ونود أن ننوه بدعم من جامعة شيكاغو قسم جراحة المسالك البولية برئاسة الدكتور ارييه Shalhav، ومدير المسالك البولية بحث الدكتور كاري المتزحلق على الجليد-شيفر. ونود أيضا أن نعترف بدعم من جامعة شيكاغو المركز الشامل للسرطان (UCCCC) بقيادة الدكتور ميشيل لو بو. أيضا نحن مع أن أشكر المساعدة التقنية خبير مرفق الأنسجة البشرية مركز الموارد الأساسية بقيادة الدكتور مارك مدينة Lingen، ومساعدة من ليزلي مارتن وماري جو Fekete. ونشكر أيضا مرفق الأساسية المناعية التي يديرها تيري لي. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل جامعة شيكاغو قسم الجراحة، وقسم جراحة المسالك البولية؛ لجمعية السرطان الأمريكية منحة البحوث المؤسسية (ACS-IRG، # IRG-58-004)؛ السرطان مركز دعم المنح (P30 CA14599)، وBrinson مؤسسة؛ الصندوق ألفين باوم العائلة، وجامعة شيكاغو مجلس أبحاث السرطان مؤسسة المرأة، ويدعم S. كريغيل من قبل HHMI: ميد حيز غراد الزملاءالورك (56006772) وعلم الأحياء جرانت تدريب السرطان (T32-CA09594). وأخيرا، نود أن نشكر روبرت كلارك، والدكتور VenkateshKrishnan، وناثان Stadick لتقييمها نقدية للمخطوطة.

