Bu çalışma Crohn ve Kanada Kolit Vakfı (CCFC) ve Sağlık Araştırması (CIHR) için Kanada Enstitüleri BAK için işletim bağışları ile desteklenmiştir. GB CIHR mezun öğrencilikle tarafından finanse edildi. BAV Bağırsak ve Karaciğer Hastalıkları (ÇOCUK) Pediatrik Gastroenteroloji Pediatrik İBH Araştırma ve Kanada Araştırma Başkanı Vakfı Başkanı olan çocuklar olduğunu.

1. Citrobacter rodentium İnokulum ve Fare Oral Gavaj hazırlanması <ol><li> Hazırlayın ve Luria Bertani broth (LB) otoklavlamayın. </li><li> Canlı C. edinin Steril bir inokülasyon döngü veya pipet kullanarak LB agar plaka üzerine donmuş bir gliserol stok ve çizgi gelen rodentium. 37 ° C de bir gece inkübe edin. Bir inokülasyon döngü veya pipet kullanarak LB plaka kolonileri ile bir şahinin kültürü tüp içinde steril LB broth 3 ml inoküle edin. Inokulum hazırlanması aseptik teknikler kullanılarak yapılması gerekir. </li><li> C. inkübe rodentium kültürü aerobik 37 ° C&#39;de 200 rpm&#39;de bir benchtop inkübasyon çalkalayıcı geceleme. Inoküle LB broth gecede kültürü sonra bulanık görünmelidir. </li><li> Bir ampul kullanın gecede C. 100 ul her fare gavaj için 1 ml şırınga bağlı gastrik gavaj iğne uçlu rodentium kültürü. Sıkıca boyun ve sırt üzerinde gevşek deri tutarak hafifçe ense fare,başparmak ve parmaklar ile. Kafasını hareketsiz ve gavaj iğne yerleştirilmesi için özofagus düzeltmek için parmağı ile hayvanın başını geriye doğru çekin. </li><li> Dik konumda fare koruyun ve onun ağız kenarı boyunca ve onun dil üzerinde gavaj iğne ampul ucu yönlendirin. Yavaşça ağız çatı boyunca iğne geçmek ve yemek borusu aşağı ilerlemek. Bu işlem sırasında hissettim bir direnç varsa, gavaj iğneyi çıkarın ve yeniden takın. </li><li> Yavaşça bakteriyel inokulum 100 ul ekleme ve yavaşça gavaj iğneyi çıkarın. Onun kafes onu döndükten sonra fare solunum hızı ve davranış izleyin. </li></ol> Notlar: <ul><li> Adım 2 ve 3&#39;te, et suyu kendisi hiçbir bakteri kirlenmesi olmasını sağlamak için gece boyunca kültive edilmesi için steril LB et suyu, 3 ml ile aseptik teknikler kullanılarak bir doğan kültür tüp hazırlanır. LB broth gecede kültürü sonrası net görünmelidir. </li><li&gt; yavaşça bakteri eşit dozda 4. adımda, her bir fare teslim edilir, böylece gavaj için şırınga yüklemeden önce şahin tüp içindeki kültür ajitasyon. </li><li> Eğer 24 saat aşkın inoküle edilmiş ise gecede kültürü atılmalıdır. </li><li> Tüm C. Enfekte hayvanların rodentium enfeksiyonları ve konut Biyogüvenlik Seviyesi 2 tesisinde yapılmalıdır. </li></ul> 2. C. Kolon Epitel Bariyeri Geçirgenliği Ölçüm rodentium-enfekte Fare <ol><li> İstediğiniz zaman noktası sonrası enfeksiyon az bariyer bütünlüğünü ölçün. </li><li> Tahlil gününde, 4 kDa fluorescein isothiocyanate (FITC)-dekstran 150 ul her bir fare için gavaj ve standart eğri hazırlamak için 80 mg ml-1 arasında bir konsantrasyonda salin (PBS) ile fosfat tamponlu içinde çözüldü yeterli hazırlayın. </li><li> FITC-dekstran 150 ul Scruff fare ve gavaj. Bu sefer kafes gıda çekin. </li><li> Sonra farelerde 4 saat uyuşturgavaging ve kardiyak ponksiyon yoluyla mümkün olduğunca çok kan (~ 450 ul) olarak toplamak. Pıhtılaşma engellemek için bir mikrosantrifüj tüpü içinde% 3-asit sitrat dekstroz bir son konsantrasyon için kan ekleyin. Fareler Euthanize ve bakteri sayımı (adımları 3,1-3,5) için PBS içinde kolon doku toplamak ve doku fiksasyonu formalin ve sonuçta immünfloresan boyama% 10 (adımlarla 4,1-4,8) olarak. </li><li> 4 ° C&#39;de santrifüj içinde 12 dakika için 1000 x g&#39;da kan örnekleri Spin Serum toplayın ve PBS içinde 1/10 ve 1/100 seyreltilmiş. Çoğaltır içinde bir 96 plakası, bu iki dilüsyonlarda her bir numunenin 100 ul ekle. </li><li> Standart eğri hazırlamak için, ilk 80 mg ml-1 FITC-dekstran aşağıdaki konsantrasyonları için PBS içinde farelere gavajla için kullanılan seyreltik: 800, 400, 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, ve 0 ug / ml . Üç kopya halinde 96 oyuklu bir plaka için her konsantrasyon 100 ul ekle. </li><li> Bir uyarım wav bir flüorometre kullanılarak her bir numunenin floresans sayısal485 nm ve 535 nm emisyon dalga elength. </li><li> Standart eğri çizerek ham verileri analiz edin. Girdi her bir numune içinde FITC-dekstran konsantrasyonunun tespit edilmesi için standart eğri tarafından üretilen denkleminin her bir numune için ham