽을 생성 할 수 PAP 펜과 조직 주변 마크 공간이 마련되어 있습니다. </li><li> immunostaining 수분 챔버에서 차단 버퍼로 실온에서 1 시간 (예 : α-염소 혈청)에 대한 블록 조직. </li><li> 꼼꼼한를 희석워 항체가 원하는 농도에 항체 희석 버퍼를 사용합니다. 버퍼를 차단 해제 넣어와 조직에 주요 항체의 50-100 μl를 추가합니다. 4 2 시간에 ° C 야간이나 실내 온도에서에 품다. </li><li> 5 분 세 번 PBS azide로 씻으십시오. 어둠 속에서 1 시간 동안 실온에서 조직 및 배양에 항체 희석 버퍼에 희석 이차 항체의 50-100 μl를 추가합니다. 5 분 세 번 DH 2 O로 씻으십시오. </li><li> DAPI 골드 장착 중간을 연장하고 coverslip을 적용 추가 슬라이드를 탈수. 형광 현미경 슬라이드를 표시합니다. </li></ol> 참고 사항 : <ul><li> PBS azide는 4 단계 이후의 세척 매체의 박테리아 성장을 방지 할 수있는 대안으로 신선하게 조리 된 PBS로 대체 할 수 있습니다. </li></ul>

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	<li>Nell, S., Seurbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD:+lessons+from+mouse+infection+models.">The impact of microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8, 564-577 (2010).</li><li>Cario, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+Receptors+in+Inflammatory+Bowel+Diseases:+A+Decade+Later.">Toll-like Receptors in Inflammatory Bowel Diseases: A Decade Later.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 16 (9), 1583-1597 (2010).</li><li>Eckmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Inflammatory+Bowel+Disease.">Animal Models of Inflammatory Bowel Disease.</a> Annals New York Academy of Sciences. , 1027-38 (2006).</li><li>Mundy, R., MacDonald, T. T., Dougan, G., Frankel, G., Wiles, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrobacter+rodentium+of+mice+and+man.">Citrobacter rodentium of mice and man.</a> Cellular Microbiology. 7, 1697-1706 (2005).</li><li>Luperchio, S., Schauer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+of+Citrobacter+rodentium+and+transmissible+murine+colonic+hyperplasia.">Molecular pathogenesis of Citrobacter rodentium and transmissible murine colonic hyperplasia.</a> Microbes and Infection. 3 (4), 333-340 (2001).</li><li>Bergstrom, K. S., Sham, H. P., Zarepour, M., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+host+responses+to+enteric+bacterial+pathogens:+a+balancing+act+between+resistance+and+tolerance.">Innate host responses to enteric bacterial pathogens: a balancing act between resistance and tolerance.</a> Cellular Microbiology. 14, 475-484 (2012).</li><li>MacDonald, T. T., Frankel, G., Dougan, G., Goncalves, N. S., Simmons, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+defences+to+Citrobacter+rodentium.">Host defences to Citrobacter rodentium.</a> International Journal of Medical Microbiology. 293, 87-93 (2003).</li><li>Borenshtein, D., McBee, M. E., Schauer, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+the+Citrobacter+rodentium+infection+model+in+laboratory+mice.">Utility of the Citrobacter rodentium infection model in laboratory mice.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 24, 32-37 (2008).</li><li>Gibson, D. L., Ma, C., Rosenberger, C. M., Bergstrom, K. S. B., Valdez, Y., Huang, J. T., Khan, M. A., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+2+plays+a+critical+role+in+maintaining+mucosal+integrity+during+Citrobacter+rodentium-induced+colitis.">Toll-like receptor 2 plays a critical role in maintaining mucosal integrity during Citrobacter rodentium-induced colitis.</a> Cellular Microbiology. 10, 388-403 (2008).</li><li>Dennis, A., Kudo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p50+subunit+of+NF-&#954;B+is+critical+for+in+vivo+clearance+of+the+non-invasive+enteric+pathogen+Citrobacter+rodentium.">The p50 subunit of NF-&#954;B is critical for in vivo clearance of the non-invasive enteric pathogen Citrobacter rodentium.</a> Infection &amp; Immunity. 76 (11), 4978-4988 (2008).</li><li>Gibson, D. L., Ma, C., Bergstrom, K. S. B., Huang, J. T., Man, C., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MyD88+signalling+plays+a+critical+role+in+host+defence+by+controlling+pathogen+burden+and+promoting+epithelial+cell+homeostasis+during+Citrobacter+rodentium-induced+colitis.">MyD88 signalling plays a critical role in host defence by controlling pathogen burden and promoting epithelial cell homeostasis during Citrobacter rodentium-induced colitis.</a> Cellular Microbiology. 10 (3), 618-631 (2008).</li><li>Lebeis, S. L., Bommarius, B., Parkos, C. A., Sherman, M. A., Kalman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TLR+signaling+mediated+by+MyD88+is+required+for+a+protective+innate+immune+response+by+neutrophils+to+Citrobacter+rodentium.">TLR signaling mediated by MyD88 is required for a protective innate immune response by neutrophils to Citrobacter rodentium.</a> Journal of Immunology. 179 (1), 566-577 (2007).</li><li>Bry, L., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+T+cell+dependent+serum+antibody,+but+not+the+gut-associated+lymphoid+tissue,+for+surviving+acute+mucosal+infection+with+Citrobacter+rodentium,+an+attaching+and+effacing+pathogen.">Critical role of T cell dependent serum antibody, but not the gut-associated lymphoid tissue, for surviving acute mucosal infection with Citrobacter rodentium, an attaching and effacing pathogen.</a> Journal of Immunology. 172 (1), 433-441 (2004).</li><li>Simmons, C. P., Clare, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+for+B+lymphocytes+and+CD4++T+cells+in+immunity+to+infection+by+the+attaching+and+effacing+pathogen+Citrobacter+rodentium.">Central role for B lymphocytes and CD4+ T cells in immunity to infection by the attaching and effacing pathogen Citrobacter rodentium.</a> Infection &amp; Immunity. 71 (9), 5077-5086 (2003).</li><li>Ahmed, I., Chandrakesan, P., Tawfik, O., Xia, L., Anant, S., Umar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+Roles+of+Notch+and+Wnt/&#946;-Catenin+Pathways+in+the+Regulation+of+Hyperplasia+and/or+Colitis+in+Response+to+Bacterial+Infection.">Critical Roles of Notch and Wnt/&#946;-Catenin Pathways in the Regulation of Hyperplasia and/or Colitis in Response to Bacterial Infection.</a> Infection &amp; Immunity. 80 (9), 3107-3121 (2012).</li></ol>