وقد أجريت هذه الدراسة بما يتفق بدقة مع التوصيات الواردة في دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية من المعاهد الوطنية للصحة. تمت الموافقة على البروتوكول من قبل جامعة شيكاغو المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام (IACUC، أرقام بروتوكول 72066 و72231). تم إجراء كل العمليات الجراحية تحت التخدير، وأدلى كل الجهود للحد من المعاناة. الإنسان الجنينية الخلايا الجذعية خط WA01 (H1؛ NIH تسجيل # 0043) تم الحصول عليها من معهد ويسيل (ماديسون، WI) ومثقف باستخدام بروتوكول المغذية مستقلة باستخدام mTeSR1 وسائل الإعلام (تقنيات الخلايا الجذعية؛ فانكوفر، BC). وقد استخدمت الخلايا الجذعية الجنينية في غضون عشرة مقاطع من الذوبان. 1. عزل الجيوب الأنفية البولي التناسلي من الفأر أو الجرذ الأجنة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الماوس توقيت الحوامل (17.5 يوم) أو الفئران (18.5 يوم) عن طريق استنشاق CO 2 لمدة 5 دقائق. تأكيد الإعدام وقف المؤشرات الحيوية في الفئران. ثم كسر عنقه إنسانية. صفي هو الموت الرحيم في هذه المرحلة. رش الايثانول 70٪ لتعقيم الجلد في البطن والخاصرتين. قطع الجلد في منطقة البطن وطبقات العضلات ومن ثم قطع الرحم، فصل الأجنة الفئران من الكيس الذي يحيط بالجنين، وقطع الحبل السري. نقل الأجنة إلى 50 مل فالكون أنبوب يحتوي على محلول الملح المتوازن الجليد الباردة هانك (HBSS) والحفاظ على الجليد. يصرح باستخدامها الأجنة بواسطة قطع الرأس مع مقص جراحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الجنين في طبق بيتري 100 ملم. شطر الجنين مع مقص على مستوى السرة (الشكل 1A). إزالة المعدة والأمعاء الدقيقة. كشف المبيضين في الجنين الأنثى والخصية في الجنين ذكر (الشكل 1B و 1C). (المبيضين وتقع في القطبين الذيلية من الكليتين. الخصيتين ما يقرب على مستوى المثانة). في هذه المرحلة التنموية، معزولة UGSM من كلا أجنة من الذكور والإناث قادرون على إحداث نسب الظهارية البروستاتا في وجود المضيفةهرمون تستوستيرون. 4 بعد هذه النقطة مرة التنموية، ومع ذلك، تبدأ براعم البروستاتا تشكيل في UGSM، والعزلة من UGSM نقية هي صعبة للغاية. 4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت المجهر تشريح، وقطع جدار البطن في خط الوسط مع مقص Vannas لفضح المثانة والجدار الخلفي للبطن. الحرة الجهاز التناسلي العلوي من المرفقات (في الأجنة الذكور، وقطع الحالب، قناة وولف ومولر القناة؛ في الأجنة الإناث، وقطع الحالب وقناة مولر). تحرير المثانة من الحبل السري. قطع عظم العانة ومنفصلة بصراحة من الجدار الأمامي من الجيب البولي التناسلي مع دومون غرامة ملقط غيض. وأخيرا، فصل الجدار الخلفي من الجيوب الأنفية البولي التناسلي من المستقيم. قطع الجيوب الأنفية البولي التناسلي مع المثانة في النهاية السفلي (من مجرى البول) وتخزين البولي التناسلي الجيوب الأنفية EN كتلة (مع المثانة) في الجليد الباردة HBSS. </li></ol> 2. فصل من اللحمة المتوسطة الجيب البولي التناسلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li&gt; إزالة المثانة من الجيوب الأنفية البولي التناسلي تحت المجهر تشريح (1D الشكل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الجيوب الأنفية البولي التناسلي إلى أنبوب الصقر تحتوي على 1٪ التربسين في الكالسيوم (كا 2 +) والمغنيسيوم (مغ 2 +) HBSS الحرة. وضع أنبوب في ثلاجة عند 4 درجة مئوية لمدة 75 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة وتحييد التربسين trypsinization مع 10٪ الجنين مصل بوفين (FBS) في DMEM/F12 المتوسطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ندف بعناية كم الوسيطة لزجة من أنبوب الظهارية مع إبرة أو ملقط دومون غرامة طرف (الحفاظ على أنبوب الظهارية سليمة يقلل من فرص تلوث الخلايا الظهارية من اللحمة المتوسطة، وهذا يمكن أن يؤدي إلى الغدد القوارض تشكيل جنبا إلى جنب مع الجذعية المشتقة الخاص الخلية البشرية ظهارة غدي) (1D الشكل) 12 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل UGSM في أنبوب فالكون جديد يحتوي DMEM/F12 المتوسطة + 10٪ FBS + 1٪ البنسلين / الستربتوميسين (القلم / بكتيريا؛ 0.5 ملغ / مل) + 1٪ الأحماض الأمينية غير الأساسية (NEAA)، بالإضافة إلى 1nM R1881. ررالآس الأنبوب في حاضنة عند 37 درجة مئوية مع نسبة 5٪ CO 2 بين عشية وضحاها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في الأنسجة في 200 XG وتجاهل طاف. يغسل مع العازلة الفوسفات المالحة (PBS) (لا تعكير صفو بيليه الأنسجة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة كولاجيناز 0.2٪ (في DMEM/F12) لإعادة تعليق الأنسجة. احتضان في 37 درجة مئوية مع هزاز لطيف لمدة 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة بقوة الأنسجة الهضم ثلاث مرات حتى يصبح الخليط متجانس وحيدة الخلية وإضافة DMEM/F12 المتوسطة + 10٪ FBS + 1٪ P / S + 1٪ + NEAA 1nM R1881 لتحييد كولاجيناز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي في 200 x ج ثم يغسل عن طريق إعادة تعليق الخلايا UGSM في HBSS، وكرر ثلاث مرات لغسل بالكامل UGSM. تعليق وأخيرا خلايا اللحمة المتوسطة في DMEM/F12 وعدد الخلايا باستخدام عدادة الكريات أو جهاز عد الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الخلايا حس مثقف بروتوكول باستخدام تغذية خالية من وسائل الاعلام مع mTeSR1 (تقنيات