veriler. </li></ol> Notlar: <ul><li> 4. adımda itibaren, buz üzerinde kan örnekleri tutmak ve ışığa maruz kalma en aza indirmek. </li><li> Şiddetli doku hasarına Bu noktadan sonra oluşacak bir zaman noktasında, ya da daha önce epitel bariyeri bütünlüğünün ölçerken, 7 gün sonrası enfeksiyon, en uygunudur. Ağır hasar oluşma önce bariyeri bütünlüğünün ölçülmesi C. sırasında geçirgenliği maksimal farklılıkları belirlemek için izin verir fare suşları arasındaki rodentium enfeksiyonu. </li><li> Bulaşmamış kontrol fareler ayrıca epitel bariyeri bütünlüğünün test emin olun. </li></ul> 3. C. Doku Bakteriyel Yük Ölçümü rodentium-enfekte Fare <ol><li> 1 ml steril PBS bir eklend yuvarlak boncuk bir otoklavlanmış metal aseptik teknik kullanılarak 2 ml santrifüj tüpüne netleşti. Her hayvan için toplanan bireysel dokuları ayrı PBS tüpler yerleştirilir. Doku ilave edilmeden önce, tüpleri tartılır. </li><li> Fare çekum ve kolon çıkarın. Kolon çekum ayırın ve forseps kullanarak lümen içeriğinin dışarı itin. PBS tüp içeriğini ekleyin. % 10 formalin fiksasyonu için distal kolon ve çekum 0.5 cm bölümleri ayırdıktan sonra, uzunlamasına kalan kolon ve çekum kesip ve tüplerde doku yerleştirmeden önce steril PBS ile yıkayın. </li><li> Doku ile PBS tüpleri tartılır ve daha sonra 30 Hz, 6 dakika boyunca damla çırpıcı kullanılarak örnekleri homojen hale getirilir. </li><li> Aseptik teknikler kullanarak, bir 96 plaka kuyu başına 180 ul steril PBS ekleyin. Her satırda ilk kuyuda her homojenize örnek 20 ul ekleyin. İyice karıştırın ve seri (ilk biz 10 -1 seyreltmeler elde etmek için de her önceki 20 ul ekleyerek, seyreltik10 -6) ll. Bir kılavuz ile kare alt LB plaka üzerinde üç nüsha halinde her örnekten her seyreltme Levha 10 ul. 37 gece inkübe ° C </li><li> Sonra ortalama koloni oluşturan birim (CFU), 3 sayıları sayın ve her örnek sayıldı hangi seyreltme kaydedin. Orijinal 1 ml numune 20 ul kullanıldığı gibi, 50 tarafından ortalama CFU çarpın, ve numune CFU / ml elde sayılır edildiği seyreltme faktörüyle. Son olarak, CFU / g belirlemek için doku ağırlığı ile bölün. </li></ol> 4. Histolojik Değerlendirilmesi ve Enfekte Kolon Dokularında immünofloresan Boyama <ol><li> Adım 3.2 olarak dokuların toplayın. Formalin gecede Mağaza dokular, daha sonra% 70 etanol ile yıkayın. Parafin doku gömme ve boyanması için 5 mikron bölümleri kesmek. Histolojik değerlendirme için hematoksilen ve eozin ile Leke ve immünofloresan boyama için aşağıdaki adımlara devam edin. </li><li> Boyamadan önce dokuların deparaffinize için, yerde slaytlar65 10 dakika süreyle ° C su banyosunda bir Coplin boyama kavanoz ve koydu. Daha sonra, 2 dakika, her biri dört yıkama için ksilen içinde yer kayar. % 95 etanol,% 75 etanol ve dH 2: 0 Slaytlar bir 5 dakika sonra, aşağıdaki her yıkama, ardından% 100 etanol içinde iki adet 5 dakikalık bir yıkama, ile sulandırılır olmalıdır. Bu yıkama zararlı buharlar maruz kalmaktan kaçınmak için, bir davlumbaz yapılmalıdır. </li><li> 30 dakika için bir gemi içine önceden ısıtılmış sodyum sitrat tampon ve ardından yer Coplin kavanoza koyun slaytlar, sonra 30 dakika bekletin. Bu süreç protein potansiyel antijenik siteleri almak formalin fiksasyonu oluşturduğu çapraz bağlantıları keser. </li><li> 5 dk, üç kez PBS azid ile yıkayın. Kuru slaytlar ve doku üzerinde lokalize boyama reaktifleri tutarak, bir hidrofobik bariyer oluşturmak için bir PAP kalem ile doku çevresindeki işareti alan. </li><li> Bir immüno nem odasında bloke etme tamponu ile oda sıcaklığında 1 saat (örneğin, α-keçi serumu) için Blok doku. </li><li> Prim seyreltinary antikor istenilen konsantrasyona antikor seyreltme tamponu kullanılarak. Tampon engelleme kapalı dökün ve dokulara primer antikor 50-100 ul ekleyin. 4 2 saat boyunca ° C gecede ya da oda sıcaklığında inkübe edin. </li><li> 5 dk, üç kez PBS azid ile yıkayın. Karanlıkta 1 saat oda sıcaklığında inkübe doku ve antikor seyreltme tamponu içinde seyreltilmiş sekonder antikor, 50-100 ul ekle. 5 dk, üç kez dH 2 O ile yıkayın. </li><li> DAPI Altın montaj orta Prolong ve lamel uygulamak eklemek, slaytları kurutmak. Bir floresan mikroskop altında slaytlar görüntüle. </li></ol> Notlar: <ul><li> PBS azid adım 4 itibaren, yıkama ortamı içinde bakteri büyümesini önlemek için bir alternatif olarak, taze hazırlanmış PBS ile ikame edilebilir. </li></ul>