제작자들은 더 경쟁 금융 이익이 없다는 점 선언합니다.

Citrobacter rodentium 감염은 전염성 질병과 쥐 대장염 모두의 연구 귀중한 모델을 제공합니다. 이 독특한 모델은 두 호스트 응답뿐만 아니라 세균의 병원성 속성의 특성을 허용합니다. 단계는이 프로토콜 세부 사항에이 모델의 성공적인 사용을 설명했다. 대장염을 유도하고 응답을 분석 할 때 염두에 두어야 할이 프로토콜의 여러 중요한 단계가 있습니다. 첫째, 신선한 밤...

장용 세균 병원균에 의해 감염이 위장 (GI) 염증뿐만 아니라, 설사 및 장 상피 장벽 기능 장애 등의 장 병리학 및 pathophysiology을 트리거합니다. 세균성 병원체가 자신의 호스트,뿐만 아니라 감염에 대한 방어를 특정 호스트 응답의 GI 기관을 식민지화하는이 독성 메커니즘이 잘못 이해되어 장용 세균 감염의 모델링에 그러나 최근 발전은 이러한 프로세스에 대한 우리의 이해를 돕기 위해 시작했습니다. 장용 박테리아는 또한 염증성 장 질병 (IBDs)에 연결되었습니다. IBDs Crohn의 질병 (CD)와 UC 만성 장 염증 및 조직 손상을 특징으로 알 수없는 병인의 복잡한 질병입니다. 이러한 dextran 나트륨 황산 (DSS)와 D와 같은 화합물과 화학 도전에, 마우스 - / - 장 염증의 많은 마우스 모델은 IL10와 같은 유전자 변형 종자에 자연스럽게 염증의 존재initrobenzene 설 폰산 (DNBS) 1. 그것은 IBD 환자에 존재 maladaptive 만성 염증성 반응이 장의 박테리아에 장 점막 면역 시스템의 이상 노출 2, 그러므로 전염성 대장염의 모델의 연구는 잠재적으로 병원성 호스트를 정의하는 중요한 가능성을 제공에 유전자 민감한 개인에 개발하는 가설되었습니다 . 장용 박테리아에 대한 답변 Citrobacter rodentium 유도 대장염은 장의 박테리아와 IBD의 pathogenesis의 잠재적 인 메커니즘의 추가 이해에 대한 호스트 응답의 분석을 위해 수 있도록 잘 1,3를 특징으로 한 감염성 대장염의 희귀 모델 중 하나이며, 필수 단계 소설 예방 및 치료 치료를 개발 인치 C. rodentium는 밀접하게 중요한 인간과 관련되어 (A / E) g 부착 부정적인 및 나온다, 손쥐 특정 세균 병원균입니다병원체 enteropathogenic E. 대장균 (EPEC) 및 enterohaemorrhagic E. 대장균 (EHEC) 3-8. A / E의 병원균의 가족은 깊은 숙주 세포에 비 침습적 받침대와 같은 구조를 형성 cecal과 colonic 상피의 꼭대기 숙주 세포 막에 첨부합니다. C.이있는 구두 도전 10 8 -10 9 생물의 rodentium은 crypts, mononuclear 면역 세포 침투와 고 블렛 셀 고갈 3,4의 colonic 증식이나 신장을 특징으로 전염성 대장염의 강력한 모델을 생산하고 있습니다. 식민지의 초기 사이트는 몇 시간 도전 한 후, cecal 패치에 2-3일 감염 3 후 말초 콜론으로 진행을합니다. 면역 적격 마우스 변종에서 병원균의 등급이 3-4주 감염 1,3,4 후에 이루어집니다. 그러나 많은 유전자 변형 종자는 즉, 유전자 결함 또는 녹아웃 (- / -) 생쥐는 increa를 표시 할 수 발견되었습니다과장 손상 및 / 또는 만성 감염과 염증 9-14의 결과로 감염에 느끼기 쉬운 상태를 SED. 이 녹아웃의 변종이 전염성 대장염 모델의 사용, 본래 신호 단백질이 부족한 많은 사람들이, 장 감염 및 염증의 해상도에 필수적인 여러 호스트 단백질을 드러내 indispensible있다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 / 재료의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> Luria 국물 </td><td> ABM </td><td> G247 </td><td> 물 1L에 LB 가루 25g을 추가합니다. 사용하기 전에 압력솥. </td></tr><tr><td> 그리드와 광장 바닥 판 </td><td> 어부 </td><td> 08-757 - 11A </td><td></td></tr><tr><td> 팔콘 문화 관 </td><td> Sarstedt </td><td> 62.515.006 </td><td></td></tr><tr><td> 전구는 위 gavage 바늘이 팁 </td><td> 정밀 과학 도구 </td><td> 18060-20 </td><td></td></tr><tr><td> 1 ML의 주사기 </td><td> BD Biosciences </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> 4 kDa FITC - dextran </td><td> 시그마 </td><td> FD-4 </td><td></td></tr><tr><td> 구연산 </td><td> 시그마 </td><td> C7129 &lt;/ TD&gt; <td></td></tr><tr><td> 나트륨 시트르산 </td><td> 어부 </td><td> S279-500 </td><td></td></tr><tr><td> 우선 당 </td><td> 어부 </td><td> D16.1 </td><td></td></tr><tr><td> 산성 구연산 덱스 트로 오스 </td><td></td><td></td><td> 20 MM ctiric 산, 110 MM 나트륨 구연산, 5 MM 덱스 트로 오스 </td></tr><tr><td> 블랙 96 - 웰 플레이트 </td><td> 어부 </td><td> 07-200-762 </td><td></td></tr><tr><td> 금속 구슬 (5 ㎜) </td><td> Qiagen </td><td> 69,989 </td><td></td></tr><tr><td> 포르말린 10% </td><td> 어부 </td><td> 5F93-4 </td><td></td></tr><tr><td> 5 ML의 약병 </td><td> DiaMed </td><td> STK3205 </td><td></td></tr><tr><td> Hematoxylin </td><td> 어부 </td><td> H345-23 </td><td></td></tr><tr><td> Eosin </td><td> 어부 </td><td> E511-100 </td><td></td></tr><tr><td> 크실렌 </td><td> 어부 </td><tD&gt; HC700-1GAL </td><td></td></tr><tr><td> 십대 초반 20 </td><td> 시그마 </td><td> P5927 </td><td></td></tr><tr><td> Coplin의 착색 병 </td><td> VWR </td><td> 47751-792 </td><td></td></tr><tr><td> 나트륨 시트르산 버퍼 </td><td></td><td></td><td> 10 MM 나트륨 구연산, 0.05 % 십대 초반 20 pH를 6.0 </td></tr><tr><td> 자궁 펜 </td><td> Cedarlane </td><td> Mu22 </td><td></td></tr><tr><td> 염소 혈청 </td><td> 시그마 </td><td> G902-3 </td><td></td></tr><tr><td> 소 혈청 알부민 (BSA) </td><td> 어부 </td><td> BP1600-100 </td><td></td></tr><tr><td> 트리톤 X-100 </td><td> 시그마 </td><td> T8532 </td><td></td></tr><tr><td> 나트륨 azide </td><td> 시그마 </td><td> SZ002 </td><td></td></tr><tr><td> 버퍼를 차단 </td><td></td><td></td><td> 2 % 염소 혈청, 1 % BSA, 0.1 % 트라이 튼 X-100, 0.05 % 십대 초반 20 0.05 % 나트륨azide, 0.01 M PBS, pH를 7.2, 4에 혼합 및 저장 ° C. </td></tr><tr><td> 항체 희석 버퍼 </td><td></td><td></td><td> 0.1 % 트라이 튼 X-100, 0.1 % BSA, 0.05 % 나트륨 azide, 0.04 % EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td></tr><tr><td> 티르에 대한 차단 버퍼 및 항체 희석 버퍼 </td><td></td><td></td><td> 위와 같이하지만, 세제의 추가 (트라이 튼 X-100과 십대 초반 20)없이 동일 요리법 </td></tr><tr><td> DAPI와 골드 Antifade의 시약을 연장 </td><td> Invitrogen </td><td> P-36931 </td><td></td></tr><tr><td> Coverslips </td><td> 어부 </td><td> 12.54SE </td><td></td></tr><tr><td> Benchtop 부화 흔드는 </td><td> Barnstead 연구소 선 </td><td> 최대 Q4000 </td><td></td></tr><tr><td> Fluorometer </td><td> Perkin 엘머 </td><td> Victor2D </td><td></td></tr><tr><td> 냉장 원심 분리기 </td><td> Beckman 보습 바로 앞에 달린 풀 베는 날 </td><td> Microfuge 22R</td><td></td></tr><tr><td> 기선 </td><td> 블랙 &amp; 데커 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 형광 현미경 </td><td> Zeiss </td><td> Axio Image.Z1 </td><td></td></tr></tbody></table>