الخلايا الجذعية؛ فانكوفر، BC) باستخدام الهضم Accutase (ميليبور؛ فالجهاز يبث اشعة تماثل، MA). غسل الخلايا حسخلال مرحلة السجل من نموها في الحارة DMEM/F12 وسائل الإعلام، ثم يضاف دافئ حل Accutase 1X، واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 15-20 دقيقة حتى الخلايا واحد يتم فصلها بشكل موحد من المستعمرات. إضافة مبلغ مساو من 1X تعريف التربسين المانع (إينفيتروجن؛ غراند ايلاند، نيويورك) لتحييد Accutase وماصة بلطف صعودا وهبوطا لخلط وتفتيت كتل الخلايا. خلايا ماصة في أنبوب الطرد المركزي وأجهزة الطرد المركزي لمدة 3 دقائق في 200 XG، وإعادة تعليق بيليه خلية في DMEM/F12 وسائل الإعلام. أجهزة الطرد المركزي أنبوب لمدة 3 دقائق في 200 XG مرة أخرى وإزالة طاف، ثم إعادة تعليق في HBSS الباردة أو DMEM/F12 في حجم المطلوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الخلايا حس مع 1:2.5 نسبة من حس / خلايا اللحمة المتوسطة. وسوف 3 يكون هذا التكوين الخلوي للخلايا 1E 5 UGSM مع 4E 4 hESCs لكل 10 مل حقن (فأر واحد UGS عادة غلات حول 2E 6 خلايا اللحمة المتوسطة). الطرد المركزي في 200 x ج لمدة 5 دقائق ثم تجاهل طاف. اعادة تعليق مع 75٪ Matrigel دينار بحريني (العلوم البيولوجية،سان خوسيه، كاليفورنيا؛ مختلطة مع 25٪ HBSS الباردة لتسهيل المناولة) ووضع أنبوب في الجليد لحقن كبسولة شبه الكلوي. </li></ol> 3. زرع الأنسجة المؤتلف تحت كبسولة الكلى <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعد منطقة العمليات الجراحية المعقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفأر عارية athymic الذكور مع الكيتامين / زيلازين الملكية الفكرية، واستخدام مزيج الطازجة التي تحتوي على نسبة 01:01:08 من الكيتامين: زيلازين: المالحة. وسوف تكون الجرعات 100 ملغم / كغم من الكيتامين و 2.5 ملغ / كغ زيلازين. ينبغي أن الحيوانات لا تستجيب إلى أخمص القدمين قرصة تكون تحت بالكامل لمدة 20-30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد جراحيا الماوس عن طريق حلق موقع الجراحية (إذا لم تكن تستخدم ماوس عارية)، والتطهير مع ثلاثة مناديل بالتناوب من الكحول 70٪ تليها حل بتدين وتطبيق ثنى الجراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع مرهم رطوبة العين (Altalube مرهم العين) للعيون من الماوس لمنع جفاف أثناء التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أثناء الجراحة، ويتم رصد معدل التنفس ودرجة حرارة الجسم الأساسية من الفئران. معدلات التنفس SHOيكون ULD ثابت وصيانتها ضمن 40-90 الأنفاس / دقيقة. ويتم رصد درجة حرارة الجسم الأساسية مع ملاحظة لون الأغشية المخاطية وباطن الوردي القدمين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل 1.0 سم طويلة طولية شق الجلد على ظهره. مواصلة خفض جدار البطن في 0.5 سم شق طولي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الضغط برفق الكلى من البطن والحفاظ على رطوبة سطح الكلى باستخدام قطرات من محلول ملحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقب بلطف الكبسولة الكلوي باستخدام فارغة عيار 27 إبرة حقنة. ثقب ضحلة جدا كافية. وسيكون هذا حيث قمت بإدراج إبرة حادة لحقن خليط الخلوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء 28 عيار إبرة حقنة حادة مع 10 ميكرولتر من خليط الخلوي. ببطء إدراج موقع ثقب واختراق لحمة الكلى للوصول إلى منطقة تحت كبسولة الكلى. حقن 10 ميكرولتر من خليط الخلوية لتشكيل بلعة على الكلى تحت الكبسولة الكلوي. انسحاب الإبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عودة الكلى إلى عبدهتجويف مينال. تأمين طبقة العضلات الصفاق مع خيوط النايلون 4-0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الجلد مع خياطة إما أو التيلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف الدم من الجلد باستخدام ملحي معقم. </li></ol> 4. تسكين والمراقبة اللاحقة للعمليات الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الحيوان مع البوبرينورفين (0.1 ملغ / كغ كل 12 ساعة) أو كيتوبروفين (3-5 ملغ / كغ في المياه المالحة كل 12 ساعة) لإدارة الألم بعد العمليات الجراحية، و 1 مل من 37 درجة مئوية IP المالحة للحفاظ على الحيوانات دافئة ومنع الجفاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوان في قفص نظيفة ووضعه على وسادة التدفئة معتدل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أرسل هذه الحيوانات مرة أخرى إلى غرفة الحيوان بمجرد يستعيد وعيه وتتحرك داخل القفص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الحيوانات يوميا بحثا عن علامات غير متوقعة من المرض والعدوى خلال الأيام الثلاثة التالية. ويتم رصد الفئران مع مراقبة الأنشطة في أقفاص بما في ذلك الغذاء والماء الوصول 1 يوم بعد العملية. إذا كانت الفئران عرض أقل الأنشطة، كيتوبروفين هو الغشاء البريتونى إعلانخدم مرة أخرى في اليوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المواد الغذائية الجلد أو الغرز 2 أسابيع بعد الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن حصاده الأنسجة طعم أجنبي في أقرب وقت 8 أسابيع بعد الجراحة. ولا يمكن تصوير Xenografts في الجسم الحي باستخدام الموجات فوق الصوتية الحيوانات الصغيرة (الشكل 2A)، ويمكن أن تكون الأنسجة ثابت مقطوع وملطخة للبروتينات المختلفة باستخدام المناعية (الشكل 3). </li></ol>