<ol>
	<li>Nell, S., Seurbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD:+lessons+from+mouse+infection+models.">The impact of microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8, 564-577 (2010).</li><li>Cario, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+Receptors+in+Inflammatory+Bowel+Diseases:+A+Decade+Later.">Toll-like Receptors in Inflammatory Bowel Diseases: A Decade Later.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 16 (9), 1583-1597 (2010).</li><li>Eckmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Inflammatory+Bowel+Disease.">Animal Models of Inflammatory Bowel Disease.</a> Annals New York Academy of Sciences. , 1027-38 (2006).</li><li>Mundy, R., MacDonald, T. T., Dougan, G., Frankel, G., Wiles, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrobacter+rodentium+of+mice+and+man.">Citrobacter rodentium of mice and man.</a> Cellular Microbiology. 7, 1697-1706 (2005).</li><li>Luperchio, S., Schauer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+of+Citrobacter+rodentium+and+transmissible+murine+colonic+hyperplasia.">Molecular pathogenesis of Citrobacter rodentium and transmissible murine colonic hyperplasia.</a> Microbes and Infection. 3 (4), 333-340 (2001).</li><li>Bergstrom, K. S., Sham, H. P., Zarepour, M., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+host+responses+to+enteric+bacterial+pathogens:+a+balancing+act+between+resistance+and+tolerance.">Innate host responses to enteric bacterial pathogens: a balancing act between resistance and tolerance.</a> Cellular Microbiology. 14, 475-484 (2012).</li><li>MacDonald, T. T., Frankel, G., Dougan, G., Goncalves, N. S., Simmons, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+defences+to+Citrobacter+rodentium.">Host defences to Citrobacter rodentium.</a> International Journal of Medical Microbiology. 293, 87-93 (2003).</li><li>Borenshtein, D., McBee, M. E., Schauer, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+the+Citrobacter+rodentium+infection+model+in+laboratory+mice.">Utility of the Citrobacter rodentium infection model in laboratory mice.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 24, 32-37 (2008).</li><li>Gibson, D. L., Ma, C., Rosenberger, C. M., Bergstrom, K. S. B., Valdez, Y., Huang, J. T., Khan, M. A., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+2+plays+a+critical+role+in+maintaining+mucosal+integrity+during+Citrobacter+rodentium-induced+colitis.">Toll-like receptor 2 plays a critical role in maintaining mucosal integrity during Citrobacter rodentium-induced colitis.</a> Cellular Microbiology. 10, 388-403 (2008).</li><li>Dennis, A., Kudo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p50+subunit+of+NF-&#954;B+is+critical+for+in+vivo+clearance+of+the+non-invasive+enteric+pathogen+Citrobacter+rodentium.">The p50 subunit of NF-&#954;B is critical for in vivo clearance of the non-invasive enteric pathogen Citrobacter rodentium.</a> Infection &amp; Immunity. 76 (11), 4978-4988 (2008).</li><li>Gibson, D. L., Ma, C., Bergstrom, K. S. B., Huang, J. T., Man, C., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MyD88+signalling+plays+a+critical+role+in+host+defence+by+controlling+pathogen+burden+and+promoting+epithelial+cell+homeostasis+during+Citrobacter+rodentium-induced+colitis.">MyD88 signalling plays a critical role in host defence by controlling pathogen burden and promoting epithelial cell homeostasis during Citrobacter rodentium-induced colitis.</a> Cellular Microbiology. 10 (3), 618-631 (2008).</li><li>Lebeis, S. L., Bommarius, B., Parkos, C. A., Sherman, M. A., Kalman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TLR+signaling+mediated+by+MyD88+is+required+for+a+protective+innate+immune+response+by+neutrophils+to+Citrobacter+rodentium.">TLR signaling mediated by MyD88 is required for a protective innate immune response by neutrophils to Citrobacter rodentium.</a> Journal of Immunology. 179 (1), 566-577 (2007).</li><li>Bry, L., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+T+cell+dependent+serum+antibody,+but+not+the+gut-associated+lymphoid+tissue,+for+surviving+acute+mucosal+infection+with+Citrobacter+rodentium,+an+attaching+and+effacing+pathogen.">Critical role of T cell dependent serum antibody, but not the gut-associated lymphoid tissue, for surviving acute mucosal infection with Citrobacter rodentium, an attaching and effacing pathogen.</a> Journal of Immunology. 172 (1), 433-441 (2004).</li><li>Simmons, C. P., Clare, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+for+B+lymphocytes+and+CD4++T+cells+in+immunity+to+infection+by+the+attaching+and+effacing+pathogen+Citrobacter+rodentium.">Central role for B lymphocytes and CD4+ T cells in immunity to infection by the attaching and effacing pathogen Citrobacter rodentium.</a> Infection &amp; Immunity. 71 (9), 5077-5086 (2003).</li><li>Ahmed, I., Chandrakesan, P., Tawfik, O., Xia, L., Anant, S., Umar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+Roles+of+Notch+and+Wnt/&#946;-Catenin+Pathways+in+the+Regulation+of+Hyperplasia+and/or+Colitis+in+Response+to+Bacterial+Infection.">Critical Roles of Notch and Wnt/&#946;-Catenin Pathways in the Regulation of Hyperplasia and/or Colitis in Response to Bacterial Infection.</a> Infection &amp; Immunity. 80 (9), 3107-3121 (2012).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Citrobacter rodentium enfeksiyon hastalığı ve farelerde kolit hem de çalışma için değerli bir model sağlamaktadır. Bu özgün model hem konakçı tepkileri, bakteriler gibi patojenik özellikleri karakterizasyonu için olanak sağlar. Adımlar bu protokolü detaylı olarak bu modelin başarılı kullanımı sıraladı. Kolit ve yanıtları analiz ederken akılda tutulması gereken bu protokolü birkaç önemli adım vardır. İlk olarak, bir gece boyunca taze C ha...