the citrobacter rodentium mouse model: studying pathogen and host contributions to infectious colitis

이 프로토콜은 전염성 질환과 대장염의 강력한 모델을 생산하는 데 필요한 단계뿐만 아니라, 마우스에 Citrobacter rodentium 감염을 특징하는 데 사용되는 방법을 설명합니다. C.는 rodentium는 밀접하게 임상 적으로 중요한 인간 병원체 enteropathogenic E. 관련되어 g 제외, 손쥐 특정 세균 병원균입니다 대장균 및 enterohemorrhagic E. 대장균. C.로 감염시 rodentium, 면역 적격 마우스는 겸손과 과도 체중 감소, 설사로 고통 받고 있습니다. Histologically, 장 토굴 신장, 면역 세포 침투 및 고 블렛 셀 고갈을 준수하고 있습니다. 감염의 등급이 3-4주 후 이루어집니다. 감염 후 다른 시간 지점에서 장 상피 장벽 무결성, 박테리아 부하 및 조직 학적 손상의 측정은 감염에 민감 마우스 종자의 특성을 수 있습니다. 독성 메커니즘s이 (가) 세균성 병원체가 자신의 호스트,뿐만 아니라 감염에 대한 방어를 특정 호스트 응답의 창자를 이식하는이 제대로 이해하고 있습니다. 따라서 C. 장용 세균 감염의 rodentium 모델은 이러한 프로세스에 대한 우리의 이해에 도움이 할 수있는 유용한 도구 역할을합니다. 장용 박테리아는 또한 염증성 장 질병 (IBDs)에 연결되었습니다. 그것은 IBD 환자에서 볼 수 maladaptive 만성 염증성 반응이 장의 박테리아에 장 점막 면역 시스템의 이상 노출 후 유전자 민감한 개인에 개발하는 가설되었습니다. 따라서, 전염성 대장염의 모델의 연구는 장용 박테리아에 잠재적으로 병원성 호스트 응답을 정의하기위한 중요한 가능성을 제공합니다. C.는 rodentium 유도 대장염은 IBD의 pathogenesis의 잠재적 인 메커니즘에 대한 우리의 이해를 발전, 장용 박테리아에 대한 호스트 응답의 분석을 허용 하나의 희귀 한 모델이다;소설 예방 및 치료 치료의 개발에 필수적.