<ol>
	<li>Taylor, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+human+prostate+tissue+from+embryonic+stem+cells.">Formation of human prostate tissue from embryonic stem cells.</a> Nat. Methods. 3, 179-181 (2006).</li><li>Cunha, G. R., Chung, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal-epithelial+interactions--I.+Induction+of+prostatic+phenotype+in+urothelium+of+testicular+feminized+(Tfm/y)+mice.">Stromal-epithelial interactions--I. Induction of prostatic phenotype in urothelium of testicular feminized (Tfm/y) mice.</a> J. Steroid Biochem. 14, 1317-1324 (1981).</li><li>Cunha, G. R., Chung, L. W., Shannon, J. M., Taguchi, O., Fujii, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormone-induced+morphogenesis+and+growth:+role+of+mesenchymal-epithelial+interactions.">Hormone-induced morphogenesis and growth: role of mesenchymal-epithelial interactions.</a> Recent Prog. Horm. Res. 39, 559-598 (1983).</li><li>Staack, A., Donjacour, A. A., Brody, J., Cunha, G. R., Carroll, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+urogenital+development:+a+practical+approach.">Mouse urogenital development: a practical approach.</a> Differentiation. 71, 402-413 (2003).</li><li>Cunha, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+and+abnormal+development+of+the+male+urogenital+tract.+Role+of+androgens,+mesenchymal-epithelial+interactions,+and+growth+factors.">Normal and abnormal development of the male urogenital tract. Role of androgens, mesenchymal-epithelial interactions, and growth factors.</a> J. Androl. 13, 465-475 (1992).</li><li>Cunha, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factors+as+mediators+of+androgen+action+during+the+development+of+the+male+urogenital+tract.">Growth factors as mediators of androgen action during the development of the male urogenital tract.</a> World J. Urol. 13, 264-276 (1995).</li><li>Aboseif, S., El-Sakka, A., Young, P., Cunha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+reprogramming+of+adult+human+epithelial+differentiation.">Mesenchymal reprogramming of adult human epithelial differentiation.</a> Differentiation. 65, 113-118 (1999).</li><li>Marker, P. C., Donjacour, A. A., Dahiya, R., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal,+cellular,+and+molecular+control+of+prostatic+development.">Hormonal, cellular, and molecular control of prostatic development.</a> Dev. Biol. 253, 165-174 (2003).</li><li>Cunha, G. R., Sekkingstad, M., Meloy, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterospecific+induction+of+prostatic+development+in+tissue+recombinants+prepared+with+mouse,+rat,+rabbit+and+human+tissues.">Heterospecific induction of prostatic development in tissue recombinants prepared with mouse, rat, rabbit and human tissues.</a> Differentiation. 24, 174-180 (1983).</li><li>Van der Griend, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+CD133+in+Normal+Human+Prostate+Stem+Cells+and+Malignant+Cancer+Initiating+Cells.">The Role of CD133 in Normal Human Prostate Stem Cells and Malignant Cancer Initiating Cells.</a> Cancer Res. 68, 9703-9711 (2008).</li><li>Van der Griend, D. J., Konishi, Y., De Marzo, A. M., Isaacs, J. T., Meeker, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-label+centromere+and+telomere+FISH+identifies+human,+rat,+and+mouse+cell+contribution+to+Multispecies+recombinant+urogenital+sinus+xenografts.">Dual-label centromere and telomere FISH identifies human, rat, and mouse cell contribution to Multispecies recombinant urogenital sinus xenografts.</a> Prostate. , (2009).</li><li>Vander Griend, D. J., Konishi, Y., De Marzo, A. M., Isaacs, J. T., Meeker, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-label+centromere+and+telomere+FISH+identifies+human,+rat,+and+mouse+cell+contribution+to+Multispecies+recombinant+urogenital+sinus+xenografts.">Dual-label centromere and telomere FISH identifies human, rat, and mouse cell contribution to Multispecies recombinant urogenital sinus xenografts.</a> Prostate. 69, 1557-1564 (2009).</li><li>Thomson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts.">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li><li>Ludwig, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeder-independent+culture+of+human+embryonic+stem+cells.">Feeder-independent culture of human embryonic stem cells.</a> Nat. Methods. 3, 637-646 (2006).</li><li>Prokhorova, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Teratoma+formation+by+human+embryonic+stem+cells+is+site+dependent+and+enhanced+by+the+presence+of+Matrigel.">Teratoma formation by human embryonic stem cells is site dependent and enhanced by the presence of Matrigel.</a> Stem Cells Dev. 18, 47-54 (2009).</li><li>Hameed, O., Sublett, J., Humphrey, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+stains+for+p63+and+alpha-methylacyl-CoA+racemase,+versus+a+cocktail+comprising+both,+in+the+diagnosis+of+prostatic+carcinoma:+a+comparison+of+the+immunohistochemical+staining+of+430+foci+in+radical+prostatectomy+and+needle+biopsy+tissues.">Immunohistochemical stains for p63 and alpha-methylacyl-CoA racemase, versus a cocktail comprising both, in the diagnosis of prostatic carcinoma: a comparison of the immunohistochemical staining of 430 foci in radical prostatectomy and needle biopsy tissues.</a> Am. J. Surg. Pathol. 29, 579-587 (2005).</li><li>Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+prostatic+epithelial+model+of+hormonal+carcinogenesis.">A human prostatic epithelial model of hormonal carcinogenesis.</a> Cancer Res. 61, 6064-6072 (2001).</li><li>Yao, V., Parwani, A., Maier, C., Heston, W. D., Bacich, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderate+expression+of+prostate-specific+membrane+antigen,+a+tissue+differentiation+antigen+and+folate+hydrolase,+facilitates+prostate+carcinogenesis.">Moderate expression of prostate-specific membrane antigen, a tissue differentiation antigen and folate hydrolase, facilitates prostate carcinogenesis.</a> Cancer Res. 68, 9070-9077 (2008).</li><li>Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+stromal-epithelial+interactions+in+hormonal+responses.">Role of stromal-epithelial interactions in hormonal responses.</a> Arch. Histol. Cytol. 67, 417-434 (2004).</li><li>Xin, L., Ide, H., Kim, Y., Dubey, P., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+regeneration+of+murine+prostate+from+dissociated+cell+populations+of+postnatal+epithelia+and+urogenital+sinus+mesenchyme.">In vivo regeneration of murine prostate from dissociated cell populations of postnatal epithelia and urogenital sinus mesenchyme.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 11896-11903 (2003).</li><li>Yu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral+vectors+with+two+independent+internal+promoters+transfer+high-level+expression+of+multiple+transgenes+to+human+hematopoietic+stem-progenitor+cells.">Lentiviral vectors with two independent internal promoters transfer high-level expression of multiple transgenes to human hematopoietic stem-progenitor cells.</a> Mol. Ther. 7, 827-838 (2003).</li><li>Anderson, J. S., Bandi, S., Kaufman, D. S., Akkina, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+normal+macrophages+from+human+embryonic+stem+(hES)+cells+for+applications+in+HIV+gene+therapy.">Derivation of normal macrophages from human embryonic stem (hES) cells for applications in HIV gene therapy.</a> Retrovirology. 3, 24 (2006).</li><li>Takahashi, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+mouse+embryonic+and+adult+fibroblast+cultures+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.</a> Cell. 126, 663-676 (2006).</li><li>Maherali, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-efficiency+system+for+the+generation+and+study+of+human+induced+pluripotent+stem+cells.">A high-efficiency system for the generation and study of human induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 340-345 (2008).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم تضارب في المصالح مع العمل المقدم.