Enterik bakteriyel patojenler tarafından Enfeksiyon gastrointestinal (Gİ) iltihabı yanı sıra, ishal ve intestinal epitel bariyeri disfonksiyonu dahil intestinal patoloji ve patofizyolojisi, tetikler. Bakteriyel patojenler kendi hosts, yanı sıra enfeksiyonlara karşı savunmak belirli bir host yanıtların gastrointestinal kolonize hangi virülans mekanizmalar yeterince anlaşılmamaktadır, enterik bakteriyel enfeksiyonların modellemede Ancak son gelişmeler bu süreçleri anlamamıza yardım etmeye başlamışlardır. Enterik bakteriler de İnflamatuvar Bağırsak Hastalıkları (İnlamatuar bağırsak) ile bağlantılı olmuştur. İnlamatuar bağırsak Crohn Hastalığı (CD) ve UC kronik intestinal inflamasyon ve doku hasarı ile karakterize etyolojisi bilinmeyen karmaşık hastalıklar vardır. Böyle dekstran sodyum sülfat (DSS) ve d gibi bileşikler, kimyasal sorunlara, fareler - / - bağırsak iltihabı birçok fare modelleri, IL10 gibi genetiği değiştirilmiş suşları, spontan inflamasyon, mevcutinitrobenzene sülfonik asit (DNBS) 1. Bu İBH hastalarında mevcut uyumsuz kronik enflamatuvar yanıtları enterik bakteriler intestinal mukozal bağışıklık sisteminin anormal pozlama 2, bu nedenle bulaşıcı kolit modelleri çalışma aynı zamanda potansiyel patojen konak tanımlanması için önemli bir potansiyel sunmaktadır üzerine genetik olarak yatkın kişilerde gelişir olduğu öne sürülmüştür . enterik bakteriler yanıtları Citrobacter rodentium indüklenen kolit enterik bakteriler ve İBH patogenezinde olası mekanizmaların daha iyi anlaşılması için ev sahibi yanıtların analizi için izin de 1,3 karakterize edilmiştir infeksiyöz kolit ender modellerden biridir; önemli bir adım yeni önleyici ve iyileştirici tedavileri geliştirmek. C. rodentium yakından önemli insan ile ilgili bir (A / D) gram takılarak negatif ve effacing, murin spesifik bakteriyel patojenpatojenler enteropatojenik E. coli (EPEC) ve enterohemorajik E. coli (EHEC) 3-8. A / E patojenlerin ailesi yakından konak hücre üzerinde bir non-invaziv kaide-benzeri bir yapı oluşturan, çekal ve kolonik epitelin apikal konak hücre zarının eklemek. C. ile Oral meydan 10 8 -10 9 organizmaların rodentium kript, mononükleer immün hücre infiltrasyonu ve goblet hücre tükenmesi 3,4 kolon hiperplazi veya uzaması ile karakterize enfeksiyöz kolit sağlam bir model üretir. Kolonizasyon ilk site, birkaç saat uyarımı sonrası, çekal yama az 2 ila 3 gün enfeksiyon sonra 3 distal kolon ilerleme takip etmektedir. Immünkompetan fare suşları olarak, patojen temizlenmesi 3 ila 4 hafta enfeksiyon 1,3,4 sonra elde edilir. Bununla birlikte, birçok genetik olarak değiştirilmiş suşları, örneğin gen eksik veya nakavt (- / -) farelerde önemli ölçüde artar göstermek için tespit edilmiştirabartılı hasar ve / veya kronik enfeksiyon ve inflamasyon 9-14 sonuçlanan enfeksiyona yatkınlık sed. Bu nakavt suşları bu infeksiyöz kolit modelinde kullanılması, doğuştan gelen sinyal proteinlerin eksik çok, bağırsak enfeksiyonu ve inflamasyonu çözünürlüğü ayrılmaz birkaç ana proteinlerin açığa vazgeçilmez olmuştur.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Malzeme Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Luria Broth </td><td> ABM </td><td> G247 </td><td> 1L su ile LB toz 25 g ekleyin. Kullanmadan önce otoklav. </td></tr><tr><td> Grid Kare alt plaka </td><td> Balıkçı </td><td> 08-757-11A </td><td></td></tr><tr><td> Falcon kültür tüpüne </td><td> Sarstedt </td><td> 62.515.006 </td><td></td></tr><tr><td> Ampul gastrik gavaj iğne uçlu </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 18060-20 </td><td></td></tr><tr><td> 1 ml şırınga </td><td> BD Biosciences </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> 4 kDa FITC-dekstran </td><td> Sigma </td><td> FD-4 </td><td></td></tr><tr><td> Sitrik asit </td><td> Sigma </td><td> C7129 &lt;/ Td&gt; <td></td></tr><tr><td> Sodyum sitrat </td><td> Balıkçı </td><td> S279-500 </td><td></td></tr><tr><td> Üzüm şekeri </td><td> Balıkçı </td><td> D16.1 </td><td></td></tr><tr><td> Asit sitrat dekstroz </td><td></td><td></td><td> 20 mM ctiric asit, 110 mM sodyum sitrat, 5 mM dekstroz </td></tr><tr><td> Siyah 96-kuyulu plakalı </td><td> Balıkçı </td><td> 07-200-762 </td><td></td></tr><tr><td> Metal boncuk (5 mm) </td><td> Qiagen </td><td> 69989 </td><td></td></tr><tr><td> % 10 formalin </td><td> Balıkçı </td><td> 5F93-4 </td><td></td></tr><tr><td> 5 ml şişe </td><td> DiaMed </td><td> STK3205 </td><td></td></tr><tr><td> Hematoksilen </td><td> Balıkçı </td><td> H345-23 </td><td></td></tr><tr><td> Eosin </td><td> Balıkçı </td><td> E511-100 </td><td></td></tr><tr><td> Ksilen </td><td> Balıkçı </td><td&gt; HC700-1GAL </td><td></td></tr><tr><td> Tween 20 </td><td> Sigma </td><td> P5927 </td><td></td></tr><tr><td> Coplin boyama kavanoz </td><td> VWR </td><td> 47751-792 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum sitrat tampon </td><td></td><td></td><td> 10 mM sodyum sitrat,% 0.05 Tween 20, pH 6.0 </td></tr><tr><td> Pap kalem </td><td> Cedarlane </td><td> Mu22 </td><td></td></tr><tr><td> Keçi serumu </td><td> Sigma </td><td> G902-3 </td><td></td></tr><tr><td> Bovine Serum Albumin (BSA) </td><td> Balıkçı </td><td> BP1600-100 </td><td></td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma </td><td> T8532 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum azid </td><td> Sigma </td><td> SZ002 </td><td></td></tr><tr><td> Tampon Engelleme </td><td></td><td></td><td> % 2 keçi serumu,% 1 BSA,% 0.1 Triton X-100,% 0.05 Tween 20,% 0.05 sodyumazid, 0.01 M PBS, pH 7.2, 4 de mix &amp; mağaza ° C </td></tr><tr><td> Antikor seyreltme tamponu </td><td></td><td></td><td> % 0.1 Triton X-100,% 0.1 BSA,% 0.05 sodyum azid,% 0.04 EDTA </td></tr><tr><td> Tir için engelleme tampon ve Antikor seyreltme tamponu </td><td></td><td></td><td> Yukarıda olduğu gibi, fakat deterjan ilave (Triton X-100 ve Tween 20) olmaksızın aynı tarifleri </td></tr><tr><td> DAPI ile Altın antifade Reaktif Prolong </td><td> Invitrogen </td><td> P-36931 </td><td></td></tr><tr><td> Lameller </td><td> Balıkçı </td><td> 12.54SE </td><td></td></tr><tr><td> Tezgahüstü inkübasyon çalkalayıcı </td><td> Barnstead Lab Hattı </td><td> Max Q4000 </td><td></td></tr><tr><td> Fluorometre </td><td> Perkin Elmer </td><td> Victor2D </td><td></td></tr><tr><td> Soğutmalı santrifüj </td><td> Beckman Coulter </td><td> Mikrofuge&#39;de 22R</td><td></td></tr><tr><td> Vapur </td><td> Black &amp; Decker </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Flüoresans mikroskobu </td><td> Zeiss </td><td> Axio Image.Z1 </td><td></td></tr></tbody></table>