표준 감염 실험이 진행되는 동안, 마우스는 100 μl 박 C.의 gavage을 통해 약 2.5 X 10 8 CFU에 감염된 rodentium 문화. C.와 C57BL / 6 마우스의 감염 겸손과 과도 체중 감소, 설사에 rodentium 결과이다. C57BL / 6 마​​우스와 드문, 동물은 병이되고 euthanization가 필요할 수 있습니다 있지만. 따라서, 쥐가 다른 변종은 감염에 의해 영향을받습니다 할 수있는 범위를 결정하기 위해, 체중 ?...

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The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Citrobacter rodentium 감염이 장의 세균 감염을 공부뿐만 아니라 마우스의 면역 반응 및 대장염를 개최 할 수있는 중요한 모델을 제공합니다. 이 프로토콜은 장벽 무결성, 병원체 부하와 손쥐 전염성 대장염에 대한 병원체 및 호스트 공헌의 철저한 특성을 허용하는 조직 학적 손상의 측정을 설명합니다.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; 마우스 모델 : 감염성 대장염에 대한 공부 병원체 및 호스트 기부

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

the-citrobacter-rodentium-mouse-model-studying-pathogen-host

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

26.4K 조회수.  BC Children's Hospital. Citrobacter rodentium 감염이 장의 세균 감염을 공부뿐만 아니라 마우스의 면역 반응 및 대장염를 개최 할 수있는 중요한 모델을 제공합니다. 이 프로토콜은 장벽 무결성, 병원체 부하와 손쥐 전염성 대장염에 대한 병원체 및 호스트 공헌의 철저한 특성을 허용하는 조직 학적 손상의 측정을 설명합니다.

비디오: The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

This protocol outlines the steps required to longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging tomography with integrated &mu;CT (DLIT-&mu;CT) and the subsequent use of this data to generate a four dimensional (4D) movie of the infection cycle. To develop the 4D infection movies and to validate the DLIT-&mu;CT imaging for bacterial infection studies using an IVIS Spectrum CT, we used infection with bioluminescent C. rodentium, which causes self-limiting colitis in mice. In this protocol, we outline the infection of mice with bioluminescent C. rodentium and non-invasive monitoring of colonization by daily DLIT-&mu;CT imaging and bacterial enumeration from feces for 8 days.
The use of the IVIS Spectrum CT facilitates seamless co-registration of optical and &mu;CT scans using a single imaging platform. The low dose &mu;CT modality enables the imaging of mice at multiple time points during infection, providing detailed anatomical localization of bioluminescent bacterial foci in 3D without causing artifacts from the cumulative radiation. Importantly, the 4D movies of infected mice provide a powerful analytical tool to monitor bacterial colonization dynamics in vivo.

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

Multi-modality imaging is a valuable approach for studying bacterial colonization in small animal models. This protocol outlines infection of mice with bioluminescent Citrobacter rodentium and the longitudinal monitoring of bacterial colonization using composite 3D diffuse light imaging tomography with &mu;CT imaging to create a 4D movie of C. rodentium infection.