إعادة التركيب الأنسجة باستخدام UGSM هو تقنية مفيدة للغاية لتحقيق التنمية في البروستاتا والأحداث الجزيئية التي تؤدي إلى سرطان البروستاتا البدء. وقد استخدم إمكانات استقرائي من UGSM للعديد من التطبيقات في مجال البحوث البروستاتا، وهذه تشمل تعزيز الورم تأخذ من خطوط الخلاي?...

هناك حاجة هائلة للنظم أفضل نموذج الإنسان من سرطان البروستاتا. على وجه الخصوص، فإن أنظمة نموذج الإنسان ذات الصلة من العادية، الأنسجة البروستات غير الخبيث الذي يمكن التلاعب بها وراثيا لنستشف مباشرة دور جينات معينة في بدء سرطان البروستاتا يكون بشكل لا يصدق غنية بالمعلومات. وقد حددت ظهور عصر الجينوم العديد من الجينات التي قد يكون لها دور في تشكيل السرطان. الافتقار إلى نظم نموذج الإنسان التجريبية، ومع ذلك، يضعف بشدة قدرتنا على اختبار وظيفيا وتوصيف سرطان البروستاتا مرشح جينات القابلية. ومن شأن النظام النموذجي المثالي تسهيل التحليلات الفنية السريعة وأسرع من جينات القابلية سرطان في تركيبة مع أنظمة نموذج القوارض المعدلة وراثيا المناسبة. وعلاوة على ذلك، فإن مثل هذا النظام نموذج الإنسان تمكين التوصيف الجزيئي للآليات يشير البروستات التسرطن نحو اكتشاف والتحقق من علاجات جديدة للمنع تكوين سرطان البروستاتا. الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) هي قادرة على تشكيل أنسجة البروستاتا الإنسان كما xenografts. في عام 2006 تايلور، وآخرون. ذكرت أن hESCs يمكن أن يتسبب في تشكيل ظهائر البروستاتا في الجسم الحي عند إعادة جنبا إلى جنب مع القوارض البولي التناسلي الجيوب الأنفية اللحمة المتوسطة (UGSM) في غضون فترة زمنية من 8-12 أسابيع. 1 هذه الدراسات استندت على الأعمال السابقة من قبل يمكن للمختبر كونها تظهر أن القوارض UGSM الجنينية تعزيز التمايز البروستاتا من الخلايا الجذعية الجنينية والخلايا الظهارية السكان في الجسم الحي. 2،3 البروستاتا يتطور من ANLAGEN الجنينية يطلق عليه الجيب البولي التناسلي (UGS)، وقبل يوم الجنينية 17 (الماوس E17 ؛ يوم E18 في الفئران) وUGS يمكن إزالتها وتنقسم فعليا إلى ظهارة (UGSE) واللحمة المتوسطة (UGSM) 4 هذا النهج إعادة التركيب الأنسجة قد عززت بشكل كبير من فهمنا للتطور البروستات والسرطان، خاصة.عامل نمو لاي ومسارات الإشارات الهرمونية والعلاقات بين الجزيئية البروستاتا سدى وظهارة. 5-8 هذا الأسلوب ينطوي على مزيج فيفو السابقين من UGSM مع الجذعية أو خلايا الظهارية من نفس النوع أو متميزة ويتم زرع هذه recombinants الخلوية / الأنسجة ونمت وxenografts داخل المضيف الماوس. 4،9 وبعد فترة من النمو في الجسم الحي، وزرع يحتوي على هياكل غدي البروستاتا الظهارية جزءا لا يتجزأ من نسيج اللحمية. ويمكن إجراء مزيد من تلطيخ لتحديد ما إذا كانت هذه الهياكل هي البروستاتا والمنشأ الإنسان حقا. 10،11

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
 <td>GIBCO</td>
 <td>14170</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMEM/F12</td>
 <td>GIBCO</td>
 <td>11330</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>R1881</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>965-93-5</td>
 <td>Mix to 1 ug/ml in Ethanol (1,000x stock)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>NEAA</td>
 <td>GIBCO</td>
 <td>11140</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pen-Strep Solution</td>
 <td>GIBCO</td>
 <td>15070</td>
 <td>100x stock</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Matrigel</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>354230</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>KETASET (ketamine hydrochloride) </td>
 <td>Fort Dodge Animal Health</td>
 <td>NDC 0856-2013-01</td>
 <td>100 mg/ml; dilute 1:10 in sterile saline </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>AnaSed (xylazine) </td>
 <td>VET-A-MIX, Inc.</td>
 <td>NADA 139-236</td>
 <td>20 mg/ml; dilute 1:10 in sterile saline</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Trypsin</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>215240</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase </td>
 <td>Sigma</td>
 <td>C2014</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketoprofen </td>
 <td>Fort Dodge</td>
 <td>NDC 0856-4396-01</td>
 <td>100 mg/ml; dilute 1:1,000 in sterile saline</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Altalube eye ointment </td>
 <td>Altaire Pharmaceuticals, Inc.</td>
 <td>NLC 56641-19850</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Leica MZ16 F Stereomicroscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td></td>
 <td>Any good dissecting scope can be used.</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vannas spring scissors</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>15001-08</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Syringe</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>84855</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hamilton Needle, Small RN, 28 gauge, 0.5inches, Point Style #3 (Blunt)</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7803-02 </td>
 <td>Custom Needle </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethanol Prep Pads</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>06-669-62 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sterile Gauze Pads</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>22-415-469 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethicon Vicryl Suture (4-0 FS-2)</td>
 <td>MedVet International</td>
 <td>J392H </td>
 <td>Needle-in, dissolvable suture </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Autoclip 9 mm Wound Clips</td>
 <td>Becton Dickenson</td>
 <td>427631</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PVP Iodine Prep Pads</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>06-669-98 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dissector scissor with blunt end</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>14072-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dumont fine tip forceps</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>11252-50</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Needle holder with Scissor</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>12002-14</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

formation of human prostate epithelium using tissue recombination of rodent urogenital sinus mesenchyme and human stem cells