the citrobacter rodentium mouse model: studying pathogen and host contributions to infectious colitis

Bu protokol, bulaşıcı hastalığı ve ülseratif sağlam bir model üretmek için gerekli adımları, aynı zamanda farelerdeki Citrobacter rodentium enfeksiyon karakterize etmek için kullanılan yöntemler açıklanmaktadır. C. rodentium yakından klinik olarak önemli insan patojenleri enteropatojenik E. ile ilgili bir gram negatif, murin spesifik bakteriyel patojen coli ve Enterohemorrhagic E. coli. C ile bulaştıktan sonra rodentium, bağışıklık fareler mütevazı ve geçici kilo kaybı ve ishal muzdarip. Histolojik olarak, bağırsak kript uzama, bağışıklık hücre infiltrasyonu ve goblet hücre tükenmesi gözlenmektedir. Enfeksiyon Açıklık 3-4 hafta sonra elde edilir. Enfeksiyonu sonrası farklı zaman noktalarında intestinal epitel bariyeri bütünlüğünün, bakteri yükü ve histolojik hasarın ölçülmesi, enfeksiyona karşı duyarlı fare suşlarının karakterizasyonu izin verir. Virülans mekanizmasıs bakteriyel patojenler onların ana yanı sıra, bu tür enfeksiyonlara karşı savunma özel ana yanıtların bağırsak kolonize olan göre tam olarak anlaşılamamıştır. Bu nedenle, C. enterik bakteriyel enfeksiyon rodentium modeli bu süreçleri anlamamıza yardım etmek için değerli bir araç olarak hizmet vermektedir. Enterik bakteriler de İnflamatuvar Bağırsak Hastalıkları (İnlamatuar bağırsak) ile bağlantılı olmuştur. Bu İBH hastalarında görülen uyumsuz kronik enflamatuvar yanıtları enterik bakteriler intestinal mukozal bağışıklık sisteminin anormal maruz kaldıktan sonra genetik olarak yatkın kişilerde gelişir olduğu öne sürülmektedir. Bu nedenle, enfeksiyöz kolit modelleri çalışmada enterik bakterilerin potansiyel patojen konakçı tepkileri tanımlamak için önemli bir potansiyel sunmaktadır. C. rodentium indüklenen kolit İBH patogenezinde potansiyel mekanizmaları hakkındaki bilgilerimizi geliştirerek, enterik bakterilerin konak yanıtların analizi için olanak sağlayan bir tür nadir bir modeldir;yeni önleyici ve terapötik tedavilerinin geliştirilmesi önemlidir.

Standart bir enfeksiyon deneme sırasında, fareler 100 ul gecede C. gavaj yoluyla yaklaşık 2,5 x 10 8 CFU ile enfekte rodentium kültürü. C olan C57BL / 6 fareler enfeksiyonu mütevazı ve geçici kilo kaybı ve ishal rodentium sonuçlar. C57BL / 6 fareler ile nadir bir olay, hayvanlar hasta olur ve euthanization gerektirebilir rağmen. Bu nedenle, farelerin farklı suşlar enfeksiyon etkilenen ölçüde belirlemek için, kilo kaybı ve böyle piloerect kürk ve kambur...