의 4D 좌석 Multimodality 이미징<em&gt; Citrobacter rodentium</em마우스에서&gt; 감염

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

연구

면역학 및 감염병학

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including neoplastic, autoimmune, and chronic inflammatory diseases. Emerging evidence implicates pathogen-induced chronic inflammation in the development and progression of chronic diseases with a wide variety of clinical manifestations. Due to the complex and multifactorial etiology of chronic disease, designing experiments for proof of causality and the establishment of mechanistic links is nearly impossible in humans. An advantage of using animal models is that both genetic and environmental factors that may influence the course of a particular disease can be controlled. Thus, designing relevant animal models of infection represents a key step in identifying host and pathogen specific mechanisms that contribute to chronic inflammation.
Here we describe a mouse model of pathogen-induced chronic inflammation at local and systemic sites following infection with the oral pathogen Porphyromonas gingivalis, a bacterium closely associated with human periodontal disease. Oral infection of specific-pathogen free mice induces a local inflammatory response resulting in destruction of tooth supporting alveolar bone, a hallmark of periodontal disease. In an established mouse model of atherosclerosis, infection with P. gingivalis accelerates inflammatory plaque deposition within the aortic sinus and innominate artery, accompanied by activation of the vascular endothelium, an increased immune cell infiltrate, and elevated expression of inflammatory mediators within lesions. We detail methodologies for the assessment of inflammation at local and systemic sites. The use of transgenic mice and defined bacterial mutants makes this model particularly suitable for identifying both host and microbial factors involved in the initiation, progression, and outcome of disease. Additionally, the model can be used to screen for novel therapeutic strategies, including vaccination and pharmacological intervention.

Animal models have proven to be invaluable tools in defining host and pathogen specific mechanisms that contribute to the development of chronic inflammation. Here we describe a mouse model of oral infection with the human pathogen Porphyromonas gingivalis and detail methodologies to assess the progression of inflammation at local and systemic sites.

로컬 및 전신 사이트에서 병원체에 의한 만성 염증을위한 마우스 모델

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal features of the natural infection. This protocol describes procedures for the establishment and evaluation of systemic infection due to neuropathogenic Escherichia coli K1 in the neonatal rat. Colonization of the gastrointestinal tract leads to dissemination of the pathogen along the gut-lymph-blood-brain course of infection and the model displays strong age dependency. A strain of E. coli O18:K1 with enhanced virulence for the neonatal rat produces exceptionally high rates of colonization, translocation to the blood compartment and invasion of the meninges following transit through the choroid plexus. As in the human host, penetration of the central nervous system is accompanied by local inflammation and an invariably lethal outcome. The model is of proven utility for studies of the mechanism of pathogenesis, for evaluation of therapeutic interventions and for assessment of bacterial virulence.

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Here, a procedure is described for the establishment of systemic infection in the neonatal rat with cultures of Escherichia coli K1. This non-invasive procedure permits colonization of the gastrointestinal tract, translocation of the pathogen to the systemic circulation, and invasion of the central nervous system at the choroid plexus.

Neuropathogenic의 비 침습 모델<em&gt; 대장균</em&gt; 신생아 쥐에 감염

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently host immune responses to microbial and environmental agents. Dinitrobenzene sulfonic acid (DNBS)-induced colitis allows one to study the pathogenesis of IBD associated environmental triggers such as stress and diet, the effects of potential therapies, and the mechanisms underlying intestinal inflammation and mucosal injury. In this paper, we investigated the effects of dietary n-3 and n-6 fatty acids on the colonic mucosal inflammatory response to DNBS-induced colitis in rats. All rats were fed identical diets with the exception of different types of fatty acids [safflower oil (SO), canola oil (CO), or fish oil (FO)] for three&#160;weeks prior to exposure to intrarectal DNBS. Control rats given intrarectal ethanol continued gaining weight over the 5 day study, whereas, DNBS-treated rats fed lipid diets all lost weight with FO and CO fed rats demonstrating significant weight loss by 48&#160;hr and rats fed SO by 72&#160;hr. Weight gain resumed after 72&#160;hr post DNBS, and by 5 days post DNBS, the FO group had a higher body weight than SO or CO groups. Colonic sections collected 5&#160;days post DNBS-treatment showed focal ulceration, crypt destruction, goblet cell depletion, and mucosal infiltration of both acute and chronic inflammatory cells that differed in severity among diet groups. The SO fed group showed the most severe damage followed by the CO, and FO fed groups that showed the mildest degree of tissue injury. Similarly, colonic myeloperoxidase (MPO) activity, a marker of neutrophil activity was significantly higher in SO followed by CO fed rats, with FO fed rats having significantly lower MPO activity. These results demonstrate the use of DNBS-induced colitis, as outlined in this protocol, to determine the impact of diet in the pathogenesis of IBD.