التقدم في بحوث سرطان البروستات محدودة للغاية من قبل توافر نظم نموذج الإنسان المشتقة من هرمون والسذاجة، والتي تحد من قدرتنا على فهم الأحداث الجينية والجزيئية الكامنة وراء البروستاتا بدء المرض. نحو تطوير أنظمة أفضل نموذج لدراسة البروستاتا البشرية التسرطن، نحن وآخرون استفادوا من إمكانات استقرائي الموالية للالبروستاتا فريدة من القوارض الجنينية البروستاتا سدى، ووصف البولي التناسلي الجيوب الأنفية اللحمة المتوسطة (UGSM). عندما معاد مع بعض السكان الخلية المحفزة مثل الخلايا الجذعية الجنينية، UGSM الحث على تشكيل طبيعي البروستاتا ظهائر الإنسان في الطريقة التي تعتمد على هرمون التستوستيرون. مثل هذا النظام نموذج الإنسان يمكن أن تستخدم للتحقيق وتجريبيا اختبار قدرة المرشح البروستاتا جينات القابلية السرطان بوتيرة متسارعة مقارنة مع الدراسات المعدلة وراثيا القوارض نموذجي. منذ الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) يمكن تعديلها وراثيا في الثقافة النقيبز محرض التعبير الجيني أو سيرنا تدق إلى أسفل نواقل قبل إعادة التركيب الأنسجة، ومثل هذا النموذج يسهل اختبار عواقب وظيفية من الجينات، أو مزيج من الجينات، التي يعتقد لتعزيز أو منع التسرطن. تقنية عزل السكان نقية من خلايا UGSM، ومع ذلك، هو التحدي والتعلم وغالبا ما يتطلب شخص من ذوي الخبرة السابقة لتعليم شخصيا. وعلاوة على ذلك، يمكن تلقيح مخاليط الخلية تحت كبسولة الكلى من مضيف المناعة تكون صعبة من الناحية التقنية. نحن هنا الخطوط العريضة وتوضح العزلة السليم للUGSM من أجنة القوارض وزرع كبسولة الكلوي المخاليط الأنسجة لتشكيل ظهارة البروستاتا الذي يصيب الانسان. مثل هذا النهج، في مرحلته الحالية، يتطلب في الجسم الحي xenografting من الخلايا الجذعية الجنينية؛ التطبيقات المستقبلية المحتملة يمكن أن تشمل في المختبر تشكيل الغدة أو استخدام يسببها المحفزة السكان الخلية الجذعية (iPSCs).

بناء على تقرير مثير من قبل تايلور، وآخرون، وقد وضعت مختبرنا بروتوكول engrafting باستخدام H1 استخداما (NIH المعين WA01، راثيا الذكور) الجنينية البشرية خط الخلايا الجذعية. 1 هذا الخط وقد تم اختبار صارم لمراقبة الجودة و أمر طبيعي karyotypically 13 عندما تربيتها بشكل مناس...

Watch this Scientific Journal Video about Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells at JoVE.com

Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells

لكشف وهناك حاجة ماسة أقرب الآليات الجزيئية الكامنة وراء سرطان البروستاتا بدء، والرواية، والنظم المبتكرة نموذج الإنسان والنهج. إمكانات ما قبل البروستاتا البولية التناسلية الجيوب الأنفية اللحمة المتوسطة (UGSM) للحث السكان الخلايا الجذعية المحفزة لتشكيل ظهارة البروستاتا الذي يصيب الانسان هو أداة قوية في مجال البحوث التجريبية البروستاتا.

تشكيل الظهارة البروستاتا الذي يصيب الانسان عن طريق إعادة التركيب الأنسجة من القوارض البولي التناسلي اللحمة المتوسطة الجيوب الأنفية والخلايا الجذعية البشرية

Progress in prostate cancer research is severely  limited by the availability of human-derived and hormone-na&iuml;ve model systems,  which limit our ...

formation-human-prostate-epithelium-using-tissue-recombination-rodent

Research

JoVE Journal

Medicine

13.6K Views.  University of Chicago. لكشف وهناك حاجة ماسة أقرب الآليات الجزيئية الكامنة وراء سرطان البروستاتا بدء، والرواية، والنظم المبتكرة نموذج الإنسان والنهج. إمكانات ما قبل البروستاتا البولية التناسلية الجيوب الأنفية اللحمة المتوسطة (UGSM) للحث السكان الخلايا الجذعية المحفزة لتشكيل ظهارة ال?...