Watch this Scientific Journal Video about The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis at JoVE.com

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Citrobacter rodentium enfeksiyonu enterik bakteriyel enfeksiyonlar çalışma yanı sıra farelerde bağışıklık yanıtları ve kolit barındırmak için değerli bir model sunar. Bu protokol bariyer bütünlüğünü, patojen yük ve murin infeksiyöz kolit patojen ve konak katkıların tam karakterizasyonu izin histolojik hasar ölçümü özetliyor.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Model: Bulaşıcı Kolit için çalışılması Patojen ve Host Katılımlar

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

the-citrobacter-rodentium-mouse-model-studying-pathogen-host

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

26.3K Görüntüleme.  BC Children's Hospital. Citrobacter rodentium enfeksiyonu enterik bakteriyel enfeksiyonlar çalışma yanı sıra farelerde bağışıklık yanıtları ve kolit barındırmak için değerli bir model sunar. Bu protokol bariyer bütünlüğünü, patojen yük ve murin infeksiyöz kolit patojen ve konak katkıların tam karakterizasyonu izin histolojik hasar ölçümü özetliyor.

Video: The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and temporal control between the phagocytic cell and microbe has rendered focused observations into the initial interactions of host response to pathogens difficult. Historically, intercellular contact events such as phagocytosis3 have been imaged by mixing two cell types, and then continuously scanning the field-of-view to find serendipitous intercellular contacts at the appropriate stage of interaction. The stochastic nature of these events renders this process tedious, and it is difficult to observe early or fleeting events in cell-cell contact by this approach. This method requires finding cell pairs that are on the verge of contact, and observing them until they consummate their contact, or do not. To address these limitations, we use optical trapping as a non-invasive, non-destructive, but fast and effective method to position cells in culture.
Optical traps, or optical tweezers, are increasingly utilized in biological research to capture and physically manipulate cells and other micron-sized particles in three dimensions4. Radiation pressure was first observed and applied to optical tweezer systems in 19705, 6, and was first used to control biological specimens in 19877. Since then, optical tweezers have matured into a technology to probe a variety of biological phenomena8-13.
We describe a method14 that advances live cell imaging by integrating an optical trap with spinning disk confocal microscopy with temperature and humidity control to provide exquisite spatial and temporal control of pathogenic organisms in a physiological environment to facilitate interactions with host cells, as determined by the operator. Live, pathogenic organisms like Candida albicans and Aspergillus fumigatus, which can cause potentially lethal, invasive infections in immunocompromised individuals15, 16 (e.g. AIDS, chemotherapy, and organ transplantation patients), were optically trapped using non-destructive laser intensities and moved adjacent to macrophages, which can phagocytose the pathogen. High resolution, transmitted light and fluorescence-based movies established the ability to observe early events of phagocytosis in living cells. To demonstrate the broad applicability in immunology, primary T-cells were also trapped and manipulated to form synapses with anti-CD3 coated microspheres in vivo, and time-lapse imaging of synapse formation was also obtained. By providing a method to exert fine spatial control of live pathogens with respect to immune cells, cellular interactions can be captured by fluorescence microscopy with minimal perturbation to cells and can yield powerful insight into early responses of innate and adaptive immunity.

A method is described to individually select, manipulate, and image live pathogens using an optical trap coupled to a spinning disk microscope. The optical trap provides spatial and temporal control of organisms and places them adjacent to host cells. Fluorescence microscopy captures dynamic intercellular interactions with minimal perturbation to cells.

Dinamik Canlı Hücre Görüntüleme Konukçu-Patojen Etkileşimleri Çalışma Optik Tuzak

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

Nontypeable Haemophilus influenzae (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory mucosa 1; 2. To study the mechanisms by which these organisms survive on and inside respiratory tissues, a model in which successful long-term co-culture of bacteria and human cells can be performed is required. We use primary human respiratory epithelial tissues raised to the air-liquid interface, the EpiAirway model (MatTek, Ashland, MA). These are non-immortalized, well-differentiated, 3-dimensional tissues that contain tight junctions, ciliated and nonciliated cells, goblet cells that produce mucin, and retain the ability to produce cytokines in response to infection. 
This biologically relevant in vitro model of the human upper airway can be used in a number of ways; the overall goal of this method is to perform long-term co-culture of EpiAirway tissues with NTHi and quantitate cell-associated and internalized bacteria over time. As well, mucin production and the cytokine profile of the infected co-cultures can be determined. This approach improves upon existing methods in that many current protocols use submerged monolayer or Transwell cultures of human cells, which are not capable of supporting bacterial infections over extended periods3. For example, if an organism can replicate in the overlying media, this can result in unacceptable levels of cytotoxicity and loss of host cells, arresting the experiment. The EpiAirway model allows characterization of long-term host-pathogen interactions. Further, since the source for the EpiAirway is normal human tracheo-bronchial cells rather than an immortalized line, each is an excellent representation of actual human upper respiratory tract tissue, both in structure and in function4.
For this method, the EpiAirway tissues are weaned off of anti-microbial and anti-fungal compounds for 2 days prior to delivery, and all procedures are performed under antibiotic-free conditions. This necessitates special considerations, since both bacteria and primary human tissues are used in the same biosafety cabinet, and are co-cultured for extended periods.

This method allows characterization of extended bacterial co-culture with EpiAirways, primary human respiratory epithelial tissue grown at the air-liquid interface, a biologically relevant in vitro model. The approach can be used with any microbe that is amenable to long-term co-culture.

Uzun vadeli Host-patojen Etkileşimleri karakterize EpiAirway Model kullanın.

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

A Comparative Approach to Characterize the Landscape of Host-Pathogen Protein-Protein Interactions

Significant efforts were gathered to generate large-scale comprehensive protein-protein interaction network maps. This is instrumental to understand the pathogen-host relationships and was essentially performed by genetic screenings in yeast two-hybrid systems. The recent improvement of protein-protein interaction detection by a Gaussia luciferase-based fragment complementation assay now offers the opportunity to develop integrative comparative interactomic approaches necessary to rigorously compare interaction profiles of proteins from different pathogen strain variants against a common set of cellular factors.
This paper specifically focuses on the utility of combining two orthogonal methods to generate protein-protein interaction datasets: yeast two-hybrid (Y2H) and a new assay, high-throughput Gaussia princeps protein complementation assay (HT-GPCA) performed in mammalian cells.
A large-scale identification of cellular partners of a pathogen protein is performed by mating-based yeast two-hybrid screenings of cDNA libraries using multiple pathogen strain variants. A subset of interacting partners selected on a high-confidence statistical scoring is further validated in mammalian cells for pair-wise interactions with the whole set of pathogen variants proteins using HT-GPCA. This combination of two complementary methods improves the robustness of the interaction dataset, and allows the performance of a stringent comparative interaction analysis. Such comparative interactomics constitute a reliable and powerful strategy to decipher any pathogen-host interplays.