DNBS/TNBS induced colitis offers an alternative and inexpensive method to study the pathobiology of inflammatory bowel disease. The protocol discussed in this paper outlines the successful application of DNBS to induce colitis in mice and rats and allows one to thoroughly study host-mediated intestinal responses.

DNBS / TNBS 대장염 모델 : 염증성 장 질환에 대한 통찰력과식이 지방의 효과를 제공

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

의학

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages and disadvantages. We describe here an experimental colitis model that is initiated by adoptive transfer of syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipient mice. The CD4+CD45RBhigh T cell population that largely consists of na&#239;ve effector cells is capable of inducing chronic intestinal inflammation, closely resembling key aspects of human IBD. This method can be manipulated to study aspects of disease onset and progression. Additionally it can be used to study the function of innate, adaptive, and regulatory immune cell populations, and the role of environmental exposures, i.e., the microbiota, in intestinal inflammation. In this article we illustrate the methodology for inducing colitis with a step-by-step protocol. This includes a video demonstration of key technical aspects required to successfully develop this murine model of experimental colitis for research purposes.

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.

이펙터 CD4의 입양 전송하여 쥐과 장내 염증의 유도<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; 높은</sup&gt; 면역 결핍 마우스에게 T 세포

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

The bacterial infected mouse model is a powerful model system for studying areas such as infection, inflammation, immunology, signal transduction, and tumorigenesis. Many researchers have taken advantage of the colitis induced by Salmonella typhimurium for the studies on the early phase of inflammation and infection. However, only few reports are on the chronic infection in vivo. Mice with Salmonella persistent existence in the gastrointestinal tract allow us to explore the long-term host-bacterial interaction, signal transduction, and tumorigenesis. We have established a chronic bacterial infected mouse model with Salmonella typhimurium colonization in the mouse intestine over 6 months. To use this system, it is necessary for the researcher to learn how to prepare the bacterial culture and gavage the animals. We detail a methodology for prepare bacterial culture and gavage mice. We also show how to detect the Salmonella persistence in the gastrointestinal tract. Overall, this protocol will aid researchers using the bacterial infected mouse model to address fundamentally important biological and microbiological questions.

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

Establish a chronic bacterial infected mouse model with persistent Salmonella typhimurium colonization in intestine for 27 weeks.

만성의 살모넬라균 감염된 마우스 모델

The bacterial infected mouse model is a powerful model system for studying areas such as infection, inflammation, immunology, signal transduction, and ...

생물학

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and consequently poses an urgent threat to public health. Recurrence of a C. difficile infection (CDI) after successful treatment with antibiotics is high, occurring in 20-30% of patients, thus necessitating the discovery of novel therapeutics against this pathogen. Current animal models of CDI result in high mortality rates and thus do not approximate the chronic, insidious disease manifestations seen in humans with CDI. To evaluate therapeutics against C. difficile, a mouse model approximating human disease utilizing a clinically-relevant strain is needed. This protocol outlines the cefoperazone mouse model of CDI using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Techniques for clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol. Compared to other mouse models of CDI, this model is not uniformly lethal at the dose administered, allowing for the observation of a prolonged clinical course of infection concordant with the human disease. Therefore, this cefoperazone mouse model of CDI proves a valuable experimental platform to assess the effects of novel therapeutics on the amelioration of clinical disease and on the restoration of colonization resistance against C. difficile.

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

This protocol outlines the cefoperazone mouse model of Clostridium difficile infection (CDI) using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Emphasis on clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol.