Video: Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and finding new sources for implantable cells are the focus of recent research4,5. Investigating the effectiveness of cell therapies is not an easy task and new tools are needed to investigate the mechanisms involved in the treatment process6. We designed an experimental protocol of ischemia/reperfusion in order to allow the observation of cellular connections and even subcellular mechanisms during ischemia/reperfusion injury and after stem cell transplantation and to evaluate the efficacy of cell therapy. H9c2 cardiomyoblast cells were placed onto cell culture plates7,8. Ischemia was simulated with 150 minutes in a glucose free medium with oxygen level below 0.5%. Then, normal media and oxygen levels were reintroduced to simulate reperfusion. After oxygen glucose deprivation, the damaged cells were treated with transplantation of labeled human bone marrow derived mesenchymal stem cells by adding them to the culture. Mesenchymal stem cells are preferred in clinical trials because they are easily accessible with minimal invasive surgery, easily expandable and autologous. After 24 hours of co-cultivation, cells were stained with calcein and ethidium-homodimer to differentiate between live and dead cells. This setup allowed us to investigate the intercellular connections using confocal fluorescent microscopy and to quantify the survival rate of postischemic cells by flow cytometry. Confocal microscopy showed the interactions of the two cell populations such as cell fusion and formation of intercellular nanotubes. Flow cytometry analysis revealed 3 clusters of damaged cells which can be plotted on a graph and analyzed statistically. These populations can be investigated separately and conclusions can be drawn on these data on the effectiveness of the simulated therapeutical approach.

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

We demonstrate how to set up an in vitro ischemia/reperfusion model and how to evaluate the effect of stem cell therapy on postischemic cardiac cells.

زرع الخلايا الجذعية في في المختبر مقلد نقص التروية / إعادة إشباع الخلايا النموذجي

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy and stem cell transplantations have become key therapeutic tools for treating blindness resulting from retinal degenerative diseases. Several forms of autologous transplantation for age-related macular degeneration (AMD), such as iris pigment epithelial cell transplantation, have generated encouraging results, and human clinical trials have begun for other forms of gene and stem cell therapies.2 These include RPE65 gene replacement therapy in patients with Leber's congenital amaurosis and an RPE cell transplantation using human embryonic stem (ES) cells in Stargardt's disease.3-4 Now that there are gene therapy vectors and stem cells available for treating patients with retinal diseases, it is important to verify these potential therapies in animal models before applying them in human studies. The mouse has become an important scientific model for testing the therapeutic efficacy of gene therapy vectors and stem cell transplantation in the eye.5-8 In this video article, we present a technique to inject gene therapy vectors or stem cells into the subretinal space of the mouse eye while minimizing damage to the surrounding tissue.

This surgical technique illustrates the injection of gene therapy vectors and stem cells into the subretinal space of the mouse eye.

تحت الشبكية حقن المتجهات العلاج الجيني والخلايا الجذعية في العين ماوس

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human pulp-derived stem cells (hDPSCs) possess high proliferation potential with multi-lineage differentiation capacity compare to the ordinary source of adult stem cells1-8; therefore, hDPSCs could be the good candidates for autologous transplantation in tissue engineering and regenerative medicine. Along with these benefits, possessing the mesenchymal stem cells (MSC) features, such as immunolodulatory effect, make hDPSCs more valuable, even in the case of allograft transplantation6,9,10. Therefore, the primary step for using this source of stem cells is to select the best protocol for isolating hDPSCs from pulp tissue. In order to achieve this goal, it is crucial to investigate the effect of various isolation conditions on different cellular behaviors, such as their common surface markers &amp; also their differentiation capacity.
Thus, here we separate human pulp tissue from impacted third molar teeth, and then used both existing protocols based on literature, for isolating hDPSCs,11-13 i.e. enzymatic dissociation of pulp tissue (DPSC-ED) or outgrowth from tissue explants (DPSC-OG). In this regards, we tried to facilitate the isolation methods by using dental diamond disk. Then, these cells characterized in terms of stromal-associated Markers (CD73, CD90, CD105 &amp; CD44), hematopoietic/endothelial Markers (CD34, CD45 &amp; CD11b), perivascular marker, like CD146 and also STRO-1. Afterwards, these two protocols were compared based on the differentiation potency into odontoblasts by both quantitative polymerase chain reaction (QPCR) &amp; Alizarin Red Staining. QPCR were used for the assessment of the expression of the mineralization-related genes (alkaline phosphatase; ALP, matrix extracellular phosphoglycoprotein; MEPE &amp; dentin sialophosphoprotein; DSPP).14

The method described isolation and characterization of human Dental Pulp Stem Cells (hDPSCs) by using either enzymatic dissociation of pulp (DPSC-ED) or direct outgrowth of stem cells from pulp tissue explants (DPSC-OG). Then followed by in vitro comparative differentiation of both types of hDPSCs into odontoblasts.

العزلة، وتوصيف المقارن التمييز بين الخلايا الجذعية البشرية الأسنان اللب المستمدة من الأسنان الدائمة باستخدام طريقتين مختلفتين

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

على الفئران نموذج مثلي من سرطان البروستاتا البشرية الانبثاث

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly isolated from human tissues and serially propagated in immunodeficient mice, typically through antibody labeling of subpopulations of cells and fractionation by flow cytometry. However, the unique clinical features of prostate cancer have considerably limited the study of prostate CSCs from fresh human tumor samples. We recently reported the isolation of prostate CSCs directly from human tissues by virtue of their HLA class I (HLAI)-negative phenotype. Prostate cancer cells are harvested from surgical specimens and mechanically dissociated. A cell suspension is generated and labeled with fluorescently conjugated HLAI and stromal antibodies. Subpopulations of HLAI-negative cells are finally isolated using a flow cytometer. The principal limitation of this protocol is the frequently microscopic and multifocal nature of primary cancer in prostatectomy specimens. Nonetheless, isolated live prostate CSCs are suitable for molecular characterization and functional validation by transplantation in immunodeficient mice.