This article focuses on the identification of high-confident interaction datasets between host and pathogen proteins using a combination of two orthogonal methods: yeast two-hybrid followed by a high-throughput interaction assay in mammalian cells called HT-GPCA.

Ana-Patojen protein-protein etkileşimleri ve Peyzaj karakterize etmek Karşılaştırmalı Bir Yaklaşım

Significant efforts were gathered to generate  large-scale comprehensive protein-protein interaction network maps. This is  instrumental to understand the ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

This protocol outlines the steps required to longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging tomography with integrated &mu;CT (DLIT-&mu;CT) and the subsequent use of this data to generate a four dimensional (4D) movie of the infection cycle. To develop the 4D infection movies and to validate the DLIT-&mu;CT imaging for bacterial infection studies using an IVIS Spectrum CT, we used infection with bioluminescent C. rodentium, which causes self-limiting colitis in mice. In this protocol, we outline the infection of mice with bioluminescent C. rodentium and non-invasive monitoring of colonization by daily DLIT-&mu;CT imaging and bacterial enumeration from feces for 8 days.
The use of the IVIS Spectrum CT facilitates seamless co-registration of optical and &mu;CT scans using a single imaging platform. The low dose &mu;CT modality enables the imaging of mice at multiple time points during infection, providing detailed anatomical localization of bioluminescent bacterial foci in 3D without causing artifacts from the cumulative radiation. Importantly, the 4D movies of infected mice provide a powerful analytical tool to monitor bacterial colonization dynamics in vivo.

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

Multi-modality imaging is a valuable approach for studying bacterial colonization in small animal models. This protocol outlines infection of mice with bioluminescent Citrobacter rodentium and the longitudinal monitoring of bacterial colonization using composite 3D diffuse light imaging tomography with &mu;CT imaging to create a 4D movie of C. rodentium infection.

4D modelli Görüntüleme<em&gt; Citrobacter rodentium</emFarelerde&gt; Enfeksiyonlar

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, it is therefore important to have a quick and reliable way of measuring transcriptional activity in infected cells. Traditionally, transcription has been measured either by incorporation of radioactive nucleosides such as 3H-uridine followed by detection via autoradiography or scintillation counting, or incorporation of halogenated uridine analogs such as 5-bromouridine (BrU) followed by detection via immunostaining. The use of radioactive isotopes, however, requires specialized equipment and is not feasible in a number of laboratory settings, while the detection of BrU can be cumbersome and may suffer from low sensitivity.
The recently developed click chemistry, which involves a copper-catalyzed triazole formation from an azide and an alkyne, now provides a rapid and highly sensitive alternative to these two methods. Click chemistry is a two step process in which nascent RNA is first labeled by incorporation of the uridine analog 5-ethynyluridine (EU), followed by detection of the label with a fluorescent azide. These azides are available as several different fluorophores, allowing for a wide range of options for visualization.
This protocol describes a method to measure transcriptional suppression in cells infected with the Rift Valley fever virus (RVFV) strain MP-12 using click chemistry. Concurrently, expression of viral proteins in these cells is determined by classical intracellular immunostaining. Steps 1 through 4 detail a method to visualize transcriptional suppression via fluorescence microscopy, while steps 5 through 8 detail a method to quantify transcriptional suppression via flow cytometry. This protocol is easily adaptable for use with other viruses.

This method describes the use of click chemistry to measure changes in host cell transcription after infection with the Rift Valley fever virus (RVFV) strain MP-12. Results can be visualized qualitatively via fluorescence microscopy or obtained quantitatively through flow cytometry. This method is adaptable for use with other viruses.

Ana-Hücre RNA sentezi üzerinde Viral Enfeksiyon Etkisi Tedbir tıklayın Kimya Kullanımı

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including neoplastic, autoimmune, and chronic inflammatory diseases. Emerging evidence implicates pathogen-induced chronic inflammation in the development and progression of chronic diseases with a wide variety of clinical manifestations. Due to the complex and multifactorial etiology of chronic disease, designing experiments for proof of causality and the establishment of mechanistic links is nearly impossible in humans. An advantage of using animal models is that both genetic and environmental factors that may influence the course of a particular disease can be controlled. Thus, designing relevant animal models of infection represents a key step in identifying host and pathogen specific mechanisms that contribute to chronic inflammation.
Here we describe a mouse model of pathogen-induced chronic inflammation at local and systemic sites following infection with the oral pathogen Porphyromonas gingivalis, a bacterium closely associated with human periodontal disease. Oral infection of specific-pathogen free mice induces a local inflammatory response resulting in destruction of tooth supporting alveolar bone, a hallmark of periodontal disease. In an established mouse model of atherosclerosis, infection with P. gingivalis accelerates inflammatory plaque deposition within the aortic sinus and innominate artery, accompanied by activation of the vascular endothelium, an increased immune cell infiltrate, and elevated expression of inflammatory mediators within lesions. We detail methodologies for the assessment of inflammation at local and systemic sites. The use of transgenic mice and defined bacterial mutants makes this model particularly suitable for identifying both host and microbial factors involved in the initiation, progression, and outcome of disease. Additionally, the model can be used to screen for novel therapeutic strategies, including vaccination and pharmacological intervention.