의 Cefoperazone 처리 된 마우스 모델 임상 관련<em&gt; 클로스 트리 디움 디피</em&gt; 스트레인 R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. Females are disproportionately afflicted by UTI: 50% of all women will have a UTI in their lifetime. Additionally, 20-40% of these women who have an initial UTI will suffer a recurrence with some suffering frequent recurrences with serious deterioration in the quality of life, pain and discomfort, disruption of daily activities, increased healthcare costs, and few treatment options other than long-term antibiotic prophylaxis. Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) is the primary causative agent of community acquired UTI. Catheter-associated UTI (CAUTI) is the most common hospital acquired infection accounting for a million occurrences in the US annually and dramatic healthcare costs. While UPEC is also the primary cause of CAUTI, other causative agents are of increased significance including Enterococcus faecalis. Here we utilize two well-established mouse models that recapitulate many of the clinical characteristics of these human diseases. For UTI, a C3H/HeN model recapitulates many of the features of UPEC virulence observed in humans including host responses, IBC formation and filamentation. For CAUTI, a model using C57BL/6 mice, which retain catheter bladder implants, has been shown to be susceptible to E. faecalis bladder infection. These representative models are being used to gain striking new insights into the pathogenesis of UTI disease, which is leading to the development of novel therapeutics and management or prevention strategies.

The ability to model urinary tract infections (UTI) is crucial in order to be able to understand bacterial pathogenesis and spawn the development of novel therapeutics. This work&#8217;s goal is to demonstrate mouse models of experimental UTI and catheter associated UTI that recapitulate and predict findings seen in humans.

마우스 모델의 설립 및 요로 감염 및 CAUTI의 특성

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

Murine 원심 인공, C57BL/6 마우스에 전환 Colitis의 새로운 모델

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

A TNBS-Induced Rodent Model to Study the Pathogenic Role of Mechanical Stress in Crohn's Disease

Inflammatory bowel diseases (IBD) such as Crohn&#39;s disease (CD) are chronic inflammatory disorders of the gastrointestinal tract affecting approximately 20 per 1,000,000 in Europe and USA. CD is characterized by transmural inflammation, intestinal fibrosis, and luminal stenosis. Although anti-inflammatory therapies may help control inflammation, they have no efficacy on fibrosis and stenosis in CD. The pathogenesis of CD is not well understood. Current studies focus mainly on delineating dysregulated gut immune response mechanisms. While CD-associated transmural inflammation, intestinal fibrosis, and luminal stenosis all represent mechanical stress to the gut wall, the role of mechanical stress in CD is not well defined. To determine if mechanical stress plays an independent pathogenic role in CD, a protocol of TNBS-induced CD-like colitis model in rodents has been developed. This TNBS-induced transmural inflammation and fibrosis model resembles pathological hallmarks of CD in the colon. It is induced by intracolonic instillation of TNBS into the distal colon of adult Sprague-Dawley rats. In this model, transmural inflammation leads to stenosis at the TNBS instillation site (Site I). Mechanical distention is observed in the portion proximal to the instillation site (Site P), representing mechanical stress but not visible inflammation. Colonic portion distal to inflammation (Site D) presents neither inflammation nor mechanical stress. Distinctive changes of gene expression, immune response, fibrosis, and smooth muscle growth at different sites (P, I, and D) were observed, highlighting a profound impact of mechanical stress. Therefore, this model of CD-like colitis will help us better understand CD&#39;s pathogenic mechanisms, particularly the role of mechanical stress and mechanical stress-induced gene expression in immune dysregulation, intestinal fibrosis, and tissue remodeling in CD.

The present protocol describes the development of a Crohn's-like colitis model in rodents. Transmural inflammation leads to stenosis at the TNBS instillation site, and mechanical enlargement is observed in the segment proximal to the stenosis. These changes allow studying mechanical stress in colitis.

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의 4D 좌석 Multimodality 이미징

로컬 및 전신 사이트에서 병원체에 의한 만성 염증을위한 마우스 모델

Neuropathogenic의 비 침습 모델

DNBS / TNBS 대장염 모델 : 염증성 장 질환에 대한 통찰력과식이 지방의 효과를 제공

이펙터 CD4의 입양 전송하여 쥐과 장내 염증의 유도

만성의 살모넬라균 감염된 마우스 모델

의 Cefoperazone 처리 된 마우스 모델 임상 관련

마우스 모델의 설립 및 요로 감염 및 CAUTI의 특성

Murine 원심 인공, C57BL/6 마우스에 전환 Colitis의 새로운 모델

크론병에서 기계적 스트레스의 병원성 역할을 연구하는 TNBS 유도 설치류 모델