The isolation of cancer stem cells (CSCs) directly from human tissues is requisite for their biological characterization. This manuscript describes a methodology for the isolation of prostate CSCs from human tissues, while also providing tips on troubleshooting difficult steps.

عزل الخلايا الجذعية للسرطان من العينات البشرية سرطان البروستاتا

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Evaluation of Stem Cell Properties in Human Ovarian Carcinoma Cells Using Multi and Single Cell-based Spheres Assays

Years of research indicates that ovarian cancers harbor a heterogeneous mixture of cells including a subpopulation of so-called &#8220;cancer stem cells&#8221; (CSCs) responsible for tumor initiation, maintenance and relapse following conventional chemotherapies. Identification of ovarian CSCs is therefore an important goal. A commonly used method to assess CSC potential in vitro is the spheres assay in which cells are plated under non-adherent culture conditions in serum-free medium supplemented with growth factors and sphere formation is scored after a few days. Here, we review currently available protocols for human ovarian cancer spheres assays and perform a side-by-side analysis between commonly used multi cell-based assays and a more accurate system based on single cell plating. Our results indicate that both multi cell-based as well as single cell-based spheres assays can be used to investigate sphere formation in vitro. The more laborious and expensive single cell-based assays are more suitable for functional assessment of individual cells and lead to overall more accurate results while multi cell-based assays can be strongly influenced by the density of plated cells and require titration experiments upfront. Methylcellulose supplementation to multi cell-based assays can be effectively used to reduce mechanical artifacts.

In vitro spheres assays are commonly used to identify cancer stem cells. Here we compare single with multi cell-based spheres assays. The more laborious single cell-based assays or methylcellulose supplementation give more accurate results while multi cell-based assays performed in liquid medium can be highly influenced by cell density.

تقييم خصائص الخلايا الجذعية في الإنسان خلايا سرطان المبيض عن طريق متعدد واحدة على أساس خلية المجالات فحوصات

Years of research indicates that ovarian cancers harbor a heterogeneous mixture of cells including a subpopulation of so-called &#8220;cancer stem ...

Laser-capture Microdissection of Human Prostatic Epithelium for RNA Analysis

The prostate gland contains a heterogeneous milieu of stromal, epithelial, neuroendocrine and immune cell types. Healthy prostate is comprised of fibromuscular stroma surrounding discrete epithelial-lined secretory lumens and a very small population of immune and neuroendocrine cells. In contrast, areas of prostate cancer have increased dysplastic luminal epithelium with greatly reduced or absent stromal population. Given the profound difference between stromal and epithelial cell types, it is imperative to separate the cell types for any type of downstream molecular analysis. Despite this knowledge, the bulk of gene expression studies compare benign prostate to cancer without micro-dissection, leading to stromal bias in the benign samples. Laser-capture micro-dissection (LCM) is an effective method to physically separate different cell types from a specimen section. The goal of this protocol is to show that RNA can be successfully isolated from LCM-collected human prostatic epithelium and used for downstream gene expression studies such as RT-qPCR and RNAseq.

The goal of this protocol is to use laser-capture micro-dissection as an effective method to isolate pure populations of cell types from heterogeneous prostate tissues for downstream RNA analysis.

الليزر التقاط تسليخ مجهري من الإنسان البروستات الظهارة لتحليل الحمض النووي الريبي

The prostate gland contains a heterogeneous milieu of stromal, epithelial, neuroendocrine and immune cell types.  Healthy prostate is comprised of ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

ما قبل السريرية مثلي فأري موديل سرطان البروستاتا البشرية

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Generation of a Humanized Mouse Liver Using Human Hepatic Stem Cells

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in which the liver has been repopulated with functional human hepatocytes, could serve as a useful tool for investigating human hepatic cell biology, drug metabolism, and other preclinical applications. One of the key factors required for successful transplantation of human hepatocytes into mice is the elimination of the endogenous hepatocytes to prevent competition with the human cells and provide a suitable space and microenvironment for promoting human donor cell expansion and differentiation. To date, two major liver injury mouse models utilizing fumarylacetoacetate hydrolase (Fah) and uroplasminogen activator (uPA) mice have been established. However, Fah mice are used mainly with mature hepatocytes and the application of the uPA model is limited by decreased breeding. To overcome these limitations, Alb-toxin receptor mediated cell knockout (TRECK)/SCID mice were used for in vivo differentiation of immature human hepatocytes and humanized liver generation. Human hepatic stem cells (HpSCs) successfully repopulated the livers of Alb-TRECK/SCID mice that had developed lethal fulminant hepatic failure following diphtheria toxin (DT) treatment. This model of a humanized liver in Alb-TRECK/SCID mice will have functional applications in studies involving drug metabolism and drug-drug interactions and will promote other in vivo and in vitro studies.

Here, we present a novel humanized mouse liver model generated in Alb-toxin receptor mediated cell knockout (TRECK)/SCID mice following the transplantation of immature and expandable human hepatic stem cells.

جيل من كبد الفأر أنسنة طريق كبد الإنسان خلايا الجذعية

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

تقييم الدالة Microvascular الأنسجة الدهنية البشرية باستخدام فيديوميكروسكوبي

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...