Animal models have proven to be invaluable tools in defining host and pathogen specific mechanisms that contribute to the development of chronic inflammation. Here we describe a mouse model of oral infection with the human pathogen Porphyromonas gingivalis and detail methodologies to assess the progression of inflammation at local and systemic sites.

Lokal ve sistemik Yer de patojen kaynaklı kronik enflamasyon Fare Modeli

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-&#947; Responses

L. monocytogenes is a gram-positive bacterium that is a cause of food borne disease in humans. Experimental infection of mice with this pathogen has been highly informative on the role of innate and adaptive immune cells and specific cytokines in host immunity against intracellular pathogens. Production of IFN-&#947; by innate cells during sublethal infection with L. monocytogenes is important for activating macrophages and early control of the pathogen1-3. In addition, IFN-&#947; production by adaptive memory lymphocytes is important for priming the activation of innate cells upon reinfection4. The L. monocytogenes infection model thus serves as a great tool for investigating whether new therapies that are designed to increase IFN-&#947; production have an impact on IFN-&#947; responses in vivo and have productive biological effects such as increasing bacterial clearance or improving mouse survival from infection. Described here is a basic protocol for how to conduct intraperitoneal infections of C57BL/6J mice with the EGD strain of L. monocytogenes and to measure IFN-&#947; production by NK cells, NKT cells, and adaptive lymphocytes by flow cytometry. In addition, procedures are described to: (1) grow and prepare the bacteria for inoculation, (2) measure bacterial load in the spleen and liver, and (3) measure animal survival to endpoints. Representative data are also provided to illustrate how this infection model can be used to test the effect of specific agents on IFN-&#947; responses to L. monocytogenes and survival of mice from this infection.

Experimental Infection with &lt;em&gt;Listeria monocytogenes&lt;/em&gt; as a Model for Studying Host Interferon-&amp;#947; Responses

This protocol describes how to inoculate C57BL/6J mice with the EGD strain of Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) and to measure interferon-&#947; (IFN-&#947;) responses by natural killer (NK) cells, natural killer T (NKT) cells, and adaptive T lymphocytes post-infection. This protocol also describes how to conduct survival studies in mice after infection with a modified LD50 dose of the pathogen.

Deneysel Enfeksiyon<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Ana İnterferon-γ Yanıtları incelenmesi için Bir Model Olarak

L. monocytogenes is a gram-positive bacterium that is a cause of food borne disease in humans. Experimental infection of mice with this pathogen has been ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, mortality, and immunosuppression in infected birds. In this study, we describe the isolation of chicken primary bursal cells from the bursa of Fabricius, the culture and infection of the cells with IBDV, and the quantification of viral replication. The addition of chicken CD40 ligand significantly increased cell proliferation fourfold over six days of culture and significantly enhanced cell viability. Two strains of IBDV, a cell-culture adapted strain, D78, and a very virulent strain, UK661, replicated well in the ex vivo cell cultures. This model will be of use in determining how cells respond to IBDV infection and will permit a reduction in the number of infected birds used in IBDV pathogenesis studies. The model can also be expanded to include other viruses and could be applied to different species of birds.

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

Here we describe the isolation of chicken primary bursal cells from the bursa of Fabricius, the culture and infection of the cells with infectious bursal disease virus, and the quantification of viral replication.

Bursal bulaşıcı hastalık virüs patogenezi okumaya bir Ex Vivo tavuk birincil Bursal hücre kültürü modeli

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Using a Bacterial Pathogen to Probe for Cellular and Organismic-level Host Responses

There are a variety of strategies bacterial pathogens employ to survive and proliferate once inside the eukaryotic cell. The so-called 'cytosolic' pathogens (Listeria monocytogenes, Shigella flexneri, Burkholderia pseudomallei, Francisella tularensis, and Rickettsia spp.) gain access to the infected cell cytosol by physically and enzymatically degrading the primary vacuolar membrane. Once in the cytosol, these pathogens both proliferate as well as generate sufficient mechanical forces to penetrate the plasma membrane of the host cell in order to infect new cells. Here, we show how this terminal step of the cellular infection cycle of L. monocytogenes (Lm) can be quantified by both colony-forming unit assays and flow cytometry and give examples of how both pathogen- and host-encoded factors impact this process. We also show a close correspondence of Lm infection dynamics of cultured cells infected in vitro and those of hepatic cells derived from mice infected in vivo. These function-based assays are relatively simple and can be readily scaled up for discovery-based high-throughput screens for modulators of eukaryotic cell function.

We describe both in vitro and in vivo infection assays that can be used to analyze the activities of host-encoding factors.

Bakteriyel Pathogen sonda için hücresel ve Organismic düzeyi ana bilgisayar yanıt için kullanma

There are a variety of strategies bacterial pathogens employ to survive and proliferate once inside the eukaryotic cell. The so-called 'cytosolic' ...

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a striking increase in life expectancy around the globe. Nonetheless, determining vaccine efficacy remains a challenge. Emerging evidence suggests that the current acellular vaccine (aPV) for Bordetella pertussis (B. pertussis) induces suboptimal immunity. Therefore, a major challenge is designing a next-generation vaccine that induces protective immunity without the adverse side effects of a whole-cell vaccine (wPV). Here we describe a protocol that we used to test the efficacy of a promising, novel adjuvant that skews immune responses to a protective Th1/Th17 phenotype and promotes a better clearance of a B. pertussis challenge from the murine respiratory tract. This article describes the protocol for mouse immunization, bacterial inoculation, tissue harvesting, and analysis of immune responses. Using this method, within our model, we have successfully elucidated crucial mechanisms elicited by a promising, next-generation acellular pertussis vaccine. This method can be applied to any infectious disease model in order to determine vaccine efficacy.

Here we present an elegant protocol for in vivo evaluation of vaccine effectiveness and host immune responses. This protocol can be adapted for vaccine models that study viral, bacterial, or parasitic pathogens.

Ana bilgisayar-patojen yanıt ve aşı etkinliği farelerde değerlendirilmesi

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...